专利名称：阿胶注射液及其制备方法
技术领域：
本发明涉及的阿胶注射剂是阿胶的新剂型，该剂型及其制备方法属于制药和生物医药领域。
背景技术：
阿胶是滋补性中药，有滋阴、补血之功效，养血润肤，使皮肤细腻光滑，富有弹性，头发乌黑，容颜悦色。白居易在《长恨歌》中曾用“温泉水滑洗凝脂”形容杨玉环的玉肌花容。据考证“阿胶羹”就是玉环常食的美容药膳之一。
现代医学发现，阿胶主要成分是胶原蛋白及其水解的肽类和氨基酸，同时，还含有丰富的与维持生物酶活性有关的微量元素。因此，阿胶具有以下功效1、促进造血功能，能明显提高红细胞及血红蛋白含量，对缺铁性贫血和失血性贫血有显著的疗效。
2、提供胶原蛋白成分的氨基酸，促进伤口愈合。
3、可以提高免疫力，明显增强机体免疫功能的作用，对年老体弱、久病体虚、易患感冒等有很好治疗预防的效果，同时可作为因免疫功能低下所致疾病及放疗、化疗患者的辅助药品。
4、促进钙的吸收和贮存，是预防、治疗骨质疏松症的有效药物。
5、阿胶有提高耐缺氧、耐疲劳的作用，对长期从事脑力劳动者、紧张学习的学生、大运动量的运动员能迅速解除疲劳，恢复体力，使之精力充沛。
6、有明显的止血作用，因此对咯血、便血、衄血、尿血等出血症有很好的疗效。
7、对妇女月经不调、孕期保健、产后调理有独特的功效。
但是，目前市售阿胶产品均为口服制剂，对不能口服给药的患者，需要将阿胶制备成静脉给药的剂型才能使用。
现有的静脉营养药物为单一种类的营养成分，例如复方氨基酸的成分为18种氨基酸，其氨基酸比例也不是伤口愈合所需氨基酸的最佳比例，没有多肽成分；微量元素注射液为6至10种人体需要的微量元素。
技术内容本发明的目的就是提供一种静脉给药的新的阿胶制剂。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的。
阿胶的主要成分为胶原蛋白、肽类、氨基酸、大豆油、微量元素和其它杂质。其中胶原蛋白和长肽有抗原性，不适合直接注射使用。大豆油和其它杂质也需要除去。
本发明将阿胶的胶原蛋白水解成没有抗原性的多肽和氨基酸，保留有益微量元素，并按照人体用注射剂的要求，制备成可以提供给人体静脉注射使用的阿胶注射剂。发明人对阿胶水解进行了水解条件的研究，并将获得的产物进行了动物实验，考察了安全性和有效性，在此基础上优选出制备工艺，制备了阿胶注射剂，动物实验证明其安全有效。
本发明的阿胶注射剂含多肽、氨基酸和微量元素，其中的多肽和氨基酸是胶原蛋白水解而来，而后者是伤口愈合的重要结构成分，所含微量元素，特别是锌元素，也有益于伤口愈合和身体机能的恢复。而且中本发明还对阿胶注射剂的制备方法进行了研究。
本发明的阿胶注射剂主要应用于不适宜口服给药期间的病人和全身情况虚弱的病人，例如胃肠道手术后伤口尚未愈合的患者、化疗后严重呕吐的患者等，适应症与阿胶口服制剂基本相同，包括生血、升白细胞、促进伤口愈合、增强免疫机能、促进机体恢复等。
图1pH对木瓜蛋白酶水解的影响图2温度对木瓜蛋白酶水解的影响图3酶与底物比(E/S)对木瓜蛋白酶水解的影响图4反应时间对木瓜蛋白酶水解的影响图5复合酶解水解液5KD以下样品软电离质谱图具体实施方式
下面结合实例对本发明予以进一步说明。
实验例1阿胶水解实验一、原料及药品枯草杆菌蛋白酶木瓜蛋白酶超滤离心管Millipore公司产品，截留分子量为5KD，10KD二、实验与方法1、酶解反应精确称取一定量的阿胶粉末溶于磷酸缓冲液中，搅拌至胶体。调整至一定pH后，加入一定量的蛋白酶进行水解。水解中断搅拌并保持pH的恒定。水解结束后，水解液100℃加热5min终止反应。
2、超滤分段水解液依次用二层滤纸，0.45μ微孔滤纸，0.22μ微孔滤纸过滤。过滤后溶液分别用截留分子量为5，10KD超滤离心管(Millipore公司产品)进行超滤离心，收集5KD和10KD以下部份。
