专利名称：2－苯并噻唑基脲衍生物及其作为蛋白激酶抑制剂的应用的制作方法
背景技术：
本发明涉及如以下限定的式(I)的苯并噻唑衍生物及其应用和药用组合物。
至少有400种酶被鉴定为蛋白激酶。这些酶催化靶蛋白底物的磷酸化。磷酸化通常是将磷酸基团从ATP转移至所述蛋白底物的反应。磷酸转移至的靶底物中的特定结构是酪氨酸、丝氨酸或苏氨酸残基。由于这些氨基酸残基是磷酰基转移的靶结构，因而这些蛋白激酶通常被称为酪氨酸激酶或丝氨酸/苏氨酸激酶。
酪氨酸、丝氨酸和苏氨酸残基上的磷酸化反应和反向的磷酸酶反应涉及构成对多样化胞内信号(通常通过细胞受体介导)应答、细胞功能的调节以及细胞过程的激活或失活的基础的多种细胞过程。蛋白激酶级联常常参与细胞信号转导，对于这些细胞过程的实现是必不可少的。因为蛋白激酶在这些过程中普遍存在，所以可以发现它们作为质膜的主要部分或者作为胞质酶或定位于细胞核内，通常作为酶复合体的组分。在许多情况下，这些蛋白激酶是酶和结构蛋白复合物的必需成分，决定在细胞内细胞过程在何时何地发生。
蛋白酪氨酸激酶。蛋白酪氨酸激酶(PTKs)是催化细胞蛋白中特定酪氨酸残基磷酸化的酶。这些底物蛋白(通常是酶自身)的这种翻译后修饰充当调节细胞增殖、激活或分化的分子开关(有关综述，参见Schlessinger和Ulrich，1992，Neuron 9383-391)。已经在许多病症包括良性和恶性增生性疾病以及由免疫系统不当激活引起的疾病(例如自身免疫病)、同种移植物排斥和移植物抗宿主病中，观察到PTK活性异常或过高。另外，内皮细胞特异性受体PTKs，例如KDR、Tie-2和Tie-1介导血管生成过程，因此参与支持癌症和涉及不当血管形成的其它疾病(例如糖尿病性视网膜病、由于年龄相关的黄斑变性所致的脉络膜新血管形成、银屑病、关节炎、早产儿视网膜病、婴儿血管瘤)的发展。
酪氨酸激酶可以是受体型(具有胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域)或者非受体型(完全在细胞内)。
受体酪氨酸激酶(RTKs)。PTKs包括一个大的生物活性多样的跨膜受体家族。目前，已经鉴定出至少19种不同的RTK亚家族。受体酪氨酸激酶(RTK)家族包括对于各种各样细胞类型的生长和分化关键性的受体(Yarden和Ullrich，Ann.Rev.Biochem.57433-478，1988；Ullrich和Schlessinger，Cell 61243-254，1990)。RTKs的固有功能在配体结合时被激活，这导致该受体和多种细胞底物的磷酸化，随后导致多种细胞反应(Ullrich和Schlessinger，1990，Cell 61203-212)。因此，受体酪氨酸激酶介导的细胞转导由与特定生长因子(配体)的胞外相互作用启动，通常随后是受体二聚化、刺激所述内在蛋白酪氨酸激酶活性和受体转磷酸化。从而产生胞内信号转导分子的结合部位，导致与多种促进适当细胞反应的胞质信号分子形成复合物(例如细胞分裂、分化、代谢效应、胞外微环境的变化)，参见Schlessinger和Ullrich，1992，Neuron 91-20。
具有SH2(src同源物-2)或磷酸酪氨酸结合(PTB)结构域的蛋白，以高亲合性结合激活的酪氨酸激酶受体及其底物，将信号传播到细胞内。这两种结构域都识别磷酸酪氨酸(Fantl等，1992，Cell 69413-423；Songyang等，1994，Mol.Cell.Biol.142777-2785；Songyang等，1993，Cell72767-778；和Koch等，1991，Science 252668-678；Shoelson，Curr.Opin.Chem.Biol.(1997)，1(2)，227-234；Cowbum，Curr.Opin.Struct.Biol.(1997)，7(6)，835-838)。已经鉴定了与受体酪氨酸激酶(RTKs)相关的几种胞内底物蛋白。它们可以分为两大类(1)具有催化结构域的底物;和(2)缺乏这种结构域、但用作连接物并与催化活性分子相连的底物(Songyang等，1993，Cell 72767-778)。受体或蛋白与其底物的SH2或PTB结构域之间相互作用的特异性由紧邻磷酸化酪氨酸残基周围的氨基酸残基决定。例如，SH2结构域与特定受体上磷酸酪氨酸残基周围的氨基酸序列之间的结合亲和性的差异，与观察到的其底物磷酸化分布型的差异相关(Songyang等，1993，Cell 72767-778)。观察结果提示，每种受体酪氨酸激酶的功能不仅由其表达模式和配体可用性决定，而且也由被特定受体激活的下游信号转导途径的排列以及那些刺激的定时和持续时间决定。因此，磷酸化提供了一个重要的调节步骤，它决定由特定生长因子受体以及分化因子受体募集的信号途径的选择性。
已经提出，几种受体酪氨酸激酶例如FGFR-1、PDGFR、Tie-2、Tie-1和c-Met以及与其结合的生长因子在血管生成中起作用，虽然某些可能间接促进血管生成(Mustonen和Alitalo，J.Cell Biol.129895-898，1995)。一种这样的受体酪氨酸激酶称为“胎肝激酶1”(FLK-1)，是RTKsIII型亚类的成员。人FLK-1的另一名称是“含激酶插入结构域的受体(kinase insertdomain-containingreceptor)”(KDR)(Terman等，Oncogene61677-83，1991)。FLK-1/KDR的另一名称是“血管内皮细胞生长因子受体2”(VEGFR-2)，因为它以高亲和性结合VEGF。FLK-1/VEGFR-2的鼠形式也称为NYK(Oelrichs等，Oncogene 8(1)11-15，1993)。已经分离出编码小鼠、大鼠和人FLK-1的DNAs，并且报道了其核苷酸序列和所编码的氨基酸序列(Matthews等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，889026-30，1991；Terman等，1991，参见上文；Terman等，Biochem.Biophys.Res.Comm.1871579-86，1992；Sarzani等，参见上文；和Millauer等，Cell72835-846，1993)。许多研究例如Millauer等(参见上文)报道的研究提示，VEGF和FLK-1/KDR/VEGFR-2是一个配体-受体对，在血管内皮细胞增殖以及血管形成和出芽(分别称为血管发生和血管生成)中起重要作用。
另一III型亚类RTK称为“fms样酪氨酸激酶-1”(Flt-1)，与FLK-1/KDR相关(DeVries等，Science 255；989-991，1992；Shibuya等，Oncogene 5519-524，1990)。Flt-1的另一名称是“血管内皮细胞生长因子受体1”(VEGFR 1)。迄今为止，已经发现FLK-1/KDR/VEGFR-2和Flt-1/VEGFR-1亚家族成员主要在内皮细胞上表达。这些亚类成员由配体的血管内皮细胞生长因子(VEGF)家族成员特异性地刺激(Klagsburn和D′Amore，Cytokine & Growth Factor Reviews 7259-270，1996)。血管内皮细胞生长因子(VEGF)与Flt-1结合亲和性高于与FLK-1/KDR的结合亲和性，并且对于血管内皮细胞是促有丝分裂的(Terinan等，1992，参见上文；Mustonen等，参见上文；DeVries等，参见上文)。据信Flt-1对于血管发育期间内皮结构组成是必需的。Flt-1的表达与小鼠胚胎早期血管发育相关，也与伤口愈合期间的新血管形成相关(Mustonen和Alitalo，参见上文)。Flt-1在单核细胞、破骨细胞和成骨细胞以及成年组织例如肾小球中表达，提示这种受体与细胞生长不相关的另一功能(Mustonen和Alitalo，参见上文)。
正如先前所述，最近的证据表明，VEGF在正常血管生成和病理血管生成的刺激中均起作用(Jakeman等，Endocrinology 133848-859，1993；Kolch等，Breast Cancer Research and Treatment 36139-155，1995；Ferrara等，Endocrine Reviews 18(1)；4-25，1997；Ferrara等，Regulation ofAngiogenesis(L.D.Goldberg和E.M.Rosen编著)，209-232，1997)。另外，VEGF涉及血管通透性的控制和增强(Connolly等，J.Biol.Chem.26420017-20024，1989；Brown等，Regulation of Angiogenesis(L.D.Goldberg和E.M.Rosen编著)，233-269，1997)。已经报道了由mRNA可变剪接产生的不同形式的VEGF，包括Ferrara等(J.Cell.Biochem.47211-218，1991)报道的4种。Ferrara等(参见上文)已经鉴定出分泌型和主要为细胞相关种类的VEGF，已知所述蛋白以二硫键连接的二聚体形式存在。
最近鉴定出几种相关的VEGF同系物。然而，它们在正常生理和病程中的作用尚未阐明。另外，VEGF家族的成员通常在许多组织中与VEGF共表达，一般能够与VEGF形成异源二聚体。该性质可能会改变所述受体的特异性以及所述异源二聚体的生物效应并且如下所述，使其具体功能的阐述进一步复杂化(Korpelainen和Alitalo，Curr.Opin.CellBiol.，159-164，1998以及其中引用的参考文献)。
胎盘生长因子(PlGF)的氨基酸序列显示出与VEGF序列有显著同源性(Park等，J.Biol.Chem.26925646-54，1994；Maglione等，Oncogene8925-31，1993)。关于VEGF，由mRNA的可变剪接产生不同种类的PlGF；并且所述蛋白以二聚体形式存在(Park等，参见上文)。PlGF-1和PlGF-2以高亲和性与Flt-1结合，PlGF-2也与neuropilin-1亲和结合(Miadal等，J Biol.Chem.273(35)22272-22278)，但均不与FLK-1/KDR结合(Park等，参见上文)。已经报PlGF既增强血管的通透性，当VEGF以低浓度存在时也增强VEGF对内皮细胞的促有丝分裂效应(声称是由于形成异源二聚体所致)(Park等，参见上文)。
VEGF-B以两种同种型(167个残基和185个残基)产生，该同种型看来也结合Flt-1/VEGFR-1。它可能通过调制尿激酶型纤溶酶原激活物和纤溶酶原激活物抑制剂1的表达和活性，在胞外基质降解、细胞粘附和迁移的调节中起作用(Pepper等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(1998)，95(20)11709-11714)。
VEGF-C最初作为VEGFR-3/Flt-4的配体克隆，主要由淋巴内皮细胞表达。在其完全加工形式中，VEGF-C也可以结合KDR/VEGFR-2，并且在体外刺激内皮细胞的增殖和迁移，在体内模型中刺激血管生成(Lymboussaki等，Am.J.Pathol.(1998)，153(2)395-403；Witzenbichler等，Am.J.Pathol.(1998)，153(2)，381-394)。VEGF-C的转基因过量表达仅引起淋巴管增生和增大，而血管不受影响。与VEGF不同，VEGF-C的表达不为低氧诱导(Ristimaki等，J.Biol.Chem.(1998)，273(14)，8413-8418)。
最近发现的VEGF-D在结构上与VEGF-C非常相似。据报道VEGF-D结合至少两种VEGFRs、VEGFR-3/Flt-4和KDR/VEGFR-2并激活它们。它最初作为成纤维细胞的c-fos诱导型促细胞分裂剂克隆，最主要在肺和皮肤的间充质细胞中表达(Achen等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(1998)，95(2)，548-553以及其中的参考文献)。
关于VEGF，据声称VEGF-C和VEGF-D在体内Miles测定中，当注射到皮肤组织中时，诱导血管通透性增加(PCT/US97/14696；WO98/07832，Witzenbichler等，参见上文)。这些配体在调节血管高通透性和在表达它们的组织中的内皮应答中的生理作用和重要性仍未确定。
最近报道了一种病毒编码的新类型的血管内皮细胞生长因子-VEGF-E(NZ-7VEGF)，它优先利用KDR/Flk-1受体，并且带有一个具强有丝分裂活性但不结合肝素的结构域(Meyer等，EMBO J.(1999)，18(2)，363-374；Ogawa等，J Biol.Chem.(1998)，273(47)，31273-31282)。VEGF-E序列与哺乳动物VEGF具有25％的同源性，并且由羊传染性口疮(Orf)副痘病毒(OV)编码。这种副痘病毒影响绵羊和山羊并，有时影响人类，产生伴有血管生成的损害。VEGF-E是一种约20kDa的二聚体，没有基本结构域，对肝素也没有亲和性，但具有在所有哺乳动物VEGFs中存在的特征性的半胱氨酸结基序，出乎意料的是发现它具有与VEGF-A的肝素结合性VEGF165同种型相似的效力和生物活性，即这两种因子都刺激组织因子(TF)的释放、在体外刺激培养的血管内皮细胞的增殖、趋化和出芽，在体内刺激血管生成。与VEGF165一样，发现VEGF-E以高亲和性与VEGF受体-2(KDR)结合，导致受体自磷酸化以及在游离胞内Ca2+浓度两相升高，而与VEGF165相反，VEGF-E不结合VEGF受体-1(Flt-1)。
根据VEGF和VEGFRs的其它同系物的发现以及配体和受体异源二聚化的先例，这类VEGF同系物的作用可能涉及VEGF配体异源二聚体的形成和/或受体异源二聚化或者与尚未发现的VEGFR结合(Witzenbichler等，参见上文)。此外，最近的报道提出，neuropilin-1(Migdal等，参见上文)或VEGFR-3/Flt-4(Witzenbichler等，参见上文)或KDR/VEGFR-2以外的受体可能参与血管通透性的诱导(Stacker，S.A.，Vitali，A.，Domagala，T.，Nice，E.和Wilks，A.F.，Angiogenesis and CancerConference，Amer.Assoc.Cancer Res.，Jan.1998，Orlando，FL；Williams，Diabetelogia 40S 118-120(1997))。
Tie-2(TEK)是最近发现的内皮细胞特异性受体酪氨酸激酶家族的一员，它参与关键性的血管生成过程，例如血管分支、出芽、重塑成熟和稳定性。Tie-2是第一个哺乳动物受体酪氨酸激酶，已经鉴定出其激动配体(例如血管生成蛋白(Angiopoietin)1(“Ang1”)，它刺激受体自磷酸化和信号转导)，也鉴定出其拮抗配体(例如血管生成蛋白2(“Ang2”))。Tie-2及其配体的剔除和其表达的转基因操作表明，对Tie-2信号的密切的空间和时间的控制对于新血管适当发育是必不可少的。目前的模型提示，Ang1配体对Tie-2激酶的刺激直接参与新血管的分支、出芽和向外生长，以及在维持血管完整性和诱导静止方面重要的内皮周支持细胞的募集和相互作用。缺乏Ang1对Tie-2的刺激或Ang2对Tie-2自磷酸化的抑制(这在血管退化部位以高水平产生)，可能引起血管结构和基质接触的丧失，导致内皮细胞死亡，尤其是在缺乏生长/存活刺激的情况下。然而，这种情况更为复杂，因为最近报道了至少两种另外的Tie-2配体(Ang3和Ang4)，并且已经证明所述各种激动性和拮抗性血管生成蛋白异源寡聚化，从而修饰其活性的能力。因而，将Tie-2配体-受体相互作用作为抗血管生成治疗方法不大合适，优选使用激酶抑制策略。
Tie-2的可溶性胞外结构域(“ExTek”)可以起作用，破坏乳房肿瘤异种移植物和肺转移性肿瘤模型以及肿瘤细胞介导的眼新血管形成中肿瘤血管系统的建立。通过腺病毒感染，可以达到在啮齿动物中体内产生mg/ml水平的ExTek达7-10天，而无不利的副作用。这些结果提示，在正常健康动物中Tie-2信号途径的破坏可以被很好地耐受。这些对ExTek的Tie-2抑制性应答可能是配体螯合和/或与全长Tie-2产生非生产性异源二聚体的结果。
最近，已经在人类关节炎性关节的血管性滑液血管翳中发现Tie-2表达的显著正调节，这与在不当新血管形成中的作用一致。这一发现提示，Tie-2在类风湿性关节炎的进程中起作用。已经鉴定了与人类静脉畸形疾病相关的、产生组成性活化形式的Tie-2的点突变。因此，Tie-2的抑制剂可用于治疗这类疾病以及用于不当新血管形成的其它情况。
非受体酪氨酸激酶。非受体酪氨酸激酶代表缺乏胞外序列和跨膜序列的细胞酶的集合。目前，已经鉴定了超过24种单个的非受体酪氨酸激酶，构成11个亚家族(Src、Frk、Btk、Csk、Abl、Zap70、Fes/Fps、Fak、Jak、Ack和LIMK)。目前，非受体酪氨酸激酶的Src亚家族由很多PTKs组成，包括Sre、Yes、Fyn、Lyn、Lck、Blk、Hck、Fgr和Yrk。已经将酶的Src亚家族与肿瘤发生和免疫应答相关联。Bolen，1993，Oncogene 82025-2031提供了更为详细的有关非受体酪氨酸激酶的讨论，该文献通过引用结合到本文中。
已经发现许多酪氨酸激酶(无论是RTK还是非受体酪氨酸激酶)参与涉及多种疾病的细胞信号途径，包括癌症、银屑病和其它高增生性疾病或超免疫应答。
调节PTKs的化合物的研制。鉴于推测的PTKs对于控制、调节和调制细胞增殖、与异常细胞增殖相关的疾病和病症的重要性，作出了许多尝试，以采用各种各样的方法鉴定受体和非受体酪氨酸激酶“抑制剂”，所述方法包括使用突变型配体(美国申请第4,966,849号)、可溶性受体和抗体(申请号WO 94/10202；Kendall和Thomas，1994，Proc.Natl.Acad Sci 9010705-09；Kim等，1993，Nature 362841-844)、RNA配体(Jellinek等，Biochemistry 3310450-56；Takano等，1993，Mol.Bio.Cell4358A；Kinsella等，1992，Exp.Cell Res.19956-62；Wright等，1992，JCellular Phys.152448-57)和酪氨酸激酶抑制剂(WO 94/03427；WO92/21660；WO 91/15495；WO 94/14808；美国专利第5,330,992号；Mariani等，1994，Proc.Am.Assoc.Cancer Res.352268)。
最近，已经尝试鉴定用作酪氨酸激酶抑制剂的小分子。例如，已经描述了一般作为酪氨酸激酶抑制剂的双单环、双环或杂环芳基化合物(PCT WO 92/20642)和亚乙烯基氮杂吲哚衍生物(PCT WO94/14808)。已经描述了苯乙烯基化合物(美国专利第5,217,999号)、苯乙烯基取代的吡啶基化合物(美国专利第5,302,606号)、某些喹唑啉衍生物(EP申请0 566 266 A1；Expert Opin.Ther.Pat.(1998)，8(4)475-478)、硒基吲哚和硒化物(PCT WO 94/03427)、三环多羟基化合物(PCTWO 92/21660)和苄基膦酸化合物(PCT WO 91/15495)为用作酪氨酸激酶抑制剂的化合物，可用于治疗癌症。已经描述了苯胺基噌啉(PCTWO97/34876)和喹唑啉衍生化合物(PCT WO97/22596；PCTWO97/42187)为血管生成和血管通透性的抑制剂。
另外，已经尝试鉴定用作丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂的小分子。例如，已经将双(吲哚基马来酰亚胺)化合物描述为抑制特定PKC丝氨酸/苏氨酸激酶同种型，所述同种型的信号转导功能与VEGF相关疾病中血管通透性改变有关(PCT WO97/40830；PCT WO97/40831)。Plk-1激酶抑制剂Plk-1是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，是细胞周期进程的一种重要的调节剂。它在有丝分裂纺锤体的装配和动态功能方面起关键作用。已经表明Plk-1和相关激酶与其它细胞周期调节剂(例如依赖细胞周期蛋白的激酶)的激活和失活密切相关。高水平Plk-1的表达与细胞增殖活性相关。它常常在各种起源的恶性肿瘤中发现。预期Plk-1的抑制剂通过破坏涉及有丝分裂纺锤体的过程和不当激活的依赖细胞周期蛋白的激酶，阻断癌细胞的增殖。Cdc2/细胞周期蛋白B激酶抑制剂(Cdc2也称为cdk1)Cdc2/细胞周期蛋白B是另一种丝氨酸/苏氨酸激酶，属于依赖细胞周期蛋白的激酶(cdk)家族。这些酶参与细胞周期进程各期之间的关键性转变。据信，不受控制的细胞增殖(这是癌症的标志)依赖于这些细胞中提高的cdk活性。用cdc2/细胞周期蛋白B激酶抑制剂抑制癌细胞提高的cdk活性，可以抑制增殖，并且可以恢复对细胞周期进程的正常控制。
对CDK激活的调节是复杂的，但需要CDK与调节亚基的细胞周期蛋白家族的一个成员相结合(Draetta，Trends in Cell Biology，3287-289(1993))；Murray和Kirschner，Nature，339275-280(1989)；Solomon等，Molecular Biology of the Cell，313-27(1992))。另一水平的调节通过激活和失活所述CDK亚基的磷酸化而发生(Draetta，Trends in Cell Biology，3287-289(1993))；Murray和Kirschner，Nature，339275-280(1989)；Solomon等，Molecular Biology of the Cell，313-27(1992)；Ducommun等，EMBO Journal，103311-3319(1991)；Gautier等，Nature 339626-629(1989)；Gould和Nurse，Nature，34239-45(1989)；Krek和Nigg，EMBOJournal，103331-3341(1991)；Solomon等，Cell，631013-1024(1990))。不同细胞周期蛋白/CDK复合物的协同激活和失活是通过细胞周期的正常进程所必需的(Pines，Trends in Biochemical Sciences，18195-197(1993)；Sherr，Cell，731059-1065(1993))。关键的G1-S和G2-M转变都受不同的细胞周期蛋白/CDK活性控制。在G1中，认为细胞周期蛋白D/CDK4和细胞周期蛋白E/CDK2介导S期的开始(Matsushima等，Molecular & Cellular Biology，142066-2076(1994)；Ohtsubo和Roberts，Science，2591908-1912(1993)；Quelle等，Genes & Development，71559-1571(1993)；Resnitzky等，Molecular & Cellular Biology，141669-1679(1994))。通过S期的进展需要细胞周期蛋白A/CDK2的活性(Girard等，Cell，671169-1179(1991)；Pagano等，EMBO Journal，11961-971(1992)；Rosenblatt等，Proceedings of the National Academy of Science USA，892824-2828(1992)；Walker和Maller，Nature，354314-317(1991)；Zindy等，Biochemical & Biophysical Research Communications，1821144-1154(1992))，而细胞周期蛋白A/cdc2(CDKI)和细胞周期蛋白B/cdc2的激活是分裂中期开始所需的(Draetta，Trends in Cell Biology，3287-289(1993))；Murray和Kirschner，Nature，339275-280(1989)；Solomon等，Molecular Biology of the Cell，313-27(1992)；Girard等，Cell，671169-1179(1991)；Pagano等，EMBO Journal，11961-971(1992)；Rosenblatt等，Proceedin，of the National Academy of Science USA，892824-2828(1992)；Walker和Maller，Nature，354314-317(1991)；Zindy等，Biochemical & Biophysical Research Communications，1821144-1154(1992))。因此，CDK调节控制的丧失是在高增生性疾病和癌症中常见的事件，这一点并不令人感到意外。(Pines，CurrentOpinion in Cell Biology，4144-148(1992)；Lees，Current Opinion in CellBiology，7773-780(1995)；Hunter和Pines，Cell，79573-582(1994))。
参与介导或维持病症的激酶的抑制剂代表针对这些疾病的新疗法。这类激酶的实例包括但不限于(1)在癌症中抑制c-Src(Brickell，Critical Reviews in Oncogenesis，3401-406(1992)；Courtneidge，Seminarsin Cancer Biology，5236-246(1994)、raf(Powis，Pharmacology &Therapeutics，6257-95(1994))以及依赖细胞周期蛋白的激酶(CDKs)1、2和4(Pines，Current Opinion in Cell Biology，4144-148(1992)；Lees，Current Opinion in Cell Biology，7773-780(1995)；Hunter和Pines，Cell，79573-582(1994))，(2)在再狭窄中抑制CDK2或PDGF-R激酶(Buchdunger等，Proceedings of the National Academy of Science USA，922258-2262(1995))，(3)在早老性痴呆中抑制CDK5和GSK3激酶(Hosoi等，Journal of Biochemistry(Tokyo)，117741-749(1995)；Aplin等，Journal of Neurochemistry，67699-707(1996)，(4)在骨质疏松中抑制c-Src激酶(Tanaka等，Nature，383528-531(1996)，(5)在2型糖尿病中抑制GSK-3激酶(Borthwick等，Biochemical & Biophysical ResearchCommunications，210738-745(1995)，(6)在炎症中抑制p38激酶(Badger等，The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics，2791453-1461(1996))，(7)在涉及血管生成的疾病中抑制VEGF-R 1-3和TIE-1和-2激酶(Shawver等，Drug Discovery Today，250-63(1997))，(8)在病毒感染中抑制UL97激酶(He等，Joumal of Virology，71405-411(1997))，(9)在骨病和造血性疾病中抑制CSF-1R激酶(Myers等，Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters，7421-424(1997)，和(10)在自身免疫性疾病和移植排斥中抑制Lck激酶(Myers等，Bioorganic &Medicinal Chemistry Letters，7417-420(1997))。
另外还有可能的是，某些激酶的抑制剂可能在该激酶未被错调节，但尽管如此它仍对维持该病症为必需的疾病治疗方面有实用性。在这种情况下，对该激酶活性的抑制可能或者用作这些疾病的治疗法或者缓解这些疾病。例如，许多病毒例如人乳头状瘤病毒破坏细胞周期，并且驱动细胞进入细胞周期的S期(Vousden，FASEB Journal，78720879(1993))。通过抑制必需的S期启动活性例如CDK2来阻止细胞在病毒感染后进入DNA合成，可能通过防止病毒复制，而破坏病毒的生活周期。这同一原理可以用来保护机体的正常细胞抵抗周期特异性化学治疗剂的毒性(Stone等，Cancer Research，563199-3202(1996)；Kohn等，Journal of Cellular Biochemistry，5444-452(1994))。抑制CDKs2或4将在正常细胞中防止进行到该周期并且限制在S期、G2或有丝分裂中起作用的细胞毒性剂的毒性。此外，也已经表明CDK2/细胞周期蛋白E活性调节NF-kB。对CDK2活性的抑制，刺激NF-kB依赖性基因的表达，这是通过与p300辅激活蛋白相互作用介导的事件(Perkins等，Science，275523-527(1997))。NF-kB调节参与炎性反应的基因(例如造血生长因子、趋化因子和白细胞粘附分子)(Baeuerle和Henkel，AnnualReview of Immunology，12141-179(1994))，并且可能参与对所述细胞内细胞凋亡信号的抑制(Beg和Baltimore，Science，274782-784(1996)；Wang等，Science，274784-787(1996)；Van Antwerp等，Science，274787-789(1996))。因此，抑制CDK2，可以通过涉及NF-kB的机制，抑制由细胞毒性药诱导的细胞凋亡。因此，这提示对CDK2活性的抑制也可能在NF-kB的调节在疾病病因学中起作用的其它情况下有实用性。再一实例可以得自真菌感染曲霉病是免疫妥协患者的一种常见感染(Armstrong，Clinical Infectious Diseases，161-7(1993)。抑制曲霉属(Aspergillus)激酶Cdc2/CDC28或Nim A(Osmani等，EMBO Journal，102669-2679(1991)；Osmani等，Cell，67283-291(1991))可能导致真菌的阻滞或死亡，改善患有这些感染的患者的治疗结果。
因此，需要对通过调节受体和非受体酪氨酸激酶和丝氨酸/苏氨酸激酶调节和调制异常或不当的细胞增殖、分化或机制来特异性地抑制信号转导和/或细胞增殖的有效小分子化合物进行鉴定。特别是，特异性抑制酪氨酸激酶功能的鉴定方法和化合物可能是有益的，所述激酶功能是血管生成过程或形成导致水肿、腹水、渗漏、渗出液、大分子外渗和基质沉积以及相关疾病的血管通透性过高所必需的发明概述一方面，本发明涉及式(I)化合物 其外消旋-非对映体混合物、其旋光异构体、其前体药物、其同位素或所述化合物、异构体、前体药物和同位素的药学上可接受的盐，其中，Q为H或代表一个键，该键将X1与同Q和X1连接的两个氮原子以及与所述两个氮原子连接的C＝Y基团结合在一起形成 Q1为(C1-C6)烷基；Y为O或S；W为H、Cl、Br、I、NO2、CN、SCN、OCF3、-Xq-(C(R10)2)a-Y1q-(C(R10)2)a-Z1q、或任选取代的选自以下的基团烷基、链烯基、链炔基、杂环基-链烯基和杂环基-链炔基；Y1和X分别独立选自苯基、杂环基、NR10、O、S、SO、SO2、CF2、CFR、C＝O、(C＝O)NR10、SONR10、SO2NR10、NR10(C＝O)、NR10SO、NR10SO2、NR10SO2NR10、NR10(C＝O)NR10、 和 q每次出现时独立地为0或1；a每次出现时独立地为0或1-5的整数；R10每次出现时独立选自H、任选取代的芳基、任选取代的杂环基和任选被以下一个或多个取代基取代的任选取代的烷基任选被一个或多个羟基、卤代基或任选取代的氨基取代的C1-6烷基；任选被一个或多个羟基、卤代基或任选取代的氨基取代的C1-6烷氧基；羟基；卤代基；或任选取代的氨基；Z1为H、任选取代的烷基、任选取代的芳基或任选取代的杂环基；X1为氢、烷基、羟基烷基或代表与以下所述的R3结合在一起的键或代表与以下所述的Q结合在一起的键；R1和R2分别独立地为氢、卤素、羟基、硝基、氰基、COOH、COOX3、SX3、SO2X3、SOX3、C(O)X3、NHC(O)X3、C(O)NHX3、NHSO2X3或选自任选取代的以下基团烷基、链烯基、链炔基、烷氧基、氨基、NHX3、NX3X3、烷基氨基、芳基氨基、杂环基氨基、烷硫基、烷基磺酸酯基(sulfonato)、芳基、芳氧基、芳基烷基、芳基链烯基、芳基链炔基、芳烷氧基、杂环基、杂环氧基、杂环基-烷基、杂环基-链烯基、杂环基-链炔基、杂环基-烷氧基、杂环硫基、杂环基亚硫酰基、杂环基磺酰基、环烷基、-(CH2)m-(CHX2)CN、-(CH2)m-(CHX2)COOH、-(CH2)m-(CHX2)COOX3、-(CH2)m-(CHX2)SO2X3、-(CH2)m-(CHX2)C(O)X3、-(CH2)m-(CHX2)C(O)NHX3和-(CH2)m-(CHX2)NHSO2X3；其中m为0-4；X2每次出现时独立地为H或任选取代的选自以下的部分烷基、链烯基、链炔基、羰基、S(O)p烷基、S(O)p芳基、S(O)p杂环基、氨基、烷氧基、烷硫基、芳硫基、全卤代烷基、芳基、芳氧基、芳基烷基、芳烷氧基、杂环基和杂环基-烷基；p为0、1或2；X3每次出现时独立地为H或任选取代的选自以下的部分一或二烷基氨基、烷基、链烯基、链炔基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基-烷基；或当R1在苯并噻唑环的7位时，R1和W可以与连接它们的碳原子结合在一起形成任选取代的5-或6-元杂环；R3为氢或任选取代的选自以下的部分羰基、烷基、链烯基、链炔基、环烷基、芳基、芳基烷基、杂环基、杂环基-烷基、杂环基-杂环基、杂环基-环烷基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、烷氧基、硫代烷氧基和酰基；或R3和X1与连接它们的氮原子结合在一起形成 或 其中Z每次出现时独立选自氧代基或任选取代的选自以下的部分-C(O)(C1-C6)烷基、-C(O)芳基、-C(O)N(C1-C6)烷基、-C(O)N-芳基、(C1-C6)烷基、(C2-C6)链烯基、(C2-C6)链炔基、氨基、一-或二-(C1-C6)烷基氨基、-COO(C1-C6)烷基、吡啶基、苯基、苯基(C1-C6)烷基和苯基(C1-C6)链烯基；其中每个上述任选取代的部分任选地被分别独立选自以下的一个或多个取代基取代氧代基、氨基、硝基、一-或二-(C1-C6)烷基氨基、羟基、腈、氯、氟、溴、碘、CF3、(C1-C6)烷基、-C(O)(C1-C6)烷基、-COOH、-COO(C1-C6)烷基、-S-(C1-C6)烷基、-S-芳基、(C1-C6)烷氧基、-SO2NH2、苯基、苯基(C1-C6)烷基、-O-(C1-C6)烷基-OH、-O-(C1-C6)烷基-O-(C1-C6)烷基、-O(C2-C6)烷基-N-((C1-C6)烷基)n、-N-(C1-C6)烷基-OH、-N-(C1-C6)烷基-O-(C1-C6)烷基、-C(O)NH2、-C(O)N((C1-C6)烷基)n、-S(O)n(C1-C6)烷基、-S(O)n芳基、-S(O)n杂环基和杂环基，其中此中所述的烷基在所述烷基部分任选具有一个或多个不饱和键；n为0、1或2；其条件是1)当Q为H；Y为O；R1和R2分别为氢、卤素、烷基、烷氧基、烷硫基、羧基烷基或任选取代的苯基；并且X1为氢或烷基时；则R3不是烷基、链烯基、烷氧基、环烷基或任选取代的苯基；2)当Q为H；Y为O；R1和R2分别为氢、卤素、烷基、烷氧基、烷硫基、羧基烷基或任选取代的苯基时；则X1和R3不结合在一起形成 3)当W为Cl、Br或I；Q为氢；Y为O；X1为H时；则R3不是 或任选被独立选自以下的1-3个取代基取代的苯基氨基、一-或二-(C1-C6)烷基氨基、羟基、氯、氟、溴、碘、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基和-SO2NH2；4)当W为Cl、Br或I；Q为H；R1为7-Cl；R2为H；并且X1为烷基时；则R3不是烷基、烷氧基或环烷基；5)当W为Cl、Br或I；Q为H；R1为7-Cl；R2为H；并且X1为H时；则R3不是烷基或环烷基氨基；6)当W为Cl、Br、I或NO2；Q为H；Y为O；X1为H；R1为OH；R2为NO2、氨基、烷基、烷氧基、羟基低级烷基或二烷基氨基时；则R3不是H或烷基；7)当W为Cl、Br或I；Q为H；Y为O；R1为CF3、CH2F、NO2、烷基或烷氧基；R2为H；X1为H时；则R3不是任选被卤代基、CF3、烷基或烷氧基取代的萘基或苯基；8)当W为Cl、Br或I；Q为H；R1为烷基；R2为H；X1为H或烷基时；则R3不是烷基或烷氧基；9)当W为Cl；Q为H；Y为S；R1和R2分别为H；X1为H时；则R3不是乙基；10)当W为Cl；Q为H；Y为O；R1和R2分别为H；X1为H时；则R3不是正丁基；并且11)当W为H时，则R1和R2不同时是H。
在一个优选实施方案中，本发明涉及下式的化合物 其外消旋-非对映体混合物、其旋光异构体、其前体药物、其同位素或所述化合物、异构体、前体药物和同位素的药学上可接受的盐，其中，Q为H或代表一个键，该键将X1与同Q和X1连接的两个氮原子以及与所述两个氮原子连接的C＝Y基团结合在一起形成 Q1为(C1-C6)烷基；Y为O或S；W为Cl、Br、I、NO2或CN;
其中X1为氢、烷基、羟基烷基或代表与以下所述的R3结合在一起的键或代表与以上所述的Q结合在一起的键；R1和R2分别独立地为氢、卤素、羟基、硝基、氰基、COOH、COOX3、5O2X3、SOX3、C(O)X3、NHC(O)X3、C(O)NHX3、NHSO2X3或选自任选取代的以下基团;烷基、链烯基、链炔基、烷氧基、氨基、NHX3、NX3X3、烷基氨基、芳基氨基、杂环基氨基、烷硫基、烷基磺酸酯基、芳基、芳氧基、芳基烷基、芳基链烯基、芳基链炔基、芳烷氧基、杂环基、杂环氧基、杂环基-烷基、杂环基-链烯基、杂环基-链炔基、杂环基-烷氧基、杂环硫基、杂环亚硫酰基、杂环磺酰基、环烷基、-(CH2)m-(CHX2)CN、-(CH2)m-(CHX2)COOH、-(CH2)m-(CHX2)COOX3、-(CH2)m-(CHX2)SO2X3、-(CH2)m-(CHX2)C(O)X3、-(CH2)m-(CHX2)C(O)NHX3和-(CH2)m-(CHX2)NHSO2X3；其中m为0-4；X2每次出现时独立地为H或任选取代的选自以下的部分；烷基、链烯基、链炔基、羰基、S(O)p烷基、S(O)p芳基、S(O)p杂环基、氨基、烷氧基、烷硫基、芳硫基、全卤代烷基、芳基、芳氧基、芳基烷基、芳烷氧基、杂环基和杂环基-烷基；p为0、1或2；X3每次出现时独立地为H或任选取代的选自以下的部分；一或二烷基氨基、烷基、链烯基、链炔基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基-烷基；R3为氢或任选取代的选自以下的部分；羰基、烷基、链烯基、链炔基、环烷基、芳基、芳基烷基、杂环基、杂环基-烷基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、烷氧基、硫代烷氧基和酰基；或R3和X1与连接它们的氮原子结合在一起形成 或 其中Z每次出现时独立选自氧代基或任选取代的选自以下的部分；-C(O)(C1-C6)烷基、-C(O)芳基、-C(O)N(C1-C6)烷基、-C(O)N-芳基、(C1-C6)烷基、(C2-C6)链烯基、(C2-C6)链炔基、氨基、一-或二-(C1-C6)烷基氨基、-COO(C1-C6)烷基、吡啶基、苯基、苯基(C1-C6)烷基和苯基(C1-C6)链烯基；其中每个上述任选取代的部分任选地被分别独立选自以下的一个或多个取代基取代;氧代基、氨基、硝基、一-或二-(C1-C6)烷基氨基、羟基、腈、氯、氟、溴、碘、CF3、(C1-C6)烷基、-C(O)(C1-C6)烷基、-COOH、-COO(C1-C6)烷基、-S-(C1-C6)烷基、-S-芳基、(C1-C6)烷氧基、-SO2NH2、苯基、苯基(C1-C6)烷基、-O-(C1-C6)烷基-OH、-O-(C1-C6)烷基-O-(C1-C6)烷基、-O(C2-C6)烷基-N-((C1-C6)烷基)n、-N-(C1-C6)烷基-OH、-N-(C1-C6)烷基-O-(C1-C6)烷基、-C(O)NH2、-C(O)N((C1-C6)烷基)n、-S(O)n(C1-C6)烷基、-S(O)n芳基、-S(O)n杂环基和杂环基，其中此中所述的烷基在所述烷基部分任选具有一个或多个不饱和键；n为0、1或2；其条件是；1)当Q为H；Y为O；R1和R2分别为氢、卤素、烷基、烷氧基、烷硫基、羧基烷基或任选取代的苯基；并且X1为氢或烷基时；则R3不是烷基、链烯基、烷氧基、环烷基或任选取代的苯基；2)当Q为H；Y为O；R1和R2分别为氢、卤素、烷基、烷氧基、烷硫基、羧基烷基或任选取代的苯基时；则X1和R3不结合在一起形成 3)当W为Cl、Br或I；Q为氢；Y为O；X1为H时；则R3不是 或任选被独立选自以下的1-3个取代基取代的苯基；氨基、一-或二-(C1-C6)烷基氨基、羟基、氯、氟、溴、碘、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基和-SO2NH2；4)当W为Cl、Br或I；Q为H；R1为7-Cl；R2为H；并且X1为烷基时；则R3不是烷基、烷氧基或环烷基；5)当W为Cl、Br或I；Q为H；R1为7-Cl；R2为H；并且X1为H时；则R3不是烷基或环烷基氨基；6)当W为Cl、Br、I或NO2；Q为H；Y为O；X1为H；R1为OH；R2为NO2、氨基、烷基、烷氧基、羟基低级烷基或二烷基氨基时；则R3不是H或烷基；7)当W为Cl、Br或I；Q为H；Y为O；R1为CF3、CH2F、NO2、烷基或烷氧基；R2为H；X1为H时；则R3不是任选被卤代基、CF3、烷基或烷氧基取代的萘基或苯基；8)当W为Cl、Br或I；Q为H；R1为烷基；R2为H；X1为H或烷基时；则R3不是烷基或烷氧基；9)当W为Cl；Q为H；Y为S；R1和R2分别为H；X1为H时；则R3不是乙基；并且10)当W为Cl；Q为H；Y为O；R1和R2分别为H；X1为H时；则R3不是正丁基。
