专利名称：：新的内切木糖聚半乳糖醛酸酶的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种新的内切木糖聚半乳糖醛酸酶(endo-xylogalacturonase，XGH)及其同源物。本发明还涉及在植物和含果胶的物质加工方法中使用内切木糖聚半乳糖醛酸酶来生产果汁和其它植物提取物。
背景技术：
：酶制剂经常用于植物材料加工过程，例如在水果及果汁的提取和液化步骤以及它们的过滤和澄清步骤中。商业的酶制剂包括降解果胶聚合物的酶混合物，果胶聚合物是植物细胞壁的一种主要成分。这些酶类包括果胶裂解酶、多聚半乳糖醛酸酶、果胶酯酶、纤维素酶、木糖葡聚糖酶、半乳聚糖酶和阿聚糖酶(arabinanase)。果胶在本质上是作为高等植物细胞壁的组成成分出现的。它们存在于原生细胞壁薄层，并嵌入到纤维素纤维之间。在不同的植物种类中果胶的成分是不同的，而且与水果的年龄和成熟度有关。富含果胶的来源是柠檬和柑橘，它们的多糖含量可高达30％。大多数果胶聚合物包括“光滑”的同型聚半乳糖醛酸区域和分枝的“毛发”区域。“光滑的”区域由线性的同型聚半乳糖醛酸骨架组成。苹果的“毛发”区域由三种不同的亚单位组成亚单位Ⅰ是木糖聚半乳糖醛酸(聚半乳糖醛酸骨架很大程度上被木糖取代了)；亚单位Ⅱ是较短的鼠李糖聚半乳糖醛酸骨架部分，相对富含长的阿聚糖、半乳聚糖和/或阿拉伯半乳聚糖侧链(“毛发”)；亚单位Ⅲ是一种鼠李糖聚半乳糖醛酸寡聚物，含有一个交错排列的鼠李糖和半乳糖醛酸残基组成的骨架。许多众所周知的用于工业食品加工的果胶酶仅降解果胶聚合物的“光滑”部分，而不降解“毛发”区域。因此，以苹果汁生产过程为例，由于果胶聚合物的未降解部分造成过滤或超滤膜的堵塞，引起低效率过滤，造成生产损失。已有报道有几种酶能降解部分毛发区，例如骨架(亚单位Ⅲ)的鼠李糖聚半乳糖醛酸区。这些酶被称作鼠李糖聚半乳糖醛酸酶(RGase)，其中这些酶有几种类型。可是，至今“毛发”区域的木糖聚半乳糖醛酸部分(亚单位Ⅰ)仍抵抗酶的消化作用，因此，在现有技术的酶促内切消化过程中木糖聚半乳糖醛酸作为惰性糖类遗留下来。由于在其它植物，如豆科植物象大豆和豌豆、西瓜、葡萄和松花粉中也发现木糖聚半乳糖醛酸的存在，降解这些聚合物的酶在植物材料加工中将会有用。已经鉴定了一种外切聚半乳糖醛酸酶(42KDa，SDS-PAGE)1，它不被单一的木糖侧链所干扰，用一种来自大豆的可溶“毛发”果胶多糖作为底物，可以降解木糖聚半乳糖醛酸。这种酶以外切的方式起作用，因为它产生半乳糖醛酸或由木糖和半乳糖醛酸组成的二糖。此酶已被纯化到接近均一(组分HTP2和Q2)，并进行了部分表征。与已知的鼠李糖聚半乳糖醛酸酶相比(不降解同型聚半乳糖醛酸)，这种酶对于木糖聚半乳糖醛酸不是十分特异的，它也能作用于果胶酸。另外，这种酶不能以随机的方式消化木糖聚半乳糖醛酸骨架，因此至今还未发现拥有内切木糖聚半乳糖醛酸酶活性的酶。
发明内容本发明来自于一种新的内切木糖聚半乳糖醛酸酶以及编码它的cDNA的分离和表征。内切木糖聚半乳糖醛酸酶cDNA序列见SEQ.IDNo.1。来自核苷酸98-1315的ORF的氨基酸序列见SEQ.IDNo.2。本发明的第一部分提供了一种(例如分离和/或纯化的)具有内切木糖聚半乳糖醛酸酶活性的多肽。还提供了一种包含内切木糖聚半乳糖醛酸酶的多肽，例如一种包含SEQ.IDNo.2所述序列的多肽，或一种与其基本上同源的多肽，或者至少有5个氨基酸的SEQ.IDNo.2的多肽的片段。优选地，本发明的多肽具有下列一种或多种附加特点，即(1)具有内切木糖聚半乳糖醛酸酶活性；(2)具有从2.5到6的最适pH值范围；(3)在50℃到70℃的温度具有最佳活性；和/或(4)具有从40到50Kda的分子量大小。“内切木糖聚半乳糖醛酸酶活性”定义为可以切割在内部糖苷键中至少部分被木糖取代的半乳糖醛酸聚合物(如在果胶中发现的)的能力。该活性由此允许切割非末端单元的相邻聚半乳糖醛酸(没有一个这样的单位是存在于聚合物的末端，这与外切活性的末端单元可被裂解是相对的)。切割优选地发生在[半乳糖醛酸(1,4)半乳糖醛酸]键。优选地，多肽不能切割木糖取代的半乳糖醛酸残基中末端的木糖残基，例如[半乳糖醛酸(3-1)木糖]键。该多肽倾向于在两个相邻的非木糖取代的聚半乳糖醛酸单元间进行切割，底物聚合物中可被其它糖基单位(如木糖)取代40-80％。本发明所述多肽切割的两个半乳糖醛酸残基可以都被(木糖)取代，或者只有一个被(木糖)取代或者(优选地)均没有被(木糖)取代。可选择地或另外，两个半乳糖醛酸残基可以都被甲基化，或者有一个可被甲基化，或者(优选的)没有被甲基化。优选地，本发明所述的多肽来自于微生物，它拥有编码内切木糖聚半乳糖醛酸酶活性的一种酶的基因。更优选地，这种微生物是一种微生物体，优选地是真菌，理想地是丝状真菌。优选的生物体是曲霉属(Aspergillus)、木霉属(Trichoderma)、青霉属(Penicillium)、顶孢霉属(Acremonium)、镰孢霉属(Fusarium)、腐质霉属(Humicola)、脉孢菌属(Neurospora)、毛霉属(Mucor)、透明小柱霉属(Scytallidium)、毁丝霉属(Myceliophtora)、梭孢壳属(Thielavia)、蓝霉菌(Talaromyces)、Thermomyces、Thermoascus、毛壳属(Chaetomium)、侧孢霉属(Sporotrichum)、Corynascus、Calcarisporiella或Mycelia的种。最佳的生物体是来自于黑曲霉的一些品种。(如Raper和Fennell定义，曲霉属(Aspergillus)，Williams&Wilkins公司，Baltimore，pp293-344，1965)，特别地包括但是不限于黑曲霉、泡盛曲霉(Aspergillusawamori)、塔宾曲霉(Aspergillustubigensis)、棘孢曲霉(Aspergillusaculeatus)、臭曲霉(Aspergillusfoetidus)、日本曲霉(Aspergillusjaponicus)或无花果曲霉(Aspergillusficuum)。本发明的第二部分提供了一种(例如分离和/或纯化)编码本发明第一部分多肽的多核苷酸。例如，本发明提供了编码内切木糖聚半乳糖醛酸酶的一种多核苷酸，这种木糖聚半乳糖醛酸酶的氨基酸序列见SEQIDNo2。本发明进一步提供了一种编码具有与SEQIDNo2氨基酸序列基本上同源的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。还提供了一种选自以下的多核苷酸(a)包含SEQIDNo1所示核苷酸序列或其互补序列的多核苷酸；(b)包含能够与SEQIDNo1所示的核苷酸序列或其片段杂交的多核苷酸；(c)包含能够与SEQIDNo1所示核苷酸序列或其片段的互补序列杂交的多核苷酸；和/或(d)包含能够与(a)、(b)、(c)所定义的多核苷酸由于遗传密码的简并性而与它们简并的多核苷酸。本发明所述的多核苷酸也包括一种多核苷酸，其a．编码一种拥有内切木糖聚半乳糖醛酸酶活性的多肽，该多核苷酸是(1)SEQIDNo1的编码序列；(2)能够选择性地与(1)中定义的序列的互补序列杂交的序列；(3)与(1)或(2)中分别定义的序列由于遗传密码而简并的序列；或b．与(a)中定义的多核苷酸互补的序列。“能够杂交”一词意思是本发明的靶多核苷酸能够与用做探针的核酸(如SEQIDNo1中的核苷酸序列，或其片段或其互补序列)以显著高于背景的水平杂交。发生背景水平的杂交可能因为例如，其它多核苷酸(象DNA分子)的存在，例如在筛选基因组或cDNA文库。在这种情况下，背景是指发生在探针和文库中的非特异性多核苷酸部分之间的相互作用所产生信号的水平，强度不超过与观察到的靶多核苷酸特异相互作用的1/10，优选地不超过1/100。相互作用的强度可以进行测量，例如，采用放射性标记探针，如使用32P。将在后面描述适宜的条件。优选地，本发明的多核苷酸与多肽来自同一种生物体，例如真菌，特别是曲霉属的真菌。本发明还提供了多核苷酸探针，其包含上述本发明多核苷酸的至少15个核苷酸片段。在第三部分，本发明提供了包含本发明所述多核苷酸的载体，包括克隆载体和表达载体，在第四部分生长的方法中，将这些载体转化或转染进合适的宿主细胞，例如在可表达本发明所述多肽或本发明中序列编码多肽的条件下进行。第五部分提供的是包含本发明的多核苷酸或载体的宿主细胞，其中该多核苷酸与宿主细胞的基因组是异源的。“与宿主细胞的基因组是异源的”这个词意思是多核苷酸天然不存在于宿主细胞的基因组中。优选地，宿主细胞是酵母细胞，例如克鲁维酵母属(Kluyveromyces)或酵母属(Saccharomyces)的酵母细胞，或一种真菌细胞，例如曲霉属的。具有内切木糖聚半乳糖醛酸酶活性的本发明的多肽可在第六部分中用于处理包括植物果肉和植物提取物的植物材料。例如，它们可用以在苹果汁生产过程中处理苹果果肉和/或原汁。本发明的多肽与合适的载体或包括缓冲液的稀释液结合在一起，以产生一种组合物/酶制剂。