3、蛋白质水解度(DH)测定取适量水解液的离心液，用甲醛固定快速滴定法测定游离氨基氮(FAN)含量，总氮测定采用半微量凯氏定氮法。
4、平均肽链长度肽分子平均链长(PCL)≈100/DH(％)三、结果与讨论1、酶解最适条件的确定(1)木瓜蛋白酶(P60)最适条件的确定
pH的影响水解过程中每0.5h测定一次pH，保持pH的恒定。
酶解条件底物浓度0.1g/ml，酶与底物比为20mg/g蛋白，反应温度55℃，反应时间4h。
由图1可以看出，木瓜蛋白酶的最佳水解胶原蛋白酶的pH为5.0～6.0，低于5.0或高于6.0酶活性下降。特别是pH低于4时酶活力下降较多。
温度的影响水解条件底物浓度0.1g/ml，酶与底物比20mg/g蛋白，反应pH5.0，反应时间4h。
由图2可以看出木瓜蛋白的最佳水解温度为55℃，超过60℃酶开始发生变性，酶解效率降低。
酶与底物比(E/S)的影响水解条件底物浓度0.1g/ml，反应pH5.0，反应温度55℃，反应时间4h。
由图3可以看出木瓜蛋白酶水解阿胶蛋白的最适酶与底物比为20mg/g蛋白，当酶与底物比超过比值时，水解度增加都不明显。考虑到经济性，我们选用酶与底物比为15～20mg/g蛋白作为最佳水解条件。
水解时间的影响水解条件底物浓度0.1g/ml，反应pH5.0，反应温度55℃，酶与底物比为20mg/g蛋白。
由图4可以看出，酶解在前2个小时速度较快，到4h后达到顶点，时间超过4h后，水解度基本保持不变。由以上实验得出木瓜蛋白酶水解阿胶蛋白的最佳条件为底物浓度0.1g/ml，反应pH5.0，反应温度55℃，酶与底物比20mg/g蛋白，反应时间4h。
二次酶解对于木瓜蛋白酶水解度的影响。
当第一次酶解结束后，在反应体系中加入酶与底物比为10mg/g蛋白的木瓜蛋白酶进行二次水解，反应2h后FAN由2.28mg/ml提高到2.86mg/ml。重复实验证明二次水解可以提高水解度20.28～22.35％。
(2)枯草杆菌蛋白酶、木瓜蛋白酶解及复合酶解的酶解程度比较枯草杆菌酶解最适条件已有多篇文献报导，酶解最适条件为，底物浓度0.1mg/ml，反应pH7.5，反应温度55℃，酶与底物比为20mg/g蛋白、反应时间4h。
表1 两种酶对阿胶蛋白水解效果的比较酶的种类 pH 温度 酶与底物比(E/S) FAN(℃) (mg/s蛋白) (mg/ml)木瓜蛋白酶 5.05520 1.32枯草杆菌蛋白酶 7.55520 1.41木瓜+枯草 5.0+7.55520+201.52枯草+木瓜 7.5+5.05520+202.59实验发现，通过复合酶解可以有效提高水解效率，特别是先用枯草杆菌蛋白酶水解再用木瓜蛋白酶水解，可比单独采用木瓜蛋白酶解提高96.2％水解程度。这可能是因为枯草杆菌蛋白酶具有较强的非专一性，对胶原蛋白具有更多个酶切位点，而且先采用枯草杆菌蛋白酶水解可以使原来包裹在胶原蛋白三股螺旋内部的木瓜蛋白酶酶切位点暴露出来，使得其后的木瓜蛋白酶解具有更高的效率。
2、超滤后酶解样品的肽链分析木瓜蛋白酶水解液5KD以下样品FAN为0.98mg/ml，总氮含量为2.42mg/ml，由此可知平均肽链长度为2.47。10KD以下样品的FAN为1.07mg/ml，总氮含量为4.38mg/ml，由此可知平均肽链长度为4.09。
枯草杆菌蛋白酶水解液5KD以下样品FAN为1.06mg/ml，总氮含量为2.44mg/ml，由此可知平均肽链长度为2.31。10KD以下样品的FAN为1.10mg/ml，总氮含量为4.35mg/ml，由此可知平均肽链长度为3.95。比木瓜蛋白酶水解度提高7-8％，这可能归功于枯草杆菌酶具有更高的非专一性，对于阿胶中的胶原蛋白具有更多的切点。