一种命名为组A的一组优选的式(I)化合物是那些化合物，其中所述烷基、链烯基和链炔基部分和一个部分的烷基部分是任选取代的具有1-8个碳原子的直链或支链；所述芳基部分和一个部分的芳基部分是任选取代的苯基、 或萘基；所述杂环基部分和一个部分的杂环基部分选自；任选取代的哌啶基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噻吩基、吡咯烷基、哌嗪基、硫代吗啉基、吗啉基、2，3，4，5-四氢呋喃基、1，3-二噁烷基、1，4二噁烷基、呋喃基和1，2，4-三唑基、四唑基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、噁唑基、噁二唑基、噻二唑基、苯并咪唑基、1，3-二氧戊环基、2-咪唑啉基、咪唑烷基、2-吡唑啉基、吡唑烷基、异噻唑基、1，2，3-三唑基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、1，4-二噻烷基、1，3，5-三嗪基、1，3，5-三噻烷基、吲哚基、异吲哚基、3H-吲哚基、二氢吲哚基、嘌呤基、4H-喹嗪基、噌啉基、2，3-二氮杂萘基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、1，8-二氮萘基、蝶啶基、奎宁环基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、吡咯基、异噁唑基、哒嗪基、吲唑基、苯并噁唑基、苯并呋喃基、苯并噻唑基、中氮茚基、咪唑并吡啶基和苯并噻吩基。
命名为组B的一组优选的组A化合物是那些化合物，其中R3是任选取代的选自以下的部分(C1-C8)烷基、苯基、苯基(C1-C8)烷基、噻吩基、噻吩基(C1-C8)烷基、哌啶基、哌啶基(C1-C8)烷基、吡咯烷基、吡咯烷基(C1-C8)烷基、吗啉基、吗啉基(C1-C8)烷基、2，3，4，5-四氢呋喃基、2，3，4，5-四氢呋喃基(C1-C8)烷基、呋喃基、呋喃基(C1-C8)烷基、环烷基、环烷基(C1-C8)烷基、吡啶基、吡啶基(C1-C8)烷基、1，2，4-三唑基、1，2，4-三唑基(C1-C8)烷基、 和 命名为组C的一组优选的组B化合物是那些化合物，其中Q为H；为NO2；Y为S；R1在7位并且为氢、-CH2-SO2-苯基、-CH2-CN、-CH(CH3)(CN)或-CH(CN)(CH2-苯基)；R2为氢；X为氢、甲基或-(CH2)2-OH；R3选自乙基、苄基、EtOH、n-PrOH、n-BuOH、正戊醇、正己醇、-(CH2)2-NH-(CH2)2-OH、-(CH2)2-O-(CH2)2-OH、-CH(CH2CH3)(CH2OH)、-CH(CH2OH)(CH2-i-Pr)、2，3-二羟基-丙基、2-羟基丙基、-CH(CH3)(CH2OH)、-C(CH3)2(CH2OH)、-CH2(CH3)(CH2OCH3)、1，3-二羟基异丙基、-CH(CH2OH)(CH2CH2SCH3)、环丙基、环丙基甲基、4-羟基环己基、3-氯苯基、4-氯苯基、2-甲基苯基、3-甲基苯基、4-氨基苄基、(4-氨基苯基)乙基、-(CH2)3-N(Et)2、-(CH2)2-N(Me)2、N-哌啶基、2，6-二甲基哌啶基、 和 命名为组D的另一组优选的组B化合物是那些化合物，其中Y为O；R1在7位并且为氢、-CH2-SO2-苯基、-CH2-CN、-CH(CH3)(CN)或-CH(CN)(CH2-苯基)；R2为氢；X1为氢、甲基或-(CH2)2-OH；R3选自苄基、EtOH、n-PrOH、t-BuOH、正己醇、氨基乙基、氨基丙基、-(CH2)2-NH-(CH2)2-OH、-(CH2)2-O-(CH2)2-OH、-CH(CH2CH3)(CH2OH)、-CH(CH2OH)(CH2-i-Pr)、2，3-二羟基-丙基、2-羟基丙基、-CH(CH3)(CH2OH)、1，3-二羟基异丙基、-CH(CH2OH)(CH2CH2SCH3)、环丁基、4-羟基环己基、-CH(COOEt)(CH2)2-SCH3、-(CH2)2-COOEt、-(CH2)5-COOEt、(2-氨基苯基)甲基、4-氨基苄基、(4-氨基苯基)乙基、-C(CH3)2(苯基)、-CH2(2，4-二氟苯基)、2-吡啶基甲基、3-吡啶基甲基、4-吡啶基甲基、-(CH2)2-噻吩-2-基、-CH(i-Pr)(COOEt)、-CH(i-Pr)(CH2OH)、3-(N-甲基氨基)丙基、-(CH2)3-N(Et)2、-(CH2)4-N(Et)2、-CH(Me)(CH2)4-CH3、-CH(Me)(CH2)3-N(Et)2、N-哌啶基、-(CH2)2-(4-(SO2NH2)苯基)、2，6-二甲基哌啶基、 和 命名为组E的另一组优选的组B化合物是那些化合物，其中W为NO2；Q为氢；R1在7位并且为-CH2-CO2-t-Bu、烯丙基或苄基；R2分别为氢；X1为氢；且R3为乙基。
命名为组F的另一组优选的组B化合物是那些化合物，其中W为NO2；R1在7位并且为氢、-CH(CH3)(CN)或-CH(CN)(CH2-苯基)；R2为氢；并且Q与X1结合在一起形成 ，其中Y为O，且R3为乙基。
命名为组G的另一组优选的组A化合物是那些化合物，其中W为NO2；Q为氢；R1和R2分别为氢；和R3和X1与连接它们的氮原子结合在一起形成 或 命名为组H的另一组优选的组B化合物是那些化合物，其中W为NO2；R1为氢或在7位，并且为-CH2-CN、-CH2-CONH2和-CH2-COO-t-Bu；R2为氢；X1为氢或-CH2-O-CH3；R3为甲基、乙基、n-BuOH、-CH2CF3、吗啉代、-(CH2)7-N(Me)2、2-苯基-苯基、n-BuOH、-CH2CF3、吗啉代、-(CH2)4-N(Me)2、-(CH2)2-N(Me)2、-(CH2)3-NHMe、苄基或-CH2-O-CH3；或Q为氢或与X1结合在一起形成 ，其中Y为O，且R3为乙基；或R3和X1与连接它们的氮原子结合在一起形成 其中Z为甲基、4-氟苯基、2-吡啶基、2-甲氧基苯基、-CH2CH＝CH-苯基或2，4-二甲氧基苯基。
命名为组I的另一组优选的式(I)化合物是那些化合物，其中W为Cl或Br；Q为H；R3为任选取代的选自以下的部分烷基、链烯基、苯基、苯基烷基、杂环基、杂环基-烷基或氨基烷基。
命名为组J的一组优选的组I化合物是那些化合物，其中R3为烷基、卤代烷基、酯烷基、N，N-二烷基氨基烷基、链烯基、苯基、苯基烷基、卤代苯基、烷氧基苯基、芳氧基苯基、噻吩基-烷基、卤代吡啶基、杂环基、杂环基-烷基或氨基烷基。
命名为组K的一组优选的组J化合物是那些化合物，其中W为Cl；R3为乙基、丙基、丁基、叔丁基、2，4，6-三氯苯基、2，4-二甲氧基苯基、-(CH2)2-2-噻吩基、烯丙基、2-溴乙基、2-苯氧基苯基、2，6-二氯吡啶-4-基、苄基、-(CH2)2-COOEt、-(CH2)3N(Et)2、-(CH2)4-N(Et)2或-(CH2)2-N(Me)2。
命名为组L的一组优选的组K化合物是那些化合物，其中R3为-(CH2)2-2-噻吩基、烯丙基、2-溴乙基、2-苯氧基苯基、2，6-二氯吡啶-4-基、苄基、-(CH2)2-COOEt、-(CH2)3-N(Et)2、-(CH2)4-N(Et)2或-(CH2)2-N(Me)2。
命名为组M的另一组优选的组J化合物是那些化合物，其中R1为羟基、硝基或任选取代的选自以下的部分烷基、烷氧基、芳烷氧基和磺酸酯基；R2为卤代基或硝基；并且R3为烷基或苯基烷基。
命名为组N的一组优选的组M化合物是那些化合物，其中R1为羟基、硝基、甲基、甲氧基、异丙氧基、苄氧基、4-氟苄氧基、-O-C(CH3)2(C(O)NH2)、-O-(CH2)2-O-(CH2)2-OMe或-O-SO2-CF3；R2为Cl或硝基；并且R3为乙基或苄基。
命名为组O的一组优选的组N化合物是那些化合物，其中X1为H。
命名为组P的一组优选的组O化合物是那些化合物，其中W为Cl；R1在7位；并且R2在4位或5位。
另一方面，本发明涉及下式的化合物 其外消旋-对映体混合物、其旋光异构体、其前体药物、其同位素或所述化合物、异构体、前体药物和同位素的药学上可接受的盐，其中R3为乙基、丙基、叔丁基、2，4，6-三氯苯基或2，4-二甲氧基苯基。
另一方面，本发明涉及下式的化合物 其外消旋-非对映体混合物、其旋光异构体、其前体药物、其同位素或所述化合物、异构体、前体药物和同位素的药学上可接受的盐，其中R1为甲基、甲氧基或异丙氧基。
另一方面，本发明涉及式(IA)的化合物 其外消旋-非对映体混合物、其旋光异构体、其前体药物、其同位素或所述化合物、异构体、前体药物和同位素的药学上可接受的盐，其中W为NO2或CN；Y为O或S；R1在7位并且为氢、甲基、乙基、烯丙基、苯基、苄基、-CH2-C(O)-CH3、-CH2-CO2-t-Bu、-CH2-SO2-芳基、-烷基-CN或-烷基(CN)(CH2-芳基)；X1为氢、烷基或羟基烷基；R3选自乙基、正丁基、叔丁基、正丙基、烯丙基、羟基烷基、氨基烷基、-烷基-NH-烷基-OH、-烷基-O-烷基-OH、二羟基烷基、烷氧基烷基、(烷硫基)羟基烷基、环烷基、环烷基烷基、羟基环烷基、(烷硫基)(烷基酯)烷基、烷基酯烷基、2，4-二甲氧基苯基、3，5-三氟甲基苯基、3-氯苯基、4-氯苯基、2，6-二氯苯基、2-甲基苯基、3-甲基苯基、(取代的苯基)烷基、苯基烷基、杂环基烷基、N-烷基氨基烷基、N，N-二烷基氨基烷基、任选取代的杂环基和任选取代的杂环基烷基。
命名为组Q的一组优选的式(IA)化合物是那些化合物，其中R1为氢，且X1为氢。
命名为组R的一组优选的式(IA)化合物是那些化合物，其中W为NO2；Q为氢；R1在7位并且为氢、甲基、乙基或苯基；R2分别为氢；X1为氢；且R选自乙基、n-Bu、t-Bu、n-Pr、烯丙基、环丙基、环丁基、2，4-二甲氧基苯基、3，5-双-三氟甲基苯基、3-氯苯基、4-氯苯基、2，6二氯苯基、2-甲基苯基和3-甲基苯基。
其它组优选的式(I)化合物如下● 其中W为-(CH2)2-NH-C(O)-NH-(C(R10)2)a-Z1q或任选取代的杂环基；R1和R2分别为H；Q为H；Y为O；X1为H；并且R3为任选取代的烷基。一组优选的上述组的化合物是这样的化合物，其中W为 -(CH2)2-NH-C(O)-NH-Et、-CH2-NH-C(O)-NH-乙基、-CH2-NH2、-NH-苯基、-C(O)NH2、-CH2-NH-S(O)2-Ph、-C(O)-NH-苯基、-CH2-NH-S(O)2-CF3、-CH2-CN、-CH2-NH-CH2-5-甲基-呋喃-2-基、-C(O)-NH-(CH2)3-(4-甲基哌嗪-1-基)、-(CH2)2-NH-C(O)-NH-(苯基)或-(CH2)2-NH-C(O)-NH-(对甲苯甲酰基)。一组优选的前述组的化合物是其中R3为乙基的化合物。● 其中W为CN；R1和R2分别为H；Q为H；Y为O；X1为H；并且R3为任选取代的杂环基-杂环基或杂环基-环烷基。一组优选的前述的化合物是这样的化合物，其中R3为3-(4-甲基哌嗪基)丙基、2-吗啉代乙基、3-(9-苄基-9-氮杂二环[3.3.1]壬基、6-(4-甲基哌嗪基)-3-吡啶基、3-(8-苄基-8-氮杂二环[3.2.1]辛基、甲基-3-(8-苄基-8-氮杂二环[3.2.1]辛基、叔丁基羧酸酯基-1-哌啶基甲基、4-哌啶基甲基、叔丁基羧酸酯基-1-哌嗪基-乙基、2-哌嗪基乙基、4-(4-甲基哌嗪基)环己基、3-哌啶子基丙基、6-(4-甲基哌嗪基)-3-吡啶基。● 其中R1和W结合在一起形成 其中X10独立选自与X3相同的取代基。一组优选的前述组化合物是这样的化合物，其中R2为H；Q为H；Y为O；X1为H；R3为烷基；和X10为乙基、3-吡啶基、N-(p-Br-苯基)-NH-、1-哌啶基或CH3-NH-。● 其中W为H；并且R1为-S-X3、-S(O)X3或-S(O)2X3。● 其中W为Br、Cl或对氟苯氧基、R1和R2分别为H；Q为H；Y为O；X1为H；并且R3为烷基-氯、 -烷基-哌嗪-1-基、-烷基-(2，5-二甲基哌嗪-1-基)、-烷基-(3，5-二甲基哌嗪-1-基)、-烷基-(3-氨基羰基哌啶-1-基)、-烷基-(4-羟基哌啶-1-基)、-烷基-(3-羟基哌啶-1-基)、-烷基-COOEt、-烷基-COOH、-烷基-(4-甲基哌嗪-1-基)、-烷基(N-吗啉代乙基氨基)、-烷基-(N-哌啶基乙基氨基)、-烷基-(N-(N，N-二乙基氨基乙基)-N-(甲基)氨基)、-烷基-((1-乙基吡咯烷-2-基)-甲基氨基)、-烷基-(N-(1-甲基哌啶-4-基)-N-(甲基)氨基)、-烷基氨基、-烷基-哌啶-1-基或-烷基(N，N-二乙基氨基乙基氨基)。一组优选的上述化合物为其中所述烷基为亚甲基、亚乙基或亚丙基的化合物。● 其中R2为H；Q为H；Y为O；X1为H，且R3为乙基。一组优选的上述组化合物是这样的化合物，其中●W为H或Br；并且R1在苯并噻唑基环的7位，且为-C≡CH、-C≡C-(2-吡啶基)、-C≡C-CH2-N(CH3)2、-O-CH(CH3)2、苯基或-CH＝CH2；●R1为-CH＝CH2，且W为-CH＝CH2；●R1为H，且W为苄基、对氟苯氧基或吡啶-4-基甲基；●W为F；R1在苯并噻唑基环的7位并且为H或Cl；并且R2在苯并噻唑基环的5位并且为H或Cl；或●R1为H，且W为-C≡CH、-C≡C-Ph、-C≡CCH2-N(CH3)2、-C≡C-(4-氟苯基)、-C≡C-(对甲苯甲酰基)、-(CH2)2-Ph、-(CH2)2-(4-氟苯基)、-CH＝CH-苯基、-CH＝CH-CH2-N(CH3)2、-CH＝CH-(4-氟苯基)、-CH＝CH-(对甲苯甲酰基)或-CH＝CH-(1-咪唑基)。● 其中W为对氟苯氧基、-(CH2)3-NHMe或-(CH2)2-1-哌嗪基；并且R3为-CH2-C(Me)2-CH2-N(CH3)2、-(CH2)2-(5-咪唑基)、 或 ● 其中R1在苯并噻唑基环的7位并且为H或CN；R2为H；Y为O；Q和X1分别为H；W为Cl、NO2、-CH2-OH、-CH2-O-C(O)-NH-Et、-S-苯基、-O-苯基、-S-CH3、-C(O)-苯基、-S(O)-苯基、-S-对硝基苯基、-S-对甲基苯基、-S-对氯苯基、-S-对甲氧基苯基、-S-m-CF3-苯基、-S-邻氯苯基、-C(O)-CH3、-NH-C(O)-NH-(-CH2)2-2-噻吩基、-NH-C(O)-NH-3-吡啶基、-S(O)2-对(羧甲基氨基)-苯基、-N-吗啉代、-NH-C(O)-NH-Et、-NH-C(O)-NH-CH2-苯基、-S-对氯苯基、-S-对溴苯基、-S-m-CF3-苯基或-S-对氟苯基； R3为 乙基、-(CH2)3-4-甲基哌嗪-1-基、-(CH2)2-N-吗啉代或-CH2-哌啶-4-基。● 其中Q和X1分别为H；Y为O；R3为乙基；W为H、-OCF3、-O-Et、F、CH3、-OCH3、-SO2-Me、NH2、-NH-C(O)-Me、-NH-CH2-苯基、-NH-S(O)2-2-噻吩基、-NH-S(O)2-(3，5-二甲基异噁唑-4-基)、-NH-S(O)2-Me、-NH-S(O)2-CH2-苯基、-NH-C(O)-O-CH2-CCl3、-NH-C(O)-O-CH2-Ph、-NH-C(O)-O-Me或NO2；R1为H、F或-CH2-S(O)2-苯基；并且R2为H、4-Cl、4-甲基、5-甲基、5-Cl、5-F或5-OCH3。
另一方面，本发明涉及一种应用式(IB)化合物或其药学上可接受的盐在正进行抗炎糖皮质激素疗法的患者中作为抗炎糖皮质激素疗法的替代治疗的方法，所述方法包括用式(IB)化合物或其药学上可接受的盐替代糖皮质激素的步骤。
同样，不作为替代疗法，本发明的化合物可以与糖皮质激素疗法结合应用，作为“节省糖皮质激素”的手段，以降低与糖皮质激素疗法相关的有害的副作用。
另一方面，本发明涉及一种抑制蛋白激酶活性的方法，所述方法包括给予患者一种式(IB)的化合物 其外消旋-非对映体混合物、其旋光异构体、其前体药物、其同位素或所述化合物、异构体、前体药物和同位素的药学上可接受的盐，其中，Q为H或代表一个键，该键将X1与同Q和X1连接的两个氮原子以及与所述两个氮原子连接的C＝Y基团结合在一起形成 Q1为(C1-C6)烷基；Y为O或S；W为H、Cl、Br、I、NO2、CN、SCN、OCF3、-Xq-(C(R10)2)a-Y1q-(C(R10)2)a-Z1q、或任选取代的选自以下的基团烷基、链烯基、链炔基、杂环基-链烯基和杂环基-链炔基；Y1和X分别独立选自苯基、杂环基、NR10、O、S、SO、SO2、CF2、CFR、C＝O、(C＝O)NR10、SONR10、SO2NR10、NR10(C＝O)、NR10SO、NR10SO2、NR10SO2NR10、NR10(C＝O)NR10、 和 q每次出现时独立地为0或1；a每次出现时独立地为0或1-5的整数；R10每次出现时独立选自H、任选取代的芳基、任选取代的杂环基和任选被以下一个或多个取代基取代的任选取代的烷基任选被一个或多个羟基、卤代基或任选取代的氨基取代的C1-6烷基；任选被一个或多个羟基、卤代基或任选取代的氨基取代的C1-6烷氧基；羟基；卤代基；或任选取代的氨基；Z1为H、任选取代的烷基、任选取代的芳基或任选取代的杂环基；X1为氢、烷基、羟基烷基或代表与以下所述的R3结合在一起的键或代表与以上所述的Q结合在一起的键；R1和R2分别独立地为氢、卤素、羟基、硝基、氰基、COOH、COOX3、SX3、SO2X3、SOX3、C(O)X3、NHC(O)X3、C(O)NHX3、NHSO2X3或选自任选取代的以下基团烷基、链烯基、链炔基、烷氧基、氨基、NHX3、NX3X3、烷基氨基、芳基氨基、杂环基氨基、烷硫基、烷基磺酸酯基、芳基、芳氧基、芳基烷基、芳基链烯基、芳基链炔基、芳烷氧基、杂环基、杂环氧基、杂环基-烷基、杂环基-链烯基、杂环基-链炔基、杂环基-烷氧基、杂环硫基、杂环基亚硫酰基、杂环基磺酰基、环烷基、-(CH2)m-(CHX2)CN、-(CH2)m-(CHX2)COOH、-(CH2)m-(CHX2)COOX3、-(CH2)m-(CHX2)SO2X3、-(CH2)m-(CHX2)C(O)X3、-(CH2)m-(CHX2)C(O)NHX3和-(CH2)m-(CHX2)NHSO2X3；其中m为0-4；X2每次出现时独立地为H或任选取代的选自以下的部分烷基、链烯基、链炔基、羰基、S(O)p烷基、S(O)p芳基、S(O)p杂环基、
氨基、烷氧基、烷硫基、芳硫基、全卤代烷基、芳基、芳氧基、芳基烷基、芳烷氧基、杂环基和杂环基-烷基；p为0、1或2；X3每次出现时独立地为H或任选取代的选自以下的部分一或二烷基氨基、烷基、链烯基、链炔基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基-烷基；或当R1在苯并噻唑基环的7位时，R1和W可以与连接它们的碳原子结合在一起形成任选取代的5-或6-元杂环；R3为氢或任选取代的选自以下的部分羰基、烷基、链烯基、链炔基、环烷基、芳基、芳基烷基、杂环基、杂环基-烷基、杂环基-杂环基、杂环基-环烷基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、烷氧基、硫代烷氧基和酰基；或R3和X1与连接它们的氮原子结合在一起形成 或 其中Z每次出现时独立选自氧代基或任选取代的选自以下的部分-C(O)(C1-C6)烷基、-C(O)芳基、-C(O)N(C1-C6)烷基、-C(O)N-芳基、(C1-C6)烷基、(C2-C6)链烯基、(C2-C6)链炔基、氨基、一-或二-(C1-C6)烷基氨基、-COO(C1-C6)烷基、吡啶基、苯基、苯基(C1-C6)烷基和苯基(C1-C6)链烯基；其中每个上述任选取代的部分任选地被分别独立选自以下的一个或多个取代基取代氧代基、氨基、硝基、一-或二-(C1-C6)烷基氨基、羟基、腈、氯、氟、溴、碘、CF3、(C1-C6)烷基、-C(O)(C1-C6)烷基、-COOH、-COO(C1-C6)烷基、-S-(C1-C6)烷基、-S-芳基、(C1-C6)烷氧基、-SO2NH2、苯基、苯基(C1-C6)烷基、-O-(C1-C6)烷基-OH、-O-(C1-C6)烷基-O-(C1-C6)烷基、-O(C2-C6)烷基-N-((C1-C6)烷基)n、-N-(C1-C6)烷基-OH、-N-(C1-C6)烷基-O-(C1-C6)烷基、-C(O)NH2、-C(O)N((C1-C6)烷基)n、-S(O)n(C1-C6)烷基、-S(O)n芳基、-S(O)n杂环基和杂环基，其中此中所述的烷基在所述烷基部分任选具有一个或多个不饱和键；n为0、1或2。
式(IB)化合物的一个优选实施方案是 其外消旋-非对映体混合物、其旋光异构体、其前体药物、其同位素或所述化合物、异构体、前体药物和同位素的药学上可接受的盐，其中，Q为H或代表一个键，该键将X1与同Q和X1连接的两个氮原子以及与所述两个氮原子连接的C＝Y基团结合在一起形成 Q1为(C1-C6)烷基；Y为O或S；W为Cl、Br、I、NO2或CN；其中X1为氢、烷基、羟基烷基或代表与以下所述的R3结合在一起的键或代表与以上所述的Q结合在一起的键；R1和R2分别独立地为氢、卤素、羟基、硝基、氰基、COOH、COOX3、SO2X3、SOX3、C(O)X3、NHC(O)X3、C(O)NHX3、NHSO2X3或选自任选取代的以下基团烷基、链烯基、链炔基、烷氧基、氨基、NHX3、NX3X3、烷基氨基、芳基氨基、杂环基氨基、烷硫基、烷基磺酸酯基、芳基、芳氧基、芳基烷基、芳基链烯基、芳基链炔基、芳烷氧基、杂环基、杂环氧基、杂环基-烷基、杂环基-链烯基、杂环基-链炔基、杂环基-烷氧基、杂环硫基、杂环基亚硫酰基、杂环基磺酰基、环烷基、-(CH2)m-(CHX2)CN、-(CH2)m-(CHX2)COOH、-(CH2)m-(CHX2)COOX3、-(CH2)m-(CHX2)SO2X3、-(CH2)m-(CHX2)C(O)X3、-(CH2)m-(CHX2)C(O)NHX3和-(CH2)m-(CHX2)NHSO2X3；其中m为0-4；X2每次出现时独立地为H或任选取代的选自以下的部分烷基、链烯基、链炔基、羰基、S(O)p烷基、S(O)p芳基、S(O)p杂环基、氨基、烷氧基、烷硫基、芳硫基、全卤代烷基、芳基、芳氧基、芳基烷基、芳烷氧基、杂环基和杂环基-烷基；p为0、1或2；X3每次出现时独立地为H或任选取代的选自以下的部分一或二烷基氨基、烷基、链烯基、链炔基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基-烷基；R3为氢或任选取代的选自以下的部分羰基、烷基、链烯基、链炔基、环烷基、芳基、芳基烷基、杂环基、杂环基-烷基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、烷氧基、硫代烷氧基和酰基；或R3和X1与连接它们的氮原子结合在一起形成 或 其中Z每次出现时独立选自氧代基或任选取代的选自以下的部分-C(O)(C1-C6)烷基、-C(O)芳基、-C(O)N(C1-C6)烷基、-C(O)N-芳基、(C1-C6)烷基、(C2-C6)链烯基、(C2-C6)链炔基、氨基、一-或二-(C1-C6)烷基氨基、-COO(C1-C6)烷基、吡啶基、苯基、苯基(C1-C6)烷基和苯基(C1-C6)链烯基；其中每个上述任选取代的部分任选地被分别独立选自以下的一个或多个取代基取代氧代基、氨基、硝基、一-或二-(C1-C6)烷基氨基、羟基、腈、氯、氟、溴、碘、CF3、(C1-C6)烷基、-C(O)(C1-C6)烷基、-COOH、-COO(C1-C6)烷基、-S-(C1-C6)烷基、-S-芳基、(C1-C6)烷氧基、-SO2NH2、苯基、苯基(C1-C6)烷基、-O-(C1-C6)烷基-OH、-O-(C1-C6)烷基-O-(C1-C6)烷基、-O-(C2-C6)烷基-N-((C1-C6)烷基)n、-N-(C1-C6)烷基-OH、-N-(C1-C6)烷基-O-(C1-C6)烷基、-C(O)NH2、-C(O)N((C1-C6)烷基)n、-S(O)n(C1-C6)烷基、-S(O)n芳基、-S(O)n杂环基和杂环基，其中此中所述的烷基在所述烷基部分任选具有一个或多个不饱和键；n为0、1或2。
一种优选的刚刚描述的方法是其中所述蛋白激酶是酪氨酸激酶的方法。
一种优选的刚刚描述的方法是其中所述酪氨酸激酶是一种受体酪氨酸激酶或非受体酪氨酸激酶的方法。
一种优选的刚刚描述的方法是其中所述酪氨酸激酶为KDR或Lck的方法。
另一种优选的用式(IB)化合物抑制酪氨酸激酶的方法是其中所述酪氨酸激酶影响血管生成的方法。
另一种优选的刚刚描述的方法是其中所述对酪氨酸激酶的抑制导致抗血管生成效应的方法。
另一方面，本发明涉及一种治疗病症、障碍或疾病的方法，所述方法包括给予患者一种以上限定的式(IB)化合物，其中所述病症、障碍或疾病选自高增生性疾病、溃疡、莱姆病、脓毒症、von Hippel Lindau病、类天疱疮、银屑病、佩吉特病、多囊性肾病、纤维变性、结节病、肝硬变、甲状腺炎、高粘滞性综合征、遗传性出血性毛细血管扩张、慢性闭塞性肺病、卵巢刺激过高综合征(ovarian hyperstimulationsyndrome)、先兆子痫、异常子宫出血、子宫内膜异位、慢性炎症、系统性狼疮、肾小球肾炎、滑膜炎、炎性肠病、局限性回肠炎、肾小球肾炎、类风湿性关节炎、骨关节炎、多发性硬化、移植排斥、镰状细胞性贫血、眼病、心血管病、动脉粥样硬化、再狭窄、局部缺血/再灌注损伤、血管闭塞、颈动脉阻塞性疾病、癌症、克罗-深濑(POEMS)综合征、糖尿病性疾病、贫血、局部缺血、梗塞、移植排斥、伤口、坏疽、坏死、哮喘或烧伤、创伤、辐照、中风、低氧症或局部缺血后水肿、以及单纯疱疹感染、带状疱疹感染、人免疫缺陷病毒感染、副痘病毒感染、原生动物感染或弓形体病。
一种优选的刚刚描述的方法是，其中所述眼病是眼水肿或黄斑水肿、眼新血管性疾病、巩膜炎、放射状角膜切开术、眼色素层炎、玻璃体炎(Vitritis)、近视、optic pits、慢性视网膜脱离、激光治疗后并发症、结膜炎、施塔加特病、伊尔斯病、视网膜病或黄斑变性；所述癌症是实体瘤、肉瘤、纤维肉瘤、骨瘤、黑素瘤、成视网膜细胞瘤、横纹肌肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、畸胎瘤、造血恶性肿瘤、恶性腹水、卡波西肉瘤、霍奇金病、淋巴瘤、骨髓瘤或白血病；及所述糖尿病性疾病是胰岛素依赖性糖尿病性青光眼、糖尿病性视网膜病或糖尿病性微血管病。
另一方面，本发明涉及一种降低患者生育力的方法，所述方法包括给予患者有效量的以上限定的式(IB)化合物。
另一方面，本发明涉及一种促进血管生成或血管发生的方法，所述方法包括给予患者以上限定的式(IB)化合物。
一种优选的刚刚描述的方法是其中所述式(IB)化合物与促血管生成性生长因子联合给予。
另一方面，本发明涉及一种治疗患有由蛋白激酶活性介导的病症的患者的方法，所述方法包括给予所述患者治疗有效量的以上限定的式(IB)化合物的步骤。
一种优选的刚刚描述的方法是其中所述蛋白激酶活性涉及T细胞活化、B细胞活化、肥大细胞脱颗粒、单核细胞活化、炎性反应的增强或其组合的方法。
另一方面，本发明涉及一种药用组合物，所述药用组合物包含以上限定的式(I)的化合物和药学上可接受的稀释剂或载体。
另一方面，本发明涉及一种药用组合物，所述药用组合物包含用于抑制蛋白激酶的有效量的式(IB)化合物和药学上可接受的载体或稀释剂。
本发明的化合物可用作丝氨酸/苏氨酸激酶和酪氨酸激酶的抑制剂。特别是，本发明化合物可用作在高增生性疾病中，特别是在癌症和在血管生成过程中是重要的酪氨酸激酶的抑制剂。例如，这些化合物中的某些化合物是诸如KDR、Flt-1、VEGFR-3、FGFR、PDGFR、c-Met、Tie-2、Tie-1或IGF-1-R的受体激酶的抑制剂。由于这些化合物中的某些化合物抗血管生成，因而它们是用于抑制其中血管生成是重要组分的病症(例如癌症、关节炎和眼新血管形成)进程的重要物质。由于这些药物中的一些阻断对VEGFs的应答，并且因为VEGF在缺氧的条件下强烈上调，所以这些化合物用于控制血管渗漏以及局部缺血和组织损伤后的新血管性事件。某些本发明化合物可有效作为诸如PKCs、erk、MAP激酶、cdks、Plk-1或Raf-1的丝氨酸/苏氨酸激酶的抑制剂。这些化合物可用于治疗癌症和高增生性疾病。另外，某些化合物是非受体激酶例如Src(例如Ick、blk和lyn)、Tec、Csk、Jak、Map、Nik和Syk家族的那些激酶的有效抑制剂。这些化合物可用于治疗癌症、高增生性疾病和免疫性疾病。
本发明的化合物当给予需要这类化合物的个体时，抑制这些个体中的血管通透性过高和水肿的形成。认为这些化合物通过抑制涉及血管通透性过高和水肿形成过程中KDR酪氨酸激酶的活性而发挥作用。KDR酪氨酸激酶也可以称为FLK-1酪氨酸激酶、NYK酪氨酸激酶或VEGFR-2酪氨酸激酶。当血管内皮细胞生长因子(VEGF)或另一激活配体(例如VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E或HIV Tat蛋白)与位于血管内皮细胞表面的KDR酪氨酸激酶受体结合时，KDR酪氨酸激酶被激活。在这种KDR酪氨酸激酶激活后，发生血管的通透性过高，来自血流的液体通过血管壁转移到胞间隙，从而形成水肿区。血细胞渗出也常常伴随这种反应。同样，过度的血管通透性过高可以破坏重要组织和器官(例如肺和肾)中跨越内皮的正常分子交换，从而引起大分子外渗和沉积。在这种对KDR刺激(据信该刺激促进随后的血管生成过程)的急性应答后，延长的KDR酪氨酸激酶刺激导致血管内皮细胞的增殖和趋化性以及新血管的形成。通过阻断所述激活配体的产生、阻断所述激活配体与KDR酪氨酸激酶受体结合、阻止受体二聚化和转磷酸作用、抑制KDR酪氨酸激酶活性(抑制该酶的磷酸化功能)或通过中断其下游信号的某些其它机制(D.Mukhopedhyay等，Cancer Res.581278-1284(1998)以及其中的参考文献)，来抑制KDR酪氨酸激酶活性，可以将通透性过高以及相关的外渗、随后的水肿形成和基质沉积和血管生成应答抑制和减至最小。
一组本发明的优选化合物具有抑制KDR酪氨酸激酶活性、而不显著抑制Flt-1酪氨酸激酶活性的特性(Flt-1酪氨酸激酶也称为VEGFR-1酪氨酸激酶)。KDR酪氨酸激酶和Flt-1酪氨酸激酶都通过VEGF分别与KDR酪氨酸激酶受体和Flt-1酪氨酸激酶受体结合而被激活。由于Flt-1酪氨酸激酶活性在内皮维持和血管功能方面可以介导重要事件，所以这种酶活性的抑制可能导致毒性效应或副作用。至少这种抑制不是阻断血管生成应答、诱导血管通透性过高和形成水肿所必需的，对个体没有用且没有价值。某些本发明的优选化合物是独特的，因为它们抑制一种由激活配体激活的VEGF受体酪氨酸激酶(KDR)的活性，但不抑制其它受体酪氨酸激酶例如Flt-1(该激酶也被某些激活配体激活)的活性。因此，本发明的所述优选化合物在其酪氨酸激酶抑制活性方面具有选择性。
本发明化合物也可用于治疗溃疡-细菌性溃疡、真菌性溃疡、莫伦溃疡和溃疡性结肠炎。
本发明的某些化合物是Tie-2和/或Tie-1激酶的抑制剂，可以抗血管生成(尤其是结合VEGFR的抑制)，或者当在VEGF相关刺激存在下或者结合VEGF相关刺激使用时促血管生成。以这种方式，这类抑制剂可以用于促进治疗性血管生成，以治疗例如局部缺血、梗塞或阻塞，或促进伤口愈合。
本发明提供一种抑制酪氨酸激酶和丝氨酸/苏氨酸激酶活性的方法，所述方法包括给予所述激酶足以抑制所述激酶活性的浓度的式I代表的化合物。
本发明还包括本文所述化合物的药用组合物，所述药用组合物包含药用有效量的所述化合物和药学上可接受的载体或赋形剂。这些药用组合物可以给予个体，以减慢或停止血管生成辅助性疾病中的血管生成过程，或者治疗水肿、渗漏、渗出液或腹水以及与血管通透性过高相关的其它病症。某些药用组合物可以给予个体，以通过抑制丝氨酸/苏氨酸激酶例如cdk、Plk-1、erk等，治疗癌症和高增生性疾病。
在恶性疾病的治疗方面，预期可与抗增生或细胞毒性化学疗法或放射疗法联合。
发明详述本发明的某些化合物具有抗血管生成特性。这些抗血管生成特性至少部分由于抑制血管生成过程所必需的蛋白酪氨酸激酶所致。因此，这些化合物可以用作针对例如以下病症的活性药物关节炎、动脉粥样硬化、再狭窄、银屑病、血管瘤、细胞内皮瘤、心肌血管生成、冠状和脑侧支、局部缺血性肢体血管生成、局部缺血/再灌注损伤、伤口愈合、消化性溃疡螺杆菌相关疾病、病毒诱发的血管生成性疾病、骨折、克罗-深濑综合征(POEMS)、先兆子痫、异常子宫出血、猫抓热、潮红、新血管性青光眼和视网膜病，例如与糖尿病性视网膜病、早产儿视网膜病或老年性黄斑变性相关的视网膜病。另外，这些化合物中的某些可以用作针对以下疾病的活性药物实体瘤、恶性腹水、vonHippel Lindau病、造血癌症和高增生性疾病，例如甲状腺增生(尤其是格雷夫斯病)和囊肿(例如滤泡性囊肿或多囊性卵巢综合征特征性的卵巢基质的血管过多(Stein-Leventhal综合征))以及多囊性肾病，因为这些疾病需要血管细胞增殖以供生长和/或转移。
此外，这些化合物中的某些可以用作针对以下疾病的活性药物烧伤、慢性肺病、中风、息肉、哮喘、过敏性、慢性和过敏性炎症、迟发型过敏反应、卵巢刺激过高综合征、脑肿瘤相关的脑水肿、或者由高空创伤或高空低氧诱发的脑水肿或肺水肿、眼水肿和黄斑水肿、腹水、肾小球肾炎以及疾病表现为血管通透性过高、渗漏、渗出、蛋白外渗或水肿的其它疾病。所述化合物也将可用于治疗其中蛋白外渗导致血纤蛋白和胞外基质沉积、促进基质增生(例如疤痕疙瘩、纤维变性、肝硬变和腕管综合征)的疾病。增加的VEGF产生，增强例如单核细胞募集和激活的炎性过程。本发明的化合物也将可用于治疗炎性疾病，例如炎性肠病(IBD)和局限性回肠炎。
本发明的化合物尤其适用于治疗炎性类风湿性或风湿性疾病，尤其是表现在运动器上的那些疾病，例如各种炎性类风湿性疾病，尤其是慢性多关节炎(＝类风湿性关节炎(非常优选的))，包括青少年关节炎或关节病性银屑病；瘤外综合征或肿瘤诱发的炎性疾病、混浊性渗漏(turbid effusions)、胶原性疾病、例如系统性红斑狼疮、多肌炎、皮肌炎、全身性硬皮病或混合型胶原性疾病；传染病后关节炎(其中在机体的受影响部分没有发现活的致病生物)或血清阴性椎关节炎，例如关节强硬性脊椎炎；脉管炎；结节病；腹膜硬化(尤其是在透析患者中)；关节病；或其任何其它组合。
由上所述，人们会理解，本发明可进一步被理解为包括所述治疗，例如任何上述疾病或病症的治疗，例如类风湿性关节炎、关节病、皮肌炎等，例如用于缓解或控制炎性过程或事件及与其相关或随之发生的后遗症，例如用于治疗类风湿性关节炎，例如以缓解或控制关节炎症或渗漏。
再一方面，按照本发明已经发现，系统给予本发明化合物或其盐，可用作抗炎糖皮质激素(例如可的松等)疗法的替代疗法，或者作为糖皮质激素节省疗法(glucocorticoid sparing therapy)。例如用于前文所述的任何治疗方法。
根据本发明化合物作为VEGF受体酪氨酸激酶活性抑制剂的功效，本发明化合物主要抑制血管生长，并且因此例如有效抵抗多种与去调节的血管生成相关的疾病，尤其是由眼新血管形成引起的疾病，尤其是视网膜病，例如糖尿病性视网膜病或老年性黄斑变性、银屑病、成血管细胞瘤例如血管瘤、血管系膜细胞增生性疾病例如慢性或急性肾病、例如糖尿病肾病、恶性肾硬变、血栓性微血管综合征(thrombicmicroangiopathy syndromes)或移植排斥、或者尤其是炎性肾病例如肾小球肾炎、尤其是肾小球系膜增生性肾小球肾炎、溶血性尿毒综合征、糖尿病性肾病、高血压性肾硬化、粉瘤、动脉再狭窄、自身免疫病、急性炎症、纤维变性性疾病(例如肝硬变)、糖尿病、神经变性性疾病和尤其是肿瘤疾病(实体瘤，但也可以是白血病和其它造血恶性肿瘤或“非实体瘤(liquid tumours)，它们表达c-kit、KDR或flt-1)，例如尤其是乳腺癌、结肠癌、肺癌(尤其是小细胞性肺癌)、前列腺癌或卡波西肉瘤。式I化合物(或其N-氧化物)抑制肿瘤的生长，尤其适合于预防肿瘤转移性传播和微转移瘤的生长。
VEGF是独特的，因为它们是引起血管通透性过高和水肿形成的仅有的血管生成性生长因子。实际上，与许多其它生长因子的表达或给予相关的血管通透性过高和水肿看来是通过VEGF的产生介导的。炎性细胞因子刺激VEGF的产生。低氧导致VEGF在许多组织中被显著负调节，因而涉及梗塞、阻塞、局部缺血、贫血或循环损害的情况通常引起VEGF/VPF介导的反应。与水肿、跨内皮交换改变和大分子外渗相关的、常常伴有血细胞渗出的血管通透性过高，可能导致基质过度沉积、异常的基质增生、纤维变性等。因而，VEGF介导的通透性过高可能是引起具有这些病因学特征的疾病的重要原因。
因为胚泡植入、胎盘发育和胚胎发生依赖于血管生成，本发明的某些化合物可用作避孕药和抗生育药。
设想了，以上所列疾病在很大程度上是由包括KDR/VEGFR-2和/或Flt-1/VEGFR-1和/或Flt-4/VEGFR-3和/或Tie-2和/或Tie-1酪氨酸激酶的蛋白酪氨酸激酶活性介导的。通过抑制这些酪氨酸激酶的活性，抑制以上所列疾病的进程，因为所述病症的血管生成或血管通透性过高的组分被大大减少。本发明某些化合物由于对特定酪氨酸激酶具有选择性，因此其作用导致使可能在使用选择性不强的酪氨酸激酶抑制剂时发生的副作用尽可能减小。本发明的某些化合物也是FGFR、PDGFR、c-Met和IGF-1-R激酶的有效抑制剂。这些受体激酶在各种疾病中可能直接或间接增强血管生成性应答和高增生性应答，因而其抑制可能阻止疾病发展。
通过真核细胞周期的进程称为依赖细胞周期蛋白的激酶(CDKs)的激酶家族控制(Myerson等，EMBO Journal，112909-2917(1992))。CDK激活的调节是复杂的，但需要CDK与一些调节亚基的细胞周期蛋白家族的成员结合(Draetta，Trends in Cell Biology，3287-289(1993)；Murray和Kirschner，Nature，339275-280(1989)；Solomon等，MolecularBiology of the Cell，313-27(1992))。另一水平的调节通过CDK亚基磷酸化的激活和失活而发生(Draetta，Trends in Cell Biology，3287-289(1993)；Murray和Kirschner，Nature，339275-280(1989)；Solomon等，Molecular Biology of the Cell，313-27(1992)；Ducommun等，EMBOJournal，103311-3319(1991)；Gautier等，Nature 339626-629(1989)；Gould和Nurse，Nature，34239-45(1989)；Krek和Nigg，EMBO Journal，103331-3341(1991)；Solomon等，Cell，631013-1024(1990))。不同的细胞周期蛋白/CDK复合物的协同激活和失活对于通过细胞周期的正常进程是必需的(Pines，Trends in Biochemical Sciences，18195-197(1993)；Sherr，Cell 731059-1065(1993))。关键的G1-S和G2-M转换通过不同细胞周期蛋白/CDK活性的激活来控制。在G1中，认为细胞周期蛋白D/CDK4和细胞周期蛋白E/CDK2都介导S期的开始(Matsushima等，Molecular & Cellular Biology，142066-2076(1994)；Ohtsubo和Roberts，Science，2591908-1912(1993)；Quelle等，Genes & Development，71559-1571(1993)；Resnitzky等，Molecular & Cellular Biology，141669-1679(1994))。通过S期的进程需要细胞周期蛋白A/CDK2的活性(Girard等，Cell，671169-1179(1991)；Pagano等，EMBO Journal，11961-971(1992)；Rosenblatt等，Proceedings of the National Academy of Science USA，892824-2828(1992)；Walker和Maller，Nature，354314-317(1991)；Zindy等，Biochemical & Biophysical Research Communications，1821144-1154(1992))，而细胞周期蛋白A/cdc2(CDK1)和胞周期蛋白B/cdc2的激活是中期开始所需的(Draetta，Trends in Cell Biology，3287-289(1993)；Murray和Kirschner，Nature，339275-280(1989)；Solomon等，Molecular Biology of the Cell，313-27(1992)；Girard等，Cell，671169-1179(1991)；Pagano等，EMBO Journal，11961-971(1992)；Rosenblatt等，Proceedings of the National Academy of Science USA，892824-2828(1992)；Walker和Maller，Nature，354314-317(1991)；Zindy等，Biochemical & Biophysical Research Communications，1821144-1154(1992))。因此，CDK调节控制的丧失是高增生性疾病和癌症中的常见事件并不令人感到意外。(Pines，Current Opinion in Cell Biology，4144-148(1992)；Lees，Current Opinion in Cell Biology，7773-780(1995)；Hunter和Pines，Cell，79573-582(1994))。因此对CDKs的选择性抑制是本发明的一个目的。