这样本发明在第七部分提供了一种包含本发明的多肽的组合物。此组合物还可包含另外的组分，诸如一种或多种酶，例如果胶酶，包括内切阿聚糖酶和鼠李糖聚半乳糖醛酸酶、纤维素酶和/或木糖聚半乳糖醛酸酶。因此，本发明的多肽和组合物可用在植物材料加工的方法中，来降解或修饰植物材料细胞壁的果胶组分。因此在第八部分，本发明提供了一种降解或修饰植物细胞壁的方法，此方法包括用本发明的多肽或组合物与植物细胞壁接触。本发明还提供了一种加工植物材料的方法，此方法包括用本发明的多肽或组合物与植物材料接触，以降解或修饰植物材料中的果胶。优选地，植物材料是植物果肉或植物提取物。尤其是，降解优选地包括对植物细胞壁的果胶成分之木糖聚半乳糖醛酸酶亚单位的内切型剪切。优选地，植物材料是水果或蔬菜果肉，或是水果或蔬菜提取物，例如，苹果果肉或苹果汁。本发明还提供了一种通过用本发明的多肽或组合物与植物材料接触而得到的加工的植物材料。优选地，加工的植物材料是水果或蔬菜汁，例如苹果汁。本发明也提供了一种减少植物提取物粘度的方法，此方法包括用有效量的本发明的多肽或组合物与植物提取物接触，以降解含在该植物提取物中的果胶。本发明的一部分优选的特点和特性对其它方面也是适用的。发明详述A．多核苷酸本发明提供了一种多核苷酸，其a．编码一种具有内切木糖聚半乳糖醛酸酶活性的多肽，此多核苷酸是(1)SEQIDNo.1的编码序列；(2)可选择性地与(1)中定义的序列之互补序列杂交的序列；或(3)由于遗传密码的简并性与(1)或(2)中定义的核酸序列简并的序列；或b．是一段与(a)中所述的多核苷酸互补的序列。本发明的多核苷酸也包括具有内切木糖聚半乳糖醛酸酶活性的SEQIDNo.1的编码序列的变异体。变异体可由添加、替换和/或缺失形成的。因此这些变异体可具有在内部剪切半乳糖醛酸聚合物的能力。通常本发明的多核苷酸包含连续的核苷酸序列，其在选择性条件下能与SEQIDNo.1的编码序列的互补序列杂交。本发明的多核苷酸及SEQIDNo1编码序列的互补序列可以以显著高于背景的水平杂交。可能会发生背景杂交，例如，由于在cDNA文库中其它cDNA的存在。本发明的多核苷酸与SEQIDNo1编码序列的互补序列之间相互作用所产生的信号水平一般比其它序列与SEQIDNo1编码序列之间相互作用所产生信号至少强10倍，优选地至少强100倍。相互作用的强度可以测定，例如采用如32P标记放射性探针。一般可采用低严谨条件(例如，0.03M氯化钠，0.03M柠檬酸钠，在约40℃)、中等严谨条件(例如，0.03M氯化钠，0.03M柠檬酸钠，在约50℃)和高严谨条件(例如，0.03M氯化钠，0.03M柠檬酸钠，在约60℃)可以实现选择性的杂交。一个优选的能够与SEQIDNo1的DNA序列之互补序列选择性杂交的多核苷酸与SEQIDNo1的编码序列一般存在至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的相同性。覆盖的区域至少有20个，优选地是至少30个，例如至少40个、至少50个、至少60个或优选至少100个连续的核苷酸，或者最优选地是覆盖SEQIDNo1的全长。上述任何不同的序列相同性和最小的长度间的组合都可以用来定义本发明的多核苷酸，优选地采用更严格的组合(指更高的序列相同性覆盖更长的长度)，例如超过25个，优选地超过30个核苷酸的序列相同性至少90％的一段多核苷酸，或者超过40个核苷酸具有至少达到95％序列相同性的一段多核苷酸。可以通过核苷酸置换的方法修饰SEQIDNo1的编码序列，例如从1个、2个、3个到10个、25个、50个或100个核苷酸置换。SEQIDNo1的多核苷酸还可以通过一个或多个插入和/或删除(如与上述置换的数目相同)和/或在一个末端或两个末端的延伸而被修饰。被修饰的多核苷酸一般编码具有内切木糖聚半乳糖醛酸酶活性的多肽。当被修饰的序列被翻译后，简并性的置换和/或置换可导致保守氨基酸的置换，例如在第11页的表中有关多肽的部分。本发明所述多核苷酸可包括DNA或者RNA。它们可能是单链或双链。它们也可是内部包括人工合成或修饰的核苷酸的多核苷酸，现有技术已知可以对多核苷酸进行多种不同类型的修饰，包括膦酸甲酯骨架和硫代磷酸酯(phosphorothioate)骨架，在分子的3’-和/或5’-末端增加吖啶或多聚赖氨酸链。为了本发明的目的应该可以理解，这里所描述的多核苷酸可以被任何本领域现有的方法所修饰。可以理解本领域熟练技术人员可以使用常规的技术，进行不影响本发明所述多核苷酸编码的多肽序列的核苷酸置换，以反映任何待表达本发明多肽的宿主生物的密码子偏好性。本发明所述的多核苷酸也可以用做引物(例如PCR引物)，用于其它扩增反应的引物，用做探针，例如采用常规的放射性或非放射性方法标记的显示性探针，或者此多核苷酸可以被克隆到载体中。这类引物、探针和其它片段的长度至少在15个，优选地至少20个，例如至少25个、30个或40个核苷酸。一般可以达到40个、50个、60个、70个、100个或150个核苷酸的长度。探针和片段的长度可以超过150个核苷酸，例如200个、300个、400个、500个、600个、700个核苷酸长度，甚至达到仅比SEQIDNo1的编码序列短几个核苷酸(如5个或10个核苷酸)。本发明的多核苷酸(象DNA)和引物可由重组、合成制备或通过在本领域技术人员可用的技术等任何方法产生。它们也可用标准的技术进行克隆。多核苷酸通常以分离和/或纯化的形式提供。一般地，引物将通过合成的方式生产，包括一次一个核苷酸的目的核酸序列的分步操作。用自动化技术完成这些任务的方法在本领域中是可得的。较长的多核苷酸通常用重组的方法制备，例如用PCR(聚合酶链式反应)克隆技术。这涉及根据待克隆的内切木糖聚半乳糖醛酸酶基因的区域设计一对引物(例如，约15-30个核苷酸的一对)，将引物与从真菌、酵母、细菌植物或原核细胞中获得的mRNA或cDNA相接触，在能发生目的区域扩增的条件下进行聚合酶链式反应，分离扩增的片段(例如，通过在琼脂糖凝胶上纯化反应混合物)以及回收扩增的DNA。引物应设计成含合适的限制性酶切位点，以使扩增的DNA能克隆到合适的克隆载体中。这种技术可用来获得此处所述的全部或部分内切木糖聚半乳糖醛酸酶序列。对应于SEQIDNo.1的cDNA或内切木糖聚半乳糖醛酸酶基因的基因组克隆，包含例如内含子和启动子区域包括在本发明之内，其也可用类似的方式(如重组方法、PCR、克隆技术)从来自真菌、酵母、细菌植物或原核细胞的基因组DNA获得。尽管此处所述的技术是本领域熟知的，可参考一些文献尤其是Sambrook等，分子克隆，实验室手册(MolecularCloning,ALaboratoryManual)(1989)和Ausubel等，现代分子生物学方法(CurrentProtocolsinMolecularBiology)(1995),JohnWileySons,Inc。与SEQIDNo.1没有100％相同性但落在本发明范围内的多核苷酸可用许多方法获得。这样，此处所述的内切木糖聚半乳糖醛酸酶的变异体可通过，诸如探查来自一定范围生物体的基因组DNA文库，例如那些作为本发明的多肽来源的生物体的方法来获得。另外，也可获得其它真菌、植物或内切木糖聚半乳糖醛酸酶的原核同源物，并且这些同源物和其片段，其一般能与SEQIDNo.1杂交。这些序列可通过探查来自其它种的cDNA文库或基因组文库来获得，并且在中等到高严谨条件下(例如，0.03M氯化钠，0.03M柠檬酸钠，在50℃-60℃)用包含所有或部分SEQIDNo.1的探针探查这些文库。包含所有或部分SEQIDNo.1的核酸探针可用来探查来自其它种的cDNA文库，例如那些描述的作为本发明的多肽来源的品种。种同源物也可用简并PCR获得，此PCR用设计在编码保守氨基酸序列的变异体和同源物之间的靶序列的引物。此引物包括一种或多种简并性位点，可使用比采用针对已知序列的单一序列引物克隆序列时所用条件低的严谨条件。或者，这类的多肽可以通过对内切木糖聚半乳糖醛酸酶或其变异体进行定点诱变方法来获得。例如，在需要序列沉默密码子改变，以优化表达该多核苷酸序列的特定宿主细胞的密码子偏好中是有益的。为了引入限制性酶内切位点，或者，为了改变由该多核苷酸编码的多肽的性质或功能也需要一些其它的序列改变。本发明包含带有本发明的多核苷酸及其互补序列的双链多核苷酸。本发明所述的多核苷酸或引物可带有一种显示标记。适宜的标记包括如32P和35S的放射性同位素标记、酶标、或者其它蛋白质标记，如生物素和DIG-半抗原。这些标记可以添加到本发明所述的多核苷酸或引物上，并可以采用自知的技术进行检测。本发明还提供了下述编码本发明多肽的多核苷酸。由于这些多核苷酸序列可用于重组生产本发明所述的多肽，因此不需要这些序列具有与SEQIDNo1杂交的能力，虽然一般需要这种能力。另外，这些多核苷酸可被标记，如需要可如上制得。B．多肽本发明的多肽包含SEQIDNo2所示的氨基酸序列或者基本上同源的序列，或者任一序列的片段，其可具有内切木糖聚半乳糖醛酸酶活性。一般来讲，SEQIDNo2所示的天然存在的氨基酸序列是优选的。特别是，本发明所述的多肽可包括a．