复合蛋白酶水解液5KD以下样品FAN为2.196mg/ml，总氮含量为2.53mg/ml，由此可知平均肽链长度为1.15。10KD以下样品的FAN为2.74mg/ml，总氮含量为4.87mg/ml，由此可知平均肽链长度为1.78。比木瓜蛋白酶水解度提高124.08-147.30％，这可能归功于枯草杆菌酶具有更高的非专一性，对于阿胶中的胶原蛋白具有更多的切点。质谱检测发现，复合蛋白酶解液中5KD样品中主要以2-6氨基酸残基组成的短肽为主，最大分子量为3101.9，大约含有25.85个氨基酸残基(见图5)。10KD以下样品，主要以2-13个氨基酸残基组成的短肽为主。
3、蛋白酶解前后氨基酸组成变化分析阿胶中的蛋白质含量约为80％左右，含有18种氨基酸(包括7种人体必需氨基酸)、其含量分别为赖氨酸2.63％，组氨酸0.59％，精氨酸4.42％，苏氨酸3.21％，丝氨酸1.86％，谷氨酸0.59％，脯氨酸6.52％，甘氨酸13.36％，丙氨酸0.12％，缬氨酸0.84％，蛋氨酸0.20％，亮氨酸1.92％，异亮氨酸0.91％，酪氨酸0.29％，苯丙氨酸1.59％等。但是其游离氨基酸含量和种类都较少，其中只含有8种氨基酸，总量只为总蛋白含量的1％-2％。经过复合酶解后游离氨基酸种类提高到15种，含量增加了32-55倍，可被人体直接利用。而且复合酶解水解物中大量的2-3肽亦可直接被人体所直接利用。
4、酶解前后微量元素含量分析阿胶中含有多种金属元素如K，Na，Ca，Mg，Fe，Cu，Al，Mn，Zn，Cr，Pt，Pr，Mo，Sr等，早先研究发现阿胶的多种药理作用与其所含的微量元素有关。铁，铜等元素以被证明可治疗某些营养性贫血，而其他多种微量元素则与种类繁多的体内生物酶有着密切的关系。我们在酶解后采用了超滤离心技术，只对大分子物质进行截留。即消除了阿胶蛋白的抗原性，且没有破坏阿胶原来多种微量元素组成。我们对超滤前后Zn，Cu，Fe，Mn，Zn/Cu进行了检测，发现并没有金属离子在超滤时被截留(见表2)表2超滤前后阿胶中的微量元素测定ug/g)
通过以上实验，最优酶解工艺为先用枯草杆菌蛋白酶进行酶解，反应条件为，底物浓度0.1g/ml，反应pH7.5，反应温度55℃，酶与底物比20mg/g蛋白，反应时间4h。第一次酶解结束后再在反应液中加入酶与底物比20mg/g蛋白的木瓜蛋白酶，反应pH5.0，反应温度55℃，反应时间4h，反应结束后100℃加热5min终止反应。酶解液依次用二层滤纸，0.45μ微孔滤纸，0.22μ微孔滤纸过滤。过滤后溶液分别用截留分子量为5，10KD超滤离心管(Millipore公司产品)进行超滤离心，收集5KD和10KD以下部份。
实验例2 阿胶水解液豚鼠全身过敏性反应试验一、目的观察阿胶水解液对豚鼠全身过敏性反应的情况，考察该制剂安全性。
二、材料和方法1、受试动物健康豚鼠24只，体重240～300g，雌雄兼用，由四川省医学科学院实验动物研究所提供，实验动物使用许可证号019。
2、受试药物10KD和5KD阿胶水解注射液(冻干)，为淡黄色疏松状粉末，规格250mg/瓶，批号040213，由成都市药友科技发展有限公司提供。
3、试剂及器材氯化钠注射液，批号040328，四川省奇力同心制药有限公司生产；一次性注射器，批号040218，成都新津事丰医疗器械有限公司生产；1％卵白蛋白，由成都市药友科技发展有限公司药理室自配。
4、方法将豚鼠按体重随机分为阿胶水解液5KD和10KD组、1％卵白蛋白(生理盐水稀释)阳性对照组、生理盐水阴性对照组4个组，每组6只，雌雄兼用。各受试豚鼠均按0.5ml/只间日肌肉注射相应的受试物，连续3次，分别在第1次注射给药后14天、21天各组各取3只豚鼠从右脚背外侧静脉注射本组受试液1ml/只，根据《中华人民共和国药典》2000版规定，观察给药后15分钟内豚鼠有无竖毛、喷嚏、干呕、咳嗽、呼吸困难、啰音、抽搐、虚脱或死亡等过敏反应。