本发明的方法可用于治疗蛋白激酶介导的疾病，例如上述任何一种病症。在一个实施方案中，所述蛋白激酶介导的病症的特征为不合需要的血管生成、水肿或基质沉积。例如，所述病症可以是一种或多种溃疡，例如细菌或真菌感染引起的溃疡、莫伦溃疡和溃疡性结肠炎。所述病症也可以由微生物感染所致，例如莱姆病、脓毒症、败血症性休克或者单纯疱疹感染、带状疱疹感染、人免疫缺陷病毒感染、原生动物感染、弓形体病或副痘病毒感染；血管生成疾病，例如von HippelLindau病、多囊性肾病、类天疱疮、佩吉特病和银屑病；生殖疾病，例如子宫内膜异位、卵巢刺激过高综合征、先兆子痫或异常子宫出血；纤维变性和水肿性疾病，例如结节病、纤维变性、肝硬变、甲状腺炎、高粘滞性综合征、遗传性出血性毛细血管扩张、慢性闭塞性肺病、哮喘和烧伤、创伤、辐照、中风、低氧症或局部缺血后水肿；或炎性/免疫病症，例如系统性狼疮、慢性炎症、肾小球肾炎、滑膜炎、炎性肠病、局限性回肠炎、类风湿性关节炎、骨关节炎、多发性硬化和移植排斥。合适的蛋白激酶介导的病症也包括镰状细胞性贫血、骨质疏松、骨硬化病、肿瘤诱发的血钙过多和骨转移。可以通过本发明方法治疗的其它蛋白激酶介导的病症除视网膜病和黄斑变性外，还包括如眼和黄斑水肿、眼新血管性疾病、巩膜炎、放射状角膜切开术、眼色素层炎、玻璃体炎、近视、眼小窝(optic pits)、慢性视网膜脱离、激光治疗后并发症、结膜炎、施塔加特病和伊尔斯病的眼病。
本发明化合物也可用于治疗心血管病，例如动脉粥样硬化、再狭窄、血管闭塞和颈动脉阻塞性疾病。
本发明的化合物还可用于治疗一种或多种影响哺乳动物的特征为血管增生性疾病区域的细胞增殖的疾病、血管畸形、淋巴组织增生性疾病、淋巴血管生成(尤其是Tie-2和Flt-4/VEGFR-3抑制剂)、纤维变性疾病、血管系膜细胞增殖性疾病和代谢性疾病。血管增生性疾病包括不当的眼新血管形成、关节炎和再狭窄。纤维变性性疾病包括肝硬变和动脉粥样硬化。血管系膜细胞增殖性疾病包括肾小球肾炎、糖尿病性视网膜病、恶性肾硬化、血栓性微血管病综合征、器官移植排斥和肾小球病。代谢性疾病包括银屑病、糖尿病、慢性伤口愈合、炎症、神经变性性疾病、黄斑变性和糖尿病视网膜病。
涉及介导或维持这些病症的激酶的抑制剂代表这些疾病的新疗法。这类激酶的实例包括但不限于(1)在癌症中抑制c-Src(Brickell，Critical Reviews in Oncogenesis，3401-406(1992)；Courtneidge，Seminarsin Cancer Biology，5236-246(1994))、raf(Powis，Pharmacology &Therapeutics，6257-95(1994))和依赖细胞周期蛋白的激酶(CDKs)1、2和4(Pines，Current Opinion in Cell Biology，4144-148(1992)；Lees，Current Opinion in Cell Biology，7773-780(1995)；Hunter和Pines，Cell，79573-582(1994))，(2)在再狭窄中抑制CDK2或PDGF-R激酶(Buchdunger等，Proceedings of the National Academy of Science USA，922258-2262(1995))，(3)在早老性痴呆中抑制CDK5和GSK3激酶(Hosoi等，Journal of Biochemistry(Tokyo)，117741-749(1995)；Aplin等，Journal of Neurochemistry，67699-707(1996))，(4)在骨质疏松中抑制c-Src激酶(Tanaka等，Nature，383528-531(1996))，(5)在2型糖尿病中抑制GSK-3激酶(Borthwick等，Biochemical & Biophysical ResearchCommunications，210738-745(1995))，(6)在炎症中抑制p38激酶(Badger等，The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics，2791453-1461(1996))，(7)在涉及血管生成的疾病中抑制VEGF-R1-3和Tie-1和-2激酶(Shawver等，Drug Discovery Today，250-63(1997))，(8)在病毒感染中抑制UL97激酶(He等，Journal of Virology，71405-411(1997))，(9)在骨病和造血性疾病中抑制CSF-1R激酶(Myers等，Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters，7421 424(1997))，和(10)在自身免疫病和移植排斥中抑制Lck激酶(Myers等，Bioorganic & MedicinalChemistry Letters，7417-420(1997))。
另外还有可能的是，某些激酶的抑制剂可能在该激酶未被错调节、但它不是该病症维持所必需的疾病治疗方面有实用性。在这种情况下，对该激酶活性的抑制可能或者用作这些疾病的治疗法或者缓解这些疾病。例如，许多病毒例如人乳头状瘤病毒破坏细胞周期，并且驱动细胞进入细胞周期的S期(Vousden，FASEB Journal，78720879(1993))。通过抑制必需的S期启动活性例如CDK2来阻止细胞在病毒感染后进入DNA合成，可能通过防止病毒复制，而破坏病毒的生活周期。这同一原理可以用来保护机体的正常细胞抵抗周期特异性化学治疗剂的毒性(Stone等，Cancer Research，563199-3202(1996)；Kohn等，Journal of Cellular Biochemistry，5444-452(1994))。抑制CDKs2或4将在正常细胞中防止进行到该周期并且限制在S期、G2或有丝分裂中起作用的细胞毒性剂的毒性。此外，也已经表明CDK2/细胞周期蛋白E活性调节NF-kB。对CDK2活性的抑制，刺激NF-kB依赖性基因的表达，这是通过与p300辅激活蛋白相互作用介导的事件(Perkins等，Science，275523-527(1997))。NF-kB调节参与炎性反应的基因(例如造血生长因子、趋化因子和白细胞粘附分子)(Baeuerle和Henkel，Annual Review ofImmunology，12141-179(1994))，并且可能参与对所述细胞内细胞凋亡信号的抑制(Beg和Baltimore，Science，274782-784(1996)；Wang等，Science，274784-787(1996)；Van Antwerp等，Science，274787-789(1996))。因此，抑制CDK2，可以通过涉及NF-kB的机制，抑制由细胞毒性药诱导的细胞凋亡。因此，这提示对CDK2活性的抑制也可能在NF-kB的调节在疾病病因学中起作用的其它情况下有实用性。再一实例可以得自真菌感染曲霉病是免疫妥协患者的一种常见感染(Armstrong，Clinical Infectious Diseases，161-7(1993))。抑制曲霉属激酶Cdc2/CDC28或Nim A(Osmani等，EMBO Journal，102669-2679(1991)；Osmani等，Cell，67283-291(1991))可能导致真菌的阻滞或死亡，改善患有这些感染的患者的治疗结果。
在一个实施方案中，本发明提供如上所述的式(I)、(IA)和(IB)化合物。
式(I)、(IA)和(IB)化合物可以作为与药学上可接受的酸形成的盐存在。本发明包括这类盐。这类盐的实例包括但不限于盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、甲磺酸盐、硝酸盐、马来酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、酒石酸盐[例如(+)-酒石酸盐、(-)酒石酸盐或其混合物，包括外消旋混合物]、琥珀酸盐、苯甲酸盐和与氨基酸例如谷氨酸形成的盐。这些盐可以通过本领域技术人员已知的方法制备。
具有酸性取代基的某些式(I)、(IA)和(IB)化合物可以作为与药学上可接受的碱形成的盐存在。本发明包括这类盐。这类盐的实例包括钠盐、钾盐、赖氨酸盐和精氨酸盐。这些盐可以通过本领域技术人员已知的方法制备。
某些式(I)、(IA)和(IB)化合物及其盐可以以一种以上的晶型存在，本发明包括每种晶型及其混合物。
某些式(I)、(IA)和(IB)化合物及其盐也可以以溶剂合物例如水合物的形式存在，本发明包括每种溶剂合物及其混合物。
某些式(I)、(IA)和(IB)化合物可以含有一个或多个手性中心，并且以不同的旋光形式存在。当式(I)、(IA)和(IB)化合物含有一个手性中心时，所述化合物以两种对映体形式存在，本发明包括这两种对映体和对映体的混合物，例如外消旋混合物。所述对映体可以通过本领域技术人员已知的方法来拆分，例如通过形成可以例如通过结晶分离的非对映体盐；形成可以例如通过结晶、气-液相色谱或液相色谱分离的非对映体衍生物或复合物；使一种对映体与对映体特异性试剂选择性地反应，例如酶促酯交换；或在手性环境中例如在手性支持物(例如结合有手性配体的二氧化硅)或在手性溶剂存在下的气-液相色谱或液相色谱来拆分。人们会认识到，当将所需对映体通过上述分离方法之一转变为另一化学实体时，需要另一个步骤来释放所需的对映体形式。或者，通过采用旋光试剂、底物、催化剂或溶剂进行不对称合成，或者通过不对称转化将一种对映体转变为另一种对映体，可以合成特定的对映体。
当式(I)、(IA)和(IB)化合物含有不止一个手性中心时，它可以以非对映体形式存在。非对映体对可以通过本领域技术人员已知的方法例如色谱或结晶来分离，每对中的单个对映体可以如上所述来分离。本发明包括式(I)、(IA)和(IB)化合物的每种非对映体及其混合物。
某些式(I)、(IA)和(IB)化合物可以以不同的互变异构体形式或作为不同的几何异构体存在，本发明包括式(I)、(IA)和(IB)化合物的每种互变异构体和/或几何异构体及其混合物。
某些式(I)、(IA)和(IB)化合物可以以可被分离的不同的稳定构象形式存在。由于围绕不对称单键旋转受限(例如因为位阻或环的张力)所致的扭转不对称可以允许分离不同的构象异构体和阻转异构体。本发明包括式(I)、(IA)和(IB)化合物的每种构象异构体及其混合物。
某些式(I)、(IA)和(IB)化合物可以以两性离子形式存在，本发明包括式(I)、(IA)和(IB)化合物的每种两性离子形式及其混合物。
式(I)、(IA)和(IB)化合物包括与所描述的化合物相同，但由于一个或多个氢或碳原子被其同位素置换的化合物。这类化合物可用作代谢药代动力学研究和结合测定中的研究工具和诊断工具。例如，在研究中的具体应用包括放射性配体结合测定、放射自显影研究和体内结合研究。在式(I)、(IA)和(IB)化合物的放射标记形式中包括其氚和C14同位素。
本发明化合物具有针对蛋白激酶的抑制活性。也就是说，这些化合物调节蛋白激酶的信号转导。本发明的化合物抑制来自丝氨酸/苏氨酸激酶类和酪氨酸激酶类的蛋白激酶。特别是，这些化合物选择性地抑制KDR/FLK-1/VEGFR-2和Flt-4/VEGFR-3酪氨酸激酶的活性。本发明的某些化合物也抑制其它酪氨酸激酶例如Flt-1/VEGFR-1、Tie-2、Tie-1、FGFR、PDGFR、IGF-1R、c-Met、Src-亚家族激酶(例如Lck、Src、fyn、blk、Lyn、yes等)的活性。另外，本发明的某些化合物显著抑制丝氨酸/苏氨酸激酶，例如PKC、MAP激酶、erk、CDKs、Plk-1或Raf-1，它们在细胞增殖和细胞周期进程中起必不可少的作用。该类的本发明化合物针对特定蛋白激酶的效力和特异性通常因取代基(即W、R1、R2、R3、Y、Q和X1)的性质、数目和排列的变异和构象限制而改变和最优化。另外，某些化合物的代谢物也可能具有显著的蛋白激酶抑制活性。单独给予或者在体内产生的这些代谢物结构可能引起所观测到的功效。
本发明的化合物当给予需要这类化合物的个体时，抑制这些个体中的血管通透性过高和水肿的形成。认为这些化合物通过至少部分抑制涉及血管通透性过高和水肿形成过程中KDR酪氨酸激酶的活性而发挥作用。KDR酪氨酸激酶也可以称为FLK-1酪氨酸激酶、NYK酪氨酸激酶或VEGFR-2酪氨酸激酶。当血管内皮细胞生长因子(VEGF)或另一激活配体(例如VEGF-C、VEGF-D、VEGF-E或HIV Tat蛋白)与位于血管内皮细胞表面的KDR酪氨酸激酶受体结合时，KDR酪氨酸激酶被激活。在这种KDR酪氨酸激酶激活后，发生血管的通透性过高，来自血流的液体通过血管壁转移到胞间隙，从而形成水肿区。血细胞渗出也常常伴随这种反应。同样，过度的血管通透性过高可以破坏重要组织和器官(例如脑、肺和肾)中跨越内皮的正常分子交换，从而引起大分子外渗和沉积。在这种对KDR刺激(据信该刺激促进随后的血管生成过程)的急性应答后，延长的KDR酪氨酸激酶刺激导致血管内皮细胞的增殖和趋化性以及新血管的形成。通过阻断所述激活配体的产生、阻断所述激活配体与KDR酪氨酸激酶受体结合、阻止受体二聚化和转磷酸作用、抑制KDR酪氨酸激酶活性(抑制该酶的磷酸化功能)或通过中断其下游信号的某些其它机制(D.Mukhopedhyay等，Cancer Res.581278-1284(1998)以及其中的参考文献)，来抑制KDR酪氨酸激酶活性，可以将通透性过高以及相关的外渗、随后的水肿形成和基质沉积和血管生成应答抑制和减至最小。
本发明的方法可用于治疗蛋白激酶介导的疾病，例如上述任何一种病症。在一个实施方案中，所述蛋白激酶介导的病症的特征为不合需要的血管生成、水肿或基质沉积。例如，所述病症可以是一种或多种溃疡，例如细菌或真菌感染引起的溃疡、莫伦溃疡和溃疡性结肠炎。所述病症也可以由微生物感染所致，例如莱姆病、脓毒症、败血症性休克或者单纯疱疹感染、带状疱疹感染、人免疫缺陷病毒感染、原生动物感染、弓形体病或副痘病毒感染；血管生成疾病，例如von HippelLindau病、多囊性肾病、类天疱疮、佩吉特病和银屑病；生殖疾病，例如子宫内膜异位、卵巢刺激过高综合征、先兆子痫或异常子宫出血；纤维变性和水肿性疾病，例如结节病、纤维变性、肝硬变、甲状腺炎、高粘滞性综合征、遗传性出血性毛细血管扩张、慢性闭塞性肺病、哮喘和烧伤、创伤、辐照、中风、急性损伤、低氧症或局部缺血后水肿；或炎性/免疫病症，例如系统性狼疮、慢性炎症、肾小球肾炎、滑膜炎、炎性肠病、局限性回肠炎、类风湿性关节炎、骨关节炎、多发性硬化和移植排斥。合适的蛋白激酶介导的病症也包括镰状细胞性贫血、骨质疏松、骨硬化病、肿瘤诱发的血钙过多和骨转移。可以通过本发明方法治疗的其它蛋白激酶介导的病症除视网膜病和黄斑变性外，还包括如眼和黄斑水肿、眼新血管性疾病、巩膜炎、放射状角膜切开术、眼色素层炎、玻璃体炎、近视、眼小窝、慢性视网膜脱离、激光治疗后并发症、结膜炎、施塔加特病和伊尔斯病的眼病。
已经注意到，肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)(肺炎球菌性感染)刺激嗜中性粒细胞产生/分泌VEGF(Infection & Immunity，68(8)，4792-4794(2000))。也注意到VEGF在囊性纤维化中升高，并且与肺部恶化相关(Am.J.Respir.Care Med.，161，1877-1880(2000))。因此，本发明化合物可用于治疗因与肺炎链球菌感染或囊性纤维化开始相关的VEGF水平提高引起的并发症例如肺部恶化。
本发明化合物也可用于治疗心血管疾病，例如动脉粥样硬化、再狭窄、血管闭塞和颈动脉阻塞性疾病。
本发明的化合物也可用于治疗癌症相关的适应症，例如各种实体瘤、癌、肉瘤(尤其是尤因瘤和骨肉瘤)、成视网膜细胞瘤、横纹肌肉瘤、成神经细胞瘤、造血恶性肿瘤包括白血病和淋巴瘤、肿瘤诱发的胸膜渗漏或心包渗漏和恶性腹水。
Castleman氏病是一种淋巴组织增生性疾病，特征为增大的增生性淋巴结并且具有显著的血管增生。在Castleman氏病的受影响淋巴结中产生的人IL-6可能造成浆细胞的VEGF产生增加和淋巴结中血管增生(Nishi，J.和Maryuma，l.，Leuk.Lymphoma，38 387)。拮抗VEGF信号的本发明化合物可用于治疗Castleman氏病。
本发明的化合物也可用于治疗克罗-深濑(POEMS)综合征和糖尿病性疾病，例如青光眼、糖尿病性视网膜病和糖尿病性微血管病。
一组本发明的优选化合物具有抑制KDR酪氨酸激酶活性、而不显著抑制Flt-1酪氨酸激酶活性的特性(Flt-1酪氨酸激酶也称为VEGFR-1酪氨酸激酶)。KDR酪氨酸激酶和Flt-1酪氨酸激酶都通过VEGF分别与KDR酪氨酸激酶受体和Flt-1酪氨酸激酶受体结合而被激活。某些本发明的优选化合物是独特的，因为它们抑制一种由激活配体激活的VEGF受体酪氨酸激酶(KDR)的活性，但不抑制其它受体酪氨酸激酶例如Flt-1(该激酶也被某些激活配体激活)的活性。因此，本发明的某些优选化合物在其酪氨酸激酶抑制活性方面具有选择性。
在一个实施方案中，本发明提供一种治疗患者的蛋白激酶介导的病症的方法，所述方法包括给予所述患者治疗或预防有效量的一种或多种式I化合物。“蛋白激酶介导的病症”或“由蛋白激酶活性介导的病症”是一种医学病症，例如其发生或进程至少部分依赖于至少一种蛋白激酶活性的疾病或其它不希望有的身体状态。所述蛋白激酶可以是例如蛋白酪氨酸激酶或蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶。
待治疗的患者可以是任何动物，最好是哺乳动物，例如驯化的动物或家畜。更优选所述患者是人类。
“治疗有效量”是一种式I化合物或两种或更多种这类化合物组合完全或部分抑制所述病症进程或至少部分缓解所述疾病的一种或多种症状的量。治疗有效量也可以是预防有效的量。预防有效的量将取决于所述患者的体型和性别、待治疗的病症、所述病症的严重程度和所寻求的结果。对于特定患者，治疗有效量可以通过本领域技术人员已知的方法来确定。
激酶的Src、Tec、Jak、Map、Csk、NFκB和Syk家族在免疫功能的调节方面起重要作用。Src家族目前包括Fyn、Lck、Fgr、Fes、Lyn、Src、Yrk、Fyk、Yes、Hck和Blk。Syk家族目前认为仅包括Zap和Syk。TEC家族包括Tec、Btk、Rlk和Itk。激酶的Janus家族参与生长因子的转导和通过多种受体的促炎细胞因子信号。虽然对激酶的Tec家族成员BTK和ITK在免疫学方面的作用不太了解，但抑制剂对其调节可能证明有治疗益处。Csk家族目前认为包括Csk和Chk。激酶RIP、IRAK-1、IRAK-2、NIK、p38MAP激酶、Jnk、IKK-1和IKK-2参与关键促炎细胞因子(例如TNF和IL-1)的信号转导途径。鉴于其抑制这些激酶中的一种或多种的能力，式I化合物可能用作免疫调节药，可用于维持同种移植物、治疗自身免疫病和治疗脓毒症和败血症性休克。通过其调节T细胞、B细胞、肥大细胞、单核细胞和嗜中性粒细胞迁移或活化的能力，这些化合物可用来治疗这类自身免疫病和脓毒症。或者宿主抗实体器官移植物、或者为移植物抗骨髓宿主的移植排斥的预防，受目前可利用的免疫抑制药毒性的限制，并可能收益于治疗指标改善的有效药物。基因靶向实验已经证明Src在负责骨吸收的破骨细胞生物学中的基本作用。式I化合物通过其调节Src的能力，也可以用于治疗骨质疏松、骨硬化病、佩吉特病、肿瘤诱导的血钙过多和治疗骨转移。
已经证明许多蛋白激酶是原癌基因。染色体断裂(在5号染色体上Jtk激酶的断裂点上)、易位，如在具有BCR的Ab1基因的情况下(Philadelphia染色体)、平截(在例如c-Kit或EGFR的情况下)或突变(例如Met)导致产生调节异常的蛋白质，将它们从原癌基因转变为癌基因产物。在其它肿瘤中，肿瘤发生为自分泌或旁分泌配体/生长因子受体相互作用所驱动。Src家族激酶的成员通常参与下游信号转导，从而增强增殖性应答或肿瘤发生，其自身可能通过过量表达或突变而变为致癌的。通过抑制这些蛋白的蛋白激酶活性，可以破坏所述疾病过程。血管再狭窄可能涉及FGF和/或PDGF-促进平滑肌和内皮细胞增殖。FGFR、PDGFR、IGF1-R和c-Met的体内配体刺激是促血管生成性的，增强血管生成依赖性疾病。单独或结合抑制FGFr、PDGFr、c-Met或IGF1-R激酶的活性，可能是一种抑制这些现象的有效策略。因此，抑制正常或异常c-kit、c-met、c-fms、src家族成员、EGFr、erbB2、erbB4、BCR-Ab1、PDGFr、FGFr、IGF1-R和其它受体酪氨酸激酶或胞质酪氨酸激酶的激酶活性的式I化合物，可能在治疗良性和肿瘤性增生性疾病方面有价值。
在许多病症(例如原发性实体瘤和转移瘤、卡波西肉瘤、类风湿性关节炎、由于不当的眼新血管形成所致的失明、银屑病和动脉粥样硬化)中，在持续的血管生成下，偶然发生疾病发展。通常由患病组织或相关的炎性细胞产生的多肽生长因子及其相应的内皮细胞特异性受体酪氨酸激酶(例如KDR/VEGFR-2、Flt-1/VEGFR-1、Tie-2/Tek和Tie-1)对于内皮细胞生长、迁移、组构、分化和必不可少的新功能血管系统的建立是必需的。由于VEGF在介导血管通透性过高方面的血管通透性因子活性，也认为VEGFR激酶的VEGF刺激在以下病症的形成中起重要作用肿瘤性腹水、脑水肿和肺水肿、胸膜渗漏和心包渗漏、迟发型过敏反应、组织水肿和创伤后器官机能障碍、急性肺损伤(ALI)、烧伤、局部缺血、糖尿病性并发症、子宫内膜异位、成人呼吸窘迫综合征(ARDS)、心肺旁路后相关低血压和通透性过高、以及导致青光眼的眼水肿或不当新血管形成所致的失明。除VEGF外，最近鉴定的VEGF-C和VEGF-D以及病毒编码的VEGF-E或HIV-Tat蛋白也通过刺激VEGFR激酶，引起血管通透性过高反应。KDR/VEGFR-2和/或Tie-2和/或Tie-1也在选定的造血干细胞群体中表达。该群体的某些成员性质上是多能的，可以被生长因子刺激，分化为内皮细胞并且参与血管发生性血管生成过程。为此，将这些称为内皮祖细胞(EPCs)(J.Clin.Investig.1031231-1236(1999))。在某些祖细胞中，Tie-2可以在其募集、粘附、调节和分化方面起作用(Blood，4317-4326(1997))。因此，能够阻断内皮细胞特异性激酶的激酶活性的某些式I的药物，可以抑制涉及这些情况的病程。
认为Tie-2(Ang2)的拮抗配体的血管去稳定诱导内皮中不稳定的“可塑(plastic)”状态。在高VEGF水平存在下，可能产生强的血管生成应答；然而，在无VEGF或VEGF相关刺激存在下，可能发生症状明显的血管退化和内皮细胞凋亡(Genes和Devel.131055-1066(1999))。以类似的方式，Tie-2激酶抑制剂在存在或缺乏VEGF相关刺激的情况下分别是促血管生成或抗血管生成的。
式I化合物或其盐或含有治疗有效量的式I化合物或其盐的药用组合物可以用于治疗蛋白激酶介导的病症，例如如上所述的良性和肿瘤性增生性疾病和免疫系统疾病。例如，这类疾病包括自身免疫病例如类风湿性关节炎、甲状腺炎、1型糖尿病、多发性硬化、结节病、炎性肠病、局限性回肠炎、重症肌无力和系统性红斑狼疮；银屑病、器官移植排斥(例如肾排斥、移植物抗宿主病)、良性和肿瘤性增生性疾病、人类癌症例如肺癌、乳腺癌、胃癌、膀胱癌、结肠癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌和直肠癌和造血性恶性肿瘤(白血病和淋巴瘤)、以及涉及不当新血管形成的疾病，例如糖尿病性视网膜病、早产儿视网膜病、老年性黄斑变性所致的脉络膜新血管形成和人类的婴儿血管瘤。另外，这类抑制剂可以用于治疗涉及VEGF介导的水肿、腹水、渗漏和渗出的疾病，包括例如黄斑水肿、脑水肿、急性肺损伤和成人呼吸窘迫综合征(ARDS)。
本发明化合物也可用于预防上述疾病。
设想以上所列疾病在很大程度上是由涉及VEGF受体(例如KDR、Flt-1和/或Tie-2和/或Tie-1)的蛋白酪氨酸激酶活性介导的。通过抑制这些受体酪氨酸激酶的活性，抑制以上所列疾病的进程，因为所述病症的血管生成组分被大大减少。本发明化合物由于对特定酪氨酸激酶具有选择性，因此其作用导致使可能在使用选择性不强的酪氨酸激酶抑制剂时发生的副作用尽可能减小。
另一方面，本发明提供以上最初限定的用作药物的式I化合物，特别是用作蛋白激酶活性例如酪氨酸激酶活性、丝氨酸激酶活性和苏氨酸激酶活性的抑制剂。在本发明的又一方面，提供以上最初限定的式I化合物在生产可用于抑制蛋白激酶活性的药物上的应用。
在本发明中，以下定义是适用的“生理上可接受的盐”是指保留生物有效性和游离碱特性的盐，它们是通过与无机酸或有机酸反应而获得的，所述无机酸有例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝基、磷酸，有机酸有例如磺酸、羧基、有机磷酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸、乳酸、酒石酸等。
“烷基”是指饱和脂族烃，包括直链和支链基团。优选的直链和支链烷基包括C1-C8烷基。
“链烯基”是指具有至少一个双键的脂族烃，包括直链和支链基团。优选的直链和支链链烯基包括C1-C8烷基。
“链炔基”是指具有至少一个叁键的脂族烃，包括直链和支链基团。优选的直链和支链链炔基包括C1-C8烷基。
“烷氧基”是指“O-烷基”基团，其中“烷基”如上定义。
“环烷基”是指具有3-12个碳原子的单环、二环和三环的碳环基团，优选的环烷基具有3-6个环碳原子。
“杂环基”是指任选取代的单环或二环芳族或非芳族杂环，其中所述杂环含有1、2、3或4个选自氮、硫或氧的杂原子。杂环基可以通过一个碳原子或杂原子连接。合适杂环基包括但不限于1，3-二氧戊环基、1，4-二氧戊环基、吗啉基、哌啶基、哌嗪基、硫代吗啉基、3H-吲哚基、4H-喹嗪基、2-咪唑啉基、咪唑烷基、奎宁环基、2-吡唑啉基、吡唑烷基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、1，4-二噻烷基、1，3，5-三噻烷基、四氢呋喃基、吡咯烷基、吡咯基、咪唑基、异噻唑基、吡唑基、噻唑基、噁唑基、噁二唑基、噻二唑基、四唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、苯并咪唑基、喹啉基、异喹啉基、吲唑基、呋喃基、2，3，4，5-四氢呋喃基、噻吩基、苯并呋喃基、中氮茚基、咪唑并吡啶基、异噁唑基、苯并噁唑基、吲哚基、异吲哚基、二氢吲哚基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、嘌呤基、1，2，3-三唑基、1，2，4-三唑基、1，3，5-三嗪基、噌啉基、2，3-二氮杂萘基、喹唑啉基、喹喔啉基、1，8-二氮萘基(naphthypyridinyl)、蝶啶基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基和吩噁嗪基。
“芳基”是指单环、二环或三环芳族基团。合适的芳基包括苯基、茚基、萘基、薁基、芴基和蒽基。
本文所用的术语“任选取代的”是指可以连接到该术语所指部分上的取代基。可以被一个或多个基团取代的苯基、萘基和杂环基的特别优选的取代基如下a)卤代基，b)C1-6烷基，所述烷基任选被一个或多个以下基团取代羟基、卤代基、任选取代的氨基或5、6或7元含有一个氮原子的饱和杂环，所述杂环任选含有一个另外的选自O、S或N的杂原子，还任选地被C1-6烷基取代，其中所述饱和环通过碳原子连接，c)任选被一个或多个以下基团取代的C1-6烷氧基羟基、C1-6烷氧基、卤代基或任选取代的氨基、或5、6或7元含有一个氮原子的饱和杂环，所述杂环任选含有一个另外的选自O、S或N的杂原子，还任选地被C1-6烷基取代，其中所述饱和环通过碳原子连接，d)任选取代的苯氧基，其中所述取代基选自与该段落中概述的相同组的优选取代基，e)羟基，f)-CORa，其中Ra是羟基、C1-6烷氧基或-NRbRc，其中Rb和Rc独立地为氢、C1-12烷基、C3-12环烷基或苯基，其中C1-12烷基、C3-12环烷基和苯基任选被一种或多种以下基团取代羟基、卤代基、C3-12环烷基或-NRhRj，其中Rh和Rj独立地为氢或C1-6烷基，或者其中Rh和Rj与连接它们的氮原子一起为5、6或7元饱和杂环，所述杂环任选含有一个另外的选自O、S或N的杂原子，并且任选地被C1-6烷基取代，g)-NRdRe，其中Rd和Re分别独立选自氢、C1-12烷基、C3-12环烷基或苯基或-CORf，其中Rf为氢、C1-12烷基、C3-12环烷基、苯基-C1-6烷基或苯基，其中在每种情况下，所述烷基、所述环烷基、苯基-C1-6烷基和苯基任选地被一个或多个以下基团取代卤代基、羟基、硝基或-NRhRj，其中Rh和Rj独立选自与如上定义相同的部分，h)-O(CH2)mRg，其中m是2、3、4或5，且Rg为羟基或式-NRdRe在基团，其中Rd和Re独立选自与如上定义相同的部分；或Rg为-CORa，其中Ra独立选自与如上定义相同的部分，和i)硝基，j)任选取代的苯基C1-6烷基，k)任选取代的苯基-C1-6烷氧基，l)氰基，m)C3-6链烯基氧基，n)吡啶氧基或吡啶硫基，其中所述吡啶环任选被一个或多个三氟甲基或硝基取代，o)羟基脒基，p)氨基甲基，q)甲酰胺基甲基，r)C1-6烷硫基，s)苯基或t)C2-4链烯基或C2-4链炔基，其中，每种基团任选被苯基取代，而所述苯基又任选被一个或多个以下基团取代C1-6烷基、C1-6烷氧基或卤代基。药用组合物本发明的化合物可以自身给予人类患者，或者可以在药用组合物中给予人类患者，其中将它们以治疗或缓解以下病症的剂量与合适的载体或赋形剂混合血管通透性过高、水肿、纤维变性、血管生成、肿瘤生长、银屑病、关节炎、高增生性疾病和相关疾病。这些化合物的混合物也可以作为简单的混合物或者在适当配制的药用组合物中给予所述患者。治疗有效剂量还指所述一种或多种化合物足以产生预防或减弱以下病症的量不当新血管形成、高增生性疾病发展、水肿、VEGF相关的通透性过高和/或VEGF相关的低血压。用于配制和给予本申请的化合物的技术可以在“Remington′s Pharmaceutical Sciences，”Mack Publishing Co.，Easton，PA，最新版中找到。给药途径合适的给药途径可以例如包括口服、滴眼、直肠、经粘膜、局部或肠内给药；胃肠外给药，包括肌内、皮下、髓内注射以及鞘内、直接心室内、静脉内、腹膜内、鼻腔或眼内注射。
或者，可以以局部而非系统给药方式给予所述化合物，例如通过将所述化合物直接直射到患病部位或水肿部位，通常以延效或缓释制剂的形式。
此外，可以用靶向药物给药系统给予所述药物，例如用内皮细胞特异性抗体包封的脂质体给予。组合物/制剂本发明的药用组合物可以以本身已知的方式制备，例如通过常规的混合、溶解、制粒、制备糖衣丸、研磨、乳化、包封、包埋或冻干方法制备。
因此，按照本发明使用的药用组合物可以以常规方式，用一种或多种生理上可接受的载体配制，所述载体包括有助于将所述活性化合物加工为药学上可以使用的制剂的赋形剂和辅料。合适的制剂取决于所选的给药途径。
关于注射，本发明的药物可以在水溶液中配制，优选在生理上相容的缓冲液例如Hank氏溶液、Ringer氏溶液或生理盐水缓冲液中配制。对于经粘膜给药，可以在制剂中使用对于待渗透的屏障合适的渗透剂。这类渗透剂是本领域已知的。
对于口服给药，通过将所述活性化合物与本领域熟知的药学上可接受的载体混合，可以容易地配制所述化合物。这类载体使得本发明的化合物可以被配制为片剂、丸剂、糖衣丸、胶囊、液体、凝胶剂、糖浆、浆液、悬浮液等，以供待治疗患者口服给药。通过将所述活性化合物与固体赋形剂混合，任选研磨所得混合物并将混合物加工成颗粒，如果需要在加入合适的辅料后，获得片剂或糖衣丸芯，可以获得口服用的药用制剂。合适的赋形剂特别是填料，例如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；纤维素制剂，例如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可以加入崩解剂，例如交联聚乙烯基吡咯烷酮、琼脂或藻酸或其盐，例如藻酸钠。
为糖衣丸芯提供合适的包衣。为此，可以使用浓的糖溶液，它可以任选含有阿拉伯胶、滑石粉、聚乙烯基吡咯烷酮、聚羧乙烯凝胶、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液以及合适的有机溶剂或溶剂混合物。染料或色素可以加入到片剂或糖衣丸的包衣中，以供鉴别或鉴定活性化合物剂量的不同组合。
可以口服使用的药用制剂包括由明胶制成的标准型(push-fit)胶囊以及由明胶和增塑剂例如甘油或山梨醇制成的软的密封型胶囊。标准型胶囊可以含有与填料例如乳糖、粘合剂例如淀粉和/或润滑剂例如滑石粉或硬脂酸镁和任选的稳定剂混合的所述有效成分。在软胶囊中，所述活性化合物可以溶解或悬浮在合适的液体例如脂肪油、液体石蜡或液态聚乙二醇中。另外，可以加入稳定剂。口服用的所有制剂都应该用适合于这类给药的剂量。
对于口含给药，所述组合物可以采用以常规方式配制的片剂或锭剂形式。
对于吸入给药，按照本发明使用的所述化合物可方便地以来自加压包装或喷雾器中气雾剂喷雾形式，利用合适的抛射剂，例如二氯二氟甲烷、三氯一氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它合适的气体传递给药。就加压气雾剂而言，剂量单位可以通过提供一个阀门以传递计量的量来确定。可以配制含有所述化合物和合适粉末基质(例如乳糖或淀粉)的粉末混合物的供吸入器或吹入器中使用的胶囊或药筒(如明胶作成的)。
可以配制通过注射(例如大剂量注射或连续输注)胃肠外给药的所述化合物。注射用制剂可以以单位剂型提供，例如安瓿或多剂量容器，并加有防腐剂。所述组合物可以采用诸如油性或水性溶媒中的悬浮液、溶液剂或乳剂形式，并且可以含有配方剂，例如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。
胃肠外给药用的药用制剂包含水溶性形式的所述活性化合物的水溶液。另外，所述活性化合物的悬浮液可以配制为合适的油性注射悬浮液。合适的亲脂溶剂或溶媒包括脂肪油例如芝麻油或者合成脂肪酸酯例如油酸乙酯或甘油三酯或者脂质体。含水的注射悬浮液可以含有增加所述悬浮液粘度的物质，例如羧甲基纤维素钠、山梨醇或葡聚糖。任选地所述悬浮液也可以含有合适的稳定剂或者增加所述化合物溶解度以允许制备高浓度的溶液的试剂。
或者，所述有效成分可以为在使用之前用合适的溶媒(例如无菌无热原水)复制的粉末形式。
所述化合物也可以配制为直肠组合物，例如栓剂或保留灌肠剂，例如含有常规栓剂基质例如可可脂或其它甘油酯。
除前述制剂外，所述化合物也可以配制为延效制剂。这类长效制剂可以通过植入(例如皮下或肌内植入或通过肌内注射)给药。因此，例如所述化合物可以用合适的聚合物质或疏水性物质(例如作为在可接受油中的乳剂)或离子交换树脂配制，或者配制为微溶性衍生物，例如微溶性盐。
用于本发明疏水性化合物的药用载体的一个实例是包含苯甲醇、非极性表面活性剂、水可混溶性有机聚合物和水相的助溶剂系统。所述助溶剂系统可以是VPD助溶剂系统。VPD是一种3％w/v苯甲醇、8％w/v非极性表面活性剂聚山梨酯80和65％w/v聚乙二醇300、在无水乙醇中定容的溶液。所述VPD助溶剂系统(VPD5W)由5％葡萄糖水溶液以1∶1稀释VPD构成。该助溶剂系统可很好地溶解疏水性化合物，其自身在系统给药时产生低毒性。自然，助溶剂系统的比率可以在不破坏其溶解性和毒性特性的情况下进行相当大的改变。此外，所述助溶剂的组分可以变化例如可以使用其它低毒性、非极性表面活性剂来代替聚山梨酯80；可以改变聚乙二醇的级分大小(fraction size)；其它生物相容的聚合物可以取代聚乙二醇，例如聚乙烯基吡咯烷酮；并且可以用其它糖或多糖取代葡萄糖。
或者，可以使用用于疏水性药用化合物的其它给药系统。脂质体和乳剂是众所周知的疏水性药物的传递媒介物或载体的实例。某些有机溶剂例如二甲亚砜也可以使用，虽然通常代价是毒性较高。此外，所述化合物可以采用缓释系统给药，例如含有所述治疗剂的固体疏水性聚合物的半渗透性基质。已经确定了各种缓释物质，并且是本领域技术人员众所周知的。缓释胶囊可以根据其化学性质，释放所述化合物达数周至100天以上。根据所述治疗剂的化学性质和生物稳定性，可以使用蛋白稳定化的其它策略。
所述药用组合物也可以包含合适的固体或凝胶相载体或赋形剂。这类载体或赋形剂的实例包括但不限于碳酸钙、磷酸钙、各种糖、淀粉、纤维素衍生物、明胶和聚合物例如聚乙二醇。
许多本发明的化合物可以作为与药学上配伍的相反离子形成的盐来提供。药学上配伍的盐可以用许多酸(包括但不限于盐酸、硫酸、乙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、琥珀酸等)和碱(包括但不限于钠、钾、锂、四烷基铵等来形成。盐与相应的游离碱形式相比，倾向于更易溶于水性或其它质子溶剂中。有效剂量适用于本发明的药用组合物包括其中含有达到其计划目的的有效量的所述有效成分的组合物。更具体地讲，治疗有效量是指有效预防受治疗者已有症状发展或缓解已有症状的量。有效量的确定在本领域技术人员的能力范围内。
对于用于本发明方法的任何化合物而言，所述治疗有效剂量可以根据细胞测定来进行初步估计。例如，可以在细胞模型或动物模型中配制一种剂量，以达到包括在细胞测定中测定的IC50(即达到给定蛋白激酶活性最大抑制一半的试验化合物的浓度)的循环浓度范围。在某些情况下，测定3-5％血清白蛋白存在下的IC50是适当的，因为这种测定接近血浆蛋白对所述化合物的结合作用。这类信息可以用来更为准确地确定人类中的有用剂量。另外，用于系统给药的最优选化合物在血浆中可安全达到的水平下有效抑制完整细胞中的蛋白激酶信号。
治疗有效剂量是指导致缓解患者症状的所述化合物的量。这类化合物的毒性和治疗功效可以通过细胞培养物或实验动物中的标准药学方法来测定，例如测定最大耐受剂量(MTD)和ED50(50％最大反应的有效剂量)。毒性效应和治疗效应之间的剂量比是治疗指数，它可以以MTD和ED50之间的比率来表示。优选表现出高治疗指数的化合物。。得自这些细胞培养物测定和动物研究的数据可以用来确定人类用的剂量范围。这类化合物的剂量优选在包括ED50在内的低毒或无毒的循环浓度范围内。根据采用的剂型和利用的给药途径，所述剂量可以在该范围内变化。准确的制剂、给药途径和剂量可以由各个医师根据患者的病症来选择。(参见例如Fingl等，1975，“The Pharmacological Basis ofTherapeutics”，第1章第1页)。在危象的治疗中，可能需要给予急性大剂量或接近MTD的输注，以获得快速反应。
剂量和给药间隔可以分别进行调整，以提供所述活性部分足以维持所述激酶调节效应的血浆水平或最低有效浓度(MEC)。MEC对于每种化合物而言将有所不同，但可以根据体外数据来估计，例如采用本文所述的测定确定的达到蛋白激酶50-90％抑制所必需的浓度。达到所述MEC所必需的剂量将取决于个体特征和给药途径。然而，可以用HPLC测定或生物测定来确定血浆浓度。
给药间隔也可以用MEC值来决定。化合物应该用在所述时间的10-90％、优选30-90％、最优选50-90％内维持血浆水平高于MEC的方案来给予，直至达到所需的症状缓解。在局部给药或选择性吸收的情况下，所述药物的有效局部浓度可以与血浆浓度无关。
当然，所给予的组合物的量将取决于受治疗者、受治疗者的体重、疾患的严重程度、给药方式和主治医师的判断。包装所述组合物如有需要，可以存在于包装或分配装置中，所述包装或装置可以含有一个或多个含有所述有效成分的单位剂型。所述包装可以例如包含金箔或塑料箔，例如泡罩。所述包装或分配装置可以配有给药说明。也可以制备包含配制在相容药用载体中的本发明化合物的组合物，将其置于合适的容器中，并且标上关于治疗适应症的标签。
在某些制剂中，利用非常小的颗粒形式的本发明化合物(例如通过流能磨获得的)可能是有益的。