SEQIDNo2所述的多肽序列；b．天然存在的变异体或不同物种间的其同源序列；或者c．与(a)或(b)所述的序列存在至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列相同性的蛋白质。变异体可以是，例如在真菌、细菌、酵母或者植物细胞中天然存在的。其可以以与SEQIDNo2的蛋白质基本上相同的方式发挥功能。同样，一种蛋白质种间同源物应该是在另一物种中天然存在的等效蛋白质，其具有内切木糖聚半乳糖醛酸酶活性。变异体和种间同源物可以在适宜的细胞中，例如细菌、酵母、真菌或植物细胞中通过下述的步骤生产SEQIDNo2多肽而获得。也可以用上述的探针探查酵母、细菌、真菌或植物细胞文库来获得包括变异体和种间同源物在内的克隆。该克隆可经常规操作来通过自知的重组或合成技术以生产本发明所述的多肽。优选地，本发明所述多肽与SEQIDNo2的蛋白质具有至少60％的相同性，更加优选地是至少70％、80％、90％、95％、97％或至少99％的序列相同性。覆盖的长度至少应达到20个连续的氨基酸，优选地是至少30个，例如至少40个、60个、100个、200个或300个连续的氨基酸，或者达到SEQIDNo2的全长。可以通过对SEQIDNo2多肽的序列及其变异体和种间同源物进行修饰来提供本发明的多肽。可以进行氨基酸的置换，例如从1个、2个或3个到10个、20个到30个置换。也可以进行同样数目的插入或缺失。修饰后的多肽一般保留内切木糖聚半乳糖醛酸酶的活性。按照下表可以进行保守的置换，位于表中第二栏同一区的，优选的第三栏中同一行的氨基酸间可以相互置换。本发明所述多肽还包括上述全长多肽及其变异体的片段，包括SEQIDNo2所示序列的片段。这类片段一般保留了内切木糖聚半乳糖醛酸酶的活性。片段可至少有10、15、20、30、50、100或200个氨基酸的长度。本发明所述多肽可以为基本上分离的形式。可以理解，该多肽在与不影响其特定目的的载体或稀释液混合时也可以被认为是基本上分离的。本发明所述的多肽也可以处于基本上纯化的形式，本发明所述多肽一般在制剂的多肽中应包含超过50％，例如超过80％、90％、95％、98％或99％(以重量计)的本发明的多肽。也可以对本发明所述多肽进行化学修饰，例如翻译后修饰，例如可以被糖基化(一次或多次)或者包含一个或多个被修饰的氨基酸残基。也可以通过添加组氨酸残基或T7标签来修饰这些多肽，从而帮助鉴定和纯化它们，或者通过增加信号肽序列促进它们从细胞中的分泌，下面将进行讨论。如果需要，本发明所述多肽可以通过合成的方法进行生产，尽管通常是采用下面将要讨论的重组方法制造。特别优选的本发明所述多肽包括由SEQIDNo2中所示氨基酸序列的第19～406氨基酸组成的多肽，因为它不含有构成SEQIDNo2中第1～18氨基酸的N-末端信号肽。这些多肽及其片段可以含有前面所定义的氨基酸变化。在重组表达生产本发明多肽时使用酵母和真菌宿主细胞，预计可以提供最佳生物学活性所需要的翻译后修饰(例如，蛋白水解加工、豆蔻酰化、糖基化、截短和酪氨酸、丝氨酸或苏氨酸磷酸化)。C．重组方面本发明所述多核苷酸可以被掺入到一个重组可复制性载体，例如一种克隆或表达载体中。载体可以在适宜的宿主细胞中用于复制该核酸分子。因此在又一实施方案中，本发明提供了一种制备本发明多核苷酸的方法，包括将本发明所述多核苷酸引入一种可复制的载体，将载体导入一种相容性宿主细胞，在一定条件下培养宿主细胞以使载体复制。可从宿主细胞中回收载体。适宜的宿主细胞将与表达载体一起在下一部分进行描述。表达载体优选地，本发明所述的多核苷酸在载体中是与一种调控序列有效地连接的，该调控序列能使宿主细胞表达编码序列，即载体是表达载体。“有效地连接”一词的意思是指所描述的成分在位置上相邻并允许它们以预定方式发挥它们的功能。一种调控序列，例如启动子、增强子或其它表达调控信号与编码序列“有效地连接”，将其放在合适的位置，使得编码序列能够在与控制序列相适合的条件下实现表达。载体可以是，例如带有复制起始位点、任选地表达本发明多核苷酸的启动子和任选地的启动子调控区域的质粒、病毒或噬菌体载体。编码该多肽的DNA序列可被导入合适的宿主细胞作为表达构建体的一部分，其中该DNA序列可与能够指导宿主细胞中的DNA序列表达的表达信号有效地连接。将此表达构建体转化合适的宿主之转化步骤对于本领域熟练人员来说是很熟悉的3,4。此表达构建体可用于转化宿主，做为携带一种选择性标记的载体的一部分，或者此表达构建体作为单独的分子与携带一种选择性标记的载体一起共转化。载体可包括一种或多种选择性标记基因。优选的选择性标记3,4包括但并不局限于诸如能用于转化大部分丝状真菌和酵母的通用标记基因，如乙酰胺酶基因或cDNA(来自构巢曲霉(A.nidulans)、或米曲霉(A.oryzae)或黑曲霉的amdS基因或cDNA)、或是提供抵抗象G418、潮霉素、腐草霉素或苯菌灵抗性(benA)的基因。另外，可使用更多的特异性选择性标记，例如需要相应突变的宿主菌株的营养缺陷型标记例如URA3(来自酿酒酵母或来自其它酵母的类似基因)、pyrG(来自构巢曲霉或黑曲霉)或argB(来自构巢曲霉或黑曲霉)。在一种更优选的实施方案中，根据EP-A-0635574中所述的方法，将表达构建体导入后把选择性标记从转化的宿主细胞中删除，从而获得能生产不含选择性标记的多肽的转化宿主细胞。其它标记包括ATP合成酶、亚单位9(oliC)、乳清酸核苷-5’-磷酸-脱羧酶(pvrA)、细菌G418抗性基因(这也可用于酵母，但不能用于真菌)、氨苄青霉素抗性基因(用于大肠杆菌)，新霉素抗性基因(芽孢杆菌)以及大肠杆菌uidA基因，编码β-葡糖醛酸酶(GUS)。载体可用于体外，例如用于制备RNA或用于转染或转化宿主细胞。对于大多数的丝状真菌和酵母，优选的表达构建体是整合到宿主细胞基因组中以获得稳定的转化。但是，对于某些酵母来讲，也有合适的附加型载体系统，其中可掺入此表达构建体用于稳定的和高水平的表达。其中的实例包括分别衍生自酵母属和克鲁维酵母属的21μ和pKD1质粒的载体。对于整合于宿主细胞基因组中的表达构建体，表达构建体可以整合在基因组的随机位点，或利用同源重组方法整合于预定的靶位点，优选的靶位点包含一个高表达基因。在这里定义的一个高表达基因，其mRNA例如在诱导条件下至少应占细胞总mRNA量的0.05％(w/w)，或者其基因产物至少占细胞总蛋白量的1％(w/w)，或者，对于分泌的基因产物，分泌的水平至少达0.1g/L。这里随后将提供许多合适的高表达基因的例子。对于一种给定的宿主细胞之表达构建体，通常包含下列(按照相对于第一部分中编码所述多肽的编码链5’-末端到3’-末端方向)有效地连接的元件(1)在给定的宿主细胞中能指导编码所述多肽的DNA序列转录的启动子序列；(2)任选的，一个可以在给定的宿主细胞中指导所述多肽分泌到培养基中的信号肽序列；(3)编码成熟和优选的活性形式多肽的DNA序列，以及优选地(4)能在编码所述多肽的DNA序列下游终止转录的转录终止区(终止子)。通过选择异源的调控区，例如启动子、分泌信号肽和终止子等用于提高表达水平的区域，可以实现编码本发明所述多肽之多核苷酸的增强表达，如果需要，也可以提高在已选择的表达宿主中目的蛋白的分泌水平和/或提供本发明所述多肽表达的可诱导的控制。除编码本发明所述多肽基因的天然启动子，其它的启动子也可以用于指导本发明所述多肽的表达。可以按照在所需表达宿主中指导本发明所述多肽的表达效率来选择启动子。可用多种3,4可在宿主细胞中指导本发明所述多肽的转录的启动子。优选地，启动子序列来自于前面定义的高表达基因。启动子所来自的高表达基因例子优选地来自和/或包含在用于表达构建体整合的预定的靶位点中，包括但不仅限于编码糖酵解酶的基因，如丙糖磷酸异构酶(TPI)、磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、磷酸甘油酸激酶(PGK)、丙酮酸激酶(PYK)、乙醇脱氢酶(ADH)以及编码淀粉酶、葡糖淀粉酶、木糖酶、纤维二糖水解酶、β-半乳糖苷酶、乙醇(甲醇)氧化酶、延伸因子和核糖体蛋白的基因。特异合适的高表达基因的例子包括来自例如克鲁维酵母属的种的LAC4基因、分别来自汉逊酵母属(Hansenula)和毕赤酵母属(Pichia)的种的甲醇氧化酶基因(AOX和MOX)、来自黑曲霉和泡盛曲霉的葡糖淀粉酶(glaA)基因、米曲霉TAKA-淀粉酶基因、构巢曲霉的gpdA基因和T.reesei的纤维二糖水解酶基因。可以在真菌表达宿主中使用的强组成型和/或诱导型表达启动子的例子有获自真菌基因的木糖酶(xlnA)、植酸酶、ATP合成酶、亚基9(oliC)、磷酸丙糖异构酶(tpi)、乙醇脱氢酶(AdhA)、α-淀粉酶(amy)、淀粉葡萄糖苷酶(AG-来源于glaA基因)、乙酰胺酶(amdS)和甘油醛-3-磷酸脱氢酶(gpd)等启动子。强的酵母启动子的例子有来源于乙醇脱氢酶、乳酸酶、3-磷酸甘油酸激酶和磷酸丙糖异构酶等基因的启动子。强的细菌启动子的例子是α-淀粉酶和SPO2的启动子，以及来自细胞外蛋白酶基因的启动子。