按表3评级标准进行评价。
表3豚鼠全身过敏反应评级标准级数反应症状0 无明显反应1 只有轻微抓鼻、颤抖或竖毛2 有几次咳嗽，有抓鼻、颤抖或竖毛3 多次或连续咳嗽，伴有呼吸困难、痉挛、抽搐等4 痉挛、抽搐、大小便失禁、休克死亡三、结果豚鼠全身过敏性反应试验结果见表4。
表4豚鼠全身过敏性反应过敏级数受试物 14天 21天生理盐水组 00阿胶水解液5KD组 00阿胶水解液10KD组001％卵白蛋白组 3.3 3.7阿胶水解液5KD和10KD组分别在第1次给药后14天、21天静脉给药后15分钟内无抓鼻、颤抖或竖毛等过敏反应症状，过敏反应平均级数均为0，提示阿胶水解液5KD、10KD对豚鼠无全身过敏性。
结论阿胶水解液5KD、10KD豚鼠全身过敏反应为阴性，无过敏性，符合《中华人民共和国药典》2000版规定。
实验例3阿胶水解注射剂(冻干)补血作用的研究一、目的观察阿胶水解注射液(冻干)对失血性贫血大鼠腹腔注射给药后，对血液中红细胞数量及血红蛋白含量的影响。
二、材料和方法1、受试药10KD和5KD阿胶水解注射液(冻干)，为淡黄色疏松状粉末，规格250mg/瓶，批号040213，由成都市药友科技发展有限公司提供。
阿胶补血膏为棕褐色的半流体，规格200g/瓶，批号040124，河南省四方药业有限公司生产。
复方氨基酸注射液(15AA)，为无色或几乎无色的澄明液体，规格250ml∶20g(总氨基酸)，批号040223，浙江济民制药有限公司生产。
阿胶水解注射液(冻干)、阿胶补血膏，临用时均用生理盐水稀释为试验所需浓度。
2、实验动物SD大鼠，体重180～200g，共100只，雌雄各半，由四川省医学科学院实验动物研究所提供，实验动物使用许可证号119。
3、仪器全自动血球计数仪，M-4000，德国生产。
4、方法取健康SD大鼠90只，雌雄各半，试验前用5ml一次性注射器心脏放血5ml致贫血，次日待动物血容量稳定后剪尾取血，计数RBC和Hb。另取10只未放血健康大鼠作为正常对照组，同上计数RBC和Hb。分组及给药剂量见表5。每日给药1次，连续14天，于d7和d14分别剪尾取血，测RBC和Hb。
表5试验分组和给药组别 动物数(n)给药剂量给药途径给药体积正常对照组10 生理盐水ip 0.5ml/100g模型组10 生理盐水ip 0.5ml/100g阿胶补血膏组 10 0.67g/mlig 1ml/100g复方氨基酸注射液组10 0.08g/mlip 0.5ml/100g10KD阿胶水 高 10 0.08g/mlip 0.5ml/100g解注射液 中 10 0.04g/mlip 0.5ml/100g(冻干)组 低 10 0.02g/mlip 0.5ml/100g5KD阿胶水 高 10 0.08g/mlip 0.5ml/100g解注射液 中 10 0.04g/mlip 0.5ml/100g(冻干)组 低 10 0.02g/mlip 0.5ml/100g三、结果10KD和5KD阿胶水解注射液(冻干)对失血性贫血大鼠血液中RBC和Hb的影响见表6、表7。
表6对失血性贫血大鼠血液中RBC的影响(x±s)