通过以下描述，说明了本发明化合物在生产药用组合物方面的应用。在这种描述中，术语“活性化合物”是指任何本发明化合物，但特别是指以下实施例之一的终产物的任何化合物。a)胶囊在胶囊的制备中，可以将例如10重量份活性化合物和240重量份乳糖解聚并掺混。可以将混合物填充到硬明胶胶囊中，每粒胶囊含有一个单位剂量或部分单位剂量的活性化合物。b)片剂可以由以下组分制备片剂，例如重量份活性化合物 10乳糖 190玉米淀粉 22聚乙烯基吡咯烷酮 10硬脂酸镁3可以将活性化合物、乳糖和部分淀粉解聚、掺混，并用聚乙烯基吡咯烷酮的乙醇溶液将所得混合物制粒。可以将干颗粒与硬脂酸镁和其余的淀粉掺混。然后，在压片机中将混合物压片，得到各含有一个单位剂量或部分单位剂量的活性化合物的片剂。c)包肠溶衣片剂可以用以上(b)中描述的方法制备片剂。可以用20％纤维素乙酸酯邻苯二甲酸酯和3％邻苯二甲酸二乙酯在乙醇∶二氯甲烷(1∶1)中的溶液，以常规方式将片剂包肠溶衣。d)栓剂在栓剂的制备中，可以将例如100重量份活性化合物掺入1300重量份甘油三酯栓剂基质中，并将混合物成形为各含有治疗有效量活性化合物的栓剂。
在本发明的组合物中，如有需要，所述活性化合物可以与其它配伍的药理活性成分结合。例如，本发明化合物可以与一种或多种其它药物联合给予，所述其它药物抑制或预防VEGF的产生或血管生成、减弱对VEGF或血管生成蛋白的胞内应答、阻断胞内信号转导、抑制血管通透性过高、减轻炎症、或者抑制或预防形成水肿或新血管形成。Tie-2抑制剂可用于治疗人类牙龈脓性肉芽肿(J.Periodont.Res，200035165-171)。本发明化合物可以在所述其它药物之前、之后或同时给予，任何给药途径都是合适的。所述其它药物包括但不限于抗水肿类固醇、NSAIDS、ras抑制剂、抗TNF药、抗IL1药、抗组胺药、PAF拮抗剂、COX-1抑制剂、COX-2抑制剂、NO合酶抑制剂、Akt/PTB抑制剂、IGF-1R抑制剂、PKC抑制剂、化疗药如丝裂霉素C或紫杉酚、血管靶向药例如combretastatin A4、微管蛋白结合剂例如dolastatin和PI3激酶抑制剂。本发明化合物和所述其它药物的作用或者相加作用，或者为协同作用。由此，给予抑制血管生成、血管通透性过高和/或抑制水肿形成的物质的这种组合，与给予任一单独的药物相比，可提供更大的缓解炎性或高增生性疾病、血管生成、血管通透性过高或水肿的有害作用。在恶性疾病的治疗方面，设想与抗增生药或细胞毒性化疗或放疗联合。
本发明也包括式I化合物作为药物的应用。
本发明的再一方面提供式I化合物或其盐在生产哺乳动物(特别是人类)的以下病症的治疗药物方面的应用血管通透性过高、血管生成依赖性疾病、增生性疾病和/或免疫系统疾病。
本发明也提供一种治疗血管通透性过高、不当新血管形成、增生性疾病和/或免疫系统疾病的方法，所述方法包括给予需要治疗的哺乳动物(特别是人类)治疗有效量的式I化合物。
化合物抑制这些蛋白激酶的体外功效可以通过以下详述的方法来测定。
化合物的功效可以通过试验化合物相对于对照，抑制外源性底物(例如合成肽(Z.Songyang等，Nature.373536-539))磷酸化的量来测定。用杆状病毒系统生产KDR酪氨酸激酶用从HUVEC细胞中分离的cDNAs，通过PCR产生人KDR胞内结构域(aa789-1354)的编码序列。也将poly-His6序列引入该蛋白的N末端。将该片段克隆到转染载体pVL1393的Xba 1和Not 1位点。通过用BaculoGold转染试剂(PharMingen)共转染，产生重组杆状病毒(BV)。重组BV经噬斑纯化，并通过蛋白质印迹分析证实。对于蛋白生产，在SF-900-II培养基中以2×106/ml培养SF-9细胞，并以0.5噬斑形成单位/细胞(MOI)感染。感染后48小时收获细胞。KDR的纯化通过将50ml Triton X-100裂解缓冲液(20mM Tris，pH8.0，137mMNaCl，10％甘油，1％Triton X-100，1mM PMSF，10μg/ml抑酶肽，1μg/ml亮抑酶肽)加入到得自1L细胞培养物的细胞沉淀中，裂解表达(His)6KDR(aa789-1354)的SF-9细胞。将裂解液以19,000rpm在SorvalSS-34转子中于4EC离心30分钟。将细胞裂解液上样到用50mM HEPES，pH7.5，0.3M NaCl平衡的5ml NiCl2螯合琼脂糖柱上。用含0.25M咪唑的同样缓冲液洗脱KDR。用SDS-PAGE和测定激酶活性的ELISA测定(参见下文)分析柱的流分。将经纯化的KDR交换到25mM HEPES，pH7.5，25mM NaCl，5mM DTT缓冲液中并贮存于-80EC。人Tie-2激酶的产生和纯化用从人胎盘分离的cDNAs作为模板，通过PCR产生人Tie-2胞内结构域(aa775-1124)的编码序列。将poly-His6序列引入到N末端，并将该构建体克隆到转染载体pVL 1939在Xba 1和Not 1位点。通过用BaculoGold转染试剂(PharMingen)共转染，产生重组BV。重组BV经噬斑纯化，并通过蛋白质印迹分析证实。对于蛋白生产，在SF-900-II培养基中以2×106/ml培养SF-9昆虫细胞，并以0.5的MOI感染。筛选所用的His标记的激酶的纯化与关于KDR所述的相似。人Flt-1酪氨酸激酶的产生和纯化使用杆状病毒表达载体pVL 1393(Phar Mingen，Los Angeles，CA)。将编码poly-His6的核苷酸序列置于编码人Flt-1的完整胞内激酶结构域(氨基酸786-1338)的核苷酸区域的5’。用从HUVEC细胞分离的cDNA文库，通过PCR产生编码该激酶结构域的核苷酸序列。所述组氨酸残基使得能够以与KDR和ZAP70类似的方式亲和纯化所述蛋白。以0.5的感染复数感染SF-9昆虫细胞，并在感染后48小时收获细胞。Flt-4 VEGF3杆状病毒表达载体通过用Flt-4特异性寡核苷酸引物，在得自人胎盘的总cDNA上，通过进行聚合酶链式反应(PCR)，获得对应于人Flt-4/VEGF 3胞内激酶结构域的cDNA(Galland，F.等，Oncogene(1993)，8，1233-1240)。比较所述cDNA序列，并用公开的GENBANK序列(x69878.gb_prl)加以证实。将对应于bp.2413-3918(即aa.Cys798-Arg1298)的FLT-4 cDNA序列亚克隆到杆状病毒表达载体pFastbacB(Life Technologies)中。所述亚克隆在Cys798之前引入了4个额外的氨基酸Ala-Met-Gly-Ser。因此，所产生的融合蛋白将具有Met-(His)6、一个间隔区、Tev蛋白酶切割位点，后接包括所述4个额外氨基酸的Flt-4激酶结构域。将所述表达载体导入SF9细胞中，产生杆状病毒，然后用所述杆状病毒感染更多的SF9细胞，并表达Flt-4/VEGF3激酶结构域蛋白。EGFR酪氨酸激酶源EGFR购自Sigma(Cat#E-3641；500单位/50μl)，EGF配体得自Oncogene Research Products/Calbiochem(Cat#PF011-100)。ZAP70的表达所用的杆状病毒表达载体是pVL1393.(Pharmingen，Los Angeles，Ca.)。将编码氨基酸M(H)6 LVPR9S的核苷酸序列置于编码完整ZAP70(氨基酸1-619)的区域的5’。用从Jurkat无限增殖化T细胞分离的cDNA文库，通过PCR产生编码所述ZAP70编码区的核苷酸序列。所述组氨酸残基使得能够亲和纯化所述蛋白(参见下文)。LVPR9S桥构成了凝血酶蛋白酶剪切的识别序列，使得能够从该酶除去所述亲和标志。以0.5的感染复数感染SF-9昆虫细胞，并在感染后48小时收获细胞。ZAP70的提取和纯化在由20mM Tris，pH8.0，137mM NaCl，10％甘油，1％Triton X-100，1mM PMSF，1μg/ml亮抑酶肽，10μg/ml抑酶肽和1mM原钒酸钠组成的缓冲液中裂解SF-9细胞。将可溶性裂解液上样到用50mM HEPES，pH7.5，0.3M NaCl平衡的螯合琼脂糖HiTrap柱(Pharmacia)上。用250mM咪唑洗脱融合蛋白。将该酶存于含有50mM HEPES，pH7.5，50mMNaCl和5mM DTT的缓冲液中。蛋白激酶源Lck、Fyn、Src、Blk、Csk和Lyn以及它们的截短形式在市场上可获得(例如得自Upstate Biotechnology Inc.，Saranac Lake，NY；和SantaCruz Biotechnology Inc.，Santa Cruz，CA)，或用常规方法从已知的天然或重组来源中纯化。用于PTKs的酶联免疫吸附测定(ELISA)用酶联免疫吸附测定(ELISA)来检出和测定酪氨酸激酶活性的存在。按照描述于例如Voller等，1980，“酶联免疫吸附测定”，出自Manualof Clinical Immunology，第2版，Rose和Friedman编著，第359-371页，Am.Soc.of Microbiology，Washington，D.C.的已知方案进行ELISA。
修改所公开的方案，来测定关于特异性PTK的活性。例如，以下提供用于进行ELISA实验的优选方案。用于测定化合物对于受体PTK家族其它成员以及非受体酪氨酸激酶的活性的这些方案的修改在本领域技术人员的能力范围内。为了测定抑制剂的选择性，通用PTK底物(例如poly(Glu4 Tyr)的随机共聚物，20,000-50,000MW)与接近该测定中表观Km两倍的浓度的ATP(通常为5μM)一起使用。
使用以下程序，分析本发明化合物对KDR、VEGFR-3、Flt-1、Tie-2、Tie-1、EGFR、FGFR、PDGFR、IGF-1-R、胰岛素受体、c-Met、Lck、Blk、Csk、Src、Lyn、Fyn和ZAP70酪氨酸激酶活性的抑制效应缓冲液和溶液PGTPoly(Glu，Tyr)4∶1将粉末贮存于-20℃。将粉末溶于磷酸缓冲盐溶液(PBS)，提供50mg/ml的溶液。
将1ml等分样品贮存于-20℃。制备时，将板在Gibco PBS中稀释至250μg/ml。
反应缓冲液100mM Hepes，20mM MgCl2，4mM MnCl2，5mM DTT，0.02％BSA，200μM NaVO4，pH7.10ATP将等分样品贮存于-20℃。在水中稀释至20μM。
洗涤缓冲液具有0.1％Tween 20的PBS抗体稀释缓冲液0.1％的牛血清白蛋白(BSA)的PBS溶液TMB底物在临使用前将TMB底物和过氧化物溶液以9∶1混合，或使用得自Neogen的K-Blue底物终止溶液1M磷酸步骤1.板的制备将PGT储备液(50mg/ml，冷冻的)在PBS中稀释至250μg/ml。在Corning改良平底高亲和性ELISA平板(Corning#25805-96)的每孔中加入125μl。向对照孔中加入125μl PBS。覆盖密封胶带，并于37℃孵育过夜。用250μl洗涤缓冲液洗涤一次，并在37℃干燥培养箱中干燥约2小时。
将包被板在密封袋中贮存于4℃直至使用。2.酪氨酸激酶反应-在20％DMSO水溶液中制备4x浓度的抑制剂溶液。
-制备反应缓冲液-制备酶溶液，使得所需单位为50μl，例如对于KDR，制备为1ng/μl，以供在反应中加入总共50ng/孔。在冰上贮存。
-在水中由100mM储备液将4x ATP溶液制备为20μM。在冰上贮存-每孔加入50μl酶溶液(通常为5-50ng酶/孔，取决于激酶的比活)-加入25μl 4x抑制剂-加入25μl 4x ATP以进行抑制剂测定-于室温保温10分钟-每孔加入50μl 0.05N HCl，终止反应-洗涤板**反应的终浓度5μM ATP，5％DMSO3.抗体结合-将1mg/ml等份的PY20-HRP(Pierce)抗体(磷酸酪氨酸抗体)在0.1％BSA的PBS溶液中通过两步稀释(100x，然后200x)稀释至50ng/ml。
-每孔加入100μl Ab。于室温保温1小时。于4℃保温1小时。
-将板洗涤4次4.颜色反应-制备TMB底物，每孔加入100μl-于650nm监测OD，直至达到0.6-用1M磷酸终止。在平板读出仪上振摇。
-立即于450nm读出OD最适保温时间和酶反应条件随酶制备物略微变化，每批凭经验确定。
对于Lck，所用的反应缓冲液是100mM MOPSO，pH6.5，4mMMnCl2，20mM MgCl2，5mM DTT，0.2％BSA，200mM NaVO4，测定条件相似。
式I化合物在治疗涉及受式I化合物抑制的已鉴定的(包括上述未提及的)和尚未鉴定的蛋白酪氨酸激酶的疾病方面有治疗实用性。本文例举的所有化合物在50μM以更低浓度下显著抑制FGFR、PDGFR、KDR、VEGFR-3、Tie-2、Tie-1、Lck、Fyn、Blk、Lyn或Src。本发明的某些化合物在50-或更低浓度下也显著抑制其它酪氨酸激酶或丝氨酸/苏氨酸激酶例如cdc2(cdk1)或Plk-1。Cdc2源人重组酶及测定缓冲液可以在市场上获得(New England Biolabs，Beverly，MA.USA)，或用常规方法从已知的天然来源或重组来源中纯化。Cdc2测定采用的方案是所购置的试剂提供的方案，有微小的修改。简而言之，反应在由以下组成的缓冲液中进行50mM Tris pH7.5，100mMNaCl，1mM EGTA，2mM DTT，0.01％Brij，5％DMSO和10mM MgCl2(市售缓冲液)，并补充新鲜的300-ATP(31μCi/ml)和30μg/ml组蛋白IIIss型，所述浓度为终浓度。含有多个单位酶的80μl体积的反应物在25℃，在存在或缺乏抑制剂的情况下反应20分钟。通过加入120μl 10％乙酸，终止反应。通过将混合物在磷酸纤维素纸上点样，然后用75mM磷酸洗涤3次，每次5分钟，从未掺入的标记中分离出底物。通过β计数器在存在液体闪烁剂的情况下测定计数。某些本发明化合物在低于50μM的浓度下显著抑制cdc2。PKC激酶源PKC的催化亚基可以在市场上获得(Calbiochem)。PKC激酶测定按照已公开的程序(Yasuda，I.，Kirshimoto，A.，Tanaka，S.，Tominaga，M.，Sakurai，A.，Nishizuka，Y.Biochemica，and Biophysical，Research Communication 3166，1220-1227(1990))，使用放射性激酶测定。简而言之，所有反应均在由以下组成的激酶缓冲液中进行50mMTris-HCI，pH7.5，10mM MgCl2，2mM DTT，1mM EGTA，100μM ATP，8μM肽，5％DMSO和33P ATP(8Ci/mM)。将化合物和酶在反应容器中混合，通过加入ATP和底物混合物起始反应。通过加入10μl终止缓冲液(75mM磷酸中的5mM ATP)终止反应后，将一部分混合物点样到磷酸纤维素滤纸上。点样的样品用75mM磷酸于室温洗涤3次，每次5-15分钟。通过液体闪烁计数，对放射性标记的掺入进行定量。Erk2酶源所述重组鼠类酶和测定缓冲液可以在市场上获得(New EnglandBiolabs，BeverlyMA.USA)，或者用常规方法从已知的天然来源或重组来源中纯化。Erk2酶测定简而言之，反应在供应商建议的条件下，在由以下组成的缓冲液中进行50mM Tris pH7.5，1mM EGTA，2mM DTT，0.01％Brij，5％DMSO和10mM MgCl2(市售缓冲液)，并补充新鲜的100-ATP(31μCi/ml)和30μM髓鞘碱性蛋白。反应体积和测定掺入的放射性的方法如PKC测定所述(参见上文)。T细胞活化的体外模型用促细胞分裂剂或抗原激活时，T细胞被诱导分泌IL-2，这是一种支持其随后增殖期的生长因子。因此，人们可以测定来自原代T细胞或作为替代物以供T细胞激活的合适T细胞系的IL-2的产生或细胞增殖。这两种测定在文献中已有充分的描述，并且大量记载了其参数(CurrentProtocols in Immunology，第2卷，7.10.1-7.11.2)。
简言之，通过与同种异型的刺激细胞共培养，激活T细胞，这是一种称为单向混合淋巴细胞反应的过程。通过Ficoll-Hypaque梯度(Pharmacia)，按照生产商的说明，纯化效应和刺激外周血单核细胞。通过用丝裂霉素C(Sigma)或γ照射处理，使刺激细胞的有丝分裂活性失活。在存在或缺乏试验化合物的情况下，将效应细胞和刺激细胞以2∶1的比率共培养。通常将105效应物与5×104刺激物混合，在U形底微量滴定板(Costar Scientific)中平板接种(200μl体积)。细胞在补充热失活胎牛血清(Hyclone Laboratories)或者来自男性供者的混合人AB血清、5×10-5M 2-巯基乙醇和0.5％DMSO的RPMI 1640中培养。培养物用0.5μCi3H胸苷(Amersham)脉冲处理1天，然后收获(通常在第3天)。收获(Betaplate harvester，Wallac)培养物，并且通过液体闪烁(Betaplate，Wallac)评价同位素的摄入。
同一培养系统可以用来通过测定IL-2的产生，评价T细胞激活。在开始培养后18-24小时，除去上清液，通过ELISA(R and D Systems)，按照生产商的说明，测定IL-2浓度。T细胞激活的体内模型化合物的体内功效可以在已知直接测定T细胞激活或证实T细胞是效应物的动物模型中测试。通过将T细胞受体的恒定部分与抗CD3单克隆抗体(Ab)连接，可在体内激活T细胞。在该模型中，在驱血之前2小时，腹膜内给予BALB/c小鼠10μg抗CD3 Ab。接受试验药物的动物在给予抗CD3 Ab之前1小时，用一剂所述化合物预处理。通过ELISA测定指示T细胞激活的促炎细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的血清水平。相似的模型利用在体内使T细胞接触特定抗原(例如匙孔蝛血蓝蛋白(KLH)，然后在体外用同一抗原进行第二次攻击引流淋巴结细胞。如前所述，利用细胞因子产生的测量，来评价培养细胞的激活状态。简而言之，在第0天，用在完全弗氏佐剂(CFA)中乳化的100μg KLH皮下免疫C57BL/6小鼠。在免疫前1天，动物用所述化合物预处理，随后在免疫后第1、2和3天用所述化合物处理。第4天收获引流淋巴结，其细胞在组织培养基(RPMI 1640，补充有热失活胎牛血清(Hyclone Laboratories)、5×10-5M 2-巯基乙醇和0.5％DMSO)以6×106/ml培养24小时和48小时。然后，通过ELISA评价培养上清液的自分泌T细胞生长因子白介素-2(IL-2)和/或IFN-γ水平。
也可以在人类疾病的动物模型中测试前导化合物。这些以实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)和胶原蛋白诱发性关节炎(CIA)为例。已描述了大鼠和小鼠中模拟人多发性硬化多个方面的EAE模型(综述参见FASEB J.52560-2566，1991；鼠类模型Lab.Invest.4(3)278，1981；啮齿动物模型J.Immunol 146(4)1163-8，1991)。简而言之，用髓鞘碱性蛋白(MBP)或其神经原性肽衍生物和CFA免疫小鼠或大鼠。通过加入细菌毒素例如百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)可诱发急性疾病。通过从MBP/肽免疫的动物继承性转移T细胞，诱发复发/缓解疾病。
可以在DBA/1小鼠中，通过用II型胶原蛋白免疫，诱发CIA(J.Immunol142(7)2237-2243)。小鼠将早在抗原攻击后10天出现关节炎体征，可以记录长达免疫后90天。在EAE和CIA两个模型中，可以或者预防性给予化合物，或者在疾病发作时给予化合物。有效的药物应该减轻严重程度和/或发病率。
抑制一种或多种血管生成性受体PTK和/或参与介导炎性反应的蛋白激酶例如lck的某些本发明化合物，在这些模型中可以减轻关节炎的严重程度和发病率。
也可以在或者皮肤(综述参见Ann.Rev.Immunol.，10333-58，1992；Transplantation57(12)1701-17D6，1994)或者心脏(Am.J.Anat.113273，1963)的小鼠同种异体移植物模型中测试化合物。简而言之，将全厚度的皮肤移植物从C57BL/6小鼠移植到BALB/c小鼠。可以从第6天开始，每日检查所述移植物，以检查排斥的证据。在新生小鼠的心脏移植物模型中，将新生小鼠心脏从C57BL/6小鼠异位移植到成年CBA/J小鼠的耳廓中。在移植后4-7天，心脏开始搏动，用解剖显微镜目测评价排斥，以发现搏动的停止。细胞受体PTK测定以下细胞测定用来测定本发明不同化合物对KDR/VEGFR2的活性水平和效应。可以采用本领域众所周知的技术，根据相同的方法，设计利用特异性配体刺激的、用于其它酪氨酸激酶的相似受体PTK测定。
人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中VEGF诱导的KDR磷酸化如下通过蛋白质印迹来测定I.HUVEC细胞(得自混合的供体)购自Clonetics(San Diego，CA)，并且按照生产商的说明来培养。仅早期的数代(3-8)用于该测定。细胞在100mm培养皿(用于组织培养的Falcon；Becton Dickinson；Plymouth，England)中用完全EBM培养基(Clonetics)培养。
2.为了评价化合物的抑制活性，细胞用胰蛋白酶消化，并以0.5-1.0×105细胞/孔接种到6孔聚集板(cluster plate)(Costar；Cambridge，MA)的各孔中。
3.接种后3-4天，平板90-100％汇合。除去所有孔中的培养基，细胞用5-10ml PBS冲洗，并与5ml未加入补充物的EBM基本培养基(即血清饥饿)一起温育18-24小时。
4.在1ml EBM培养基(25μM、5μM或1μM终浓度)中将抑制剂的连续稀释液加至细胞中，并于37℃温育1小时。然后将人重组VEGF165(R&D Systems)加入所有孔中的2ml EBM培养基中，终浓度为50ng/ml，并于37℃孵育10分钟。未经处理或仅用VEGF处理的对照细胞用来评价本底磷酸化和VEGF诱导的磷酸化。
所有孔用5-10ml含有1mM原钒酸钠(Sigma)的冷PBS冲洗，在含有蛋白酶抑制剂(PMSF 1mM，抑酶肽1μg/ml，胃蛋白酶抑制剂1μg/ml，亮抑酶肽1μg/ml，钒酸钠1mM，氟化钠1mM)和1μg/ml DNA酶的200μlRIPA缓冲液(50mM Tris-HCl)pH7，150mM NaCl，1％NP-40，0.25％脱氧胆酸钠，1mM EDTA)(所有化学药品均得自Sigma Chemical Company，St Louis，MO)中裂解和刮磨细胞。裂解液以14,000rpm离心30分钟，以除去细胞核。
然后通过加入冷(-20C)乙醇(2倍体积)达最少1小时或最长过夜，沉淀等量的蛋白。沉淀在含有5％2-巯基乙醇(BioRad；Hercules，CA)的Laemli样品缓冲液中复制，并煮沸5分钟。蛋白通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE；6％，1.5mm Novex，San Deigo，CA)分离，并且用Novex系统转移到硝酸纤维素膜上。用牛血清白蛋白(3％)封闭后，用抗KDR多克隆抗体(C20，Santa Cruz Biotechnology；Santa Cruz，CA)或用抗磷酸酪氨酸单克隆抗体(4G10，Upstate Biotechnology，Lake Placid，NY)于4℃探测蛋白。洗涤并与HRP缀合的山羊抗兔或山羊抗小鼠IgG的F(ab)2一起温育后，用发射化学发光(ECL)系统(Amersham Life Sciences，ArlingtonHeight，IL)显现条带。
本发明的某些实施例在低于50-的浓度下显著抑制细胞VEGF诱导的KDR酪氨酸激酶磷酸化。
通过进一步的体外实验，可以证实经转染的持久表达人VEGF受体(KDR)的CHO细胞(CHO＝中国仓鼠卵巢)对VEGF诱导的KDR受体自身磷酸化的抑制。将细胞接种到6孔细胞培养板的培养基(具有10％胎牛血清＝FCS)，并且在5％CO2下于37℃孵育，直至它们显示出约80％汇合。然后将该测试化合物在培养基(无FCS，含有0.1％牛血清白蛋白)中稀释，并加入到细胞中。(对照用无试验化合物的培养基处理)。于37℃孵育2小时后，加入重组VEGF；VEGF终浓度为20ng/ml。于37℃再孵育5分钟后，细胞用冰冷的PBS(磷酸缓冲盐溶液)洗涤二次，并立即在每孔100μl裂解缓冲液中裂解。然后将裂解液离心以除去细胞核，用商业蛋白质测定(BIORAD)，测定上清液的蛋白浓度。然后，裂解液或者立即使用，或者如有必要，在如下所述用PAGE和免疫印迹法评价之前，贮存于-20℃。体内子宫水肿模型该测定测量化合物抑制在雌激素刺激后前几小时内发生的小鼠体内子宫重量急性增加的能力。这种子宫重量增加的早期开始，已知是由于子宫血管系统通透性增加引起的水肿所致。Cullinan-Bove和Koss(Endocrinology(1993)，133829-837)证明，雌激素刺激的子宫水肿与大鼠子宫内VEGF mRNA表达增加之间密切的时序关系。这些结果已经通过利用针对VEGF的中和单克隆抗体得到证实，所述抗体显著减少在雌激素刺激后子宫重量的急性增加(WO 97/42187)。因而，该系统可以用作VEGF信号的体内抑制以及相关的通透性过高和水肿的模型。
材料所有激素均购自Sigma(St.Louis，MO)或Cal Biochem(LaJolla，CA)，为冻干粉，并且按照供应商的说明进行制备。
溶媒组分(DMSO，Cremaphor EL)购自Sigma(St.Louis，MO)。
小鼠(Balb/c，8-12周龄)购自Taconic(Germantown，NY)，并且在无病原体的动物装置中按照institutional Animal Care and Use CommitteeGuidelines关养。方法第1天给Balb/c小鼠腹膜内(i.p.)注射12.5单位孕马血清促性腺激素(PMSG)。
第3天小鼠腹膜内接受15单位人绒毛膜促性腺激素(hCG)。
第4天将小鼠随机化，分为每组5-10只的多个组。根据溶解性和溶媒，通过i.p.、i.V.或p.o.途径，以剂量范围为1-100mg/kg给予试验化合物。溶媒对照组仅接受溶媒，留下两个组不处理。
30分钟后，给予实验组、溶媒组和其中1个未经处理组i.p.注射17-雌二醇(500mg/kg)。2-3小时后，通过吸入CO2处死动物。在中线切开后，分离出每个子宫，通过恰好在宫颈之下和子宫和输卵管的接点处切下，取出子宫。在称量(湿重)之前除去脂肪和结缔组织，小心不要破坏子宫的完整性。通过用1升装有水的玻璃瓶在两张滤纸之间挤压，将子宫吸干以除去流体。在吸干后称量子宫(吸干后的重量)。湿重和吸干后的重量之间的差异作为子宫流体含量。将处理组的平均流体含量与未经处理组或溶媒处理组的进行比较。通过Student氏检验确定显著性。无刺激的对照组用来监测雌二醇反应。
结果表明，某些本发明化合物当通过各种途径系统给予时抑制水肿的形成。
作为血管生成受体酪氨酸激酶抑制剂的某些本发明化合物也在新血管形成的Matrigel移植物模型中表现出有活性。所述Matrigel新血管形成模型涉及在皮下植入透明大理石样的(a clear marble of)胞外基质内由于存在产生促血管生成因子的肿瘤细胞而诱导的新血管形成(例如参见Passaniti，A.等，Lab.Investig.(1992)，67(4)，519-528；Anat.Rec.(1997)，249(1)，63-73；Int.J.Cancer(1995)，63(5)，694-701；Vasc.Biol.(1995)，15(11)，1857-6)。该模型最好在3-4天内进行试验，终点包括新血管形成的宏观目测/成像记录、显微镜微血管密度的测定、以及与来自未用抑制剂处理的动物的对照相比除去植入物后的血红蛋白定量(Drabkin法)。该模型或者可以利用bFGF或HGF作为刺激物。
抑制一种或多种肿瘤发生、促肿瘤发生或增殖依赖性蛋白激酶或者血管生成性受体PTK的某些本发明化合物，也抑制原发鼠类、大鼠或人异种移植肿瘤在小鼠体内的生长，或者在鼠模型中抑制转移。
本发明化合物的抗肿瘤功效可以如下在体内证明在裸鼠异种移植模型中的体内活性将雌性BALB/c裸鼠(8-12周龄，例如NovartisAnimal Farm，Sisseln，Switzerland)保持在无菌条件下，自由供应水和饲料。通过皮下注射肿瘤细胞(例如人上皮细胞系A-431；美国典型培养物保藏中心(ATCC)，Rockville，MD，USA，保藏号ATCC CRL 1555；得自85岁妇女的细胞系；表皮样癌细胞系)到载体小鼠体内，诱发肿瘤。如果使用肿瘤碎块，则在处理开始之前，所得的肿瘤通过至少3次连续移植。将肿瘤碎块(约25mg)用13号套针在Forene麻醉(Abbott，Switzerland)下皮下植入到动物的左胁腹中。肿瘤一达到100mm3的平均体积，则开始用试验化合物处理。一周测量2-3次肿瘤生长及在最后一次处理后24小时测量，测定两个垂直轴的长度。肿瘤体积按照已公开的方法(参见Evans等，Brit.J.Cancer45，466-8)进行计算。抗肿瘤功效如下计算用以经处理动物的肿瘤体积的平均增加除以未经处理动物(对照)的肿瘤体积的平均增加再乘以100，以T/C％表示。肿瘤消退(以％计)以相对于处理开始时的平均肿瘤体积的最小平均肿瘤体积来报告。每日通过管饲法给予试验化合物。
作为细胞系A-431的替代物，也可以以同样的方式使用其它细胞系，例如；-MCF-7乳腺癌细胞系(ATCC No.HTB 22；s也参见J.Natl.CancerInst.(Bethesda)51，1409-16)；-MDA-MB 468乳腺癌细胞系(ATCC No.HTB 132；也参见InVitro14，911-15)；
-MDA-MB 231乳腺癌细胞系(ATTC No.HTB 26；也参见J.Natl.Cancer Inst.(Bethesda)53，661-71)；-colo 205结肠癌细胞系(ATCC No.CCL 222；也参见Cancer Res.38，1345-55)；-HCT 116结肠癌细胞系(ATCC No.247；也参见Cancer Res.41，1751-6；-DU 145前列腺癌细胞系DU 145(ATCC No.HTB81；也参见Cancer Res.37，4049-58；或PC-3前列腺癌细胞系PC-3(ATCC No.CRL 1435；也参见CancerRes.40，524-34。
本发明化合物针对疼痛的活性可以在以下感受伤害(疼痛)模型中显示。在该模型中，通过在足趾上施加增加的压力，直至动物喊叫或受压足趾缩足，测量通过平面间酵母注射(inter-planar yeast injection)引起的痛觉过敏。该模型对COX抑制剂敏感，将3mg/kg的双氯酚酸作为阳性对照。
方法测量诱发雄性Sprague Dawley大鼠(重约180g，由Iffa Credo供应，France)发声或缩足所需的基线压力(处理前2小时)，然后在后爪平面内注射100μl20％酵母含水悬浮液。2小时后(时间点为0小时)，大鼠通过口服试验化合物(3、10或30mg/kg)、双氯酚酸(3mg/kg)或溶媒(盐水)进行治疗，给药后1小时和2小时重复压力试验。用Ugo Basile，Italy供应的标准仪器，将这些时间点诱发经所述化合物治疗大鼠喊叫或缩足所需的压力与溶媒治疗组的动物进行比较。
在Randall-Selitto试验中，优选在20-75mg/kg p.o.剂量范围内的式I的试验化合物在给药后1小时和2小时最好以10-100％抑制足趾痛觉过敏，证明所述化合物具有镇痛活性。
根据这些研究，出乎意料的是，本发明的化合物适合于炎性(尤其是风湿性或类风湿性)疾病和/或疼痛。
通用方法。本发明化合物可以并且已经按照以下描述和实施例合成。除非另有说明，所有原料和溶剂都得自市售来源，并且不用进一步纯化而使用。LCMS分析和纯化用配有与Micromass Platform质谱仪连接的215个自动取样器的Gilson HPLC系统进行。乙腈和50mM乙酸铵水溶液(pH4.5)用来从Pecosphere C18，3μm，33×4.6mm柱或者从Hypersil BDS-C18，5μm，100×20mm柱上(分别供分析性或制备性研究用)洗脱产物。对于分析性分析，使用在4.5分钟内在0-100％的乙腈线性梯度，流速为3.5ml/min。对于制备性分离，使用8.5分钟内的0-100％乙腈线性梯度，流速为25ml/min。NMR谱在Bruker 400 MHz分光计上采用氘化溶剂为内锁来记录。1H NMR数据以化学位移(ppm)、峰裂数、氢数来报告，其中化学位移与TMS相比。方案I 方案II 方案III 方案IIIA 实施例116方案I的概述。在1英钱(dram)管形瓶中装入惰性溶剂(例如甲苯)中的异氰酸芳族或者脂族酯。一次性加入作为固体的等摩尔比或过量摩尔比的2-氨基-6-硝基苯并噻唑或2-氨基-6-氯苯并噻唑，然后加入等摩尔比的碱例如三乙胺。在摇床中于约80℃，在搅拌下加热反应混合物，直至原料耗尽。采用标准方法收集沉淀的产物，并用乙醚洗涤。
实施例1以下实施例是按照方案I的合成的代表。
实施例1A向1英钱管形瓶中装入异氰酸3，5-二甲氧基苯酯(51mg，0.282mmol)的1mL甲苯溶液，一次性加入作为固体的2-氨基-6-硝基苯并噻唑(50mg，0.256mmol)，然后加入三乙胺(36μl，0.256mmol)。在摇床中于约80℃，在搅拌下加热反应混合物，直至原料耗尽。将产物沉淀，并收集在烧结漏斗上，用乙醚洗涤。(M-H)373，HPLC RT 2.99min，1H NMR(δ-DMSO)3.76(s，3H)，3.75(s，3H)，6.25(s，1H)，6.74(s，2H)，7.79(d，1H，J＝8)，8.2(dd，1H，J＝2和J＝8)，8.98(s，1H)，9.19(brs，1H)，11.20(br s，1H)。
实施例1B向1英钱管形瓶中装入异氰酸乙酯(2.1ml，24.5mmol)，2-氨基-6-氯苯并噻唑(4.48g，24.3mmol)和三乙胺(3.4ml，24.3mmol)的100ml甲苯溶液。将反应混合物加热至回流，并监测反应进程，直至原料耗尽。将产物收集在烧结漏斗上，并用乙醚洗涤，得到5.68g(92％)的纯物质。HPLC RT 1.96min；(M-H)253；1H NMR(d-DMSO)δ1.10(t，3H)，3.2(q，2H)，6.72(brs，1H)，7.38(d，1H)，7.61(d，1H)，8.01(s，1H)，10.77(br s，1H)。
方案II的概述。方案II中A的合成。在圆底烧瓶中装入2-氨基-6-硝基-苯并噻唑或2-氨基-6-氯代-苯并噻唑和氯代硫代甲酸甲酯的吡啶溶液。将反应混合物于约50℃加热约8小时，冷却至室温过夜。将灰白色固体收集在烧结漏斗上，用乙醚洗涤并真空干燥，得到所需产物。
向1英钱管形瓶中装入A(1eq)和合适的胺(约1.2eq或更多)的无水EtOH溶液。在摇床中将反应混合物在搅拌下加热至约80℃，直至所有原料耗尽。将沉淀的产物收集在烧结漏斗上，用乙醚洗涤并真空干燥。不沉淀的产物通过制备性反向HPLC纯化。
实施例2该实施例是按照方案II的合成的代表。在500ml圆底烧瓶中装入2-氨基-6-硝基-苯并噻唑(7.0g，0.036mol)和氯代硫代甲酸甲酯(6g，0.0543mol)的250ml吡啶溶液。将反应混合物于约50℃加热约8小时，并冷却至室温过夜。将灰白色固体收集在烧结漏斗上，用乙醚洗涤并真空干燥，得到4.6g，47％的产物。(M-H)267.1，HPLC RT 3.22min，1HNMR(δ-DMSO)2.42(s，3H)，7.87(d，1H，J＝9)，8.27(dd，1H，J＝2和9)，9.00(s，1H)，13.27(br s，1H)。
向1英钱管形瓶中装入A(50mg，0.186mmol)和2-氨基-2-甲基-丙醇(20mg，0.223mmol)的1ml无水乙醇溶液。将反应混合物于约80℃加热约14小时，或直至原料耗尽。产物在冷却时沉淀，收集在烧结漏斗上，用乙醚洗涤并真空干燥。(M-H)309.1；HPLC RT 2.06min；1H NMR(δ-DMSO)1.43(s，6H)，3.41(d.2H)，5.07(t，1H)，6.67(br s，1H)，7.73(d，1H)，8.2(d，1H)，8.92(s，1H)，10.94(br s，1H)。
方案III的概述。方案III中B的合成。按照Merchan等，Synthesis，1982，590的描述完成B的合成。用DMF进行所述产物的重结晶。
向1英钱管形瓶中装入B(1eq)和合适的胺(约1.2eq)的无水EtOH溶液。在摇床中搅拌下将反应混合物加热至约80℃，直至所有原料耗尽。将沉淀的产物收集在烧结漏斗上，用乙醚洗涤并真空干燥。不沉淀的产物经制备性HPLC纯化。
实施例3该实施例是按照方案III的合成的代表。向2-氨基-6-硝基-苯并噻唑(7g，0.036mol)在DMF中的搅拌溶液中，于约0℃滴加NaOH(2.58ml，20M，0.043mol)。所述碱以3次加入，在每次加入间隔约20min。观察到暗红色。在约10分钟内滴加二硫化碳(4.33ml，0.072mol)。于约0℃搅拌反应混合物约30min，然后分次加入另一相当量的NaOH。加入纯甲基碘(2.23ml，0.036mol)并除去冰浴。将反应混合物于室温搅拌约2小时。将反应混合物倾至200Nml去离子水中，用2N HCl中和。于室温搅拌所得的悬浮液过夜，将沉淀收集在烧结漏斗上。分离出作为长、黄色晶体的所述产物。(M-H)284；HPLC RT 2.69min；1H NMR (δ-DMSO)2.86(s，3H)，7.71(d，1H)，8.3(d，1H)，8.98(s，1H)。
在1英钱管形瓶中装入B(30mg，0.106mmol)和乙胺(63ul (2M的甲醇溶液)，0.126mmol)的1ml无水乙醇溶液。将反应混合物于约80℃加热约16小时，或直至原料耗尽。产物冷却时沉淀，将其收集在烧结漏斗上，用乙醚洗涤并真空干燥。(M-H)281；HPLC RT 2.74min；1HNMR(δ-DMSO)1.1(t，3H)，3.5(q，2h)，7.7(d，1H)，8.2(d，1H)8.9(s，1H)，9.1(br s，1H)，12.15(br s，1H)。(M-H)284，HPLC RT 2.71min，1HNMR(δ-DMSO)2.61(s，3H)，7.72(d，1H，J＝11)，8.34(dd，1H，J＝2和9)，9.00(d，1H，J＝2)。
方案IIIA的概述。向IA、甲醛和甲胺在醇/水溶液中的搅拌悬浮溶液中加入N-烷基吗啉。将反应混合物加热至约60-100℃、最好是80℃达约18-20小时。通过LCMS监测反应进程。在整个反应中反应物是多相的。用本领域的标准方法收集所需产物1B。
于室温下，在圆底烧瓶中装入1B和(苯硫基)乙腈的DMSO溶液。一次性加入叔丁醇钾在THF中的1M溶液。将反应混合物于室温搅拌过夜。将粗制反应混合物缓慢加入到乙酸甲酯和乙酸铵的剧烈搅拌的混合物中。分离各层，有机层经无水硫酸钠干燥，所述产物1C按照本领域已知的标准方法分离。
向1C在DMSO中的搅拌溶液中加入叔丁醇钾(约1eq)的THF溶液。加入所述碱时，反应混合物的颜色变为深紫色。一次性加入相当量的甲基碘。反应混合物变为深红色。将反应混合物于室温搅拌1-6小时。加入乙酸铵的水溶液，用二氯甲烷萃取所述产物。粗产物按照本领域已知的标准方法纯化。
在酸性条件下除去三嗪酮保护基，得到所需的游离脲。纯三氟乙酸、1N盐酸水溶液、4M盐酸的二噁烷溶液和1∶1的乙酸的甲醇溶液都可在4-24小时内，于室温除去所述保护基。脱保护的优选条件是于室温下的4M HCl的二噁烷溶液，直至反应完成。
实施例4 该实施例是按照方案IIIA的合成的代表。向1A(555mg，2.09mmol)、甲醛(1.02g，20.8mmol)和甲胺(354μL，6.25mmol)在1∶1(v/v)的乙醇/水中的搅拌悬浮溶液中，加入N-甲基吗啉(583μl，4.17mmol)。将反应混合物加热至约80℃达约18-20小时。通过LCMS监测反应进程。在整个反应过程中反应物是多相的。将固体收集在烧结漏斗上，得到575mg(86％)作为黄色针状物的所需产物1B。mp 193-194℃；LCMS MHt+321.9m/z；1H NMR(d-DMSO)δ8.9(1H，s)，8.2(1H，d)，7.8(1H，d)，5.1(2H，s)，4.3(2H，s)，3.3(2H，q)，2.6(3H，s)，1.1(3H，t)；13CNMR(d-DMSO)δ164.6，153.6，151.0，142.5，133.5，121.4，120.0，118.3，69.1，69.4，38.5，12.5。
于室温下，在圆底烧瓶中装入1B(500mg，1.56mmol)和(苯硫基)乙腈(279μL，1.87mmol)的10ml DMSO溶液。通过注射器一次性加入叔丁醇钾在THF中的1M溶液(3.11ml，3.12mmol)。加入所述碱时，反应混合物的颜色变为深紫色。于室温下将反应混合物搅拌过夜。将粗制反应混合物缓慢加入到乙酸乙酯和100mM乙酸铵的剧烈搅拌混合物中。分离各层，有机层经无水硫酸钠干燥。真空除去溶剂，得到291mg(52％)作为浅褐色固体的产物。LCMS3.02min；MH+360m/z。
向1C在DMSO中的搅拌溶液中，加入叔丁醇钾(1eq)在THF中的1M溶液。加入所述碱时，反应混合物的颜色变为深紫色。一次性加入相当量的甲基碘。反应混合物变为深红色。将反应混合物于室温搅拌1-6小时。加入乙酸铵水溶液(6M)，产物用二氯甲烷萃取。粗产物经制备性HPLC/MS纯化。MH+375m/z。如上所述在酸性条件下除去三嗪酮保护基，得到所需的游离脲标题化合物，LCMSR.T.2.66min，MH-304m/z。