宿主细胞和表达优选地，多肽以一种分泌蛋白的形式产生，在此情况下，编码表达构建体中多核苷酸的成熟形式的DNA序列有效地与编码信号序列的DNA序列连接。优选地，信号序列对于编码多肽的DNA序列是天然的(同源的)。另外，信号序列对于编码多肽的DNA序列是外来的(异源的)，在此情况下信号序列对于在其中表达DNA序列的宿主细胞优选是内源的。合适的酵母宿主细胞的信号序列的例子是来自酵母α-因子基因的信号序列。同样地，一种适于丝状真菌的信号序列是例如来自丝状真菌葡糖淀粉酶基因(如黑曲霉glaA基因)。这可与淀粉葡糖苷酶(AG)启动子自身一起使用，也可与其它启动子联合使用。杂合信号序列也可用在本发明的范围之列。优选的异源分泌引导序列有来源于真菌的淀粉葡糖苷酶(AG)基因(glaA-18和24个氨基酸的版本，例如来自曲霉属的)、α-因子基因(例如酵母属和克鲁维酵母属的)或者α-淀粉酶基因(芽孢杆菌属)。在编码本发明多肽DNA序列的下游，表达构建体优选地包含一个3’-非翻译区，其中带有一个或更多的转录终止位点，也称为终止子。终止子的来源并不关键。终止子可以是对于编码本发明多肽DNA序列为天然的终止子。但是优选地，在酵母宿主细胞中使用酵母终止子及在真菌宿主细胞中使用真菌终止子。更优选地，终止子对于在其中表达编码本发明所述多肽的DNA序列的宿主细胞来讲应是内源的。另一方面，本发明提供了按照本发明制备多肽的方法，包括在可使带有编码本发明所述多肽的编码序列的载体表达的条件下，培养已被前述表达载体转染或转化的宿主细胞，以及回收表达的多肽。另一方面，本发明还提供了被包含本发明所述多核苷酸或载体转染或转化的宿主细胞。优选地，本发明多核苷酸携带于一个载体中以便复制和表达。应选择与上述载体相容性的细胞，例如原核细胞(如细菌)、真菌、酵母或植物细胞。根据编码本发明多肽的多核苷酸的特点，和/或表达蛋白的进一步加工的需要，优选的可是真核宿主细胞，如酵母或真菌。一般来说，酵母细胞优于真菌细胞，因为它们易于操作。但是，一些蛋白质难以从酵母细胞中分泌，或者在某些情况下不能正确加工(例如在酵母细胞中的过度糖基化)。在这些情况下，应选择真菌宿主机体。当本发明多肽要以基本上无其它果胶降解酶的形式表达，也可以选择异源宿主。可以通过选择一般不产生这些酶类的宿主来达到这一要求，例如乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyceslactis)。本发明包括通过重组表达编码多肽的DNA序列的方法生产本发明的多肽的过程。为此目的，本发明的DNA序列可用于基因扩增和/或表达信号的交换，例如启动子、分泌信号序列，从而在同源的或异源的宿主细胞中允许经济的多肽生产。此处的同源宿主细胞定义为一种与DNA序列所衍生的种类为同一种或同一种的变异体的宿主细胞。合适的宿主细胞最好是原核微生物例如细菌、或更优选地是真核生物体，例如真菌，诸如酵母或丝状真菌、或植物细胞。来自芽孢杆菌属的种的细菌由于其能分泌蛋白质进入培养液，其作为异源宿主是非常合适的。其它合适的作为宿主的细菌是那些来自链霉菌属(Streptomyces)和假单胞属(Pseudomonas)的细菌。一种优选的表达编码多肽的DNA序列的酵母宿主细胞是来自酵母属、克鲁维酵母属、汉森酵母属、毕赤酵母属、Yarrowia和裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)。更优选地酵母宿主细胞是选自下列属的种酿酒酵母、乳酸克鲁维酵母(也称作马克思克鲁维酵母乳酸变种(Kluyveromycesmarxianusvar.1actis))、多形汉森酵母(Hansenulapolymorpha)、毕赤巴斯德酵母(Pichiapastoris)、Yarrowialipolytica和粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomycespombe)。然而最优选地表达编码多肽的DNA序列的是丝状真菌宿主细胞。优选的丝状真菌宿主细胞选自下列属的种曲霉属、木霉属、镰孢霉属、青霉属、顶孢霉属、脉孢菌属、Thermoascus、毁丝霉属、侧孢霉属、梭孢壳属和Talaromyces。更优选地，丝状真菌宿主细胞是属于米曲霉、酱油曲霉(Aspergillussojae)、构巢曲霉，来自黑曲霉群的种(由Raper和Fennell定义，曲霉属，Willians&Wilkins公司，Baltimore,pp293-344,1965)。这包括但并不局限于黑曲霉、泡盛曲霉、塔宾曲霉、棘孢曲霉、臭曲霉、构巢曲霉、日本曲霉、米曲霉和无花果曲霉，并进一步包括Trichodermareesei、禾本科镰孢(Fusariumgraminearum)、产黄青霉(Penicilliumchrysogenum)、Acremoniumalabamense、红色脉孢霉(Neurosporacrassa)、Myceliophtorathermophilum、Sporotrichumcellulophilum和Thielaviaterrestris。本发明范围内优选的表达宿主的例子是真菌，例如曲霉属的种(描述于EP-A-184438和EP-A-284603)和木霉属的种；诸如芽孢杆状属的种的细菌(描述于EP-A-134048和EP-A253455)，例如，枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)、液化淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)、假单胞菌属的种；以及酵母，例如克鲁维酵母属的种(描述于EP-A-096430，例如乳酸克鲁维酵母和EP-A-301670)和酵母属的种，例如酿酒酵母。宿主细胞培养和重组生产根据本发明，本发明的多核苷酸的生产可受到培养的微生物表达宿主的影响，该表达宿主已被一种或多种本发明的多核苷酸转化，且在常规营养发酵培养基培养。根据本发明的重组宿主细胞可用本领域熟知的步骤培养。对于各个启动子和宿主细胞的组合，有益于编码多肽的DNA序列表达的培养条件是可用的。当达到所需的细胞密度或多肽效价即停止培养，并用已知的步骤回收多肽。发酵培养基可包括含有碳源(例如葡萄糖、麦芽糖、糖蜜等)、氮源(例如硫酸铵、硝酸铵、氯化铵等)、有机氮源(例如酵母提取物、麦芽提取物、蛋白胨等)以及无机营养源(例如磷酸、镁、钠、锌、铁等)的已知培养基。任选地，也可包括诱导剂(例如苹果MHR、果胶或木糖聚半乳糖醛酸)。选择合适的培养基可根据选择的表达宿主细胞和/或根据表达构建体的调控需要。这些培养基为本领域技术人员所熟知。如果需要，培养基可包含附加的组分以有利于转化的表达宿主对抗其它潜在的污染性微生物。发酵可进行的时间为0.5-20天，以分批、连续的或分批补料的操作形式在0-45℃的温度范围是合适的，例如，在2和10之间的pH。优选的发酵条件是温度在20和37℃范围内和/或在3和9之间的pH。合适的条件通常是根据表达宿主和要表达的蛋白质而选择的。发酵后，可通过离心或过滤将细胞从发酵肉汤中除去。除去细胞后，本发明的多肽可回收，若需要的话，用常规方法纯化和分离。D．植物或含果胶材料的加工方法植物和含果胶的材料包括植物果肉、植物的部分和植物提取物。在本发明的范围中，植物材料的提取物是能通过提取(机械的和/或化学的)、加工或通过其它分离技术而得的任何来源于植物材料的物质。提取物可以是汁液、花蜜、基料(base)或由它们制得的浓缩物。植物材料可包括或来自蔬菜，例如，胡萝卜、芹菜、洋葱、豆荚或豆类植物(大豆、黄豆、豌豆)或水果，例如，梨果或种子水果(苹果、梨、温柏等)、葡萄、西红柿、柑橘类植物(橘子、柠檬、酸橙、中国柑桔)、瓜类、李子类、樱桃、黑醋栗，红醋栗、覆盆子、黑莓、大果越桔、凤梨和其它热带水果、树和其部分(例如来自松树的花粉)。根据本发明，苹果和苹果汁是特别优选的。本发明的多肽可由此用于处理包括植物果肉或植物提取物的植物材料。举例来说，在苹果汁的生产过程中它可用于处理苹果果肉和/或原果汁。它们还可用于处理液态物质或固体食品或可食用的食品成分。通常，本发明的多肽与合适(固体或液体)的载体或包括缓冲液的稀释剂一起使用，以产生一种组合物或酶制剂。多肽通常以液体或干粉形式稳定地配制。通常，产物制成一种任选地包含例如稳定缓冲液和/或防腐剂的组合物。组合物还可包括其它能消化植物材料或果胶的酶，例如其它果胶酶，诸如内切-阿聚糖酶、鼠李糖聚半乳糖醛酸酶、和/或多聚半乳糖醛酸酶。对某些应用，在固体基质上酶的固定或与固体载体颗粒结合或进入固体载体颗粒是优选的。组合物也可包括多种其它降解植物材料的酶，例如纤维素酶和其它果胶酶。因此本发明的多肽和组合物可用于植物材料加工方法中，以降解或修饰植物材料细胞壁的果胶成分2。通常，本发明的多肽被用做如上所述的组合物/酶制剂。此组合物一般被加入如用机械加工(象粉碎或压榨)得到的植物果肉中。将组合物和植物一起孵育，通常进行10分钟到5小时，诸如30分钟到2小时，最好是约1小时。