RBC(1012/L)组别剂量药前 d7 d14正常对照组 - 7.44±0.25 7.55±0.597.61±0.37模型组 - 5.72±0.41**5.73±0.32**7.12±0.47阿胶补血膏组0.67g/ml5.68±0.22*7.30±0.28▲▲7.57±0.22复方氨基酸 0.08g/ml5.77±0.45**6.92±0.72▲7.41±0.1110KD阿胶水高0.08g/ml5.87±0.13**7.42±0.14▲▲7.59±0.29解注射液 中0.04g/ml5.72±0.77**7.38±0.29▲▲7.47±0.36(冻干)组 低0.02g/ml5.70±0.23**7.33±0.75▲▲7.52±0.445KD阿胶水 高0.08g/ml5.81±0.07**7.40±0.65▲▲7.58±0.55解注射液 中0.04g/ml5.65±0.34**7.35±0.27▲▲7.41±0.32(冻干)组 低0.02g/ml5.73±0.72**7.32±0.12▲▲7.50±0.74注与正常对照组比较P＜0.01；与模型组比较▲P＜0.05，▲▲P＜0.01。
表7对失血性贫血大鼠血液中Hb的影响(x±s)Hb(g/100ml)组别剂量药前 d7d14正常对照组 - 12.85±0.22 12.73±0.12 12.92±0.27模型组 - 9.37±0.17**10.10±0.22 11.83±0.33阿胶补血膏组0.67g/ml9.46±0.25**11.97±0.32△12.36±0.26复方氨基酸注射液组 0.08g/ml9.42±0.57**11.31±0.27△12.03±0.4210KD阿胶水高0.08g/ml9.39±0.26**11.96±0.16△12.53±0.37解注射液 中0.04g/ml9.41±0.58**11.87±0.42△12.40±0.42(冻干)组 低0.02g/ml9.40±0.12**11.62±0.11△12.21±0.225KD阿胶水 高0.08g/ml9.45±0.21**11.87±0.22△12.47±0.64解注射液 中0.04g/ml9.43±0.16**11.83±0.17△12.39±0.36(冻干)组 低0.02g/ml9.39±0.56**11.62±0.34△12.17±0.11注与正常对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01，与模型组比较△P＜0.05。
结论由表6、表7结果可见，大鼠心脏放血后RBC和Hb明显降低，处于失血性贫血状态，给予10KD和5KD阿胶酶水注射液(冻干)治疗后，d7与模型组比较，对升高RBC具有极显著性差异；对升高Hb，具有显著性差异。说明该药具有补血作用。
实验例4阿胶水解注射剂对创伤大鼠伤口愈合和纤维结合蛋白水平的影响一、目的观察受试药物对创伤大鼠伤口愈合时间及血液和肉芽组织中纤维结合蛋白水平的影响，了解该药对治疗伤口的疗效。
二、材料和方法1、受试药10KD和5KD阿胶水解注射液(冻干)，为淡黄色疏松状粉末，规格250mg/瓶，批号040213，由成都市药友科技发展有限公司提供。
阿胶补血膏为棕褐色的半流体，规格200g/瓶，批号040124，由河南省四方药业有限公司提供。
复方氨基酸注射液(15AA)，为无色或几乎无色的澄明液体，规格250ml∶20g(总氨基酸)，批号040223，由浙江济民制药有限公司。
阿胶水解注射液(冻干)、阿胶补血膏，临用时均用生理盐水稀释为试验所需浓度。
2、试验动物SD大鼠，体重180～200g，共190只，雌雄各半，由四川省医学科学院实验动物研究所提供，实验动物使用许可证号119。
3、试剂与仪器试剂大鼠Fn标准参考血清，兔抗鼠Fn抗血清，华西医科大学病理教研室提供(批号040217)；琼脂糖，上海试剂三厂生产(批号031025)；巴比妥盐酸电泳缓冲液，样品稀释液，华西医科大学生化教研室配制。
仪器电泳仪，微量注射器，恒温振荡水浴，高速离心机，电子天平，电动研磨器。