实施例5N-(6-氯-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-乙基脲将3克6-氯-1，3-苯并噻唑-2-胺溶于约50ml DMF中。接着，加入约2.5ml EtNCO，然后加入约3.2ml三乙胺。让溶液于约80℃反应约8小时。然后真空除去溶剂，将粗制油状物溶于乙醚中。通过过滤分离出固体，用乙醚洗涤。然后真空干燥产物。1H NMR 1.09(t，3H，J＝7.2Hz)，3.19(m，2H)，6.74(br s，1H)，7.37(d，1H，J＝8.58Hz)，7.60(d，1H，J＝8.59Hz)，8.01(s，1H)，10.8(br s，1H)。LCMSR.T.2.3min，MH-254m/z。
实施例6N-(6-氯-5-硝基-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-乙基脲将3克N-(6-氯-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-乙基脲溶于约15ml浓硫酸(约92-94％)中。将溶液冷却至约0-5℃。滴加约1.5g冰冷的硝酸(使用70％的浓度，虽然这不是必需的)。将反应物于0-5℃保持约1小时，然后倾至水中。用氨将pH调至约7-8，并通过过滤分离固体。固体用水洗涤，然后真空干燥。产物经色谱进一步纯化，然后真空干燥。1H NMR1.08(t，3H，J＝7.2Hz)，3.19(m，2H)，6.92(br s，1H)，8.26(s，1H)，8.31(s，1H)，LC/MS 3.72min，302(M+1)实施例7-166以下实施例基本上按照该表第3栏指明的实施例，用合适的原料合成。
注释NA＝不能获得羟基和氨基的氢在以上结构式中未显示，而是假定其存在。
方案IV 方案IV的概述2-氨基-1，3-苯并噻唑-6-腈将4-氨基苄腈溶于乙酸(或一种弱质子酸)，将该溶液冷却至约16-30℃、优选16-18℃。加入硫氰酸钾，然后给烧瓶配上另一漏斗。在所述另一漏斗中装入溴和乙酸。然后将该深色溶液在良好搅拌下滴加到苄腈溶液中，搅拌约12-20小时，优选约16小时。然后将浆液淹没在水中并过滤。滤饼用水充分洗涤，在稀碱水溶液中再制成浆液并过滤。滤饼再次用水充分洗涤，获得标题化合物。
N-(6-氰基-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-乙基脲将2-氨基-1，3-苯并噻唑-6-腈溶于极性非质子溶剂、优选二甲基甲酰胺中。加入R3NCO，然后加入烷基胺碱，优选三乙胺，将该溶液在良好搅拌下加热至约70-90℃、优选约80℃。将溶液搅拌约4-8小时、优选约4小时，然后冷却至室温。真空除去溶剂，固体用乙醚充分洗涤。产物经柱色谱进一步纯化，在真空干燥后，分离出标题产物。甲硫代酸甲酯将2-氨基-1，3-苯并噻唑-6-腈溶于吡啶中。加入氯代硫代甲酸甲酯，并在良好搅拌下将溶液加热至约50-60℃、优选约50℃。将该溶液搅拌约8-24小时、优选8小时，然后冷却至室温。将浆液过滤，固体用水充分洗涤并真空干燥。
方案IV的化合物C的合成将[(6-氰基-1，3-苯并噻唑-2-基)氨基]甲硫代酸甲酯溶于链烷醇中。加入过量的合适的胺R3X1NH，在良好搅拌下将溶液加热至约75-85℃、优选80℃。将溶液搅拌约8-24小时、优选14小时，然后冷却至室温。真空除去溶剂。产物可以经柱色谱进一步纯化，得到所需产物。
制备12-氨基-1，3-苯并噻唑-6-腈将2g 4-氨基苄腈溶于约40ml乙酸中，将溶液冷却至约16℃。加入约3.3g异硫氰酸钾，给烧瓶配上另一漏斗。在所述另一漏斗中装入约2.7g溴和约5ml乙酸。然后将该深色溶液在良好搅拌下滴加到苄腈溶液中，搅拌约16小时。然后将浆液淹没在水中并过滤。滤饼用水充分洗涤，在稀碱水溶液中再制成浆液并过滤。再次将滤饼用水充分洗涤。真空干燥后，分离出约2克标题化合物。1H NMR 6.8(d，1H，J＝8.7Hz)，6.9(br s，2H)，7.6(dd，1H，J＝2Hz，J＝8.7Hz)，8.0(d，1H，J＝2Hz)，LC/MS 2.34min，174(M-H-)，RP-HPLC RT 7.7分钟。
制备2[(6-氰基-1，3-苯并噻唑-2-基)氨基]甲硫代酸甲酯将2-氨基-1，3-苯并噻唑-6-腈(1.4g)溶于约50ml吡啶中。加入约2g氯代硫代甲酸甲酯，将该溶液在良好搅拌下加热至约50℃。将该溶液搅拌达约8小时，然后冷却至室温。将浆液过滤，固体用水充分洗涤。真空干燥后，分离出约1.2克标题产物。1H NMR 2.4(s，3H)，7.8(m，2H)，8.5(s，1H)，13.2(br s，1H)，LC/MS 2.92min，250(MH+)，248(M-H-)。用于实施例166-197的仪器是LC/MS纯化条件柱子HypersilBDS，C18，5μ，100×21.2mm(Hypersil Inc.，Needham，MA)梯度一般在8.5分钟内从100％pH4.5 50mM NH4OAc/H2O至100％CH3CN，但根据所需的分离而变化流速25ml/min1H NMR谱用四甲基硅烷(0.00ppm)作为内标，在氘化DMSO中，在Bruker400MHz分光计上记录。
LC条件(分析性分离)柱子PECOSPHERE，C18，3μm，33×4.6mm(Perkin Elmer，Norwalk，CT)梯度在4.5分钟内从100％pH4.5 50mM NH4OAc/H2O至100％CH3CN流速3.5ml/min实施例167-169N-(6-氰基-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-乙基脲将2-氨基-1，3-苯并噻唑-6-腈(0.2g)溶于约5ml二甲基甲酰胺中。加入约0.2ml异氰酸乙酯，然后加入约0.3ml三乙胺，将该溶液在良好搅拌下加热至约80℃。将该溶液搅拌约4小时，然后冷却至室温。真空除去溶剂，固体用乙醚充分洗涤。产物经柱色谱进一步纯化，在真空干燥后，分离出约0.14克。1H NMR 1.1(t，3H，J＝7.2Hz)，3.2(m，2H)，6.8(s，1H)，7.7(m，2H)，8.4(s，1H)，11.0(s，1H)，LC/MS 2.54min，247(MH+)，245(M-H-)，实验室RP-HPLC RT 7.8分钟。
实施例168和169按照实施例167的合成法，用合适的原料合成。
实施例168N-(6-氰基-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-[(1S)-1-苯基乙基]脲1H NMR 1.4(d，3H，J＝6.8Hz)，4.9(m，1H)，7.3(m，6H)，7.7(br s，2H)，8.4(s，1H)，10.8(br s，1H)，LC/MS 3.32min，323(MH+)，321(M-H-)。
实施例169N-(6-氰基-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-[(1R)-1-苯基乙基]脲1H NMR 1.4(d，3H，J＝6.9Hz)，4.9(m，1H)，7.3(m，5H)，7.36(d，1H，J＝4.5Hz)，7.7(m，2H)，8.4(s，1H)，10.8(br s，1H)，LC/MS 3.30min，321(M-H-)。
实施例170-171以下实施例按照制备方案IV的化合物C的通用方法，用合适的胺合成。
实施例170N-(6-氰基-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-(4-吡啶基甲基)脲1H NMR 4.4(d，2H，J＝6Hz)，7.31(d，2H，J＝5.8Hz)，7.4(br s，1H)，7.8(m，2H)，8.46(s，1H)，8.52(d，2H，J＝5.8Hz)，11.3(br s，1H)，LC/MS 2.44min 310(MH+)，308(M-H-)。
实施例171N-(6-氰基-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-(3-吡啶基甲基)脲1H NMR 4.4(d，2H，J＝5.9Hz)，7.38(m，2H)，7.8(m，3H)，8.46(m，2H)，8.55(s，1H)，11.1(br s，1H)，LC/MS 2.46min，310(MH+)，308(M-H-)。
方案V 合成1-乙基-5-甲基-3-(6-硝基-1，3-苯并噻唑-2-基)-1，3，5-三嗪烷(triazinan)-2-酮的通用方法于室温下，将N-乙基-N’-(6-硝基-1，3-苯并噻唑-2-基)脲悬浮于链烷醇/水混合物、优选1∶1 EtOH/H2O中。加入37％甲醛水溶液，然后加入2MMeNH2的MeOH溶液，然后加入约2摩尔相当量的N-甲基吗啉。将溶液温热至约70-85℃、优选80℃，然后搅拌约4-24小时、优选4小时。将浆液冷却至室温，过滤并用水充分洗涤，干燥，分离出标题产物。格利雅加成的通用方法格利雅合成可以基本上按照Bartoli，JOC，(1980)，45，522-524的方法进行。例如，将1-乙基-5-甲基-3-(6-硝基-1，3-苯并噻唑-2-基)-1，3，5-三嗪烷-2-酮溶于惰性溶剂例如醚、优选四氢呋喃中。将该浆液冷却至约0-5℃，优选0℃。向浆液中滴加约2摩尔相当量的合适的格利雅试剂。一旦加入完成，则将溶液于约0-30℃搅拌约5分钟。接着，于约0-5℃、优选0℃，滴加溶于1∶1 丙酮/水中的约0.66摩尔相当量的KMnO4。将该溶液搅拌至室温。反应粗产物用水稀释，将所需产物萃取到二氯甲烷中。合并的有机层经硫酸镁干燥，然后真空除去溶剂。产物可以经色谱进一步纯化，然后真空干燥。
制备31-乙基-5-甲基-3-(6-硝基-1，3-苯并噻唑-2-基)-1，3，5-三嗪烷-2-酮于室温下，将N-乙基-N’-(6-硝基-1，3-苯并噻唑-2-基)脲(2.8g)悬浮于约100m1 1∶1 EtOH/H2O中。加入约8ml 37％甲醛水溶液，然后加入约15ml 2MMeNH2的MeOH溶液，然后加入约2.2ml N-甲基吗啉。将溶液温热至约80℃，然后搅拌约16小时。然后将浆液冷却至室温，过滤并用水充分洗涤。真空干燥后，分离出约3.2克。1H NMR 1.13(t，3H，J＝7.1Hz)，2.55(s，3H)，3.38(q，2H，J＝7.1Hz)，4.39(s，2H)，5.16(s，2H)，7.81(d，1H，J＝8.9Hz)，8.22(dd，1H，J＝2.4Hz，J＝8.9Hz)，8.95(d，1H，J＝2.4Hz)LC/MS＝3.33min，322(MH+)，320(M-H-)。
实施例172-177以下实施例按照以上描述，用指明的格利雅试剂合成。
实施例1721-乙基-3-(7-乙基-6-硝基-1，3-苯并噻唑-2-基)-5-甲基-1，3，5-三嗪烷-2-酮格利雅试剂＝EtMgBr的Et2O溶液；1H NMR 1.13(t，3H，J＝7.1Hz)，1.33(t，3H，J＝7.5Hz)，2.55(s，3H)，3.05(m，2H)，3.35(m，2H)，4.4(s，2H)，5.15(s，2H)，7.68(d，1H，J＝8.84Hz)，8.02(d，1H，J＝8.83Hz)，LC/MS 3.61min，351(MH+)，349(M-H-)。
实施例1731-(7-烯丙基-6-硝基-1，3-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-5-甲基-1，3，5-三嗪烷-2-酮格利雅试剂＝烯丙基-MgBr的THF溶液；1H NMR 1.12(t，3H，J＝7.1Hz)，2.54(s，3H)，3.38(m，2H)，3.82(d，2H，J＝6.2Hz)，4.4(s，2H)，5.02(s，1H)，5.06(d，1H，J＝1.6Hz)，5.1(s，2H)，6.02(m，2H)，7.72(d，1H，J＝8.8Hz)，8.06(d，1H，J＝8.8Hz)，LC/MS 3.6min，362(MH+)，361(M-H-)。
实施例1741-乙基-5-甲基-3-(6-硝基-7-苯基-1，3-苯并噻唑-2-基)-1，3，5-三嗪烷-2-酮格利雅试剂＝苯基-MgCl的THF溶液；LC/MS 2.77min.，398(MH+)。
实施例1751-(7-苄基-6-硝基-1，3-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-5-甲基-1，3，5-三嗪烷-2-酮格利雅试剂＝Benzyl-MgCl的THF溶液；1H NMR 1.09(t，3H，J＝7.1Hz)，2.52(s，3H).3.3(m，2H)，4.36(s，2H)，4.49(s，2H)，5.12(s，2H)，7.12(m，2H)，7.19(m，1H)，7.28(m，2H)，7.76(d，1H，J＝8.8Hz)，8.09(d，1H，J＝8.8Hz)，LC/MS 3.81min，412(MH+)。
实施例1761-乙基-3-(7-甲基-6-硝基-1，3-苯并噻唑-2-基)-5-甲基-1，3，5-三嗪烷-2-酮格利雅试剂＝MeMgCl的THF溶液；1H NMR 1.13(m，3H)，2.54(s，3H)，2.73(s，3H)，3.35(m，2H)，4.39(s，2H)，5.15(s，2H)，7.61(d，1H，J＝8.4Hz)，8.05(d，1H，J＝8.8Hz)，LC/MS 3.36min，336(MH+)，335(M-H-)。
实施例1772-(2-(3-乙基-5-甲基-2-氧代-1，3，5-三嗪烷-1-基)-6-硝基-1，3-苯并噻唑-7-基)-乙酸叔丁酯将1-乙基-5-甲基-3-(6-硝基-1，3-苯并噻唑-2-基)-1，3，5-三嗪烷-2-酮(0.05g)溶于约25ml二甲基甲酰胺。将溶液冷却至约-40℃。滴加约0.24ml氯乙酸叔丁酯。接着逐滴加入约1.5ml KOt-Bu的THF溶液(1M)。一旦完成加入，则将溶液于约-40至-50℃搅拌约3小时。接着加入约2ml饱和氯化铵，将溶液温热至室温。然后反应粗产物用水稀释，将产物萃取到乙酸乙酯中。合并的有机层经硫酸镁干燥，然后真空除去溶剂。产物经色谱进一步纯化，然后真空干燥。1H NMR 1.1(t，3H，J＝7.0Hz)，1.23(s，9H)，2.55(s，3H)，3.38(m，2H)，4.1(s，2H)，4.4(s，2H)，5.16(s，2H)，7.7(d，1H，J＝8.8Hz)，8.1(d，1H，J＝8.8Hz)，LC/MS 3.72min，436(MH+)。脲保护基水解的通用方法将合适的7-取代的1-乙基-5-甲基-3-(6-硝基-1，3-苯并噻唑-2-基)-1，3，5-三嗪烷-2-酮溶于过量的质子酸(例如三氟乙酸或HCl水溶液)，并于室温下搅拌直至反应完成。中和后，产物或者过滤并用水洗涤，或者萃取到二氯甲烷中、然后干燥。产物经色谱进一步纯化。将产物真空干燥。
实施例178-183以下实施例按照上述关于水解的概述进行合成。
实施例1782-(2-[(乙氨基)羰基]氨基-6-硝基-1，3-苯并噻唑-7-基)乙酸叔丁酯1H NMR 1.1(t，3H，J 7.2Hz)，1.4(s，9H)，3.2(m，2H)，4.1(s，2H)，6.9(brs，1H)，7.69(d，1H，J 8.8Hz)，8.14(d，1H，J 8.8Hz)，11.25(br s，1H)，LC/MS 3.32min，381(MH+)。
实施例179N-乙基-N’-(7-乙基-6-硝基-1，3-苯并噻唑-2-基)脲1H NMR，1.1(t，3H，J＝7.2Hz)，1.3(t，3H，J＝7.4Hz)，3.0(m，2H)，3.2(m，2H)，7.0(br s，1H)，7.59(d，1H，J＝8.8Hz)，8.01(d，1H，J＝8.8Hz)，11.35(br s，1H)，LC/MS 3.13min.，295(MH+)，293(M-H-)。
实施例180N-(7-烯丙基-6-硝基-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-乙基脲1H NMR1.1(t，3H，J＝7.2Hz)，3.2(m，2H)，3.82(d，2H，J＝6Hz)，5.06(d，1H，J＝1.6Hz)，5.12(d，1H，J＝9.3Hz)，6.0(m，1H)，6.8(br s，1H)，7.65(d，1H，J＝8.8Hz)，8.06(d，1H，J＝8.8Hz)，11.17(br s，1H)，LC/MS 3.04min.，307(MH+)，305(M-H-)。
实施例181N-(7-苄基-6-硝基-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-乙基脲1H NMR1.07(t，3H，J＝7.2Hz)，3.15(m，2H)，4.49(s，2H)，6.77(br s，1H)，7.11-7.29(m，5H)，7.69(d，1H，J＝8.4Hz)，8.09(d，1H，J＝8.8Hz)，11.15(br s，1H)，LC/MS 3.44min，357(MH+)，355(M-H-)。
实施例182N-乙基-N’-(6-硝基-7-苯基-1，3-苯并噻唑-2-基)脲LC/MS 2.51min.，341(MH+)，343(M-H-)。
实施例183N-乙基-N’-(7-甲基-6-硝基-1，3-苯并噻唑-2-基)脲1H NMR，1.1(t，3H，J＝7.1Hz)，2.73(s，3H)，3.2(m，2H)，6.79(br s，1H)，7.61(d，1H，J＝8.8Hz)，8.05(d，1H，J＝8.8Hz)，11.15(br s，1H)，LC/MS2.85min.，281(MH+)，279(M-H-)。方案VI 制备42-溴-1，3-环己二酮(1)，向1，3-环己二酮(1.15g，10.0mol，97％纯度)和48％HBr(aq)(1.5ml)，13.3mmol，1.33eq)的H2O(10ml)溶液中于约20℃，在约10分钟内滴加KBrO3(0.55g，3.30mol，0.33eq)的H2O(10ml)的温热溶液。重要的是将KBrO3/H2O溶液保持在35℃左右，以便保持钾盐溶解。加入时，反应混合物变温热，将其于约20℃搅拌约15分钟。滤出沉淀，用水(3×5ml)洗涤。将固体真空干燥，得到1.68g(88％)的1。该物质不经进一步纯化，而用于以下合成中。1H NMR(CDCl3)δ6.52(br s，1H)，2.62(m，4H，CH2)，2.03(p，2H，J＝6.4Hz，CH2)。
制备52-氨基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-苯并噻唑(3).将2-溴-1，3-环己二酮1(15.44g，80.8mmol)和硫脲(6.15g，80.8mmol，1.0eq)的无水THF(120ml)中的悬浮溶液于约20℃搅拌约2天。在TLC上可以观测到1消失和2的出现。将混合物浓缩，加入无水二噁烷(120ml)。将反应混合物于约110℃加热约1天。将其冷却，滤出沉淀，并用THF(2×150ml)洗涤。将固体溶于水(100ml)中，并用饱和NaHCO3溶液中和，此时形成沉淀。收集沉淀，从MeOH中重结晶，得到7.93g(58％)的3。1H NMR(DMSO)δ8.10(br s，2H，NH2)，2.67(t，2H，J＝6.0Hz，CH2)，2.36(t，2H，J＝6.0Hz，CH2)，1.99(p，2H，J＝6.4Hz，CH2)；Mp 259.3-262.5℃(分解)。
制备61-(7-氧代-4，5，6，7-四氢-2-苯并噻唑基)-3-乙基-脲(4).2-氨基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-苯并噻唑3(11.56g，68.7mmol)的无水DMF(200ml)溶液用三乙胺(19.2ml，137mmol，2.0eq)和异氰酸乙酯(10.9ml，137mmol，2.0eq)处理。将反应混合物于约90℃在搅拌下加热约3小时。减压蒸馏出DMF溶剂。获得粘稠的褐色残余物。用Et2O(100ml)处理，得到沉淀，将其滤出并再用Et2O(50ml)洗涤。将浅褐色固体真空干燥，得到13.97g(85％)的4。该物质不经进一步纯化而用于以下合成。1H NMR(DMSO)δ10.95(br s，1H，NH)，6.66(br s，1H，NH)，3.16(p，2H，J＝7.2Hz，CH2)，2.79(t，2H，J＝6.1Hz，CH2)，2.45(t，2H，J＝6.5Hz，CH2)，2.05(p，2H，J＝6.4Hz，CH2)，1.07(t，3H，J＝7.2Hz，CH3)；LC/MS240(MH+)；RP-HPLC RT 2.27分钟。方案VII 制备71-(6，6-二溴-7-氧代-4，5，6，7-四氢-2-苯并噻唑基)-3-乙基-脲(5).1-(7-氧代-4，5，6，7-四氢-2-苯并噻唑基)-3-乙基-脲4(5.00g，20.9mmol)、48％HBr(aq)(1.20ml，2.09mmol，0.1eq)和AcOH(45ml)的溶液通过在搅拌下滴加Br2(2.21ml，42.8mmol，2.05eq)的AcOH(5ml)溶液进行处理。在反应烧瓶顶部带有冷凝器下，将反应混合物于约45℃在搅拌下加热约16小时。获得橙色悬浮液。滤出固体，用Et2O(20ml)、甲苯(50ml)和Et2O(3×30ml)洗涤。真空干燥后，获得7.78g(94％)的化合物5。1H NMR(DMSO)δ11.35(br s，1H，NH)，6.78(br s，1H，NH)，3.18(m，2H，CH2)，3.12(t，2H，J＝5.6Hz，CH2)，2.91(t，2H，J＝5.6Hz，CH2)，1.08(t，3H，J＝7.2Hz，CH3)；LC/MS 396(MH+)；RP-HPLC RT 3.04分钟。
实施例1841-(6-溴-7-羟基-2-苯并噻唑基)-3-乙基-脲(6).1-(6，6-二溴-7-氢代-4，5，6，7-四氢-2-苯并噻唑基)-3-乙基-脲5(7.78g，19.6mmol)的THF(50ml)中的悬浮溶液通过于约20℃滴加DBU(8.79ml，58.8mmol，3.0eq)进行处理。当加入DBU当中产生热量时，获得暗绿色悬浮液。将其于约20℃搅拌约18小时。将反应混合物浓缩，残余物用饱和NH4Cl(aq)溶液处理至中性。获得浅褐色沉淀。将其滤出，并用H2O(2×50ml)、少量MeOH和CH2Cl2洗涤，最后真空干燥，获得4.83g(78％)的所需化合物6。1H NMR(DMSO)δ10.68(br s，1H，NH)，7.43(d，1H，J＝8.5Hz，ArH)，7.08(d，1H，J＝8.5Hz，ArH)，6.70(br s，1H，NH)，3.18(m，2H，CH2)，1.09(t，3H，J＝7.2Hz，CH2)。LC/MS 316(MH+)；RP-HPLC RT2.80分钟。方案VIII 制备81-(6-溴-7-氧代-4，5，6，7-四氢-2-苯并噻唑基)-3-乙基-脲(7).1-(7-氧代-4，5，6，7-四氢-2-苯并噻唑基)-3-乙基-脲4(1.00g，4.18mmol)和48％HBr(aq)(0.24ml，2.09mmol，0.5eq)的AcOH(18ml)溶液通过在搅拌下滴加Br2(0.23ml，4.39mmol，1.05eq)的AcOH(1ml)溶液进行处理。在反应烧瓶顶部带有冷凝器下，将反应混合物于约45℃在搅拌下加热约16小时。获得橙色悬浮液。滤出固体，用AcOH(5ml)、甲苯(2×3ml)和Et2O(2×5ml)洗涤。真空干燥后，获得1.11g(83％)所需化合物7。1H NMR(DMSO)δ11.15(br s，1H，NH)，6.73(br s，1H，NH)，4.87(t，1H，J＝4.6Hz，CH)，3.17(m，2H，CH2)，2.87(dd，2H，J＝7.2，4.4Hz，CH2)，2.61-2.54(m，1H，CH2)，2.39-2.33(m，1H，CH2)，1.08(t，3H，J＝7.2Hz，CH3)；LC/MS 318(MH+)；RP-HPLC RT 2.68分钟。
制备91-(7-羟基-2-苯并噻唑基)-3-乙基-脲(8).向1-(6-溴-7-氧代-4，5，6，7-四氢-2-苯并噻唑基)-3-乙基-脲5(0.100g，0.314mmol)的THF(1.0ml)中的悬浮溶液中于约20℃滴加DBU(0.141ml，0.94mmol，3eq)。当加入DBU当中产生热量时，获得暗绿色悬浮液。将其于约20℃搅拌约18小时。将反应混合物浓缩，并溶于DMF(2ml)中。LC/MS纯化获得0.024g(32％)的所需化合物8。1H NMR(DMSO)δ10.54(br s，1H，NH)，7.17-7.07(m，2H，ArH)，6.63(d，1H，J＝6.9Hz，ArH)，6.70(br s，1H，NH)，3.18(m，2H，CH2)，1.09(t，3H，J＝7.2Hz，CH3)。LC/MS 238(MH+)；RP-HPLC RT 2.26分钟。 化合物R1实施例1859 C6H5CH2-实施例18610CH3-实施例18711(CH3)2CH-实施例18812CH3O(CH2)2O(CH2)2-实施例18913p-F-C6H4CH2-实施例19014CF3SO2-实施例19115NH2COC(CH3)2-1-(6-溴-7-烷氧基-2-苯并噻唑基)-3-乙基-脲化合物9-13的通用方法.将1-(6-溴-7-羟基-2-苯并噻唑基)-3-乙基-脲6和碳酸钾(1.05eq)在无水DMF中的混合物于约20℃搅拌约0.5小时，并冷却至约0℃。混合物用烷基卤(1.0eq)处理，并于约0-85℃搅拌约16小时。向反应混合物中加入甲醇。滤出固体并用甲醇洗涤。蒸发溶剂，将残余物溶于DMF中。粗制反应溶液经制备性LC/MS纯化，得到纯的所需产物实施例1851-(6-溴-7-苄氧基-2-苯并噻唑基)-3-乙基-脲(9).将1-(6-溴-7-羟基-2-苯并噻唑基)-3-乙基-脲6(0.050g，0.16mmoD和碳酸钾(0.023g，0.17mmol，1.05eq)在无水DMF(1.6ml)中的混合物于约20℃搅拌约0.5小时，并冷却至约0℃。反应混合物用苄基溴(0.019ml，0.16mmol，1.0eq)处理，然后于约0℃搅拌约16小时。向反应混合物中加入甲醇(10ml)。滤出固体，并用甲醇(3ml)冲洗。蒸发溶剂，将残余物溶于DMF(2ml)中。粗制反应溶液经LC/MS纯化，得到0.029g(45％)的所需化合物9。1H NMR(DMSO)δ10.86(br s，1H，NH)，7.59-7.34(m，7H，ArH)，6.72(br s，1H，NH)，5.17(s，2H，CH2)，3.18(m，2H，CH2)，1.09(t，3H，J＝7.2Hz，CH3)；LC/MS 406(MH+)；RP-HPLC RT 3.8分钟。
实施例1861-(6-溴-7-甲氧基-2-苯并噻唑基)-3-乙基-脲(10).使1-(6-溴-7-羟基-2-苯并噻唑基)-3-乙基-脲6、碳酸钾和碘代甲烷的混合物在DMF中反应，得到0.0034g(2％)的所需化合物10。1H NMR(DMSO)δ10.88(brs，1H，NH)，7.55(d，1H，J＝8.5Hz，ArH)，7.33(d，1H，J＝8.5Hz，ArH)，6.82(br s，1H，NH)3.93(s，3H，CH3)3.18(m，2H，CH2)，1.09(t，3H，J＝7.2Hz，CH3)；LC/MS 330(MH+)；RP-HPLC RT 3.04分钟。
实施例1871-(6-溴-7-异丙氧基-2-苯并噻唑基)-3-乙基-脲(11).使1-(6-溴-7-羟基-2-苯并噻唑基)-3-乙基-脲6、碳酸钾和2-溴丙烷的混合物在DMF中反应，获得0.046g(81％)的所需化合物11。1H NMR(DMSO)δ10.83(brs，1H，NH)，7.55(d，1H，J＝8.5Hz，ArH)，7.31(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，6.71(br s，1H，NH)，4.69(七重峰，1H，J＝6.0Hz，CH)，3.18(m，2H，CH2)，1.32(d，6H，J＝6.1Hz，CH3)，1.09(t，3H，J＝7.2Hz，CH3)；LC/MS 358(MH+)；RP-HPLC RT 3.42分钟。
实施例1881-(6-溴-7-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基-脲(12).使1-(6-溴-7-羟基-2-苯并噻唑基)-3-乙基-脲6、碳酸钾和2-(2-甲氧基乙氧基)乙基溴在DMF中的混合物反应，获得0.026g(39％)的所需化合物12。1H NMR(DMSO)δ10.65(br s，1H，NH)，7.54(d，1H，J＝8.5Hz，ArH)，7.32(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，6.73(br s，1H，NH)，4.24(d，2H，J 4.4Hz，CH2)，3.76(d，2H，J＝4.8Hz，CH2)，3.61(dd，2H，J＝6.0，5.2Hz，CH2)，3.48(dd，2H，J 6.0，5.2Hz，CH2)，3.26(s，3H CH3)，3.19(m，2H，CH2)，1.09(t，3H，J＝7.1Hz，CH3)；LC/MS 418(MH+)；RP-HPLC RT2.95分钟。
实施例1891-(6-溴-7-(4-氟-苄氧基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基-脲(13).使1-(6-溴-7-羟基-2-苯并噻唑基)-3-乙基-脲6、碳酸钾和对氟-苄基溴的在DMF中的混合物反应，获得0.013g(19％)的所需化合物13。1H NMR(DMSO)δ1.08(t，3H，J＝8Hz CH2CH3)，3.18(m，2H，CH2)，5.16(s，2H，OCH2Ar)，6.73(br s，1H，NH)，7.26(dd，2H，J＝4，4Hz，ArH)，7.36(d，1H，J＝8Hz，ArH)，7.56(d，1H，J＝4Hz，ArH)，7.58(d，2H，J＝4Hz，ArH)，10.89(br s，1H，NH)。HPLC保留时间3.61分钟。
实施例1901-(6-溴-7-三氟甲磺酰基-2-苯并噻唑基)-3-乙基-脲(14).向1-(6-溴-7-羟基-2-苯并噻唑基)-3-乙基-脲(50mg，0.158mmol)的吡啶(1ml)溶液中，加入3份(CF3SO2)2O(29μl，0.174mmol)，每份间隔约45分钟。将反应混合物于约35℃搅拌约3小时。蒸发溶剂。粗制物质经LC/MS纯化，得到23mg(32％)纯的14。1H NMR(DMSO)δ1.09(t，3H，J＝8Hz CH3)，3.19(m，2H，CH2)，6.79(br s，1H，NH)，7.67(d，1H，J＝12Hz，ArH)，7.80(d，1H，J＝8Hz，ArH)，11.20(br s，1H，NH)。HPLC保留时间3.58分钟。
实施例1911-(6-溴-7-(2-氨基羧基)异丙氧基-2-苯并噻唑基)-3-乙基-脲(15).将1-(6-溴-7-羟基-2-苯并噻唑基)-3-乙基-脲6(0.050g，0.16mmol)、碳酸铯(0.155g，0.48mmol，3.0eq)和60％氢化钠(0.019g，0.48mmol，3.0eq)的无水二噁烷(1.0ml)中的混合物于约20℃搅拌约0.5小时，然后加入2-溴-2-甲基丙酰胺(0.079g，0.48mmol，3.0eq)。将其于约110℃加热约18小时。加入DMPU(2ml)，将其于约85℃再加热约18小时。再加入一份60％氢化钠(0.013g，0.32mmol，2.0eq.的矿物油溶液)。约3.5天后，用水(1ml)猝灭反应。将混合物真空浓缩，并加入EtOAc(25ml)。滤出沉淀，用乙醚(2×5ml)和甲醇(2×5ml)冲洗。将有机溶液浓缩，将残余物溶于DMF(2ml)中。LC/MS纯化产生0.021g(33％)的所需化合物15。1H NMR(DMSO)δ10.81(br s，1H，NH)，7.73(br s，1H，NH2)，7.57(d，1H，J＝8.6Hz，ArH)，7.44(br s，1H，NH2)，7.34(d，1H，J＝8.5Hz，ArH)，6.71(br，s，1H，NH)，3.18(m，2H，CH2)，1.46(s，6H，CH3)，1.08(t，3H，J＝7.2Hz，CH3)；LC/MS 401(MH+)；RP-HPLC RT 2.64分钟。 实施例1921-(6-溴-7-甲氧基-2-苯并噻唑基)-1-甲基-3-乙基-脲(16).分离出少量的作为化合物10形成的副产物的化合物16。分离0.0030g(2％)的所需化合物16。1H NMR(DMSO)δ7.73(t，1H，J＝5.4Hz，NH)，7.56(d，1H，J＝8.5Hz，ArH)，7.40(d，1H，J＝8.5Hz，ArH)，3.94(s，3H，CH3)，3.59(s，3H，CH3)，3.24(m，2H，CH2)，1.09(t，3H，J＝7.1Hz，CH3)；LC/MS344(MH+)；RP-HPLC RT 3.58分钟。
实施例1931-(7-羟基-6-硝基-2-苯并噻唑基)-3-乙基-脲(17).向2-甲基吡啶酮(0.020ml，0.20mmol，1.2eq)的无水乙腈(0.5ml)溶液中加入四氟硼酸硝鎓盐(0.045g，0.32mmol，1.9eq)。将悬浮液于约20℃搅拌约5分钟，得到橙色溶液。然后将该溶液转移到1-(7-羟基-2-苯并噻唑基)-3-乙基-脲8(0.040g，0.17mmol)在乙腈(0.5ml)中的悬浮液中。将反应混合物于约20℃搅拌约15分钟，然后溶于乙醚(8ml)中，然后通过用饱和碳酸氢钠溶液(1.5ml)洗涤进行中和。将橙色萃取液浓缩，溶于甲醇(2ml)中。LC/MS纯化后，进行硅胶快速色谱纯化(二氯甲烷/甲醇＝40/1)，获得0.005g(10％)的所需化合物17。1H NMR (DMSO)δ11.20(br s，1H，NH)，8.02(d，1H，J 9.0Hz，ArH)，7.23(d，1H，J＝7.5Hz，ArH)，6.78(br s，1H，NH)，3.20(m，2H，CH2)，1.10(t，3H，J＝7.2Hz，CH3)。LC/MS 283(MH+)；RP-HPLC RT 2.74分钟。 实施例1941-(4，6-二溴-7-羟基-2-苯并噻唑基)-3-乙基-脲(18).向1-(6-溴-7-羟基-2-苯并噻唑基)-3-乙基-脲(50mg，0.158mmol)在AcOH(2ml)中的悬浮液中于约20℃下加入Br2(9μL，0.174mmol)。将反应混合物于约20℃搅拌约15分钟。加入甲苯(10ml)并蒸发溶剂。粗制物质经制备性LC/MS纯化，得到19mg(30％)纯的18。1H NMR(DMSO)δ1.09(t，3H，J＝6Hz，CH3)，3.19(m，2H，CH2)，6.55(br s，1H，NH)，7.68(s，1H，ArH)，10.51(br s，1H，NH或OH)，11.20(br s，1H，NH或OH)。HPLC保留时间2.90分钟。
实施例1951-(4，6-二溴-7-异丙氧基-2-苯并噻唑基)-3-乙基-脲(19).如上所述由1-(6-溴-7-异丙氧基-2-苯并噻唑基)-3-乙基-脲制备。经LC/MS纯化，得到25mg(41％)纯的19。1H NMR(DMSO)δ1.08(t，3H，J＝8Hz，CH2CH3)，1.32(d，6H，J＝4Hz，CH(CH3)2)，3.19(m，2H，CH2)，4.68(m，Z1H，CH(CH3)2)，6.59(br s，1H，NH)，7.83(s，1H，ArH)，11.45(br s，1H，NH)。HPLC保留时间4.01分钟。 和 实施例196-1971-(4-氯-7-羟基-2-苯并噻唑基)-3-乙基-脲(20)和1-(6-氯-7-羟基-2苯并噻唑基)-3-乙基-脲(21).向1-(7-氧代-4，5，6，7-四氢-2-苯并噻唑基)-3-乙基-脲(50mg，0.209mmol)的DMF(1ml)溶液中加入新制备的Cl2的在约20℃下饱和的DMF(3ml)溶液。将反应混合物于约80℃搅拌约24小时。蒸发溶剂，粗制物质经LC/MS纯化。获得6mg(11％)比例为1∶1的纯20和21的混合物。1H NMR(DMSO)δ1.08(t，3H，J 8HzCH2CH3)，3.16(m，2H，CH2)，6.63(d，0.5H，J＝8Hz，ArH)，6.64(br s，0.5H，NH)，6.87(br s，0.5H，NH)，7.01(d，0.5H，J＝8Hz，ArH)，7.22(d，0.5H，J＝8Hz，ArH)，7.25(d，0.5H，J＝8Hz，ArH)。HPLC保留时间2.54分钟。 实施例1981-(4，6-二氯-7-羟基-2-苯并噻唑基)-3-乙基-脲(22).向1-(7-氧代-4，5，6，7-四氢-2-苯并噻唑基)-3-乙基-脲(50mg，0.209mmol)的AcOH(2ml)溶液中于约20℃通入Cl2气达约1分钟。形成白色沉淀，将其滤出。获得5mg(8％)纯的22。1H NMR(DMSO)δ1.09(t，3H，J＝6Hz CH3)，3.19(m，2H，CH2)，6.59(br s，1H，NH)，7.47(s，1H，ArH)，10.58(br s，1H，NH或OH)，11.26(br s，1H，NH或OH)。HPLC保留时间2.73分钟。制备1-(7-链炔基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲化合物的通用方法步骤A1-(7-三氟甲磺酰基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲.向1-(7-羟基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲(1.50g，6.32mmol)的15ml吡啶溶液中于约0℃滴加三氟甲磺酸酐(2.13ml，12.64mmol)。将其于约0℃搅拌约2小时。用15ml MeOH猝灭反应，并蒸发溶剂。粗制混合物经硅胶快速色谱用二氯甲烷和甲醇(90/1)纯化，得到1.45g(62％)所需化合物。LC/MS 369.9(M+1)；LC保留时间3.34min。
步骤B向1-(7-三氟甲磺酰基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲、Pd(PPh3)2Cl2(0.08eq)和三乙胺(4.3eq)在无水DMF中的混合物中通入氮气约5分钟，然后加入所选的链炔(5.0eq)。将混合物于约100℃在密封管中、在搅拌下加热约18小时。将混合物冷却，用MeOH溶解，并蒸发至干。经硅胶快速色谱，用乙酸乙酯和庚烷纯化，得到纯的所需产物。
实施例1991-(7-三甲基甲硅烷基乙炔基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲向1-(7-三氟甲磺酰基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲(0.080g，80％纯度，0.17mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(0.010g，0.014mmol，0.08eq)和三乙胺(0.102ml，0.73mmol，4.3eq)在1ml无水DMF中的混合物中通入氮气达5分钟，然后加入三甲基甲硅烷基乙炔(0.12ml，0.85mmol，5.0eq)。在密封管中，将混合物于约100℃在搅拌下加热约18小时。将混合物冷却，溶于10ml MeOH中，并蒸发至干。经硅胶快速色谱，用乙酸乙酯和庚烷(2/1)纯化，得到纯的所需化合物0.050g(93％)。LC/MS 318(M+1)；LC保留时间9.25min。
1-(7-乙炔基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲将1-(7-三甲基甲硅烷基乙炔基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲2(0.050g，0.16mmol)和1M KOH水溶液(0.16ml，0.16mmol，1.0eq)在1.5ml 2/1DMF/MeOH混合物中的混合物于室温下搅拌约2小时。将混合物溶于10ml MeOH中，然后滤出沉淀。将母液浓缩，并经制备性HPLC纯化，得到所需化合物0.006g(15％)。LC/MS 246(M+1)；LC保留时间2.77min。
实施例2001-(7-(N，N-二甲基甲基乙炔基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲按照制备链炔基化合物的通用方法，使1-(7-三氟甲磺酰基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲、三乙胺、Pd(PPh3)2Cl2和N，N-二甲基甲基乙炔的混合物在DMF中反应，得到0.0025g(8％)的所需化合物。LC/MS 303(M+1)；LC保留时间2.20min。
实施例2011-(7-(2′-吡啶基乙炔基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲按照制备链炔基化合物的通用方法，使1-(7-三氟甲磺酰基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲、三乙胺、Pd(PPh3)2Cl2和2-吡啶基乙炔的混合物在DMF中反应，得到0.020g(57％)所需化合物。LC/MS 322.9(M+1)；LC保留时间3.18min。