优选地，加工温度为10-55℃，例如从15-25℃，最合适地，大约20℃，并且每吨要处理的物质可用10-300g，优选地30-70g，最合适地大约50g的酶。所有的酶或其组合物可按顺序或同时加入到植物果肉中。根据酶制剂的组合物，植物材料可首先被浸软(呈浓汤状)或液化。使用本发明的多肽加工参数例如提取的产量、提取物的粘度和/或提取物的质量可得到提高。另外，或除上所述，本发明的多肽可加入到来自压榨或液化植物果肉得到的原汁中。关于剂量、温度、保持时间方面，处理原汁和处理植物果肉的方式是类似的。此外，其它的酶，例如那些前面讨论过的酶也包括在内。通常的孵育条件和前面段落描述的相同。原汁和本发明的多肽一起孵育后，果汁经离心或(超滤)过滤以生产出终产品。含有本发明的多肽的组合物也可在水果或蔬菜汁的制备过程中使用。这些步骤的终产物通常在85℃热处理1分钟到1小时的一段时间，在部分或完全灭活本发明多肽的条件下进行。由于对果胶的高度特异作用，本发明的多肽也可用于制备具有修饰的特性的果胶，例如，用于特殊应用的修饰的凝胶化能力。本发明的多肽也可加入富含果胶或木糖聚半乳糖醛酸的动物饲料，例如含大豆的食物中，以改进植物细胞壁的破碎，从而提高动物对植物营养的利用。如果预浸透或流质食品是优选的，本发明的多肽可添加到饲料或贮藏的饲料中。有利地，本发明的多肽可继续在体内降解食物中的木糖聚半乳糖醛酸。本发明真菌来源的多肽一般有最合适的较低的pH，并能在象动物的胃这样的酸性环境中释放出重要的营养物质。因此本发明也构思了包括一种或多种本发明的多肽的(如动物)饲料或粮食。本发明的多肽也可用在从大豆中生产牛奶的替代品(或替代物)的过程中。这种牛奶的替代品人和动物都可使用。在制备这些牛奶替代品的过程中通常的一个问题是大豆浆液的高粘度，导致需要不希望的对浆液稀释到干固体10-15％的浓度。包含本发明多肽的酶制剂可加入，或在浆液的加工过程中加入，能使在一种较高浓度(通常40-50％)干固体的情况下加工。酶也可用在风味产品的制作中，例如用大豆制作。果胶降解酶的检测此处描述的新的检测方法和底物使得可鉴定和确定内切-木糖聚半乳糖醛酸酶的活性。然而，这些方法可用于检测其它果胶降解酶是否有内切-木糖聚半乳糖醛酸酶的活性。可用于此种检测方法的底物可包括已经过强酸处理的西黄蓍胶。优选的酸是三氟乙酸(TFA)。西黄蓍胶可任选地被皂化和/或其已被碱处理，例如一种碱金属氢氧化物，例如氢氧化钠。本发明的另一部分涉及鉴定或检测一种能降解果胶的多肽的检测方法。活性可以是内切-木糖聚半乳糖醛酸酶或、或可以是果胶裂解酶、多聚半乳糖醛酸酶、酯酶、纤维素酶、木糖聚半乳糖醛酸酶、半乳糖醛酸酶、阿拉伯聚糖酶和鼠李糖聚半乳糖醛酸酶。此检测方法包括a．提供前面段落描述的底物，作为候选化合物(通常为一种多肽)的底物；和b．用候选化合物接触底物，检测是否引起任何碳水化合物的减少。碳水化合物的减少的量能测量出来。若必要，它们然后可与没有候选化合物存在的对照实验中的碳水化合物的量相比较。测量可包括BCA检测。这可包括用存在的碳水化合物的减少测量Cu(Ⅱ)还原为Cu(Ⅰ)的量。这可通过与二辛可酸(BCA)接触，并确定BCA-Cu(Ⅰ)复合物形成的量。本发明现将关于下列仅是举例但并不局限的实施例进行描述。在图中有实施例。图1是一种有最高的分子量的苹果MHR(修饰的毛发区)优势群假想的结构示意图(亚单位Ⅰ是木糖聚半乳糖醛酸，亚单位Ⅱ是富含阿拉伯聚糖侧链的骨架，亚单位Ⅲ是鼠李糖聚半乳糖醛酸酶寡聚物。乙酰基的分布没有给出，但主要部分认为是定位在亚单位Ⅲ之内。注GalA=半乳糖醛酸；rham=鼠李糖；gal=半乳糖；xyl=木糖；ara=阿拉伯糖)；图2是根据本发明载体pCVlacK的图谱(构建描述于实施例1)；图3是说明用木糖聚半乳糖醛酸酶(一种本发明的多肽)降解木糖聚半乳糖醛酸后的HPAEC图；图4是说明用木糖聚半乳糖醛酸酶降解前和降解后木糖聚半乳糖醛酸的HPSEC的图；图5说明用木糖聚半乳糖醛酸酶完全降解木糖聚半乳糖醛酸的产物的Malsi-ToF质谱图；图6A-G是表明分别单独用和共同用内切-阿拉伯聚糖酶、鼠李糖聚半乳糖醛酸酶、木糖聚半乳糖醛酸酶降解MHR-S的HPSEC洗脱图；图7和8分别是HPSEC和HPAEC的图，洗脱方式表明用木糖聚半乳糖醛酸酶降解大豆果胶；及图9表明PG、XghA和RHG序列(与XghA序列相同的氨基酸用一个点代替)的多种序列比较，为获得理想的序列比较引入的缺口用(-)指出。在所有植物、真菌和原核PG中的保守氨基酸用阴影表示。注Atub=塔宾曲霉；Anig=黑曲霉；Aac=棘孢曲霉。cDNA厍用SephacrylS-500柱分离大小。最先从柱上洗脱下的级分不含任何cDNA，但第二和第三级分包含最大尺寸的cDNA。接下来的级分大概含有相对大量的非全长cDNA，对构建文库无用。用ClontechLigationExpressTM试剂盒将第二和第三级分的cDNA连接到pCVlacK表达载体的HindⅢ和XhoⅠ位点。每个连接混合物分两批转化至电感受态大肠杆菌XL-BlueMRF1细胞。四份转化悬浮液铺板在32个琼脂平板上(LB+50μg/ml氨苄青霉素)。37℃孵育16小时后，得到7366个转化子。通过将2.5mlLB培养基倒入平板上，然后刮下细胞收集细菌；将0.5ml细胞悬液加入甘油中于-80℃保存；剩余的2ml用做DNA分离(QiagenTMSpinminiprep试剂盒)。如果发现每个平板上的转化子数较低，将2.5ml转到第二、第三或第四个平板上。这产生22个库的325个单一的转化子。混合每个库中等量的DNA用做乳酸克鲁维酵母的转化。实施例1.3表达文库转化乳酸克鲁维酵母过夜培养的生长在30℃的YPD(10g/l酵母提取物、20g/l的Bacto-蛋白胨、20g/l的葡萄糖)上的乳酸克鲁维酵母菌株CBS2359在150ml新鲜的YPD中稀释3000-、600-、300和100倍，并在160转/分的旋转摇床上于30℃孵育6小时。光密度值为0.7-1.0的培养物用做准备电感受态的细胞6。用1μg合并的大肠杆菌文库DNA转化电感受态的细胞。用BioradGenepulserTM的系统进行转化，设置是1.4kV、200欧姆和25μF。转化子的选择用双层的YPD平板(20g/l的Bacto-琼脂的YPD)底层含50μg/mlG418，上层是非选择性的。将660μL的转化混合物铺到80个双层平板上。吸取1.5和15μL的等份液体到各平板上。大约获得10,000个转化子。表1温和酸水解从多糖中有效地去除了阿拉伯糖基和岩藻糖基，然而GlaAXyl的比例基本上没有改变。西黄蓍胶的乙酰基和甲基酯化程度用高压液相(HPLC)来测定7。西黄蓍胶甲基化和乙酰基化的程度分别是大约75％和20％(以摩尔甲基或乙酰基团/每摩尔GlaA计算)。胶的皂化去掉了所有甲基和乙酰基团。聚合物的分子量分布用高压分子排阻层析(HPSEC)方法在三个Bio-GelTSK柱子(40XL、30XL和20XL)上连续地进行8，皂化的西黄蓍胶的温和酸性水解伴随着分子量的减少，尽管得到的产物仍有高的分子量。根据HPSEC的洗脱图，用支链淀粉做参考化合物，木糖聚半乳糖醛酸的估计分子量大约为1100kDa。木糖聚半乳糖醛酸证明能有效地抵抗所有测试的内切-多聚半乳糖醛酸酶和鼠李糖聚半乳糖醛酸酶的酶降解作用。将这些转化子接种于一系列35多孔培养板，其中含80ng/mL抗生素G418的相同的200μL培养基，同时做复制板。乳酸克鲁维酵母转化子在30℃的温箱中生长两天。在HermleTMzk380离心机中3000转/分离心沉淀细胞。实施例3.2底物降解仔细地将每孔的25μL上清吸出转到新的多孔培养板中，加入25μL0.2％的底物缓冲液(来自实施例2的MHR-S或木糖聚半乳糖醛酸或sGT/TFA)或加入100mM醋酸钠缓冲液，pH5.0。于30℃的温箱中孵育过夜后，用BCA方法检测还原糖类的增加。步骤包括在一个多孔培养板中混合10μL包含来自实施例3.2样品的还原糖，和90μL水和100μLBCA试剂。每天通过混合两种溶液，A和B,1∶1(v/v)来制备新鲜的BCA试剂。溶液A在每升蒸馏水含54.28gNa2CO3,24.20gNaHCO3和1.942gNa2BCA。溶液B在每升蒸馏水中含1.248gCuSO4·5H2O和1.262gL-丝氨酸。将含样品、试剂和水的培养板盖上盖子于80℃温箱中孵育1小时。冷却培养板15分钟后，用酶标仪(SLT实验室仪器，澳大利亚；EAR400型)读取550nm的吸收值。半乳糖的检测线表明在0到125μM半乳糖范围内测定是线性的。在BCA检测中产生比空白高0.1单位吸收值的转化子被选出，再一次培养，并采用木糖-聚半乳糖醛酸作为底物进行BCA检测，检查其降解木糖聚半乳糖醛酸的能力。发现三个产生木糖聚半乳糖醛酸酶的转化子。与蛋白数据库比较氨基酸序列表明，与原核、真菌、植物的多聚半乳糖醛酸酶序列以及与曲霉属的鼠李糖聚半乳糖醛酸酶A和B的序列同源。用来自EMBL资料库的序列对XghA的氨基酸序列进行比较。XghA与内切PG有31-39％的序列相似性，与塔宾曲霉的外切PG有44％的序列相似性。