4、方法大鼠常规饲养3d后，用8％硫化钠脱去背部毛，3d后造模。以4％戊巴比妥钠(4mg/100g体重)腹腔注射麻醉，用剪刀剪去动物背部一圆形全层皮肤，深达筋膜，止血，伤口直径3.0cm，待醒后单笼饲养，试验分组及给药见表1。每组分为2批，一批每日给药1次，直至伤口完全愈合，比较其伤口愈合时间；另一批用药7d后，股动脉取血5ml处死，分离血清，将大鼠血清稀释后上样，行火箭电泳，并以。同时取创面肉芽组织及皮肤用生理盐水冲洗干净，吸干，称取0.2g，剪碎，加入生理盐水2ml，置于冰浴中，电动研磨制成匀浆，高速离心，取上清液直接电泳，也同时以参考标准血清绘制标准曲线，分别测定血清及组织中纤维结合蛋白含量。
表8试验分组和给药组别 动物数(n)给药剂量给药途径给药体积正常对照组10 - ip 0.5ml/100g模型组20 - ip 0.5ml/100g阿胶补血膏组 20 0.67g/mlig 1ml/100g复方氨基酸注射液组20 0.08g/mlip 0.5ml/100g10KD阿胶酶 高 20 0.08g/mlip 0.5ml/100g解注射液 中 20 0.04g/mlip 0.5ml/100g(冻干)组 低 20 0.02g/mlip 0.5ml/100g5KD阿胶酶 高 20 0.08g/mlip 0.5ml/100g解注射液 中 20 0.04g/mlip 0.5ml/100g(冻干)组 低 20 0.02g/mlip 0.5ml/100g三、结果试验结果见表9、表10。
表9对伤口愈合时间的影响(x±s)组别剂量 伤口愈合时间(天)模型组 -28.6±3.4阿胶补血膏组0.67g/ml 24.1±2.3*复方氨基酸注射液组 0.08g/ml 26.2±3.210KD阿胶酶高0.08g/ml 22.6±2.7**解注射液 中0.04g/ml 23.1±2.8**(冻干)组 低0.02g/ml 24.3±3.5*5KD阿胶酶 高0.08g/ml 22.1±3.2**解注射液 中0.04g/ml 23.6±4.3**(冻干)组 低0.02g/ml 24.7±3.2*注与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01。
表10对血清和肉芽组织中Fn的影响(x+s)Fn(μg·ml-1)组别 剂量血清肉芽组织正常对照组皮肤 -220.7±52.9 未检出模型组 -427.1±73.4 21.6±4.6阿胶补血膏组 0.67g/ml 573.6±64.1*38.7±5.7*
复方氨基酸注射液组0.08g/ml506.9±77.2 30.6±3.910KD阿胶酶高 0.08g/ml612.7±92.5**67.3±4.5**解注射液 中 0.04g/ml598.1±73.4**58.7±2.3**(冻干)组 低 0.02g/ml532.6±62.4*38.5±4.2*5KD阿胶酶 高 0.08g/ml631.9±73.5**66.7±5.3**解注射液 中 0.04g/ml602.7±63.5**55.1±3.7**(冻干)组 低 0.02g/ml537.7±87.4*40.6±5.2*注与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01。
结论纤维结合蛋白是一种分子量约为450K的大分子糖蛋白，与胶原具有特别的亲和力，参与伤口愈合的全过程，在创面修复的许多环节中都起着重要作用。以上试验结果显示，10KD和5KD阿胶水解注射液(冻干)对创伤大鼠伤口愈合时间明显缩短，血液和肉芽组织中纤维结合蛋白含量明显升高，与模型组比较，具有显著性差异和极显著性差异，且随剂量的增加作用越好。
实验例5阿胶水解注射液对小鼠免疫器官重量的影响一、目的小鼠经多次腹腔注射给予10KD和5KD阿胶水解注射液(冻干)，观察该药物对小鼠免疫脏器重量的影响。