实施例2021-(7-异丙氧基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲将1-(6-溴-7-异丙氧基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲(0.036g，0.10mmol)的0.5ml DME溶液冷却至约-78℃，用1.6Mn-BuLi的己烷溶液(0.16ml，0.26mmol，2.6eq)处理。将其于室温搅拌约20分钟，然后加入N-氯代琥珀酰亚胺(NCS)(0.015g，0.11mmol，1.1eq)的0.5ml DME溶液。将其温热至约02℃达0.5小时。将其溶于MeOH中，并经HPLC纯化，得到0.007g(25％)标题化合物。LC/MS 279.9(M+1)；LC保留时间3.10min。
实施例2031-(7-苯基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲将1-(7-三氟甲磺酰基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲(0.050g，80％纯度，0.11mmol)、氯化锂(0.039g，0.92mmol，8.4eq)、三苯膦(0.017g，0.066mmol，0.6eq)、Pd(PPh3)2Cl2(0.010g，0.013mmol，0.12eq)、三丁基苯基锡(0.036ml，0.33mmol，3.0eq)和一粒2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚晶体在1ml无水DMF中的混合物用氮气吹洗，并在密封管中于约120℃加热约36小时。在开始后的24小时后，再向该混合物中加入催化剂Pd(PPh3)2Cl2(0.010g，0.013mmol，0.12eq)和锡试剂(0.024ml，0.22mmol，2.0eq)。将混合物溶于MeOH中，过滤并浓缩。经HPLC纯化，得到0.004g(12％)所需化合物。LC/MS 298.0(M+1)；LC保留时间3.37min。
实施例2041-(7-乙烯基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲与实施例203的合成相似，将1-(7-三氟甲磺酰基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲(0.050g，80％纯度，0.11mmol)、氯化锂(0.039g，0.92mmol，8.4eq)、三苯膦(0.017g，0.066mmol，0.6eq)、Pd(PPh3)2Cl2(0.009g，0.013mmol，0.12eq)、四乙烯基锡(0.040ml，0.22mmol，2.0eq)和一粒2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚结晶的混合物用氮气吹洗，并于约100℃加热约1.5小时。将混合物溶于MeOH中，过滤并浓缩，经HPLC和制备性TLC在乙酸乙酯/庚烷混合物中纯化，得到0.004g(14％)所需化合物。LC/MS248(M+1)；LC保留时间2.96min。
实施例2051-(6-溴-7-三氟甲磺酰基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲向于约0℃的1-(6-溴-7-羟基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲(3.35g，10.6mmol)的40ml吡啶溶液中，滴加三氟甲磺酸酐(2.67ml，15.9mmol)。将其于约0℃搅拌约4小时。将反应物溶于100ml AcOEt中，用70ml2M HCl和70ml盐水洗涤。将溶液干燥(硫酸镁)并浓缩。粗制混合物经硅胶快速色谱，用AcOEt和庚烷(1/3)纯化，得到2.39g(50％)所需化合物。LC/MS 445.9(M-1)；LC保留时间3.84min。
1-(6，7-二乙烯基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲与实施例203的合成相似，将1-(6-溴-7-三氟甲磺酰基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲(0.100g，0.22mmol)、氯化锂(0.078g，1.84mmol，8.4eq)、三苯膦(0.034g，0.13mmol，0.6eq)、Pd(PPh3)2Cl2(0.018g，0.026mmol，0.12eq)、四乙烯基锡(0.080ml，0.44mmol，2.0eq)和一粒2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚晶体的混合物用氮气吹洗，并于约100℃加热约18小时。在开始2小时后，向混合物中加入另外的锡试剂(0.080ml，0.44mmol，2.0eq)。将混合物溶于MeOH中，过滤并浓缩。经HPLC和硅胶快速色谱用乙酸乙酯/二氯甲烷(1/4)纯化，得到所需化合物0.014g(23％)。LC/MS 274.3(M+1)；LC保留时间2.32min，制备2-氨基-6-取代的苯并噻唑化合物的通用方法将4-取代的苯胺和KSCN(2.0eq)的乙酸溶液于约5℃冷却，通过滴加溴的乙酸溶液(1.0eq)进行处理。将混合物于室温搅拌约1-3小时。滤出沉淀，用Et2O洗涤。所获得的固体用饱和碳酸钠溶液中和，形成新的沉淀。将其滤出，用水洗涤并真空干燥，得到所需化合物。
实施例2062-氨基-6-苄基-苯并噻唑4-苄基苯胺(0.916g，5.00mmol)和KSCN(0.97g，10.0mmol，2.0eq)的10ml乙酸溶液于约5℃冷却，并通过滴加溴(0.258ml，5.00mmol，1.0eq)的2ml乙酸溶液进行处理。将混合物于室温搅拌约1小时。滤出沉淀，用Et2O洗涤。所获得的固体用饱和碳酸钠溶液中和，形成新的沉淀。将其滤出，用水和甲醇洗涤并真空干燥，得到所需化合物1.06g(88％)。LC/MS 241.2(M+1)；LC保留时间2.46min。
1-(6-苄基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲将2-氨基-6-苄基-苯并噻唑(0.040g，0.17mmol)、三乙胺(0.104ml，0.77mmol，4.5eq)和异氰酸乙酯(0.049mL，0.64mmol，3.8eq)在1ml甲苯中的悬浮液于约95℃加热约16小时。滤出沉淀，用Et2O和MeOH洗涤并真空干燥，得到所需化合物0.029g(56％)。LC/MS 312.3(M+1)；LC保留时间2.62min。
实施例2072-氨基-6-(4’-氟代苯氧基)-苯并噻唑将4-(4’-氟代苯氧基)苯胺(0.305g，1.50mmol)和KSCN(0.29g，3.00mmol，2.0eq)的3ml乙酸溶液于约5℃冷却，通过滴加溴(0.077ml，1.50mmol，1.0eq)的2ml乙酸溶液进行处理。将混合物于室温搅拌约2小时。滤出沉淀，用Et2O洗涤。将得自过滤的母液浓缩，将残余物与沉淀合并。所获得的固体用饱和碳酸钠溶液中和，形成新的沉淀。将其滤出，用水洗涤并真空干燥，得到所需化合物0.403g(90％)。LC/MS261.2(M+1)；LC保留时间2.44min。
实施例2082-氨基-6-(4’-吡啶基甲基)-苯并噻唑将4-(4’-吡啶基甲基)苯胺(0.368g，2.00mmol)和KSCN(0.388g，4.00mmol，2.0eq)的5ml乙酸溶液于约5℃冷却，通过滴加溴(0.103ml，2.00mmol，1.0eq)的2ml乙酸溶液进行处理。将混合物于室温搅拌3小时。滤出沉淀，用Et2O洗涤。所获得的固体用饱和碳酸钠溶液中和，形成新的沉淀。将其滤出，用水洗涤并真空干燥，得到所需化合物0.41g(85％)。LC/MS 242.2(M+1)；LC保留时间1.61min。
制备1-(6-取代的-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲化合物的通用方法.将2-氨基-6-取代的苯并噻唑、三乙胺(3.0eq)和异氰酸乙酯(2.5eq)在甲苯中的悬浮液于约95℃加热约3-20小时。滤出沉淀，用Et2O和MeOH洗涤并真空干燥，得到所需化合物。
实施例2091-(6-(4’-氟代苯氧基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲按照上述通用方法，使2-氨基-6-(4’-氟代苯氧基)-苯并噻唑、三乙胺和异氰酸乙酯的混合物在甲苯中反应，得到0.041g(66％)所需化合物。LC/MS 332.2(M+1)；LC保留时间2.66min。
实施例2101-(6-(4’-吡啶基甲基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲按照上述通用方法，使2-氨基-6-(4’-吡啶基甲基)-苯并噻唑、三乙胺和异氰酸乙酯的混合物在甲苯中反应，得到0.100g(62％)所需化合物。LC/MS 313.3(M+1)；LC保留时间1.96min。 实施例2111-(6-氟-7-氯-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲和1-(5-氯-6-氟-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲将3-氯-4-氟-苯胺(0.300g，2.06mmol)和KSCN(0.412g，4.25mmol，2.06eq)的5ml乙酸溶液于约5℃冷却，通过滴加溴(0.159ml，3.09mmol，1.5eq)的5ml乙酸溶液进行处理。将混合物于室温搅拌约3小时。将混合物浓缩，在二氧化硅上用AcOEt和二氯甲烷(1/8)纯化，得到0.041g(10％)6-氟-7-氯-苯并噻唑和5-氯-6-氟-苯并噻唑的混合物。将该混合物与三乙胺(0.055ml，0.40mmol，2.0eq)和异氰酸乙酯(0.031ml，0.40mmol，2.0eq)的1ml甲苯溶液混合。将其于约110℃加热约1天。将残余物蒸发至干，溶于DMF中。从DMF溶液中滤出沉淀，用Et2O洗涤并真空干燥，得到1-(5-氯-6-氟-2苯并噻唑基)-3-乙基脲0.003g。LC/MS 274.0(M+1)；LC保留时间3.10min。DMF母液经HPLC和制备性TLC纯化，得到1-(6-氟-7-氯-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲0.002g。LC/MS274.0(M+1)；LC保留时间3.08min。
实施例2121-(6-溴-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲将2-氨基-6-溴-苯并噻唑(6.12g，26.2mmol)、三乙胺(7.30ml，52.4mmol，2.0eq)和异氰酸乙酯(4.15mL，52.4mmol，2.0eq)在50ml甲苯中的悬浮液于约95℃加热约15小时。滤出沉淀，用Et2O洗涤并真空干燥，得到所需化合物7.39g(94％)。LC/MS 300.0(M-1)；LC保留时间3.01min。制备1-(6-链炔基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲化合物的通用方法向1-(6-溴-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲、Pd(PPh3)2Cl2(0.05eq)和三乙胺(4.3eq)在无水DMF中混合物中通入氮气达约5分钟，然后加入所选的链炔(5.0eq)。在密封管中，将混合物于约80℃在搅拌下加热约15小时。将混合物冷却，用MeOH溶解并蒸发至干。经HPLC或硅胶快速色谱，用乙酸乙酯和庚烷纯化，得到纯的所需产物。
实施例2131-(6-三甲基甲硅烷基乙炔基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲向1-(6-溴-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲(0.100g，0.33mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(0.012g，0.017mmol，0.05eq)和三乙胺(0.20ml，1.42mmol，4.3eq)在1ml无水DMF中的混合物中通入氮气达约5分钟，然后加入三甲基甲硅烷基乙炔(0.23ml，1.65mmol，5.0eq)。在密封管中，将混合物于约80℃在搅拌下加热约15小时。将混合物冷却，用10mlMeOH溶解并蒸发至干。经HPLC纯化，得到纯的所需化合物0.093g(89％)。LC/MS 318(M+1)；LC保留时间3.77min。
实施例2141-(6-苯基乙炔基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲按照实施例213的方法，使1-(6-溴-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲、Pd(PPh3)2Cl2、三乙胺和苯乙炔在1ml无水DMF中的混合物反应，得到0.008g(8％)所需化合物。LC/MS 322(M+1)；LC保留时间3.65min。
实施例2151-(6-(N，N-二甲基氨基甲基)乙炔基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲按照实施例213的方法，使1-(6-溴-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲、Pd(PPh3)2Cl2、三乙胺和N，N-二甲基氨基甲基乙炔在1ml无水DMF中的混合物反应，得到0.145g(28％)所需化合物。LC/MS 303(M+1)；LC保留时间1.40min。
实施例2161-(6-(4’-氟代苯基)乙炔基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲按照实施例213的方法，使1-(6-溴-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲、Pd(PPh3)2Cl2、三乙胺和4-氟苯乙炔在1ml无水DMF中的混合物反应，得到0.215g(94％)所需化合物。LC/MS 340.3(M+1)；LC保留时间2.92min。
实施例2171-(6-(4’-甲苯基)乙炔基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲按照实施例213的方法，使1-(6-溴-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲、Pd(PPh3)2Cl2、三乙胺和4-甲苯乙炔在1ml无水DMF中的混合物反应，得到0.185g(99％)所需化合物。LC/MS 336.3(M+1)；LC保留时间3.07min。
实施例2181-(6-乙炔基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲将1-(6-三甲基甲硅烷基乙炔基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲(0.0710g，0.22mmol)和1M KOH水溶液(1.22ml，1.22mmol，5.5eq)在1.5mlMeOH中的混合物于室温搅拌约2小时。混合物用1M HCl酸化，然后溶于20ml AcOEt中，水相用10ml AcOEt萃取。将合并的有机部分干燥(硫酸镁)，浓缩并经HPLC纯化，得到所需化合物0.003g(5％)。LC/MS 246(M+1)；LC保留时间2.84min。
实施例2191-(6-(2-苯基乙基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲1-(6-苯基乙炔基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲(0.048g，0.15mmol)和10％披钯碳(0.016g，10％重量纯度，0.015mmol，0.10eq)在2ml乙醇中的悬浮液用氮气吹洗，然后通入氢气。将其在氢气环境下搅拌约16小时。将混合物溶于8ml MeOH中，过滤、浓缩并真空干燥，得到0.037g(76％)所需化合物。LC/MS 326.3(M+1)；LC保留时间2.84min。
实施例2201-(6-(2-(4’-氟代苯基)乙基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲将1-(6-(4’-氟苯基)乙炔基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲(0.144g，0.42mmol)和Lindlar催化剂(0.090g，5％重量纯度，0.042mmol，0.10eq)在8ml乙醇中的悬浮液用氮气吹洗，然后通入氢气。将其在氢气环境下搅拌约16小时。所得混合物由具有完全还原的叁键的化合物和具有部分还原的叁键的化合物组成。加入新的催化剂-披钯碳(0.045g，0.042mmol，0.10eq)。将反应混合物在氢气氛下搅拌约另1小时。将混合物溶于8ml MeOH中，过滤、浓缩并从MeOH中重结晶，得到0.046g(38％)所需化合物。LC/MS 344.3(M+1)；LC保留时间2.81min。
合成1-(6-(2(Z)-取代的-乙烯基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲化合物的通用方法.1-(6-取代的-乙炔基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲化合物和Lindlar催化剂(5％重量纯度，0.15eq)在乙醇中的悬浮液用氮气吹洗，然后通入氢气。将其在氢气环境下搅拌约36小时。将混合物溶于MeOH中，过滤、浓缩并经制备性TLC纯化，得到所需化合物。
实施例2211-(6-(2(Z)-苯基乙烯基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲1-(6-苯基乙炔基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲(0.032g，83％重量纯度，0.083mmol)和Lindlar催化剂(0.030g，5％重量纯度，0.012mmol，0.15eq)在2ml乙醇中的悬浮液用氮气吹洗，然后通入氢气。将其在氢气环境下搅拌约36小时。将混合物溶于10ml MeOH中，过滤、浓缩并经制备性TLC纯化，得到0.011g(41％)所需化合物。LC/MS 324(M+1)；LC保留时间2.84min。
实施例2221-(6-(2(Z)-(N，N-二甲基氨基甲基)乙烯基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲按照实施例221的方法，使1-(6-(N，N-二甲基氨基甲基)乙炔基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲和Lindlar催化剂的混合物在氢气氛下反应，得到所需化合物0.013g(21％)。LC/MS 305.3(M+1)；LC保留时间1.51min。
实施例2231-(6-(2(Z)-(4’-氟代苯基)乙烯基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲按照实施例221的方法，使1-(6-(4’-氟代苯基)乙炔基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲和Lindlar催化剂的混合物在氢气氛下反应，得到所需化合物0.046g(38％)。LC/MS 344.3(M+1)；LC保留时间2.81min。
实施例2241-(6-(2(Z)-(4’-甲苯基)乙烯基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲按照实施例221的方法，使1-(6-(4’-甲苯基)乙炔基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲和Lindlar催化剂的混合物在氢气氛下反应，得到所需化合物0.053g(90％)。LC/MS 338.3(M+1)；LC保留时间3.02min。
合成1-(6-(2(E)-取代的-乙烯基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲化合物的通用方法.向1-(6-溴-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲、Pd(PPh3)2Cl2(0.10eq)、1，3-双(二苯基膦基)丙烷(dppp)(0.11eq)、三乙胺(1.2eq)、一取代的乙烯(2.0eq)和两粒BHT晶体在无水DMF中的混合物中通入氮气。在密封管中，将混合物于约105℃在搅拌下加热约15小时。将混合物冷却，溶于MeOH中并蒸发至干。经硅胶快速色谱用MeOH和二氯甲烷纯化，得到所需化合物。
实施例2251-(6-(2(E)-(4’-氟代苯基)乙烯基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲向1-(6-溴-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲(0.150g，0.50mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(0.035g，0.05mmol，0.10eq)、dppp(0.023g，0.055mmol，0.11eq)、三乙胺(0.083ml，0.60mmol，1.2eq)、4-氟苯乙烯(0.120ml，1.00mmol，2.0eq)和两粒BHT晶体在2ml无水DMF中的混合物中通入氮气。在密封管中，将混合物于约105℃在搅拌下加热约15小时。将混合物冷却，溶于5ml MeOH中并蒸发至干。经硅胶快速色谱用MeOH和二氯甲烷(1.5/100)纯化，得到所需化合物0.096g(56％)。通过从MeOH中沉淀将其进一步纯化。LC/MS 342.3(M+1)；LC保留时间2.86min。
实施例2261-(6-(2(E)-苯基乙烯基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲按照实施例225的方法，使1-(6-溴-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲、Pd(PPh3)2Cl2、dppp、三乙胺、苯乙烯和两粒BHT晶体的混合物在无水DMF中反应，得到所需化合物0.201g(62％)。LC/MS 324.2(M+1)；LC保留时间2.87min。
实施例2271-(6-(2(E)-(4’-甲苯基)乙烯基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲按照实施例225的方法，使1-(6-溴-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲、Pd(PPh3)2Cl2、dppp、三乙胺、4-甲基苯乙烯和两粒BHT晶体的混合物在无水DMF中反应，得到所需化合物0.030g(37％)。LC/MS 338.0(M+1)；LC保留时间3.80min。
实施例2281-(6-(2(E)-(1’-咪唑基)乙烯基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲按照实施例225的方法，使1-(6-溴-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲、Pd(PPh3)2Cl2、dppp、三乙胺、1-乙烯基咪唑和两粒BHT晶体的混合物在无水DMF中反应，得到所需化合物0.308g(97％)。LC/MS 314.1(M+1)；LC保留时间1.82min。
实施例229{[6-(4-氟代苯氧基)-2-苯并噻唑基]氨基}甲硫代酸乙酯将2-氨基-6-(4’-氟代苯氧基)-苯并噻唑(与2.0eq KBr盐结合，2.50g，5.02mmol)在10ml吡啶中的悬浮液通过滴加氯代硫代甲酸甲酯(0.65ml，7.53mmol，01.5eq)进行处理。将其于室温搅拌约1小时，倾至40ml冰水中。混合物用1M HCl溶液缓慢酸化。滤出所得的沉淀，用水和MeOH洗涤并真空干燥，得到1.18g(65％)所需化合物。LC/MS 334.9(M+1)；LC保留时间3.70min。
合成1-(6-(4’-氟代苯氧基)-2-苯并噻唑基)-3-任选取代的-烷基脲化合物的通用方法.将{[6-(4-氟苯氧基)-2-苯并噻唑基]氨基}甲硫代酸乙酯(实施例229)和所选的烷基胺(1.2eq)在EtOH中的悬浮液于约80℃加热约2.5小时至3天。将混合物溶于MeOH中，浓缩并经HPLC纯化，得到所需化合物。
实施例2301-(6-(4’-氟代苯氧基)-2-苯并噻唑基)-3-(3-(4-甲基哌嗪基)丙基)脲将{[6-(4-氟代苯氧基)-2-苯并噻唑基]氨基}甲硫代酸乙酯(0.154g，0.46mmol)和4-甲基-1-(3-氨基丙基)哌嗪(0.100ml，0.55mmol，1.2eq)在8ml EtOH中的悬浮液于约80℃加热约3天。滤出沉淀，用MeOH洗涤并真空干燥，得到作为副产物的化合物氨基甲酸N-(6-(4’-氟代苯氧基)-2-苯并噻唑基)-乙酯0.004g(3％)。LC/MS 333.4(M+1)；LC保留时间3.66min。
将得自过滤的母液浓缩并经HPLC纯化，这是乙酸盐形式的所需化合物。LC/MS 444.1(M+1)；LC保留时间3.32min。
将一份经纯化的化合物溶于二氯甲烷中，用2M NaOH溶液洗涤。蒸发有机部分，溶于AcOEt中，用1ml马来酸的AcOEt溶液处理。滤出产生的白色沉淀，用乙酸乙酯洗涤并且真空干燥，得到马来酸盐形式的0.024g(8％)的所需化合物。LC/MS 444.1(M+1)；LC保留时间3.38min。
在进行的另一相同反应中，在反应完成后将混合物蒸发至干。残余物从Et2O和庚烷中重结晶，得到0.088g(56％)作为游离碱的所需产物。LC/MS 444.1(M+1)；LC保留时间2.17min。
实施例2311-(6-(4’-氟代苯氧基)-2-苯并噻唑基)-3-(2-(4-咪唑基)乙基)脲按照获得实施例230的游离碱的方法，使{[6-(4-氟代苯氧基)-2-苯并噻唑基]氨基}甲硫代酸乙酯和4-(2-氨基乙基)咪唑的混合物在EtOH中反应，得到所需化合物0.027g(46％)。LC/MS 398.2(M+1)；LC保留时间2.24min。
实施例2321-(6-(4’-氟代苯氧基)-2-苯并噻唑基)-3-(2，2-二甲基-3-(N，N-二甲基)氨基丙基)脲使{[6-(4-氟代苯氧基)-2-苯并噻唑基]氨基}甲硫代酸乙酯和2，2-二甲基-3-(N，N-二甲基)氨基丙胺的混合物在EtOH中反应，得到所需化合物0.047g(38％)。LC/MS 417.2(M+1)；LC保留时间2.46min。
以下化合物按照实施例230的方法，但使用合适的胺来合成结构 LC/MS(M+1)LC保留时间(Min) 实施例2381-(6-(4’-氟代苯氧基)-2-苯并噻唑基)-3-(4-哌啶基甲基)脲使{[6-(4-氟代苯氧基)-2-苯并噻唑基]氨基}甲硫代酸乙酯和N-Boc-4-氨基甲基哌啶的混合物在EtOH中反应，得到作为油状物的标题化合物的t-Boc被护类似物。将油状物于约0℃溶于二氯甲烷中，并用3ml30％TFA溶液处理。将其温热，并于室温搅拌约4小时。将混合物浓缩，溶于AcOEt中，用NaHCO3中和，用水和盐水洗涤。浓缩有机部分并经HPLC纯化，得到所需化合物0.008g(两步的总收率7％)。LC/MS 401.2(M+1)；LC保留时间2.26min。
实施例2391-(6-(4’-氟代苯氧基)-2-苯并噻唑基)-3-(2-(1-哌嗪基)乙基)脲按照48的方法，使{[6-(4-氟代苯氧基)-2-苯并噻唑基]氨基}甲硫代酸乙酯42和1-Boc-4-(2-氨基乙基)哌啶和TFA的混合物反应，得到所需化合物0.040g(两步的总收率32％)。LC/MS 414.1(M+1)；LC保留时间2.84min。
实施例2402-氨基-6-乙酰-苯并噻唑按照关于2-氨基-6-取代的苯并噻唑化合物的通用方法，使4-乙酰-苯胺、KSCN和溴的乙酸溶液中的混合物反应，得到6.27g(66％)所需化合物。LC/MS 192.9(M+1)；LC保留时间2.25min。
实施例2411-(6-乙酰-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲按照关于1-(6-取代的-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲化合物的通用方法，使2-氨基-6-乙酰-苯并噻唑、三乙胺和异氰酸乙酯的混合物在甲苯中反应，得到所需化合物2.08g(83％)。
实施例242N1-苯基-3-(2-{[(乙基氨基)羰基]氨基}-1，3-苯并噻唑-6-基)-3-氧代丙酰胺向1-(6-乙酰-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲(0.100g，0.17mmol)在2mlTHF中的悬浮液中，于约-78℃加入1M LiHMDS的THF溶液(0.51ml，0.51mmol，3.0eq)。将其于室温搅拌约15分钟。混合物用异氰酸苯酯(0.022ml，0.20mmol，1.2eq)处理并于约-78℃搅拌约10分钟，然后在5小时内温热至室温。用MeOH猝灭，用HCl略微酸化并浓缩。残余物经硅胶快速色谱用MeOH和二氯甲烷(1/100)纯化，得到所需化合物0.002g(3％)。LC/MS 383.0(M+1)；LC保留时间4.10min。
实施例243N1-(3-甲基苯基)-3-(2-{[(乙基氨基)羰基]氨基}-1，3-苯并噻唑-6-基)-3-氧代丙酰胺与实施例242的合成相似，使1-(6-乙酰-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲、LiHMDS和异氰酸3-甲基苯酯的混合物在THF中反应，得到0.068g(41％)所需化合物。LC/MS 396.8(M+1)；LC保留时间3.12min。
实施例244N1-14-(二甲基氨基)苯基]-3-(2-{[(乙基氨基)羰基]氨基}-1，3-苯并噻唑-6-基)-3-氧代丙酰胺与实施例242的合成相似，使1-(6-乙酰-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲、LiHMDS和异氰酸4-二甲基氨基苯酯的混合物在THF中反应，得到0.005g(3％)所需化合物。LC/MS 426.1(M+1)；LC保留时间2.00min。
实施例2451-(6-乙氧羰基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲按照关于1-(6-取代的-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲化合物的通用方法，并且与1-(6-苄基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲的合成相似，使2-氨基-6-乙氧羰基-苯并噻唑、三乙胺和异氰酸乙酯在甲苯中混合物反应，得到所需化合物2.40g(82％)。LC/MS 294.0(M+1)；LC保留时间4.29min。
实施例2461-(6-(2-氰基乙酰基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲1-(6-乙氧羰基-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲(1.20g，4.09mmol)的5ml无水DMF溶液用2ml乙腈处理，冷却至约0℃，然后用1M LiHMDS的THF溶液(13.1ml，13.1mmol，3.2eq)处理。将其于该温度下搅拌约0.5小时，然后温热至室温，并再搅拌4小时。第1小时后，再加入LiHMDS(4ml，4.0mmol，1.0eq)。混合物用MeOH和水猝灭，浓缩并经硅胶快速色谱用MeOH和二氯甲烷(1/50)纯化，得到所需化合物0.640g(54％)。LC/MS 288.9(M+1)；LC保留时间2.56min。
实施例2471-(6-(3-氨基丙酰基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲吹洗1-(6-(2-氰基乙酰基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲(0.56g，1.94mmol)和氧化铂(IV)(0.176g，0.78mmol，0.40eq)在50ml MeOH和氯仿的2/3混合物中的悬浮液，并通入氢气。将其在氢气氛下搅拌约2天。将混合物过滤并浓缩，得到0.689g(定量的收率)所需化合物。LC/MS292.9(M+1)；LC保留时间1.80min。HPLC纯化产生相应的乙酸盐。LC/MS 292.9(M+1)；LC保留时间1.80min。在一个相似的反应中，在HPLC纯化后，获得作为乙酸盐的化合物。
实施例248N1-[3-(2-{[(乙基氨基)羰基]氨基}-1，3-苯并噻唑-6-基)-3-氧代丙基]苯甲酰胺1-(6-(3-氨基丙酰基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲(0.033g，0.10mmol)的1ml无水DMF溶液于室温用三乙胺(0.028ml，0.20mmol，2.0eq)处理。将其搅拌约5分钟，然后加入苯甲酰氯(0.014ml，0.12mmol，1.2eq)。将其搅拌约2.5小时，用MeOH猝灭，过滤，浓缩并经HPLC纯化，得到所需化合物0.011g(28％)。LC/MS 396.7(M+1)；LC保留时间2.74min。
实施例2491-(6-(3-苯基氨基羰基氨基-丙酰基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲1-(6-(3-氨基丙酰基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲(0.033g，0.10mmol)的1ml无水DMF溶液于室温用三乙胺(0.028ml，0.20mmol，2.0eq)处理。将其搅拌约5分钟，然后加入异氰酸苯酯(0.013ml，0.12mmol，1.2eq)。将其搅拌约2.5小时，用MeOH猝灭，过滤，浓缩并经HPLC纯化，得到所需化合物0.009g(22％)。LC/MS 412.2(M+1)；LC保留时间2.80min。
实施例2501-(6-(3-(3-甲基苯基)氨基羰基氨基-丙酰基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲与实施例249的合成相似，使1-(6-(3-氨基丙酰基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲、三乙胺和异氰酸3-甲基苯酯的混合物在DMF中反应，得到所需化合物0.021g(25％)。LC/MS 426.1(M+1)；LC保留时间2.94min。
实施例251N1-[3-(2-{[(乙基氨基)羰基]氨基}-1，3-苯并噻唑-6-基)-3-氧代丙基]-4-(二甲氨基)苯甲酰胺与实施例248的合成相似，使1-(6-(3-氨基丙酰基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲、三乙胺和4-二甲基氨基苯甲酰氯的混合物在DMF中反应，得到作为乙酸盐的所需化合物0.025g(25％)。LC/MS 440.1(M+1)；LC保留时间2.86min。
实施例252N1-[3-(2-{[(乙基氨基)羰基]氨基}-1，3-苯并噻唑-6-基)-3-氧代丙基]-4-氟苯甲酰胺与实施例248的合成相似，使1-(6-(-3-氨基丙酰基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲、三乙胺和4-氟苯甲酰氯的混合物在DMF中反应，得到所需化合物0.008g(10％)。LC/MS 415.1(M+1)；LC保留时间2.17min。
实施例253N1-[3-(2-{[(乙基氨基)羰基]氨基}-1，3-苯并噻唑-6-基)-3-氧代丙基]-2，5-二氟代苯甲酰胺与实施例249的合成相似，使1-(6-(3-氨基丙酰基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲、三乙胺和2，5-二氟苯甲酰氯的混合物在DMF中反应，得到所需化合物0.019g(22％)。LC/MS 433.0(M+1)；LC保留时间2.94min。
实施例2541-(6-溴-1，3-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-5-甲基-1，3，5-三嗪烷-2-酮使1-(6-溴-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲、甲胺、甲醛和N-甲基吗啉的混合物在乙醇和水的混合溶剂中反应，得到所需化合物1.56g(88％)。
实施例2551-(6-(2(E)-(乙氧羰基)乙烯基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲按照关于合成1-(6-(2(E)-取代的-乙烯基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲化合物的通用方法，使1-(6-溴-1，3-苯并噻唑-2-基)-3-乙基-5-甲基-1，3，5-三嗪烷-2-酮、Pd(PPh3)2Cl2、dppp、三乙胺、丙烯酸乙酯和两粒BHT晶体的混合物在无水DMF中反应，得到所需化合物650.022g(29％)。LC/MS 375.0(M+1)；LC保留时间3.63min。将化合物(0.019g，0.051mmol)在1ml 4M HCl的二噁烷溶液中的溶液于室温搅拌约4小时。将混合物滤出，固体用MeOH洗涤并真空干燥，得到所需化合物660.015g，(94％)。LC/MS 320.2(M+1)；LC保留时间2.23min。
实施例2561-(6-(3-氨基苯基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲将1-(6-溴-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲(0.300g，1.00mmol)、3-氨基苯基硼酸(0.237g，1.50mmol，1.5eq)和碳酸氢钠(0.210g，2.50mmol，2.5eq)在8ml混合溶剂DMF/水(5/1)中的悬浮液用氮气吹洗。向混合物中加入催化剂Pd(PPh3)4(0.058g，0.05mmol，0.05eq)。用氮气再吹洗，并在密封管中于约100℃加热约48小时。在开始加热24小时后，再加入Pd(PPh3)4(0.025g，0.02mmol，0.02eq)和硼酸(0.080g，0.50mmol，0.50eq)。将混合物溶于MeOH中，浓缩，溶于二氯甲烷中，用碳酸氢钠溶液洗涤，干燥(硫酸镁)，蒸发并经硅胶快速色谱用MeOH和二氯甲烷(1/50)纯化，得到所需化合物0.073g(23％)。LC/MS 313.2(M+1)；LC保留时间2.11min。
实施例2561-(6-(3-苯基氨基羰基氨基苯基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲将1-(6-(3-氨基苯基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲(0.062g，0.20mmol)、三乙胺(0.083ml，0.60mmol，3.0eq)和异氰酸苯酯(0.055ml，0.50mmol，2.5eq)在2ml甲苯中的悬浮液于室温搅拌约1小时。滤出白色沉淀，用Et2O和MeOH洗涤并真空干燥，得到所需化合物0.038g(44％)。LC/MS 431.8(M+1)；LC保留时间3.49min。
实施例2574-吡唑基硼酸频哪醇酯(4-pyrazolylboronic pinacolate)4-溴吡唑(3.02g，20.3mmol)、双(频哪醇基(pinacolato))乙硼烷(6.20g，24.4mmol，1.2eq)、KOAc(5.99g，60.9mmol，3.0eq)和催化剂Pd(dppf)Cl2/CH2Cl2(0.83g，1.02mmol，0.05eq)在40 DMF中的混合物用氮气吹洗。将其在密封瓶中于约95℃加热约15小时。将其溶于AcOEt中，浓缩，再溶于AcOEt中，经硅胶柱过滤并浓缩。残余物经硅胶快速色谱用EtOAc和庚烷(1/1)进一步纯化，得到所需化合物2.46g(62％)。LC/MS 195.1(M+1)；LC保留时间1.59min。