XghA与2RGH-A的序列相似性有30％(黑曲霉)和32％(棘孢曲霉)，而与黑曲霉的RGH-B的相似性很有限。图9表明Xgh与PG和RGH-A的多重序列比较的分析。多重序列比较表明四个保守的氨基酸结构域，这是首次对植物、真菌和细菌来源的多聚半乳糖醛酸酶进行的描述15。当将所有的从数据库检索中获得的PG序列排列起来进行比较，只有四个小的氨基酸片段是保守的NXD、DD、HG和RXK(图9中的阴影，其中X代表一种可变的氨基酸)。在水解反应中涉及到的关键氨基酸认为是结构域Ⅰ和结构域Ⅱ的三个天冬氨酸残基以及结构域Ⅲ的组氨酸残基中的一个。这些结构域在XghA中完全保守。假定第四个结构域含涉及底物结合的氨基酸。此结构域的精氨酸残基是XghA中的甘氨酸残基。此结构域在RGH序列上不太保守，三个天冬氨酸残基中只有两个是保守的，且组氨酸被甘氨酸代替。实施例4.2Southern印迹分析XghA基因的拷贝数用几种酶消化后的塔宾曲霉基因组DNA进行Southern印迹分析(没有显示结果)。在严谨条件(65℃和0.2xSSC)和较低严谨条件(60℃和1xSSC)下与xghA的1.0kbHindⅢ片段杂交，清楚地表明单个的杂交片段。这证实xghA基因在塔宾曲霉基因组中是单拷贝存在的。粗酶制剂在HitrapTMQ离子交换柱(PharmaciaBiotech，瑞典)上进行预浓缩，流速为0.3mL/分。洗脱用一种盐梯度从20mM的哌嗪(pH5.0)起始缓冲液(缓冲液A)到20mM的哌嗪(pH5.0)溶液中的0.5MNaCl(缓冲液B)在FPLC系统上进行(PharmaciaBiotech，瑞典)。采用下列梯度1分钟内到10％的B缓冲液，19分钟内到35％的B，经2分钟到100％的B并持续3分钟。采用实施例3描述的方法检查活性并收集活性级分。用20mM的哌嗪(pH5.0)缓冲液将样品稀释3倍，上MiniQ柱(PharmaciaBiotech，瑞典)。在Smart系统(PharmaciaBiotech，瑞典)上采用20mM的哌嗪(pH5.0)起始缓冲液到10mM的HCl的线性pH梯度进行洗脱，流速为0.4mL/分钟。收集活性级分并采用SDS-PAGE进行检查。采用银染的方法在分子量大约60kDa的位置发现一个蛋白质条带。推测与基于DNA序列预测的分子量为45kDa(见实施例4)的区别是由于糖基化的原因。为测定pH和温度的最优条件，纯化的酶和底物在pH范围从2.5到8或温度范围从20到80℃温育2小时。此后，还原糖的增加用实施例3所述的方法测定。在温度为60℃和pH3.0时酶有最佳活性。在pH2.5到5.0的范围酶表现出不超过50％的活性。pH2.5时的活性仍然有pH3.0时最大活性的95％。没有测量低于pH2.5时的值。用4×250ml规格的DionexcarbopackPA1柱进行HPAEC。用0.1MNaOH(溶液A)和在0.1MNaOH中的1MNaOAc(溶液B)进行洗脱。采用下列梯度50分钟内从0到62％B,5分钟内到100％B，然后100％B持续5分钟。酶没有产生木糖(预期在5分钟的保持时间)和半乳糖醛酸(预期在15分钟的保持时间)，甚至孵育8小时后也没有。仅有寡聚物释放出来，最小的寡聚物发现在约22分钟的保持时间这是木糖-半乳糖醛酸二聚体。(图3中，下线(A)t=1小时，中线(B)t=4小时，顶线(C)t=8小时的孵育)。用三个连续的柱进行HPSECBio-GelTSK40(300×7.5mm，来自Biorad),Bio-GelTSK30XL(300×7.5mm，来自Biorad)和TSKGelG2500PXL(300×7.8mm，来自TosoHaas)。图4说明木糖聚半乳糖醛酸的高分子量部分被迅速地降解(上线(B)代表降解前的聚合物，下线(A)代表降解后的聚合物)。当用Maldi-ToF质谱仪监测降解产物时，鉴定发现的产物示于表2。表2<tablesid="t02"num="003"><table>寡聚物降解产物的成分波峰数目(图4中)分子量(Da)二聚体galAxy11349.1三聚体GalA2xy12525.1四聚体GalA2xy12GalA3xy13a,3b657.3,701.3五聚体GalA3xy12GalA4xy114a,4b833.4,877.4六聚体GalA4xy1251009.5七聚体GalA4xy13GalA5xy126a,6b1141.6,1185.5八聚体GalA6xy1271361.5</table></tables>当MHR-S与XghA孵育时形成两种产物。这些产物甚至在孵育很短的时间后就出现。这些结果表明木糖聚半乳糖醛酸是由木糖聚半乳糖醛酸酶以内切方式降解的。获得的图与那些从多聚半乳糖醛酸消化得到的相比，很清楚没有形成MHR-S降解产物的是多聚半乳糖醛酸寡聚物。这表明XghA产生被木糖取代的半乳糖醛酸寡聚物。当将产生木糖聚半乳糖醛酸酶的乳酸克鲁维酵母转化子的上清液与多聚半乳糖醛酸孵育时，没有发现此底物的降解。象实施例7描述的那样，用HPSEC对MHR-S的降解进行监测。结果在图6到6G中显示，其中上线(b)代表对照，下线(d)代表与酶一起孵育。孵育是与A阿拉伯聚糖酶；B木糖聚半乳糖醛酸酶；C鼠李糖聚半乳糖醛酸酶D内切-阿拉伯聚糖酶和木糖聚半乳糖醛酸酶顺序加入；E内切-阿拉伯聚糖酶和木糖聚半乳糖醛酸酶共同加入；F内切-阿拉伯聚糖酶和鼠李糖聚半乳糖醛酸酶顺序加入；及G内切-阿拉伯聚糖酶、鼠李糖和木糖聚半乳糖醛酸酶共同加入。图6B表明木糖聚半乳糖醛酸酶能降解MHR-S可观察到向较低分子量物质移动。内切-阿拉伯聚糖酶(图6A)和鼠李糖聚半乳糖醛酸酶(图6C)也产生一些分子量的移动。可是，在一次孵育中使用两种不同的酶会得到较好的结果(图6D，内切-阿拉伯聚糖酶和木糖聚半乳糖醛酸酶顺序加入；6E，内切-阿拉伯聚糖酶和木糖聚半乳糖醛酸酶共同加入；和6F内切-阿拉伯聚糖酶和鼠李糖聚半乳糖醛酸酶顺序加入)。图6D和6E的区别是显著的共同加入内切阿拉伯聚糖酶和木糖聚半乳糖醛酸酶比顺序加入有效得多。当将三种酶共同加入时，高分子量物质的几乎完全降解是可能的(图6G)。图7表明如HPSEC测量的分子量分布的变化在木糖聚半乳糖醛酸酶处理的物质(曲线c)，峰值出现在大约20分钟，代表高分子量物质，降低到起始物质值的70％(曲线a)。在图8中显示了HPSEC分析的结果。木糖聚半乳糖醛酸酶处理的物质(曲线b)与空白(曲线(a))相比，可以看出木糖聚半乳糖醛酸酶导致了特征性木糖半乳糖醛酸二聚体(用一个X做标志)和其它未确定的寡聚体(X右侧的峰)的释放，与实施例7中的图6出现的峰是相类似。参考文献1．G.Beldman,L.A.M.vandenBroeck,H.A.Schols,M.J.FSearle-vanLeeuwen,K.M.JvanLaere和A.G.J.Voragen(1996)生物技术通讯(BiotechnologyLetters)18707-7122．C.Grassin和P.Fauquembergue(1996)果胶和果胶酶，生物技术进展(ProgressinBiotechnology)14453-4623．Goosen等人.，1992，“丝状真菌的转化和基因调控综述”在应用真菌学手册(HandbookofAppliedMycology)第4卷“真菌生物技术”(FungalBiotechnology),D.K.4．Romanos等人，酵母(Yeast)8423-488(1992)5．Arora,R.P.Elander和K.G.Mukerji，编，MarcelDekerIn.,NewYork,151-195页6．K.N.Faber,P.Haima,W.Harder,M。Veenhuis,G.AB(1994)，现代遗传学(CurrentGenetics)25305-3107．A.G.J.Voragen,H.A.Schols和W.Pilnik,(1986)FoodHydrocoll165-708．H.A.Schols,M.A.Posthumus,A.G.J.Voragen(1990)糖类研究(CarbohydrateResearch)206117-1299．J.D.Fox,J.F.Robyt(1991)分析生物化学(AnalyticalBiochemistry)19593-9610．M.A.Sobanski和Didlinson(1995)生物化学技术(BiotechnologyTechniques)9225-23011．G.vonHeijne(1986)核酸研究(NucleicacieResearch)144683-469012．G.Beldman,M.J.F.SearlevanLeeuwen,G.A.deRuiter,H.A.Siliha,A.G.J.Voragen(1993)糖类聚合物(CarbohydratePolymers)20159-16813．H.A.Schols,C.C.,J.M.Geraerds,M.J.F.SearlevanLeeuwen,F.J.M.Kormelink,A.G.J.Voragen(1990)糖类研究(CarbohydrateResearch)206105-11514．