实施例2581-(6-(4-吡唑基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲与1-(6-(3-氨基苯基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲的合成相似，使4-吡唑基硼酸频哪醇酯、1-(6-溴-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲、碳酸钠和Pd(PPh3)4的混合物在DMF/水混合溶剂中反应，得到所需化合物0.543g(30％)。LC/MS 288.2(M+1)；LC保留时间2.61min。
实施例2591-(6-(频哪醇基硼烷基(pinacolatoborano))-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲与4-吡唑基硼酸频哪醇酯的合成相似，使1-(6-溴-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲、双(频哪醇基)乙硼烷、KOAc和催化剂Pd(dppf)Cl2/CH2Cl2的混合物在DMF中反应，得到所需化合物3.31g(93％)。LC/MS(M+1)348.1；LC保留时间2.62min。
实施例2604-(2-{[(乙基氨基)羰基]氨基}-1，3-苯并噻唑-6-基)-1H-2-吡咯羧酸甲酯与1-(6-(4-吡唑基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲的合成相似，使1-(6-(频哪醇基硼烷基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲、4-溴吡咯-2-羧酸甲酯、碳酸钠和Pd(PPh3)4的混合物在DMF/水混合溶剂中反应，得到所需化合物0.001g(1％)。LC/MS 345.0(M+1)；LC保留时间3.04min。
实施例2611-(6-(4-氯苯基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲与1-(6-(4-吡唑基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲的合成相似，使1-(6-溴-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲、4-氯苯基硼酸、碳酸氢钠和Pd(PPh3)4的混合物在DMF/水混合溶剂(5/1)中反应，得到所需化合物0.020g(18％)。LC/MS 330(M-1)；LC保留时间2.70min。
实施例2621-(6-(3-(3-甲苯基)氨基羰基氨基苯基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲与1-(6-(3-苯基氨基羰基氨基苯基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲的合成相似，使1-(6-(3-氨基苯基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲、三乙胺和异氰酸3-甲苯酯的混合物在甲苯中反应，得到所需化合物0.023g(26％)。LC/MS 446.2(M+1)；LC保留时间3.76min。
实施例2631-(6-(1-苯基氨基羰基吡唑-4-基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲与1-(6-(3-苯基氨基羰基氨基苯基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲的合成相似，使1-(6-(4-吡唑基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲、三乙胺和异氰酸苯酯的混合物在甲苯中反应，得到所需化合物0.025g(23％)。LC/MS407.1(M+1)；LC保留时间3.85min。
实施例2641-(6-(3-(2-氟代苯基)氨基羰基氨基-丙酰基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲与实施例249的合成相似，使1-(6-(3-氨基丙酰基)-2-苯并噻唑基)-3-乙基脲、三乙胺和异氰酸2-氟苯酯的混合物在DMF中反应，得到所需化合物0.022g(26％)。LC/MS 430.01(M+1)；LC保留时间2.89min。
实施例2651-(6-(4’-氟代苯氧基)-2-苯并噻唑基)-3-(2-(3-甲基氨基丙基))脲与1-(6-(4’-氟代苯氧基)-2-苯并噻唑基)-3-(4-哌啶基甲基)脲的合成相似，使{[6-(4-氟代苯氧基)-2-苯并噻唑基]氨基}甲硫代酸乙酯、3-Boc-3-甲基丙胺和TFA的混合物反应，得到所需化合物0.044g(两步的总收率39％)。LC/MS 375.0(M+1)；LC保留时间3.17min。
制备式 化合物的通用方法将N-(6-溴-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-乙基脲和所选硫代酰胺(1eq.)在正丙醇中的悬浮液于约105℃加热约16小时。将反应混合物真空浓缩，残余的粗制物质经制备性HPLC纯化。
实施例266N-乙基-N’-[7-(3-吡啶基)-4，5-二氢[1，3]噻唑并[4’，5’3，4]苯并[d][1，3]噻唑-2-基]脲将N-(6-溴-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-乙基脲(25mg，0.079mmol)和硫代烟酰胺(11mg，0.079mmol)在正丙醇(0.4ml)中的悬浮液于约105℃加热约16小时。将反应混合物真空浓缩，残余的粗制物质经制备性HPLC纯化。分离出10mg(36％)纯产物。
实施例267N-乙基-N’-(7-乙基-4，5-二氢[1，3]噻唑并[4’，5’3，4]苯并[d][1，3]噻唑-2-基)脲如上所述，但用合适的原料替代硫代烟酰胺。分离出3mg(20％)产物。制备式 化合物的通用方法将N-乙基-N’-[7-(3-R1)-4，5-二氢[1，3]噻唑并[4’，5’3，4]苯并[d][1，3]噻唑-2-基)脲和DDQ(2eq.)在甲苯中的悬浮液加热至约35℃达约3小时。将反应混合物真空浓缩并经制备性HPLC纯化。
实施例268N-乙基-N’-[7-(3-吡啶基)[1，3]噻唑并[4’，5’3，4]苯并[d][1，3]噻唑-2-基]脲将N-乙基-N’-[7-(3-吡啶基)-4，5-二氢[1，3]噻唑并[4’，5’3，4]苯并[d][1，3]噻唑-2-基]脲(10mg，0.028mmol)和DDQ(13mg，0.056mmol)在甲苯(1ml)中的悬浮液加热至约35℃达约3小时。将反应混合物真空浓缩并经制备性HPLC纯化。分离出3mg(30％)纯产物。LC/MS 356(MH+)；RP-HPLC 14.25min。
实施例269N-乙基-N’-(7-乙基[1，3]噻唑并[4’，5’3，4]苯并[d][1，3]噻唑-2-基)脲如上所述，但用N-乙基-N’-(7-乙基-4，5-二氢[1，3]噻唑并[4’，5’3，4]苯并[d][1，3]噻唑-2-基)脲作为原料。分离出16mg(23％)产物。LC/MS307(MH+)；RP-HPLC 2.88min。制备式 化合物的通用方法将N-(6-溴-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-乙基脲和所选硫代酰胺(1eq.)的THF中的悬浮液加热至约65℃达约1.5小时。泵出反应混合物，不经进一步纯化而用于下一步。
实施例270N-[7-(4-溴代苯胺基)-4，5-二氢[1，3]噻唑并[4’，5’3，4]苯并[d][1，3]噻唑-2-基]-N’-乙基脲将N-(6-溴-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1，-3-苯并噻唑-2-基)-N’-乙基脲(50mg，0.16mmol)和4-溴-苯基-硫脲(36mg，0.16mmol)在THF(1.0ml)中的悬浮液加热至约65℃达约1.5小时。泵出反应混合物，不经进一步纯化而用于下一步。
实施例271N-乙基-N’-(7-哌啶子基-4，5-二氢[1，3]噻唑并[4’，5’3，4]苯并[d][1，3]噻唑-2-基)脲如上所述，但使用哌啶基硫脲。
实施例272N-乙基-N’-[7-(甲基氨基)-4，5-二氢11，3]噻唑并[4’，5’3，4]苯并[d][1，3]噻唑-2-基]脲如上所述，但使用甲基硫脲。制备式 化合物的通用方法向N-[7-(R2)-4，5-二氢[1，3]噻唑并[4’，5’3，4]苯并[d][1，3]噻唑-2-基]-N’-乙基脲在甲苯中的悬浮液中加入DDQ(2 eq.)。将反应混合物于约20℃搅拌约2小时。真空泵出反应混合物，经制备性HPLC纯化。
实施例273N-[7-(4-溴苯胺基)[1，3]噻唑并[4’，5’3，41苯并[d][1，3]噻唑-2-基]-N’-乙基脲向N-[7-(4-溴苯胺基)-4，5-二氢[1，3]噻唑并[4’，5’3，4]苯并[d][1，3]噻唑-2-基]-N’-乙基脲(27mg，0.060mmol)在甲苯(2.0ml)中的悬浮液中加入DDQ(28mg，0.125mmol)。将反应混合物于约20℃搅拌约2小时。真空泵出反应混合物，经制备性HPLC纯化。分离出7mg(26％，2步)纯产物。LC/MS 448和450(MH+)；RP-HPLC 18.09min。
实施例274N-乙基-N’-(7-哌啶子基[1，3]噻唑并[4’，5’3，4]苯并[d][1，3]噻唑-2-基)脲正如实施例273一样，但使用合适的原料。18mg(21％，两步)。LC/MS 362(MH+)；RP-HPLC 16.97min。
实施例275N-乙基-N’-[7-(1-甲基ammonio)[1，3]噻唑并[4’，5’3，4]苯并[d][1，3]噻唑-2-基]脲乙酸盐正如实施例273一样，但使用合适的原料。分离出5mg(7％，两步)纯产物。LC/MS 308(MH+)；RP-HPLC 8.75min。
实施例2762-(3-乙基-5-甲基-2-氧代-1，3，5-三嗪烷-1-基)-4，5，6，7-四氢-1，3-苯并噻唑-7-酮向N-乙基-N’-(7-氧代-4，5，6，7-四氢-1，3-苯并噻唑-2-基)脲(10.0g，41.79mmol)在EtOH/H2O(1/1，300ml)中的悬浮液中加入甲醛(37wt％的水溶液，20.4g，417.87mmol)、甲胺(40wt％的水溶液，10.8ml，125.37mmol)和N-甲基吗啉(11.8ml，83.6mmol)。将悬浮液加热至约60℃达约5小时，则形成了溶液。真空泵出反应混合物，得到12.41g(定量的收率)纯产物。
实施例2772-(3-乙基-5-甲基-2-氧代-1，3，5-三嗪烷-1-基)-6-[(Z)-1-羟基亚甲基]-4，5，6，7-四氢-1，3-苯并噻唑-7-酮于约0℃向2-(3-乙基-5-甲基-2-氧代-1，3，5-三嗪烷-1-基)-4，5，6，7-四氢-1，3-苯并噻唑-7-酮(2.0g，6.79mmol)和甲酸乙酯(2.5ml，30.95mmol)在甲苯(60ml)中的悬浮液中加入固体NaH(60％的矿物油溶液，2.5g，30.48mmol)。将反应混合物于约0℃搅拌约7小时，然后倾至饱和氯化铵水溶液中。将产物萃取到CH2Cl2中(3次)。将合并的有机相过滤，将滤液浓缩，得到2.5g粗产物，将其不经进一步纯化而用于下一步中。制备式 化合物的通用方法向2-(3-乙基-5-甲基-2-氧代-1，3，5-三嗪烷-1-基)-6-[(Z)-1-羟基亚甲基]-4，5，6，7-四氢-1，3-苯并噻唑-7-酮在EtOH中的悬浮液中加入R2HNNH2·XH2O(4eq.)。将反应混合物于约20℃搅拌约16小时，再加入R2HNNH2·XH2O(4eq.)，将反应混合物于约40℃再搅拌约4小时，仍存在一些未保护的产物。加入第三份R2HNNH2·XH2O(8eq.)，并将反应混合物于约45℃再搅拌约7小时。泵出反应混合物，不经进一步纯化而进行到下一步。通过制备性HPLC得到分析纯样品。
实施例278N-(5，8-二氢-4H-[1，3]噻唑并[4，5-g]吲哚-2-基)-N’-乙基脲向2-(3-乙基-5-甲基-2-氧代-1，3，5-三嗪烷-1-基)-6-[(Z)-1-羟基亚甲基]-4，5，6，7-四氢-1，3-苯并噻唑-7-酮(100mg，0.31mmol)在EtOH(2.5ml)中的悬浮液中加入H2NNH2·XH2O(0.040ml，1.24mmol)。将反应混合物于约20℃搅拌约16小时，再加入H2NNH2·XH2O(0.040ml，1.24mmol)，将反应混合物于约40℃再搅拌约4小时，仍存在一些未保护的产物。加入第三份H2NNH2·XH2O(0.080ml，2.48mmol)，并将反应混合物于约45℃再搅拌约7小时。泵出反应混合物，不经进一步纯化而进行到下一步。通过制备性HPLC得到分析纯样品。LC/MS 264(MH+)；RP-HPLC 9.72min。
实施例279N-乙基-N’-(8-甲基-5，8-二氢-4H-[1，3]噻唑并[4，5-g]吲哚-2-基)脲如上所述，但使用MeHNNH2·XH2O而不是H2NNH2·XH2O。该产物在这一阶段不经进一步的纯化，而进行到下一步。制备式 化合物的通用方法向N-(5，8-二氢-4H-[1，3]噻唑并[4，5-g]吲哚-2-基)-N’-乙基脲在甲苯中的悬浮液中加入DDQ(1.1eq.)。将反应混合物于约45℃搅拌约4小时。泵出反应混合物，粗制物质经制备性HPLC纯化。
实施例280N-乙基-N’-(8H-[1，3]噻唑并[4，5-g]吲哚-2-基)脲向N-(5，8-二氢-4H-[1，3]噻唑并[4，5-g]吲哚-2-基)-N’-乙基脲(81mg，0.308mmol)在甲苯(3.5ml)中的悬浮液中加入DDQ(78mg，0.34mmol)。将反应混合物于约45℃搅拌约4小时。泵出反应混合物，粗制物质经制备性HPLC纯化。分离出3mg(4％，2步)纯产物。LC/MS262(MH+)；RP-HPLC RT 10.45min。
实施例2817-[(乙基氨基)羰基]氨基-1-甲基-1H-[1，3]噻唑并[4，5-g]吲唑-1-鎓乙酸盐如实施例280所述，但使用合适的原料。分离出6mg(2.0％，2步)纯产物。LC/MS 276(MH+)；RP-HPLC 11.70min。
实施例282N-[7，7-二(苯基硫基(sulfanyl))-4，5，6，7-四氢-1，3-苯并噻唑-2-基]-N，-乙基脲将N-乙基-N’-(7-氧代-4，5，6，7-四氢-1，3-苯并噻唑-2-基)脲(1.0g，4.18mmol)和苯硫酚(0.59ml，4.74mmol)在EtOH(20ml)中的悬浮液于约0℃用HCl(g)饱和。将反应混合物于约20℃搅拌约2小时，然后加入第二份苯硫酚(0.59ml，4.74mmol)，将反应混合物再搅拌约2小时。真空除去乙醇，并加入水。水相通过加入2M NaOH进行中和，将产物萃取到CH2Cl2中(4次)。合并的有机相经硫酸镁干燥。蒸发溶剂，得到1.85g(定量的收率)纯产物。
实施例283N-乙基-N’-[7-(苯基硫基)-4，5-二氢-1，3-苯并噻唑-2-基]脲向N-[7，7-二(苯基硫基)-4，5，6，7-四氢-1，3-苯并噻唑-2-基]-N’-乙基脲(700mg，1.59mmol)在THF(14.0ml)中的悬浮液中加入DBU(0.36ml，2.38mmol)。将反应混合物于约20℃搅拌约30分钟。真空浓缩反应物。将残余的黄色油状物溶于CH2Cl2中，用AcOH/H2O 1/10洗涤，并经硫酸镁干燥。真空除去有机溶剂，残余的油状物(1.0g)不经进一步纯化而用于下一步。
实施例284N-乙基-N’-[7-(苯基硫基)-1，3-苯并噻唑-2-基]脲向N-乙基-N’-[7-(苯基硫基)-4，5-二氢-1，3-苯并噻唑-2-基]脲(得自前一反应的粗产物，1.59mmol)在甲苯(35.0ml)中的混合物中加入DDQ(500mg，2.17mmol)。将反应混合物于约20℃搅拌约2小时。真空除去甲苯，将粗制物质溶于CH2Cl2中。有机相用0.5M NaOH(2次)洗涤，并经硫酸镁干燥。残余的油状物经硅胶快速色谱(EtOAc/CH2Cl25/95)纯化。分离出445mg(85％，两步)纯产物。LC/MS 3300(MH+)；RP-HPLCRT 17.56min。
实施例285N-乙基-N’-[7-(苯基亚硫酰基)-1，3-苯并噻唑-2-基]脲向N-乙基-N’-[7-(苯基硫基)-1，3-苯并噻唑-2-基]脲(107mg，0.32mmol)在CH2Cl2(5ml)中的悬浮液中加入MCPBA(60mg，0.24mmol，70％)。将反应混合物于约20℃搅拌约1.5小时。然后真空浓缩反应混合物。粗制反应混合物经硅胶快速色谱(EtOAc/CH2Cl210/90)纯化。分离出32mg(29％)纯产物。LC/MS 346(MH+)；RP-HPLC RT 12.96min。
实施例286N-乙基-N’-[7-(苯基磺酰基)-1，3-苯并噻唑-2-基]脲向N-乙基-N’-[7-(苯基硫基)-1，3-苯并噻唑-2-基]脲(150mg，0.46mmol)在CH2Cl2(5ml)中的悬浮液中加入MCPBA(125mg，0.50mmol，70％)。将反应混合物于约20℃搅拌约1.5小时，再加入MCPBA(60mg，0.24mmol，70％)。将反应混合物再搅拌约1小时后，真空浓缩。粗制反应混合物经硅胶快速色谱(EtOAc/CH2Cl210/90)纯化。分离出45mg(27％)纯产物。LC/MS 362(MH+)；RP-HPLC RT 14.41min。
实施例287N-(6-溴-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-(3-氯丙基)脲参见以下通用方法制备下式化合物的通用方法 (参见表1)。
向N-(6-溴-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-(3-氯丙基)脲在THF/EtOH中的混合物中加入所选的胺(10eq.)。将反应混合物于约55℃加热约16小时。泵出粗制反应混合物，经硅胶快速色谱纯化。
实施例289N-(6-溴-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-(3-哌嗪基丙基)脲向N-(6-溴-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-(3-氯丙基)脲(100mg，0.287mmol)在THF/EtOH(0.50/0.25ml)中的混合物中加入哌嗪(247mg，2.87mmol)。将反应混合物加热至约55℃达约16小时。泵出粗制反应混合物，经硅胶快速色谱纯化。表1 制备下式化合物的通用方法 ，其中R1为Br(参见表2)。
向4-([(6-溴-1，3-苯并噻唑-2-基)氨基]羰基氨基)-丁酸乙酯的THF/EtOH溶液中加入2M NaOH(10eq.)。将反应混合物于约20℃搅拌约3小时，然后加入2M HCl直至pH＜6，形成白色沉淀。滤出沉淀，用水洗涤，分离出纯产物。
实施例2994-([(6-溴-1，3-苯并噻唑-2-基)氨基]羰基氨基)丁酸向4-([(6-溴-1，3-苯并噻唑-2-基)氨基]羰基氨基)-丁酸乙酯(175mg，0.453mmol)的THF/EtOH(1/1，3ml)溶液中加入2M NaOH(2.26ml，4.53mmol)。将反应混合物于约20℃搅拌约3小时，然后加入2M HCl直至pH＜6，形成白色沉淀。滤出沉淀，用水洗涤，分离出25mg(15％)纯产物。
实施例3064-([(6-氯-1，3-苯并噻唑-2-基)氨基]羰基氨基)丁酰胺将氨气通入4-([(6-氯-1，3-苯并噻唑-2-基)氨基]羰基氨基)丁酸乙酯(155mg，0.453mmol)在MeOH(1.5ml)中的悬浮液中达约5分钟，然后将反应混合物加热至约85℃达约2小时。将该步骤重复4次。将反应混合物冷却，滤出白色沉淀。分离出62mg(44％)纯产物。制备下式化合物的通用方法 ，其中R1为Br，而R2为胺(参见表2)。
将纯净的4-([(6-溴-1，3-苯并噻唑-2-基)氨基]羰基氨基)丁酸乙酯与所选胺(10eq.)一起于约80℃加热约8小时。向粗制反应混合物中加入THF，滤出沉淀，并用THF洗涤。
实施例298N-(6-溴-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-[4-(4-甲基哌嗪基)-4-氧代丁基]脲将纯净的4-([(6-溴-1，3-苯并噻唑-2-基)氨基]羰基氨基)丁酸乙酯(100mg，0.259mmol)在N-甲基-哌嗪(259mg，2.59mmol)中于约80℃加热约8小时。向粗品反应混合物中加入THF(2ml)，滤出沉淀，并用THF(1ml)洗涤。将产物真空干燥，得到67mg(53％)纯产物。
实施例314N-[6-(5-氯-2-噻吩基)-1，3-苯并噻唑-2-基]-N’-乙基脲在40ml压力管中装入约100mg N-(6-溴-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-乙基脲和约2ml乙二醇二甲醚。所述浆液通过磁力搅棒搅拌，然后抽真空、充入氮气(3次)。接着加入约6％(摩尔)Pd(PPh3)4，然后加入约1.1eq的5-氯噻吩-2-硼酸。加入约3当量碳酸钠的0.5ml水溶液后，将悬浮液抽真空并充入氮气3次。然后将压力管密封，加热至约85-90℃达约12-20小时。将反应物冷却至室温，然后经制备性HPLC纯化，得到16％的N-[6-(5-氯-2-噻吩基)-1，3-苯并噻唑-2-基]-N’-乙基脲。1HNMR 1.1(t，3H)，3.2(m，2H)，6.75(m，1H)，7.18(d，1H)，7.38(m，1H)，7.6(m，2H)，8.19(d，1H)，10.75(br s，1H)；LC/MS 3.86min，338(M+1)，336(M-1)。
实施例315N-[6-(5-氯-2-噻吩基)-1，3-苯并噻唑-2-基]-N’-乙基脲这是制备实施例314化合物的一种替代方法。在40ml压力管中装入约32mg 5-氯噻吩-2-硼酸、约50mg N-(6-溴-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-乙基脲和作为碱的约30mg氟化钾。加入约3ml乙二醇二甲醚，将悬浮液抽真空，并充入氮气3次。在单独的烧瓶中如下制备催化剂溶液装入约31mg Pd(OAc)2和约110mg 2-二环己基膦基-2’-(N，N-二甲基氨基)联苯，然后装入约6ml乙二醇二甲醚。将烧瓶抽真空并充入氮气3次，接着搅拌成完全的溶液。然后将适量的催化剂溶液(约10-50％(摩尔)催化剂)转移到压力管中。然后将压力管抽真空并充入氮气3次，将其密封，加热至约85-90℃达约12-20小时。冷却至室温后，将澄清的溶液经制备性HPLC纯化，得到约33％的N-[6-(5-氯-2-噻吩基)-1，3-苯并噻唑-2-基]-N’-乙基脲。1H NMR 1.1(t，3H)，3.2(m，2H)，6.75(m，1H)，7.18(d，1H)，7.38(m，1H)，7.6(m，2H)，8.19(d，1H)，10.75(br s，1H)；LC/MS 3.86min，338(M+1)，336(M-1)。
实施例316N-[6-(5-氯-2-噻吩基)-1，3-苯并噻唑-2-基]-N’-乙基脲这是制备实施例314化合物的另一可替代的方法。在40ml压力管中装入约100mg N-(6-溴-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-乙基脲、约1.2当量频哪醇乙硼烷、约3当量乙酸钾和约1.5ml二甲基甲酰胺。将反应混合物抽真空并充入氮气3次。加入约5％(摩尔)PdCl2dppf，再次将反应烧瓶抽真空并充入氮气3次。将管密封，将混合物加热至约85-90℃过夜。在冷却至室温后，混合物在硅胶上纯化，得到约90％收率的N-乙基-N’-[6-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)-1，3-苯并噻唑-2-基]脲。LC/MS 3.5min，348(M+1)，346(M-1)。
在40ml压力管中装入约1.5ml乙二醇二甲醚、约10mgPd(PPh3)4和约0.016ml 2-溴-5-氯噻吩。然后将浆液抽真空并充入氮气3次。接着加入52mg N-乙基-N’-[6-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊环-2-基)-1，3-苯并噻唑-2-基]脲，再次将浆液抽真空并充入氮气3次。加入碳酸钠溶液(约0.5ml水中含约46mg)后，将悬浮液抽真空并充入氮气3次。然后将反应管密封，并加热至约85-90℃过夜。冷却至室温后，将澄清的溶液经制备性HPLC纯化，得到43％的N-[6-(5-氯-2-噻吩基)-1，3-苯并噻唑-2-基]-N’-乙基脲。1H NMR 1.1(t，3H)，3.2(m，2H)，6.75(m，1H)，7.18(d，1H)，7.38(m，1H)，7.6(m，2H)，8.19(d，1H)，10.75(br s，1H)；LC/MS 3.86min，338(M+1)，336(M-1)。
实施例317N-乙基-N’-[6-(1H-1-吡咯基)-1，3-苯并噻唑-2-基]脲将约500mg N-乙基-N’-(6-硝基-1，3-苯并噻唑-2-基)脲加入约75ml乙醇中。加入约20mg氧化铂，然后抽真空并充入氢气3次。将该体系置于氢气压(约20-40psi)下达约5-20小时。终止反应，全部物质通过硅藻土过滤，并用甲醇洗涤。真空除去溶剂，粗制N-(6-氨基-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-乙基脲不经进一步纯化而用于下一步。将约0.44gN-(6-氨基-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-乙基脲加入约15ml乙酸中，然后加入约0.23ml2，5-二甲氧基四氢呋喃。回流约1小时，然后冷却至室温。真空除去溶剂，产物经制备性HPLC纯化。1H NMR 1.1(t，3 H)，3.2(m，2H)，6.26(m，2H)，6.71(m，1H)，7.35(m，2H)，7.55(m，1H)，7.7(m，1H)，8.1(m，1H)，10.69(br s，1H)；LC/MS 3.1min，285(M-1)。
实施例318(2-氨基-1，3-苯并噻唑-6-基)甲基氰将2克4-氨基苄腈溶于约40ml乙酸中，将溶液冷却至约16℃。加入约3.3硫氰酸钾，为烧瓶配上加液漏斗。向加液漏斗中加入约2.7g溴和约5ml乙酸。然后将该暗色溶液在良好搅拌下滴加到所述苄腈溶液中，搅拌约16小时。然后在水中研磨浆液并过滤。滤饼用水充分洗涤，在稀碱水溶液中再制成浆液并过滤。滤饼再次用水充分洗涤。真空干燥后分离出约2克。
1H NMR 6.8(d，1H，J＝8.7Hz)，6.9(br s，2H)，7.6(dd，1H，J＝2Hz，J＝8.7Hz)，8.0(d，1H，J＝2Hz)，LC/MS 2.34min，174(M-1)，实验室LC保留时间7.7分钟。
实施例319N-(6-氰基-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-乙基脲将0.2克2-氨基-1，3-苯并噻唑-6-腈溶于约5ml二甲基甲酰胺中。加入约0.2ml异氰酸乙酯，然后加入约0.3ml三乙胺，在良好搅拌下将溶液加热至约80℃。将该溶液搅拌约4小时，然后冷却至室温。真空除去溶剂，固体用乙醚充分洗涤。产物经柱色谱进一步纯化，真空干燥后，分离出约0.14克。
1H NMR 1.1(t，3H，J＝7.2Hz)，3.2(m，2H)，6.8(s，1H)，7.7(m，2H)，8.4(s，1H)，11.0(s，1H)，LC/MS 2.54min，247(M+1)，245(M-1)，实验室LC保留时间7.8分钟。
实施例320N-[6-(2-氨基乙基)-1，3-苯并噻唑-2-基]-N’-乙基脲将约500mg N-(6-氰基-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-乙基脲加入约50ml乙醇和约1ml氯仿中。加入约0.1克氧化铂，然后在20-40psi氢气氛下搅拌约8小时。然后用碳酸氢钠将溶液碱化至pH＞7，通过Celite床过滤，并用乙酸乙酯充分洗涤。所得的粗产物经制备性HPLC纯化，得到未反应的N-(6-氰基-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-乙基脲和N-[6-(2-氨基乙基)-1，3-苯并噻唑-2-基]-N’-乙基脲(20％)。
1H NMR 1.08(t，3H)，2.7(m，2H)，2.9(m，2H)，3.16(m，2H)，6.8(brs，1H)，7.2(m，1H)，7.25(brs，1H)，7.5(m，1H)，7.95(m，1H)，LC/MS 2.09min，263(M-1)，265(M+1)。N-[6-(2-氨基乙基)-1，3-苯并噻唑-2-基]-N’-乙基脲与异氰酸酯反应的通用方法将0.02克N-[6-(2-氨基乙基)-1，3-苯并噻唑-2-基]-N’-乙基脲溶于约1ml二甲基甲酰胺中。加入约2当量合适的异氰酸酯，然后加入约0.02ml三乙胺，在良好搅拌下将溶液加热至约80℃。将溶液搅拌约10-24小时，然后冷却至室温。真空除去溶剂，固体用乙醚充分洗涤。产物经制备性HPLC进一步纯化并真空干燥。
实施例321N-[6-(乙基脲基)甲基)-1，3-苯并噻唑-2-基]-N’-乙基脲LC/MS 2.65min，336(M+1)，334(M-1)。
实施例322N-[6-(苯基脲基)甲基)-1，3-苯并噻唑-2-基]-N’-乙基脲1H NMR 1.08(m，3H)，2.85(m，2H)，3.25(m，2H)，3.45(m，2H)，6.1(m，1H)，6.75(m，1H)，6.8-7.3(m，5H)，7.35(m，1H)，7.45(m，1H)，7.75(s，1H)，8.43(s，1H)，10.58(br s，1H)，LC/MS 3.4min，384(M+1)。
实施例323N-[6-(乙基-2-氨基-间甲苯基脲)-1，3-苯并噻唑-2-基]-N’-乙基脲1H NMR 1.09(m，3H)，2.23(s，3H)，2.8(m，2H)，3.17(m，2H)，3.35(m，2H)，6.07(m，1H)，6.7(m，2H)，7.0-7.5(m，5H)，7.7(s，1H)，8.35(s，1H)，10.57(br s，1H)，LC/MS 3.27min，398(M+1)。
实施例324N-(8-氰基[1，3]噻唑并[5’，4’3，4]苯并[c]异噁唑-2-基)-N’-乙基脲将0.2g[2-(3-乙基-5-甲基-2-氧代-1，3，5-三嗪烷-1-基)-6-硝基-1，3-苯并噻唑-7-基]甲基氰加入到约2ml二甲基甲酰胺中。加入约15当量三乙胺，然后加入约15当量三甲基甲硅烷基氯。将溶液于室温搅拌约4-20小时。反应物通过倾至稀盐酸水溶液中进行猝灭，然后用乙酸乙酯充分萃取。合并的有机相用稀碳酸氢钠溶液反萃取，然后经硫酸镁干燥并浓缩。该深色油状物经制备性HPLC进一步纯化，得到2-(3-乙基-5-甲基-2-氧代-1，3，5-三嗪烷-1-基)[1，3]噻唑并[5’，4’3，4]苯并[c]异噁唑-8-基氰。1H NMR 1.12(m，3H)，2.55(s，3H)，3.4(m，2H)，4.39(s，2H)，5.16(s，2H)，7.9(d，1H)，7.95(d，1H)，LC/MS 2.6min，343(M+1)。
然后，上述产物用4NHCl的二噁烷溶液脱保护。因此，将所述产物溶于约2ml 4NHCl的二噁烷溶液中。搅拌约2-8小时后，将粗制反应混合物倾至冰中，在水和醚之间分离。用醚进一步萃取后，合并的有机层用硫酸镁干燥并浓缩，产物经制备性HPLC进一步纯化。1H NMR 1.11(t，3H)，3.22(m，2H)，6.8(br s，1H)，7.9(d，2H)，11.25(br s，1H)，LC/MS 2.24min，288(M+1)。制备脲的通用方法将0.2克[(6-氰基-1，3-苯并噻唑-2-基)氨基]甲硫代酸甲酯溶于约5ml链烷醇中。加入0.04ml吡啶，然后加入过量的合适的胺，将溶液在良好搅拌下加热至约80℃。将溶液搅拌约14小时，然后冷却至室温。真空除去溶剂。产物经制备性HPLC进一步纯化，然后真空干燥。如有必要，通过溶于链烷醇中，然后将链烷醇溶剂中的适量马来酸溶液加入到该溶液中，制备马来酸盐。冷却后，收集作为沉淀的马来酸盐产物。
实施例325N-(6-氰基-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-[3-(4-甲基哌嗪基)丙基]脲1H NMR 1.6(m，2H)，2.1(s，3H)，2.3(m，2H)，2.7(br s，4H)，2.9(br s，4H)，3.1(m，2H)，7.65(m，1H)，7.95(m，2H)，8.35(br s，1H)，8.45(br s，1H)，LC/MS 1.50min，359(M+1)。
实施例326N-(6-氰基-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-(2-吗啉代乙基)脲1H NMR 1.9(s，3H)，2.42(m，6H)，3.58(m，4H)，6.85(br s，1H)，7.73(m，2H)，8.43(s，1H)，9.8(br s，1H)，LC/MS 1.54min，332(M+1)。
实施例327N-(6-氰基-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-(3-(9-苄基-9-氮杂二环[3.3.1]壬基))脲1H MR 1.48(m，2H)，1.6-2.0(m，8H)，2.85(br s，2H)，3.82(br s，2H)，4.45(m，1H)，6.7(br s，1H)，7.22(m，1H)，7.35(m，4H)，7.75(m，2H)，8.46(s，1H)，10.9(br s，1H)。LC/MS 2.16min，432(M+1)。
实施例328N-(6-氰基-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-[6-(4-甲基哌嗪基)-3-吡啶基]脲1H NMR 2.84(s，3H)，3.1(br s，4H)，3.49(br s，2H)，4.32(br s，2H)，6.125(s，2H)，6.99(d，1H)，7.8(m，3H)，8.28(s，1H)，8.48(s，1H)，9.17(s，1H)，9.76(br s，1H)。LC/MS 2.62min，394(M+1)，392(M-1)。
实施例329N-(6-氰基-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-(3-(8-苄基-8-氮杂二环[3.2.1]辛基))脲1H NMR 1.5-1.8(m，6H)，2.05(m，2H)，3.15(m，2H)，3.36(br s，2H)，3.95(m，1H)，6.7(br s，1H)，7.35(m，5H)，7.74(m，2H)，8.46(s，1H)，10.9(br s，1H)。LC/MS 2.86min，418(M+1)，416(M-1)。
实施例330N-(6-氰基-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-(甲基-3-(8-苄基-8-氮杂二环[3.2.1]辛基))脲1H NMR 1.3-1.6(m，6H)，1.8(br s，1H)，1.9(br s，2H)，3.1(m，2H)，3.2(m，2H)，3.5(br s，2H)，6.8(br s，1H)，7.35(m，5H)，7.74(m，2H)，8.45(s，1H)，11.8(br s.1H)。LC/MS 3.09min，432(M+1)，430(M-1)。
实施例3314-[([(6-氰基-1，3-苯并噻唑-2-基)氨基]羰基氨基)甲基]-1-哌啶羧酸叔丁酯1H NMR 1.1(m，2H)，1.38(s，9H)，1.62(m，3H)，2.7(m，2H)，3.1(m，2H)，3.95(m，2H)，6.9(br s，1H)，7.74(m，2H)，8.45(s，1H)，11.0(br s，1H)。LC/MS 2.61min，414(M-1)。
实施例332N-(6-氰基-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-(4-哌啶基甲基)脲1H NMR 1.1(m，2H)，1.6(m，3H)，3.1(m，4H)，3.4(m，4H)，7.32(br s，1H)，7.6(d，1H)，7.67(d，1H)，7.95(s，1H)，8.31(br s，1H)。LC/MS 1.54min，316(M+1)。
实施例3334-[2-([(6-氰基-1，3-苯并噻唑-2-基)氨基]羰基氨基)乙基]-1-哌嗪羧酸叔丁酯1H NMR 1.4(s，9H)，1.9(s，3H)，2.4(m，6H)，3.3(m，4H)，6.85(br s，1H)，7.74(m，2H)，8.45(s，1H)，11.2(br s，1H)，DMSO或水峰下的其它信号。LC/MS 2.81min，431(M+1)，429(M-1)。
实施例334N-(6-氰基-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-(2-哌嗪基乙基)脲1H NMR 1.9(s，6H)，2.4(m，6H)，2.75(m，4H)，3.3(m，2H)，3.5(br s，1H)，7.15(br s，1H)，7.7(m，2H)，7.95(s，1H)，8.4(s，1H)。LC/MS 2.58min，331(M+1)，329(M-1)。
实施例335N-(6-氰基-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-[4-(4-甲基哌嗪基)环己基]脲极性较强的(反式)1H NMR 1.2(m，4H)，1.8(m，2H)，1.91(s，3H)，1.93(m，2H)，2.33(m，与DMSO重叠)，3.36(m，与水重叠)，6.7(m，1H)，7.7(m，2H)，8.45(s，1H)，10.8(m，1H)，DMSO或水下的其它信号。LC/MS 1.64min，399(M+1)。
实施例336N-(6-氰基-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-[4-(4-甲基哌嗪基)环己基]脲极性较弱的(顺式)1H NMR 1.55-1.75(m，4H)，2.2(m，与DMSO重叠)，3.85(m，1H)，6.95(m，1H)，7.7(m，2H)，8.46(s，1H)，10.65(m，1H)，DMSO或水下的其它信号。LC/MS 1.75min，399(M+1)。
实施例337N-(6-氰基-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-(3-哌啶子基丙基)脲1H NMR 1.35(m，2H)，1.6(m，4H)，1.75(m，2H)，1.9(s，3H)，2.3(m，6H)，3.25(m，2H)，6.9(m，1H)，7.7(m，2H)，8.4(s，1H)，10.8(br s，1H)，LC/MS1.69min，344(M+1)。
实施例3382-[(乙基氨基)羰基]氨基-1，3-苯并噻唑-6-羧酸将约60 mg N-(6-氰基-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-乙基脲加入到约5ml约2N KOH水溶液和二噁烷的约1∶1混合物中。然后使反应混合物回流约12-24小时。冷却后，将反应混合物倾至约25ml稀酸水溶液中。通过过滤收集白色沉淀，并用水充分洗涤。1H NMR 1.09(t，3H)，3.19(m，2H)，6.79(br s，1H)，7.65(d，1H)，7.92(m，1H)，8.48(d，1H)，11.0(br s，1H)，12.8(br s，1H)；LC/MS 2.12min，266(M+1)，264(M-1)，实验室LC保留时间4.7分钟。
实施例339N-(6-溴-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-乙基脲将约5g 4-溴苯胺溶于约100ml乙酸中，将溶液冷却至约16℃。加入约5.6g硫氰酸钾，为烧瓶配上加液漏斗。在加液漏斗中装入约4.7g溴和约20ml乙酸。然后将该暗色溶液在良好搅拌下滴加到所述苄腈溶液中，将其搅拌约6-20小时。然后在水中研磨该浆液并过滤。滤饼用水、稀碱然后用水充分洗涤，并且过滤。LC/MS证实产物是6-溴-1，3-苯并噻唑-2-胺和硫氰酸2-氨基-1，3-苯并噻唑-6-基酯的混合物，将其不经进一步纯化而进行到下一步。
将约0.75g 6-溴-1，3-苯并噻唑-2-胺(粗制品)溶于约15ml DMF中。加入约0.5ml异氰酸乙酯，然后加入约0.9ml三乙胺，将该溶液在良好搅拌下加热至约80℃。将该溶液搅拌约4小时，然后冷却至室温。真空除去溶剂，固体用乙醚充分洗涤。产物经柱色谱进一步纯化。1H NMR 1.08(t，3H)，3.19(m，2H)，6.71(s，1H)，7.48(m，1H)，7.54(d，1H)，8.13(d，1H)，10.75(br s，1H)；LC/MS 3.78 min，301(M+1)，实验室LC保留时间8.9分钟。
实施例340硫氰酸2-(((乙基氨基)羰基)氨基)-1，3-苯并噻唑-6-基酯也从实施例的反应混合物中分离出标题化合物。1H NMR 1.09(t，3H)，3.19(m，2H)，6.75(s，1H)，7.62(m，1H)，7.71(d，1H)，8.3(d，1H)，10.9(br s，1H)；LC/MS 3.0min，279(M+1)，实验室LC保留时间7.8分钟。
实施例3412-[(乙基氨基)羰基]氨基-1，3-苯并噻唑-6-甲酰胺将约1g N-(6-氰基-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-乙基脲加入到约30ml链烷醇水液中。加入约0.6g盐酸羟胺和约0.45g碳酸钠，然后加热至回流。将溶液回流约4-8小时，然后冷却至室温。经过滤回收沉淀并用水充分洗涤。LC/MS显示为两种产物的混合物，所述产物在经制备性HPLC进一步纯化后被鉴定如下1H NMR 1.09(t，3H)，3.16(m，2H)，5.8(s，2H)，7.1(br s，1H)，7.55(d，1H)，7.67(m，1H)，8.1(d，1H)；LC/MS 2.1min，265(M+1)，263(M-1)。
2-[(乙基氨基)羰基]氨基-1，3-苯并噻唑-6-甲酰胺肟也从实施例的反应混合物中分离出该标题化合物。1H NMR 1.09(t，3H)，3.19(m，2H)，5.81(br s，2H)，6.72(br s，1H)，7.57(d，1H)，7.68(m，1H)，8.13(d，1H)，9.58(s，1H)，10.7(br s，1H)；LC/MS 2.04min，278(M-1)。
实施例342N-乙基-N’-[6-(5-甲基-1，2，4-噁二唑-3-基)-1，3-苯并噻唑-2-基]脲将约50mg 2-[(乙基氨基)羰基]氨基-1，3-苯并噻唑-6-甲酰胺肟加入到约1ml冰乙酸中。将混合物加热至约110℃，然后在该温度下搅拌约12-20小时。将溶液冷却至室温，并真空除去溶剂。然后残余物经制备性HPLC进一步纯化。1H NMR 1.10(t，3H)，2.67(s.3H)，3.17(m，2H)，6.74(s，1H)，7.73(d，1H)，7.97(d，1H)，8.53(s，1H)，10.9(s，1H)；LC/MS 2.69min，304(M+1)，302(M-1)。
实施例343N-(6-苯胺基-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-乙基脲将约150mg N-(6-氨基-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-乙基脲和约285mg三苯基铋(bismuthane)加入到约15ml二氯甲烷中。加入约0.1ml三乙胺，然后加入约120mg乙酸铜(II)。将混合物于室温搅拌约12-24小时。将溶液倾至约60ml稀酸水溶液中，然后于室温搅拌约1小时。粗制混合物用二氯甲烷萃取，合并的有机层依次用稀酸水溶液、水和稀碳酸钾水溶液洗涤，然后干燥。
减压除去溶剂。粗制混合物经制备性HPLC进一步纯化。1H NMR 1.09(t，3H)，3.18(m，2H)，6.69(s，1H)，6.78(m，2H)，7.04(d，2H)，7.09(m，1H)，7.21(m，2H)，7.49(d，1H)，7.55(d，1H)，8.13(s，1H)，10.46(br s，1H)；LC/MS 3.06min，313(M+1)，311(M-1)。
实施例344N-[6-(氨基甲基)-1，3-苯并噻唑-2-基]-N’-乙基脲将约0.05g N-(6-氰基-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-乙基脲加入到约10ml乙二醇二甲醚中。在约12-24小时内分数次加入约50mg氢化铝锂。浆液用约5-10ml乙酸乙酯然后用约1-2ml饱和硫酸钠水溶液猝灭。然后用水将其稀释，用乙酸乙酯萃取。干燥和减压除去溶剂后，产物通过制备性HPLC分离。1H NMR 1.08(t，3H)，1.88(s，3H)，3.17(m，2H)，3.83(s，2H)，7.07(m，1H)，7.32(m，1H)，7.54(d，1H)，7.8(s，1H)；LC/MS1.86min，251(M+1)，249(M-1)。
实施例345N-[6-(乙基脲基)甲基)-1，3-苯并噻唑-2-基]-N’-乙基脲将约0.025g的N-[6-(氨基甲基)-1，3-苯并噻唑-2-基]-N’-乙基脲溶于约1ml二甲基甲酰胺中。加入约0.015ml异氰酸乙酯，然后加入约0.029ml三乙胺，将溶液在良好搅拌下加热至约80℃。将溶液搅拌约4小时，然后冷却至室温。真空除去溶剂，固体用乙醚充分洗涤。1H NMR1.0(t，3H)，1.09(t，3H)，3.0(m，2H)，3.2(m，2H)，4.25(d，2H)，5.86(m，1H)，5.33(br s，1H)，6.3(m，1H)，6.7(m，1H)，7.23(m，1H)，7.53(d，1H)，7.69(d，1H)，10.6(br s，1H)；LC/MS 1.43min，322(M+1)。
实施例346N-乙基-N’-[6-(2H-1，2，3，4-四唑-5-基)-1，3-苯并噻唑-2-基]脲将约30mg N-(6-氰基-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-乙基脲加入到约5ml干燥的四氢呋喃中。加入约2g叠氮基三丁基锡烷，然后回流约48-72小时。减压除去溶剂，然后将粗制油状物溶于二氯甲烷中。加入约0.5ml稀盐酸水溶液，形成白色沉淀。让其静止约30分钟，然后通过过滤收集沉淀，用温热的THF洗涤，然后真空干燥。1H NMR 1.10(t，3H)，3.2(m，2H)，6.76(br s，1H)，7.78(d，1H)，8.0(d，1H)，8.58(s，1H)，10.91(s，1H)；LC/MS 1.37min，290(M+1)。
实施例347N1-[(2-[(乙基氨基)羰基]氨基-1，3-苯并噻唑-6-基)甲基]-1-苯磺酰胺将约0.015g N-[6-(氨基甲基)-1，3-苯并噻唑-2-基]-N’-乙基脲溶于约1ml二氯甲烷中。冷却至约0-5℃，然后加入约0.01ml三乙胺，然后加入约1.2当量合适的磺酰氯。将反应物温热至室温，然后搅拌约12-24小时。减压除去溶剂，粗制反应物经制备性HPLC进一步纯化。1H NMR 1.08(t，3H)，3.19(m，2H)，4.05(d，2H)，6.71(br s，1H)，7.20(m，1H)，7.5(d，1H)，7.54-7.65(m，4H)，7.8(d，1H)，8.16(m，1H)，10.6(br s，1H)；LC/MS 1.98min，391(M+1)。
实施例348N-[(2-[(乙基氨基)羰基]氨基-1，3-苯并噻唑-6-基)甲基]三氟甲磺酰胺也从实施例347的反应混合物中分离出标题化合物。1H NMR 1.09(t，3H)，3.18(m，2H)，4.4(s，2H)，6.71(m，1H)，6.6(d，1H)，7.32(m，1H)，7.81(s，1H)，9.93(br s，1H)，10.68(br s，1H)；LC/MS 2.15min，383(M+1)。
实施例349N6-苯基-2-[(乙基氨基)羰基]氨基-1，3-苯并噻唑-6-甲酰胺将约0.2g 2-[(乙基氨基)羰基]氨基-1，3-苯并噻唑-6-羧酸溶于约20ml二氯甲烷和约0.2ml三乙胺中。加入约1 eq合适的胺，然后加入约0.3g盐酸1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐，然后于室温搅拌约12-24小时。减压除去溶剂，然后粗制反应混合物经制备性HPLC纯化。1H NMR 1.10(t，3H)，3.2(m，2H)，6.76(br s，1H)，7.10(m，1H)，7.36(m，2H)，7.70(d，1H)，7.79(d，2H)，7.97(m，1H)，8.5(s，1H)，10.23(s，1H)，10.9(br s，1H)；LC/MS 2.86min，341(M+1)；实施例350N6-[3-(4-甲基哌嗪基)丙基]-2-[(乙基氨基)羰基]氨基-1，3-苯并噻唑-6-甲酰胺也从实施例的反应混合物中分离出标题化合物。1H NMR 1.09(t，3H)，1.76(m，2H)，2.6-2.7(m，4H)，3.2(m，4H)，3.3(m，4H)，3.42(m，2H)，6.12(s，4H)，6.75(m，1H)，7.64(d，1H)，7.84(m，1H)，8.34(d，1H)，8.49(m，1H)，10.9(br s，1H)，在溶剂峰下只有一个甲基；LC/MS 1.34min，405(M+1)。制备脲的通用方法将0.2克[(6-氰基-1，3-苯并噻唑-2-基)氨基]甲硫代酸甲酯溶于约5ml链烷醇中。加入约0.04ml吡啶，然后加入过量的合适的胺，将溶液在良好搅拌下加热至约80℃。将溶液搅拌约14小时，然后冷却至室温。真空除去溶剂。产物经制备性HPLC进一步纯化，然后真空干燥。必要时，通过溶于链烷醇中，然后将同一链烷醇溶剂中的适量马来酸加入到该溶液中，制备马来酸盐。冷却后，收集作为沉淀的马来酸盐产物。
实施例351N-(6-氰基-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-[6-(4-甲基哌嗪基)-3-吡啶基]脲1H NMR 2.84(s，3H)，3.1(br s，4H)，3.49(br s，2H)，4.32(br s，2H)，6.125(s，2H)，6.99(d，1H)，7.8(m，3H)，8.28(s，1H)，8.48(s，1H)，9.17(s，1H)，9.76(br s，1H)。LC/MS 2.62min，394(M+1)，392(M-1)。
实施例352N-(6-甲基氰基-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-乙基脲将约1g(2-氨基-1，3-苯并噻唑-6-基)甲基氰溶于约10ml二甲基甲酰胺中。加入约0.8ml异氰酸乙酯，然后加入约1.4ml三乙胺，将溶液在良好搅拌下加热至约80℃。将溶液搅拌约4-6小时，然后冷却至室温。减压除去溶剂，固体用乙醚充分洗涤。产物从热EtOAc中重结晶。1H NMR 1.09(t，3H)，3.1(m，2H)，4.1(s，2H)，6.72(m，1H)，7.32(m，1H)，7.61(d，1H)，7.85(s，1H)，10.7(s，1H)；LC/MS 2.73min，261(M+1)，259(M-1)。
实施例353N-[6-(二[(5-甲基-2-呋喃基)甲基]氨基甲基)-1，3-苯并噻唑-2-基]-N’-乙基脲将约10mg N-(6-氨基甲基-1，3-苯并噻唑-2-基)-N’-乙基脲溶于约1ml二氯甲烷、3μl乙酸和4μl5-甲基-2-糠醛中。于室温搅拌约1小时，然后加入约0.013g三乙酰氧基硼氢化钠。将混合物于室温搅拌约12-20小时。反应物在约5ml水中研磨，然后用二氯甲烷充分萃取。合并的有机层经硫酸镁干燥，然后减压除去溶剂。粗制混合物经制备性HPLC进一步纯化。1H NMR 1.10(t，3H)，1.8(s，3H)，2.2(s，6H)，3.1(m，2H)，3.5(s，4H)，3.6(s，2H)，6.0(m，2H)，6.2(m，2H)，7.29(m，1H)，7.4(brs，1H)，7.5(m，1H)，7.7(s，1H)；LC/MS 2.87min，439(M+1)。从取代的苯胺开始制备式 化合物的通用方法向取代的苯胺例如4-(对氟苯硫基)苯胺和硫氰酸钾(～2eq.)在冰乙酸的搅拌溶液中，于室温下滴加溴(～1eq.)的冰乙酸溶液。将反应混合物搅拌约24小时。通过过滤除去固体(KBr)，将所得的溶液真空浓缩，得到作为氢溴酸盐的相应苯并噻唑基化合物。HPLC RT＝3.3min，MH+277。
向得自前一步骤的苯并噻唑基化合物和三乙胺(～2eq.)在甲苯中的搅拌溶液中加入异氰酸乙酯(～1.5eq.)。将反应混合物于约80℃加热约2天。在烧结漏斗上收集沉淀的产物，用乙醚洗涤并真空干燥。HPLCRT 3.61min，MH+349。
以下实施例按照上文所述方法合成。
权利要求
1.一种式(I)的化合物， 其外消旋-非对映体混合物、其旋光异构体、其前体药物、其同位素或所述化合物、异构体、前体药物和同位素的药学上可接受的盐，其中，Q为H或代表一个键，该键将X1与同Q和X1连接的两个氮原子以及与所述两个氮原子连接的C＝Y基团结合在一起形成 Q1为(C1-C6)烷基；Y为O或S；W为H、Cl、Br、I、NO2、CN、SCN、OCF3、-Xq-(C(R10)2)a-Y1q-(C(R10)2)a-Z1q、或任选取代的选自以下的基团烷基、链烯基、链炔基、杂环基-链烯基和杂环基-链炔基；Y1和X分别独立选自苯基、杂环基、NR10、O、S、SO、SO2、CF2、CFR、C＝O、(C＝O)NR10、SONR10、SO2NR10、NR10(C＝O)、NR10SO、NR10SO2、NR10SO2NR10、NR10(C＝O)NR10、 和 q每次出现时独立地为0或1；a每次出现时独立地为0或1-5的整数；R10每次出现时独立选自H、任选取代的芳基、任选取代的杂环基和任选被以下一个或多个取代基取代的任选取代的烷基任选被一个或多个羟基、卤代基或任选取代的氨基取代的C1-6烷基；任选被一个或多个羟基、卤代基或任选取代的氨基取代的C1-6烷氧基；羟基；卤代基；或任选取代的氨基；Z1为H、任选取代的烷基、任选取代的芳基或任选取代的杂环基；X1为氢、烷基、羟基烷基或代表与以下所述的R3结合在一起的键或代表与以上所述的Q结合在一起的键；R1和R2分别独立地为氢、卤素、羟基、硝基、氰基、COOH、COOX3、SX3、SO2X3、SOX3、C(O)X3、NHC(O)X3、C(O)NHX3、NHSO2X3或选自任选取代的以下基团烷基、链烯基、链炔基、烷氧基、氨基、NHX3、NX3X3、烷基氨基、芳基氨基、杂环基氨基、烷硫基、烷基磺酸酯基(sulfonato)、芳基、芳氧基、芳基烷基、芳基链烯基、芳基链炔基、芳烷氧基、杂环基、杂环氧基、杂环基-烷基、杂环基-链烯基、杂环基-链炔基、杂环基-烷氧基、杂环硫基、杂环基亚硫酰基、杂环基磺酰基、环烷基、-(CH2)m-(CHX2)CN、-(CH2)m-(CHX2)COOH、-(CH2)m-(CHX2)COOX3、-(CH2)m-(CHX2)SO2X3、-(ch2)m-(CHX2)C(O)X3、-(CH2)m-(CHX2)C(O)NHX3和-(CH2)m-(CHX2)NHSO2X3；其中m为0-4；X2每次出现时独立地为H或任选取代的选自以下的部分烷基、链烯基、链炔基、羰基、S(O)p烷基、S(O)p芳基、S(O)p杂环基、氨基、烷氧基、烷硫基、芳硫基、全卤代烷基、芳基、芳氧基、芳基烷基、芳烷氧基、杂环基和杂环基-烷基；p为0、1或2；X3每次出现时独立地为H或任选取代的选自以下的部分一或二烷基氨基、烷基、链烯基、链炔基、芳基、芳基烷基、杂环基和杂环基-烷基；或当R1在苯并噻唑环的7位时，R1和W可以与连接它们的碳原子结合在一起形成任选取代的5-或6-元杂环；R3为氢或任选取代的选自以下的部分羰基、烷基、链烯基、链炔基、环烷基、芳基、芳基烷基、杂环基、杂环基-烷基、杂环基-杂环基、杂环基-环烷基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、烷氧基、硫代烷氧基和酰基；或R3和X1与连接它们的氮原子结合在一起形成 或 其中Z每次出现时独立选自氧代基或任选取代的选自以下的部分-C(O)(C1-C6)烷基、-C(O)芳基、-C(O)N(C1-C6)烷基、-C(O)N-芳基、(C1-C6)烷基、(C2-C6)链烯基、(C2-C6)链炔基、氨基、一-或二-(C1-C6)烷基氨基、-COO(C1-C6)烷基、吡啶基、苯基、苯基(C1-C6)烷基和苯基(C1-C6)链烯基；其中每个上述任选取代的部分任选地被分别独立选自以下的一个或多个取代基取代氧代基、氨基、硝基、一-或二-(C1-C6)烷基氨基、羟基、腈、氯、氟、溴、碘、CF3、(C1-C6)烷基、-C(O)(C1-C6)烷基、-COOH、-COO(C1-C6)烷基、-S-(C1-C6)烷基、-S-芳基、(C1-C6)烷氧基、-SO2NH2、苯基、苯基(C1-C6)烷基、-O-(C1-C6)烷基-OH、-O-(C1-C6)烷基-O-(C1-C6)烷基、-O(C2-C6)烷基-N-((C1-C6)烷基)n、-N-(C1-C6)烷基-OH、-N-(C1-C6)烷基-O-(C1-C6)烷基、-C(O)NH2、-C(O)N((C1-C6)烷基)n、-S(O)n(C1-C6)烷基、-S(O)n芳基、-S(O)n杂环基和杂环基，其中此中所述的烷基在所述烷基部分任选具有一个或多个不饱和键；n为0、1或2；其条件是1)当Q为H；Y为O；R1和R2分别为氢、卤素、烷基、烷氧基、烷硫基、羧基烷基或任选取代的苯基；并且X1为氢或烷基时；则R3不是烷基、链烯基、烷氧基、环烷基或任选取代的苯基；2)当Q为H；Y为O；R1和R3分别为氢、卤素、烷基、烷氧基、烷硫基、羧基烷基或任选取代的苯基时；则X1和R3不结合在一起形成 3)当W为Cl、Br或I；Q为氢；Y为O；X1为H时；则R3不是 或任选被独立选自以下的1-3个取代基取代的苯基氨基、一-或二-(C1-C6)烷基氨基、羟基、氯、氟、溴、碘、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基和-SO2NH2；4)当W为Cl、Br或I；Q为H；R1为7-Cl；R2为H；并且X1为烷基时；则R3不是烷基、烷氧基或环烷基；5)当W为Cl、Br或I；Q为H；R1为7-Cl；R2为H；并且X1为H时；则R3不是烷基或环烷基氨基；6)当W为Cl、Br、I或NO2；Q为H；Y为O；X1为H；R1为OH；R2为NO2、氨基、烷基、烷氧基、羟基低级烷基或二烷基氨基时；则R3不是H或烷基；7)当W为Cl、Br或I；Q为H；Y为O；R1为CF3、CH2F、NO2、烷基或烷氧基；R2为H；X1为H时；则R3不是任选被卤代基、CF3、烷基或烷氧基取代的萘基或苯基；8)当W为Cl、Br或I；Q为H；R1为烷基；R2为H；X1为H或烷基时；则R3不是烷基或烷氧基；9)当W为Cl；Q为H；Y为S；R1和R2分别为H；X1为H时；则R3不是乙基；10)当W为Cl；Q为H；Y为O；R1和R2分别为H；X1为H时；则R3不是正丁基；并且11)当W为H时，则R1和R2不同时是H。
2.一种权利要求1的化合物、其外消旋-非对映体混合物、其旋光异构体、其前体药物、其同位素或所述化合物、异构体、前体药物和同位素的药学上可接受的盐，其中所述烷基、链烯基和链炔基部分和一个部分的烷基部分是任选取代的具有1-8个碳原子的直链或支链；所述芳基部分和一个部分的芳基部分是任选取代的苯基、 或萘基；所述杂环基部分和一个部分的杂环基部分选自任选取代的哌啶基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噻吩基、吡咯烷基、哌嗪基、硫代吗啉基、吗啉基、2，3，4，5-四氢呋喃基、1，3-二噁烷基、1，4二噁烷基、呋喃基和1，2，4-三唑基、四唑基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、噁唑基、噁二唑基、噻二唑基、苯并咪唑基、1，3-二氧戊环基、2-咪唑啉基、咪唑烷基、2-吡唑啉基、吡唑烷基、异噻唑基、1，2，3-三唑基、2H-吡喃基、4H-吡喃基、1，4-二噻烷基、1，3，5-三嗪基、1，3，5-三噻烷基、吲哚基、异吲哚基、3H-吲哚基、二氢吲哚基、嘌呤基、4H-喹嗪基、噌啉基、2，3-二氮杂萘基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、1，8-二氮萘基、蝶啶基、奎宁环基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、吡咯基、异噁唑基、哒嗪基、吲唑基、苯并噁唑基、苯并呋喃基、苯并噻唑基、中氮茚基、咪唑并吡啶基和苯并噻吩基。
3.一种权利要求2的化合物、其外消旋-非对映体混合物、其旋光异构体、其前体药物、其同位素或所述化合物、异构体、前体药物和同位素的药学上可接受的盐，其中R3是任选取代的选自以下的部分(C1-C8)烷基、苯基、苯基(C1-C8)烷基、噻吩基、噻吩基(C1-C8)烷基、哌啶基、哌啶基(C1-C8)烷基、吡咯烷基、吡咯烷基(C1-C8)烷基、吗啉基、吗啉基(C1-C8)烷基、2，3，4，5-四氢呋喃基、2，3，4，5-四氢呋喃基(C1-C8)烷基、呋喃基、呋喃基(C1-C8)烷基、环烷基、环烷基(C1-C8)烷基、吡啶基、吡啶基(C1-C8)烷基、1，2，4-三唑基、1，2，4-三唑基(C1-C8)烷基、 和
4.一种式(IA)的化合物 其外消旋-非对映体混合物、其旋光异构体、其前体药物、其同位素或所述化合物、异构体、前体药物和同位素的药学上可接受的盐，其中W为NO2或CN；Y为O或S；R1在7位并且为氢、甲基、乙基、烯丙基、苯基、苄基、-CH2-C(O)-CH3、-CH2-CO2-t-Bu、-CH2-SO2-芳基、-烷基-CN或-烷基(CN)(CH2-芳基)；X1为氢、烷基或羟基烷基；R3选自乙基、正丁基、叔丁基、正丙基、烯丙基、羟基烷基、氨基烷基、-烷基-NH-烷基-OH、-烷基-O-烷基-OH、二羟基烷基、烷氧基烷基、(烷硫基)羟基烷基、环烷基、环烷基烷基、羟基环烷基、(烷硫基)(烷基酯)烷基、烷基酯烷基、2，4-二甲氧基苯基、3，5-三氟甲基苯基、3-氯苯基、4-氯苯基、2，6-二氯苯基、2-甲基苯基、3-甲基苯基、(取代的苯基)烷基、苯基烷基、杂环基烷基、N-烷基氨基烷基、N，N-二烷基氨基烷基、任选取代的杂环基和任选取代的杂环基烷基。
5.一种权利要求4的化合物、其外消旋-非对映体混合物、其旋光异构体、其前体药物、其同位素或所述化合物、异构体、前体药物和同位素的药学上可接受的盐，其中R1为氢，且X1为氢。
6.一种权利要求4的化合物、其外消旋-非对映体混合物、其旋光异构体、其前体药物、其同位素或所述化合物、异构体、前体药物和同位素的药学上可接受的盐，其中W为NO2；Q为氢；R1在7位并且为氢、甲基、乙基或苯基；R2分别为氢；X1为氢；且R选自乙基、n-Bu、t-Bu、n-Pr、烯丙基、环丙基、环丁基、2，4-二甲氧基苯基、3，5-双-三氟甲基苯基、3-氯苯基、4-氯苯基、2，6二氯苯基、2-甲基苯基和3-甲基苯基。
7.一种权利要求3的化合物、其外消旋-非对映体混合物、其旋光异构体、其前体药物、其同位素或所述化合物、异构体、前体药物和同位素的药学上可接受的盐，其中Q为H；W为NO2；Y为S；R1在7位，并且为氢、-CH2-SO2-苯基、-CH2-CN、-CH(CH3)(CN)或CH(CN)(CH2-苯基)；R2为氢；X1为氢、甲基或-(CH2)2-OH；R3选自乙基、苄基、EtOH、n-PrOH、n-BuOH、正戊醇、正己醇、-(CH2)2-NH-(CH2)2-OH、-(CH2)2-O-(CH2)2-OH、-CH(CH2CH3)(CH2OH)、-CH(CH2OH)(CH2-i-Pr)、2，3-二羟基-丙基、2-羟基丙基、-CH(CH3)(CH2OH)、-C(CH3)2(CH2OH)、-CH2(CH3)(CH2OCH3)、1，3-二羟基异丙基、-CH(CH2OH)(CH2CH2SCH3)、环丙基、环丙基甲基、4-羟基环己基、3-氯苯基、4-氯苯基、2-甲基苯基、3-甲基苯基、4-氨基苄基、(4-氨基苯基)乙基、-(CH2)3-N(Et)2、-(CH2)2-N(Me)2、N-哌啶基、2，6-二甲基哌啶基、 和
8.一种权利要求3的化合物、其外消旋-非对映体混合物、其旋光异构体、其前体药物、其同位素或所述化合物、异构体、前体药物和同位素的药学上可接受的盐，其中Y为O；R1在7位并且为氢、-CH2-SO2-苯基、-CH2-CN、-CH(CH3)(CN)或-CH(CN)(CH2-苯基)；R2为氢；X1为氢、甲基或-(CH2)2-OH；R3选自苄基、EtOH、n-PrOH、t-BuOH、正己醇、氨基乙基、氨基丙基、-(CH2)2-NH-(CH2)2-OH、-(CH2)2-O-(CH2)2-OH、-CH(CH2CH3)(CH2OH)、-CH(CH2OH)(CH2-i-Pr)、2，3-二羟基-丙基、2-羟基丙基、-CH(CH3)(CH2OH)、1，3-二羟基异丙基、-CH(CH2OH)(CH2CH2SCH3)、环丁基、4-羟基环己基、-CH(COOEt)(CH2)2-SCH3、-(CH2)2-COOEt、-(CH2)5-COOEt、(2-氨基苯基)甲基、4-氨基苄基、(4-氨基苯基)乙基、-C(CH3)2(苯基)、-CH2(2，4-二氟苯基)、2-吡啶基甲基、3-吡啶基甲基、4-吡啶基甲基、-(CH2)2-噻吩-2-基、-CH(i-Pr)(COOEt)、-CH(i-Pr)(CH2OH)、3-(N-甲基氨基)丙基、-(CH2)3-N(Et)2、-(CH2)4-N(Et)2、-CH(Me)(CH2)4-CH3、-CH(Me)(CH2)3-N(Et)2、N-哌啶基、-(CH2)2-(4-(SO2NH2)苯基)、2，6-二甲基哌啶基、 和
9.一种权利要求3的化合物、其外消旋-非对映体混合物、其旋光异构体、其前体药物、其同位素或所述化合物、异构体、前体药物和同位素的药学上可接受的盐，其中W为NO2；Q为氢；R1在7位并且为-CH2-CO2-t-Bu、烯丙基或苄基；R2分别为氢；X1为氢；且R3为乙基。
10.一种权利要求3的化合物、其外消旋-非对映体混合物、其旋光异构体、其前体药物、其同位素或所述化合物、异构体、前体药物和同位素的药学上可接受的盐，其中W为NO2；R1在7位并且为氢、-CH(CH3)(CN)或-CH(CN)(CH2-苯基)；R2为氢；并且Q与X1结合在一起形成 ，其中Y为O，且R3为乙基。
11.一种权利要求2的化合物、其外消旋-非对映体混合物、其旋光异构体、其前体药物、其同位素或所述化合物、异构体、前体药物和同位素的药学上可接受的盐，其中W为NO2；Q为H；R1和R2分别为氢；并且R3和X1与连接它们的氮原子结合在一起，形成 或
12.一种权利要求3的化合物、其外消旋-非对映体混合物、其旋光异构体、其前体药物、其同位素或所述化合物、异构体、前体药物和同位素的药学上可接受的盐，其中W为NO2；R1为氢或在7位，并且为-CH2-CN、-CH2-CONH2和-CH2-COO-t-Bu；R2为氢；X1为氢或-CH2-O-CH3；R3为甲基、乙基、n-BuOH、-CH2CF3、吗啉代、-(CH2)7-N(Me)2、2-苯基-苯基、n-BuOH、-CH2CF3、吗啉代、-(CH2)4-N(Me)2、-(CH2)2-N(Me)2、-(CH2)3-NHMe、苄基或-CH2-O-CH3；或Q为氢或与X1结合在一起形成 ，其中Y为O，且R3为乙基；或R3和X1与连接它们的氮原子结合在一起形成 其中Z为甲基、4-氟苯基、2-吡啶基、2-甲氧基苯基、-CH2CH＝CH-苯基或2，4-二甲氧基苯基。
13.一种权利要求1的化合物、其外消旋-非对映体混合物、其旋光异构体、其前体药物、其同位素或所述化合物、异构体、前体药物和同位素的药学上可接受的盐，其中W为Cl或Br；Q为H；R3为任选取代的选自以下的部分烷基、链烯基、苯基、苯基烷基、杂环基、杂环基-烷基或氨基烷基。
14.一种权利要求13的化合物、其外消旋-非对映体混合物、其旋光异构体、其前体药物、其同位素或所述化合物、异构体、前体药物和同位素的药学上可接受的盐，其中R3为烷基、卤代烷基、酯烷基、N，N-二烷基氨基烷基、链烯基、苯基、苯基烷基、卤代苯基、烷氧基苯基、芳氧基苯基、噻吩基-烷基、卤代吡啶基、杂环基、杂环基-烷基或氨基烷基。
15.一种权利要求14的化合物、其外消旋-非对映体混合物、其旋光异构体、其前体药物、其同位素或所述化合物、异构体、前体药物和同位素的药学上可接受的盐，其中W为Cl；R3为乙基、丙基、丁基、叔丁基、2，4，6-三氯苯基、2，4-二甲氧基苯基、-(CH2)2-2-噻吩基、烯丙基、2-溴乙基、2-苯氧基苯基、2，6-二氯吡啶-4-基、苄基、-(CH2)2-COOEt、-(CH2)3N(Et)2、-(CH2)4-N(Et)2或-(CH2)2-N(Me)2。
16.一种权利要求15的化合物、其外消旋-非对映体混合物、其旋光异构体、其前体药物、其同位素或所述化合物、异构体、前体药物和同位素的药学上可接受的盐，其中R3为-(CH2)2-2-噻吩基、烯丙基、2-溴乙基、2-苯氧基苯基、2，6-二氯吡啶-4-基、苄基、-(CH2)2-COOEt、-(CH2)3-N(Et)2、-(CH2)4-N(Et)2或-(CH2)2-N(Me)2。
17.一种下式化合物 其外消旋-非对映体混合物、其旋光异构体、其前体药物、其同位素或所述化合物、异构体、前体药物和同位素的药学上可接受的盐，其中R3为乙基、丙基、叔丁基、2，4，6-三氯苯基或2，4-二甲氧基苯基。
18.一种权利要求14的化合物、其外消旋-非对映体混合物、其旋光异构体、其前体药物、其同位素或所述化合物、异构体、前体药物和同位素的药学上可接受的盐，其中R1为羟基、硝基或任选取代的选自以下的部分烷基、烷氧基、芳烷氧基和磺酸酯基；R2为卤代基或硝基；并且R3为烷基或苯基烷基。
19.一种权利要求18的化合物、其外消旋-非对映体混合物、其旋光异构体、其前体药物、其同位素或所述化合物、异构体、前体药物和同位素的药学上可接受的盐，其中R1为羟基、硝基、甲基、甲氧基、异丙氧基、苄氧基、4-氟苄氧基、-O-C(CH3)2(C(O)NH2)、-O-(CH2)2-O-(CH2)2-OMe或-O-SO2-CF3；R2为Cl或硝基；并且R3为乙基或苄基。
20.一种权利要求19的化合物、其外消旋-非对映体混合物、其旋光异构体、其前体药物、其同位素或所述化合物、异构体、前体药物和同位素的药学上可接受的盐，其中X1为H。
21.一种权利要求20的化合物、其外消旋-非对映体混合物、其旋光异构体、其前体药物、其同位素或所述化合物、异构体、前体药物和同位素的药学上可接受的盐，其中W为Cl；R1在7位；并且R2在4位或5位。
22.一种下式的化合物 其外消旋-非对映体混合物、其旋光异构体、其前体药物、其同位素或所述化合物、异构体、前体药物和同位素的药学上可接受的盐，其中R1为甲基、甲氧基或异丙氧基。
23.一种抑制蛋白激酶活性的方法，所述方法包括给予患者一种以上限定的式(IB)的化合物、其外消旋-非对映体混合物、其旋光异构体、其前体药物、其同位素或所述化合物、异构体、前体药物和同位素的药学上可接受的盐。
24.权利要求23的方法，其中所述蛋白激酶为酪氨酸激酶。
25.权利要求24的方法，其中所述酪氨酸激酶是一种受体酪氨酸激酶或非受体酪氨酸激酶。
26.权利要求25的方法，其中所述酪氨酸激酶为KDR或Lck。
27.权利要求23的方法，其中所述酪氨酸激酶影响血管生成。
28.权利要求27的方法，其中对所述酪氨酸激酶的抑制导致抗血管生成效应。
29.一种治疗病症、障碍或疾病的方法，所述方法包括给予患者一种以上限定的式(IB)的化合物、其外消旋-非对映体混合物、其旋光异构体、其前体药物、其同位素或所述化合物、异构体、前体药物和同位素的药学上可接受的盐；其中所述病症、障碍或疾病选自高增生性疾病、溃疡、莱姆病、脓毒症、von Hippel Lindau病、类天疱疮、银屑病、关节病性银屑病、瘤外综合征、混浊性渗漏(turbideffusions)、胶原性疾病、红斑狼疮、多肌炎、皮肌炎、全身性硬皮病、混合型胶原性疾病、传染病后关节炎、血清阴性椎关节炎、关节强硬性脊椎炎、脉管炎、结节病、关节病、疼痛、佩吉特病、多囊性肾病、纤维变性、结节病、肝硬变、甲状腺炎、高粘滞性综合征、遗传性出血性毛细血管扩张、慢性闭塞性肺病、卵巢刺激过高综合征(ovarian hyperstimulation syndrome)、先兆子痫、异常子宫出血、子宫内膜异位、慢性炎症、系统性狼疮、肾小球肾炎、滑膜炎、炎性肠病、局限性回肠炎、肾小球肾炎、类风湿性关节炎、青少年关节炎、骨关节炎、多发性硬化、移植排斥、镰状细胞性贫血、眼病、心血管病、动脉粥样硬化、再狭窄、局部缺血/再灌注损伤、血管闭塞、颈动脉阻塞性疾病、癌症、克罗-深濑(POEMS)综合征、糖尿病性疾病、贫血、局部缺血、梗塞、移植排斥、伤口、坏疽、坏死、哮喘和烧伤、创伤、辐照、中风、低氧症或局部缺血后水肿以及单纯疱疹感染、带状疱疹感染、人免疫缺陷病毒感染、副痘病毒感染、原生动物感染或弓形体病。
30.权利要求29的方法，其中所述眼病是眼水肿或黄斑水肿、眼新血管性疾病、巩膜炎、放射状角膜切开术、眼色素层炎、玻璃体炎(vitritis)、近视、眼小窝(optic pits)、慢性视网膜脱离、激光治疗后并发症、结膜炎、施塔加特病、伊尔斯病、视网膜病或黄斑变性。
31.权利要求29的方法，其中所述癌症是实体瘤、肉瘤、纤维肉瘤、骨瘤、黑素瘤、成视网膜细胞瘤、横纹肌肉瘤、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、畸胎瘤、造血恶性肿瘤、恶性腹水、卡波西肉瘤、霍奇金病、淋巴瘤、骨髓瘤或白血病。
32.权利要求29的方法，其中所述糖尿病性疾病是胰岛素依赖性糖尿病性青光眼、糖尿病性视网膜病或糖尿病性微血管病。
33.一种降低患者生育力的方法，所述方法包括给予患者有效量的以上限定的式(IB)化合物、其外消旋-非对映体混合物、其旋光异构体、其前体药物、其同位素或所述化合物、异构体、前体药物和同位素的药学上可接受的盐。
34.一种促进血管生成或血管发生的方法，所述方法包括给予患者以上限定的式(IB)化合物、其外消旋-非对映体混合物、其旋光异构体、其前体药物、其同位素或所述化合物、异构体、前体药物和同位素的药学上可接受的盐。
35.一种权利要求34的方法，其中所述式(IB)化合物与促血管生成性生长因子联合给予。
36.一种治疗患有由蛋白激酶活性介导的病症的患者的方法，所述方法包括给予所述患者治疗有效量的以上限定的式(IB)化合物、其外消旋-非对映体混合物、其旋光异构体、其前体药物、其同位素或所述化合物、异构体、前体药物和同位素的药学上可接受的盐的步骤。
37.权利要求36的方法，其中所述蛋白激酶活性涉及T细胞活化、B细胞活化、肥大细胞脱颗粒、单核细胞活化、炎性反应的增强或其组合。
38.一种药用组合物，所述药用组合物包含权利要求1的化合物和药学上可接受的稀释剂或载体。
39.一种用于抑制蛋白激酶的药用组合物，所述药用组合物包含药学上可接受的载体或稀释剂和有效量的以上限定的式(IB)化合物、其外消旋-非对映体混合物、其旋光异构体、其前体药物、其同位素或所述化合物、异构体、前体药物和同位素的药学上可接受的盐。
40.一种权利要求1的化合物，其中W为-(CH2)2-NH-C(O)-NH-(C(R10)2)a-Z1q或任选取代的杂环基；R1和R2分别为H；Q为H；Y为O；X1为H；并且R3为任选取代的烷基。
41.一种权利要求40的化合物，其中W为 -(CH2)2-NH-C(O)-NH-Et、-CH2-NH-C(O)-NH-乙基、-CH2-NH2、-NH-苯基、-C(O)NH2、-CH2-NH-S(O)2-Ph、-C(O)-NH-苯基、-CH2-NH-S(O)2-CF3、-CH2-CN、-CH2-NH-CH2-5-甲基-呋喃-2-基、-C(O)-NH-(CH2)3-(4-甲基哌嗪-1-基)、-(CH2)2-NH-C(O)-NH-(苯基)或-(CH2)2-NH-C(O)-NH-(对甲苯甲酰基)。
42.一种权利要求41的化合物，其中R3为乙基。
43.一种权利要求1的化合物，其中W为CN；R1和R2分别为H；Q为H；Y为O；X1为H；并且R3为任选取代的杂环基-杂环基或杂环基-环烷基。
44.一种权利要求1的化合物，其中R3为3-(4-甲基哌嗪基)丙基、2-吗啉代乙基、3-(9-苄基-9-氮杂二环[3.3.1]壬基、6-(4-甲基哌嗪基)-3-吡啶基、3-(8-苄基-8-氮杂二环[3.2.1]辛基、甲基-3-(8-苄基-8-氮杂二环[3.2.1]辛基、叔丁基羧酸酯基-1-哌啶基甲基、4-哌啶基甲基、叔丁基羧酸酯基-1-哌嗪基-乙基、2-哌嗪基乙基、4-(4-甲基哌嗪基)环己基、3-哌啶子基丙基、6-(4-甲基哌嗪基)-3-吡啶基。
45.一种权利要求1的化合物，其中R1和W结合在一起形成 其中X10独立选自与X3相同的取代基。
46.一种权利要求45的化合物，其中R2为H；Q为H；Y为O；X1为H；R3为烷基；X10为乙基、3-吡啶基、N-(p-Br-苯基)-NH-、1-哌啶基或CH3-NH-。
47.一种权利要求1的化合物，其中W为H；并且R1为-S-X3、-S(O)X3或-S(O)2X3。
48.一种权利要求1的化合物，其中W为Br、Cl或对氟苯氧基，R1和R2分别为H；Q为H；Y为O；X1为H；并且R3为烷基-氯、 -烷基-哌嗪-1-基、-烷基-(2，5-二甲基哌嗪-1-基)、-烷基-(3，5-二甲基哌嗪-1-基)、-烷基-(3-氨基羰基哌啶-1-基)、-烷基-(4-羟基哌啶-1-基)、-烷基-(3-羟基哌啶-1-基)、-烷基-COOEt、-烷基-COOH、-烷基-(4-甲基哌嗪-1-基)、-烷基(N-吗啉代乙基氨基)、-烷基-(N-哌啶基乙基氨基)、-烷基-(N-(N，N-二乙基氨基乙基)-N-(甲基)氨基)、-烷基-((1-乙基吡咯烷-2-基)-甲基氨基)、-烷基-(N-(1-甲基哌啶-4-基)-N-(甲基)氨基)、-烷基氨基、-烷基-哌啶-1-基或-烷基(N，N-二乙基氨基乙基氨基)。
49.一种权利要求48的化合物，其中所述烷基为亚甲基、亚乙基或亚丙基。
50.一种权利要求1的化合物，其中R2为H；Q为H；Y为O；X1为H，且R3为乙基。
51.一种权利要求50的化合物，其中W为H或Br；并且R1在苯并噻唑基环的7位，且为-C≡CH、-C≡C-(2-吡啶基)、-C≡C-CH2-N(CH3)2、-O-CH(CH3)2、苯基或-CH＝CH2。
52.一种权利要求50的化合物，其中R1为-CH＝CH2，且W为-CH＝CH2。
53.一种权利要求50的化合物，其中R1为H，且W为苄基、对氟苯氧基或吡啶-4-基甲基。
54.一种权利要求50的化合物，其中W为F；R1在苯并噻唑基环的7位并且为H或Cl；并且R2在苯并噻唑基环的5位并且为H或Cl。
55.一种权利要求50的化合物，其中R1为H，且W为-C≡CH、-C≡C-Ph、-C≡CCH2-N(CH3)2、-C≡C-(4-氟苯基)、-C≡C-(对甲苯甲酰基)、-(CH2)2-Ph、-(CH2)2-(4-氟苯基)、-CH＝CH-苯基、-CH＝CH-CH2-N(CH3)2、-CH＝CH-(4-氟苯基)、-CH＝CH-(对甲苯甲酰基)或-CH＝CH-(1-咪唑基)。
56.一种权利要求1的化合物，其中W为对氟苯氧基、-(CH2)3-NHMe或-(CH2)2-1-哌嗪基；并且R3为-CH2-C(Me)2-CH2-N(CH3)2、-(CH2)2-(5-咪唑基)、 或
57.一种权利要求1的化合物，其中R1在苯并噻唑基环的7位并且为H或CN；R2为H；Y为O；Q和X1分别为H；W为Cl、NO2、-CH2-OH、-CH2-O-C(O)-NH-Et、-S-苯基、-O-苯基、-S-CH3、-C(O)-苯基、-S(O)-苯基、-S-对硝基苯基、-S-对甲基苯基、-S-对氯苯基、-S-对甲氧基苯基、-S-间-CF3-苯基、-S-邻氯苯基、-C(O)-CH3、-NH-C(O)-NH-(-CH2)2-2-噻吩基、-NH-C(O)-NH-3-吡啶基、-S(O)2-对(羧甲基氨基)-苯基、-N-吗啉代、-NH-C(O)-NH-Et、-NH-C(O)-NH-CH2-苯基、-S-对氯苯基、-S-对溴苯基、-S-间-CF3-苯基或-S-对氟苯基； R3为 乙基、-(CH2)3-4-甲基哌嗪-1-基、-(CH2)2-N-吗啉代或-CH2-哌啶-4-基。
58.一种下式的化合物 其中W为H、-OCF3、-O-Et、F、CH3、-OCH3、-SO2-Me、NH2、-NH-C(O)-Me、-NH-CH2-苯基、-NH-S(O)2-2-噻吩基、-NH-S(O)2-(3，5-二甲基异噁唑-4-基)、-NH-S(O)2-Me、-NH-S(O)2-CH2-苯基、-NH-C(O)-O-CH2-CCl3、-NH-C(O)-O-CH2-Ph、-NH-C(O)-O-Me或NO2；R1为H、F或-CH2-S(O)2-苯基；并且R2为H、4-Cl、4-甲基、5-甲基、5-Cl、5-F或5-OCH3。
59.一种应用式(IB)化合物或其药学上可接受的盐在正进行抗炎糖皮质激素疗法的患者中作为抗炎糖皮质激素疗法的替代治疗的方法，所述方法包括用式(IB)化合物或其药学上可接受的盐替代糖皮质激素的步骤。
60.一种在正进行糖皮质激素疗法的患者中结合糖皮质激素治疗应用式(IB)化合物或其药学上可接受的盐的方法，所述方法包括替代给予所述患者的一部分量的糖皮质激素的步骤。
全文摘要
本发明涉及式(I)化合物、其外消旋－非对映体混合物、其旋光异构体、其前体药物、其同位素或所述化合物、异构体、前体药物和同位素的药学上可接受的盐，其中所述变量如本文定义。本发明的化合物可用作丝氨酸/苏氨酸激酶和酪氨酸激酶的抑制剂。特别是，本发明的化合物可用作高增生性疾病、尤其是癌症和血管生成过程中重要的酪氨酸激酶的抑制剂。
文档编号A61K31/496GK1422262SQ01807734
公开日2003年6月4日 申请日期2001年2月6日 优先权日2000年2月7日
发明者K·P·库萨克, B·斯科特, L·D·阿诺, A·艾利松 申请人:艾博特股份有限两合公司