M.Kozak，等人，翻译的扫描模型进展细胞生物学杂志(J.Cell.Biol)。108(1989)229-24115．H.J.D.Bussink等人，现代遗传学19(1991),467-47416．Huisman,M.M.H.等人(1998)糖类聚合物3787-9517．WinklerA.A.等人，博士论文，Leiden大学，荷兰(1998)序列表(1)一般信息(ⅰ)申请人(A)姓名GIST-BROCADESB.V.(B)街道Wateringseweg1(C)城市Delft(E)国家荷兰(F)邮政编码2611XT(ⅱ)发明名称新型内切木糖聚半乳糖醛酸酶(ⅲ)序列数目2(ⅳ)计算机可读形式(A)介质类型磁盘(B)计算机IBM兼容机(C)操作系统PC-DOS/MS-DOS(D)软件PatnetInRelease#1.0Version#1.25(EPO)(ⅴ)当前申请信息申请号N/A(2)SEQ.ID.NO.1的信息(ⅰ)序列特征(A)长度1602个碱基对(B)类型核酸(C)链型双链(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型cDNA(ⅲ)假拟非(ⅳ)反义否(ⅵ)初始来源(A)生物塔宾曲霉(ⅸ)特征(A)名称/关键词CDS(B)位置98..1318CTCGAG是XhoI位点(ⅹⅰ)SEQ.ID.NO.1的序列描述GCTTGTGTTTCTTAGGAGAATTATTATTCTTTTGTTATGTTGCGCTTGTAGTTGGAAAAG60GTGAAGAGACAAAGCTTGAATTCCGAAATCGCTCATCATGGCGCTATATCGTAAC115MetAlaLeuTyrArgAsn15CTCTACCTTCTGGCCAGCCTTGGGCTAAGCAGTGCTGCTCCCTCCAAG163LeuTyrLeuLeuAlaSerLeuGlyLeuSerSerAlaAlaProSerLys101520GTCCAGCGAGCCCCGGATTCTTCCATTCATGCTCGCGCTGTCTGTACC211ValGlnArgAlaProAspSerSerIleHisAlaArgAlaValCysThr253035CCGACCGCAGGAGGCGATTCGTCCACCGACGATGTCCCCGCCATCACC259ProThrAlaGlyGlyAspSerSerThrAspAspValProAlaIleThr404550GAGGCCCTCAGCTCGTGCGGAAATGGTGGCACCATCGTCTTCCCCGAG307GluAlaLeuSerSerCysGlyAsnGlyGlyThrIleValPheProGlu55606570GGCAGCACCTACTACCTCAACAGTGTGCTGGACTTGGGCAGCTGCAGT355GlySerThrTyrTyrLeuAsnSerValLeuAspLeuGlySerCysSer758085GATTGCGACATCCAGGTGGAAGGTCTTCTGAAGTTCGCCAGCGATACC403AspCysAspIleGlnValGluGlyLeuLeuLysPheAlaSerAspThr9095100GATTACTGGAGCGGTCGCACTGCCATGATCAGTGTTTCCAATGTAGAT451AspTyrTrpSerGlyArgThrAlaMetIleSerValSerAsnValAsp105110115GGTTTGAAGCTGCGCTCATTGACTGGATCTGGTGTCATTGATGGCAAT499GlyLeuLysLeuArgSerLeuThrGlySerGlyValIleAspGlyAsn120125130GGCCAGGATGCGTGGGATCTCTTTGCTTCGGACAGTAGTTACTCACGC547GlyGlnAspAlaTrpAspLeuPheAlaSerAspSerSerTyrSerArg135140145150CCGACGCTCTTGTACATCACTGGCGGCAGCAACCTAGAAATCTCCGGG595ProThrLeuLeuTyrIleThrGlyGlySerAsnLeuGluIleSerGly155160165CTGCGTCAAAAGAATCCACCTAACGTGTTCAACTCGGTCAAGGGTGGC643LeuArgGlnLysASnProProAsnValPheASnSerValLysGlyGly170175180GCCACTAATGTCGTCTTCTCCAACCTGAAGATGGATGCCAACTCCAAG691AlaThrASnValValPheSerAsnLeuLysMetAspAlaASnSerLys185190195TCGGACAATCCGCCCAAGAACACTGATGGGTTCGACATTGGCGAGAGT739SerAspAsnProProLysAsnThrAspGlyPheAspIleGlyGluSer200205210ACCTATGTGACCATCACCGAGGTCACCGTAGTCAACGATGACGACTGT787ThrTyrValThrIleThrGluValThrValValAsnAspAspAspCys215220225230GTCGCCTTCAAGCCCAGTTCCAACTACGTGACAGTGGACACGATCAGC835ValAlaPheLysProSerSerAsnTyrValThrValAspThrIleSer235240245TGCACCGGCTCCCATGGAATTTCCGTGGGATCATTAGGAAAGTCGAGC863CysThrGlySerMisGlyIleSerValGlySerLeuGlyLysSerSer250255260GACGACTCGGTCAAGAACATTTATGTCACGGGCGCAACTATGATCAAC931AspASpSerVelLysAsnIleTyrValThrGlyAlaThrMetIleAsn265270275TCCACCAAAGCCGCCGGGATCAAGACTTATCCGAGTGGAGGCGACCAC979SerThrLysAlaAlaGlyIleLysThrTyrProSerGlyGlyAspHis280285290GGTACCTCCACGGTCAGCAATGTGACCTTCAACGATTTCACTGTGGAC1027GlyThrSerThrValSerAsnValThrPheAsnAspPheThrValAsp295300305310AACTCCGACTATGCCTTCCAGATCCAGAGCTGCTATGGCGAGGACGAT1075ASnSerAspTyrAlaPheGlnIleGlnSerCysTyrGlyGluAspAsp315320325GACTATTGCGAGGAAAACCCGGGCAACGCCAAACTGACTGATATAGTC1123AspTyrCysGluGluAsnProGlyAsnAlaLysLeuThrAspIleVal330335340GTGTCAAGCTTCAGTGGGACAACCAGTGACAAGTACGATCCGGTCGTG1171ValSerSerPheSerGlyThrThrSerAspLysTyrAspProValVal345350355GCCAACCTCGACTGCGGTGCGGATGGAACTTGTGGCATCTCCATCAGT1219AlaAsnLeuAspCysGlyAlaAspGlyThrCysGlyIleSerIleSer360365370GGGTTCGATGTCAAGGCGCCATCGGGCAAGTCTGAAGTGTTGTGCGCC1267GlyPheAspValLysAlaProSerGlyLysSerGluValLeuCysAla375380385390AACACCCCGTCTGATTTGGGCGTCACTTGCACTTCGGGGGCTTCGGGC1315AsnThrProSerAspLeuGlyValThrCysThrSerGlyAlaSerGly395400405TAAATAGCTTTGGCCGGGTTGCTTTCTGAATCCACTGAGTGGAGGTCTTCTTCGGGTTTG1375ATATTTTGTATGGTCGTGTGTATAGCAGAATGTGACAATAGAATTAGTGAAATTGCCATT1435CTTTTCGAAAGACAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAACTCGAGAATTTATACTTAG1495ATAAGTATGTACTTACAGGTATATTTCTATGAGATACTGATGTATACATGCATGATAATA1555TTTAAACGGTTATTAGTGCCGATTGTCTTGTGCGATAATGACGTTCC1602(2)SEQ.ID.NO.2的信息(ⅰ)序列特征(A)长度406个氨基酸(B)类型氨基酸(D)拓扑结构线性(ⅱ)分子类型蛋白质(ⅹⅰ)SEQ.ID.NO.2的序列描述MetAlaLeuTyrArgAsnLeuTyrLeuLeuAlaSerLeuGlyLeuSer151015SerAlaAlaProSerLysValGlnArgAlaProAspSerSerIleHis202530AlaArgAlaValCysThrProThrAlaGlyGlyAspSerSerThrAsp354045AspValProAlaIleThrGluAlaLeuSerSerCysGlyAsnGlyGly505560ThrIleValPheProGluGlySerThrTyrTyrLeuAsnSerValLeu65707580AspLeuGlySerCysSerAspCysAspIleGlnValGluGlyLeuLeu859095LysPheAlaSerAspThrAspTyrTrpSerGlyArgThrAlaMetIle100105110SerValSerAsnValAspGlyLeuLysLeuArgSerLeuThrGlySer115120125GlyValIleAspGlyAsnGlyGlnAspAlaTrpAspLeuPheAlaSer130135140AspSerSerTyrSerArgProThrLeuLeuTyrIleThrGlyGlySer145150155160AsnLeuGluIleSerGlyLeuArgGlnLysAsnProProAsnValPhe165170175AsnSerValLysGlyGlyAlaThrAsnValValPheSerAsnLeuLys180185190MetAspAlaAsnSerLysSerAspAsnProProLysAsnThrAspGly195200205PheAspIleGlyGluSerThrTyrValThrIleThrGluValThrVal210215220ValAsnAspAspAspCysValAlaPheLysProSerSerAsnTyrVal225230235240ThrValAspThrIleSerCysThrGlySerHisGlyIleSerValGly245250255SerLeuGlyLysSerSerAspAspSerValLysAsnIleTyrValThr260265270GlyAlaThrMetIleAsnSerThrLysAlaAlaGlyIleLysThrTyr275280285ProSerGlyGlyAspHisGlyThrSerThrValSerAsnValThrPhe290295300AsnAspPheThrValAspAsnSerAspTyrAlaPheGlnIleGlnSer305310315320CysTyrGlyGluAspAspAspTyrCysGluGluAsnProGlyAsnAla325330335LysLeuThrAspIleValValSerSerPheSerGlyThrThrSerAsp340345350LysTyrAspProValValAlaAsnLeuAspCysGlyAlaAspGlyThr355360365CysGlyIleSerIleSerGlyPheAspValLysAlaProSerGlyLys370375380SerGluValLeuCysAlaAsnThrProSerAspLeuGlyValThrCys385390395400ThrSerGlyAlaSerGly40权利要求1．一种具有内切木糖聚半乳糖醛酸酶活性的多肽。2．一种从真菌获得并具有内切木糖聚半乳糖醛酸酶活性的具有内木糖聚半乳糖醛酸酶活性的多肽。3．根据权利要求2的多肽，其中该真菌是曲霉属的。4．根据前述任一权利要求的多肽，其包括SEQ.IDNo.2所述序列，或一种与其基本上同源的序列、或任一序列的片段。5．根据权利要求4的多肽，其中该片段有至少5个氨基酸或同源序列与SEQ.IDNo.2有至少60％的相同性。6．根据权利要求5的多肽，其包括SEQ.IDNo.2所述氨基酸序列的19-406氨基酸。7．一种编码根据任一前述权利要求的多肽的多核苷酸。8．一种多核苷酸，包含(a)SEQ.IDNo.1所述多核苷酸序列，或其互补序列；(b)能与SEQ.IDNo.1所述核苷酸序列杂交的多核苷酸序列，或其片段；(c)能与SEQ.IDNo.1所述多核苷酸序列的互补序列杂交的多核苷酸序列，或其片段；(d)多核苷酸序列，其由于遗传密码的简并性与(a)(b)或(c)中定义的任一多核苷酸是简并的。9．根据权利要求8的多核苷酸，其a．编码具有内切木糖聚半乳糖醛酸酶活性的多肽，此多核苷酸是(1)SEQ.IDNo.1的编码序列；(2)一种与(1)中定义的序列的互补序列选择性杂交的序列；或(3)一种由于遗传密码的简并性与(1)或(2)中定义的序列简并的序列，或者b．一种与(a)中定义的多核苷酸互补的序列。10．根据权利要求7、8或9从真菌中获得的分离的多核苷酸。11．根据权利要求10的多核苷酸，其中真菌是曲霉属的。12．一种包括权利要求7到11中任一项定义的多核苷酸之至少15个核苷酸的片段的多核苷酸探针。13．一种包含权利要求7到12中任一项定义的多核苷酸的载体。14．一种包含权利要求7到11中任一项定义的多核苷酸的表达载体，所述多核苷酸与一种或多种能在宿主细胞中指导多核苷酸表达的调控序列有效地连接。15．一种用根据权利要求13到14中任一项的载体转化或转染的宿主细胞。16．包括或含有根据权利要求7到11中任一项的多核苷酸的宿主细胞，其中该多核苷酸与宿主细胞的基因组是异源的。17．根据权利要求15或16的宿主细胞，其是酵母细胞。18．一种制备根据任何权利要求1到6中任一项的多肽的方法，包括在允许多肽表达的条件下孵育或培养根据权利要求15到17中任一项的宿主细胞，并任选地纯化多肽。19．一种包括或表达根据权利要求1到6中任一项的多肽的宿主细胞，其中该多肽与宿主细胞是异源的。20．一种包含根据权利要求1到6中任一项的多肽的组合物。21．根据权利要求20的组合物，其中还包括具有内切阿拉伯聚糖酶、鼠李糖聚半乳糖醛酸酶或多聚半乳糖醛酸酶活性的多肽。22．一种处理植物材料的方法，此方法包括用根据权利要求1到6中任一项的多肽或根据权利要求20或21的组合物来接触植物材料。23．根据权利要求22的方法，其中处理包括降解或修饰植物材料中的果胶。24．根据权利要求22的方法，用于降解或修饰植物细胞壁。25．根据权利要求22或23的方法，其中处理包括对材料中的果胶成分的木糖聚半乳糖醛酸亚单位的内切型剪切。26．根据权利要求22到24中任一项的方法，其中材料包括植物、植物果肉、植物提取液或可食用的食品或其中的成分。27．根据权利要求26的方法，其中材料是水果或蔬菜果肉、液汁或提取物。28．一种加工的植物材料，其是用根据任何权利要求1到6中任一项的多肽或根据权利要求20或21的组合物与植物材料接触获得的，或由根据权利要求22到26中任一项的方法获得的。29．根据权利要求27的加工的植物材料，其是一种水果或蔬菜汁。30．一种降低植物材料粘度的方法，此方法包括用根据权利要求1到6中任一项的多肽或根据权利要求20或21的组合物以有效降解材料中所含的果胶的量和条件下接触植物材料。31．根据任何权利要求1到6中任一项的多肽或根据权利要求20或21的组合物在处理植物材料的方法中的用途。32．根据权利要求31的用途，其中处理包括内切型剪切植物材料中果胶的木糖聚半乳糖醛酸取代基。33．根据权利要求1到6中任一项的多肽或根据权利要求20或21的组合物在加工植物果肉、汁液或提取物的方法中的用途，此方法包括用多肽或组合物与果肉、汁液或提取物温育以至少部分降解果胶。34．一种包含根据权利要求1到6中任一项的多肽的(动物)饲料或食品。35．一种包含(任选地皂化的)用强酸处理的西黄蓍胶(sGT)的组合物。36．一种鉴定或检测具有果胶降解活性的多肽的检测方法，包括a．作为候选化合物的底物，提供用强酸(sGT/TFA)处理过的(任选地皂化的)西黄蓍胶，及b．用候选化合物接触sGT/TFA，检测是否有任何还原糖类产生。37．根据权利要求35的检测方法，其中测量了还原糖类的量，并任选地与没有候选化合物的对照中产生的糖类的量比较。38．根据权利要求35或36的检测方法，其包括通过测量由糖类还原Cu(Ⅱ)为Cu(Ⅰ)的量，任选地通过与二辛可酸(BCA)接触，确定形成的BCA-Cu(Ⅰ)复合物的量。全文摘要公开了具有新的活性,即内切木糖聚半乳糖醛酸酶活性的多肽。这些多肽可降解见于植物提取物和植物材料中的果胶,尤其是果胶聚合物中的“毛发区”。特别是,多肽可在内部糖苷键处切割半乳糖醛酸。公开了新型酶XghA,其氨基酸序列和编码DNA序列也给出。在酵母细胞中表达此多肽,并用于处理植物材料,特别是处理在可食性食物制备中的大豆和水果汁。文档编号A23L2/84GK1294633SQ99804431公开日2001年5月9日申请日期1999年2月9日优先权日1998年2月10日发明者P·J·A·密乌森,C·J·B·范德威鲁特伯格曼斯,J·P·范克恩,G·贝尔德曼,A·G·J·沃瑞格恩,M·A·赫威杰尔,A·J·J·范欧杰恩申请人:Dsm公司