二、材料和方法1、受试药物10KD和5KD阿胶水解注射液(冻干)，为淡黄色疏松状粉末，规格250mg/瓶，批号040213，由成都市药友科技发展有限公司提供。
阿胶补血膏为棕褐色的半流体，规格200g/瓶，批号040124，由河南省四方药业有限公司提供。
复方氨基酸注射液(15AA)，为无色或几乎无色的澄明液体，规格250ml∶20g(总氨基酸)，批号040223，由浙江济民制药有限公司。
阿胶水解注射液(冻干)、阿胶补血膏，临用时均用生理盐水稀释为试验所需浓度。
2、试验动物昆明种小鼠，体重18～22g，共90只，雌雄各半，由四川省医学科学院实验动物研究所提供，实验动物使用许可证号119。
3、仪器电子天平。
4、方法将小鼠随机分为9组，每组10只，雌雄各半。分组及给药剂量见表11。按表1连续给药14天，于末次给药后1h，将小鼠脱颈椎处死，打开腹腔和胸腔分别摘取脾脏和胸腺，电子天平称重，计算脏器指数。
表11试验分组和给药组别动物数(n)给药剂量给药途径 给药体积正常对照组 10 - ip0.2ml/10g阿胶补血膏组10 0.167g/ml ig0.4ml/10g复方氨基酸注射液组 10 0.08g/mlip0.2ml/10g10KD阿胶水高10 0.02g/mlip0.2ml/10g解注射液 中10 0.01g/mlip0.2ml/10g(冻干)组 低10 0.005g/ml ip0.2ml/10g5KD阿胶水 高10 0.02g/mlip0.2ml/10g解注射液 中10 0.01g/mlip0.2ml/10g(冻干)组 低10 0.005g/ml ip0.2ml/10g三、结果试验结果见表12。
表12对血清和肉芽组织中Fn的影响(x±s)脏器指数(mg/g)组别 剂量胸腺 脾脏正常对照组- 2.10±0.13 4.32±0.11阿胶补血膏组 0.167g/ml 3.62±0.22**5.62±0.23**复方氨基酸注射液组0.08g/ml 3.34±0.17*5.12±0.13*10KD阿胶酶高 0.02g/ml 3.72±0.25**5.73±0.14**解注射液 中 0.01g/ml 3.67±0.18**5.67±0.27**(冻干)组 低 0.005g/ml 3.57±0.29**5.43±0.13**5KD阿胶酶 高 0.02g/ml 3.77±0.18**5.77±0.29**解注射液 中 0.01g/ml 3.69±0.27**5.61±0.32**(冻干)组 低 0.005g/ml 3.57±0.17**5.50±0.11**
注与正常对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01结论10KD、5KD阿胶水解注射液(冻干)对小鼠免疫器官具有明显增重作用，与正常对照组比较具有极显著性差异，且随剂量的增加有增强趋势。
实施例1阿胶蛋白水解物氯化钠注射液规格100ml∶5g(总蛋白质量不低于1.5g，总氮量不低于0.25g)处方阿胶蛋白水解物 50g注射用氯化钠9g10％氢氧化钠溶液适量加注射用水至1000ml制成10瓶制备方法取经酶解后得到的阿胶蛋白水解物，用注射用水溶解，再加入注射用氯化钠，搅拌溶解，用10％氢氧化钠溶液调PH值为6.0～8.0，0.45μm微孔滤膜过滤，滤液分装入100ml输液瓶，压盖、灭菌，即得。
实施例2阿胶蛋白水解物葡萄糖注射液规格100ml∶5g(总蛋白质量不低于1.5g，总氮量不低于0.25g)处方阿胶蛋白水解物 50g注射用葡萄糖5g0.1mol盐酸溶液 适量加注射用水至1000ml制成10瓶制备方法取经酶解后得到的阿胶蛋白水解物，用注射用水溶解，再加入注射用葡萄糖，搅拌溶解，用0.1mol盐酸溶液调PH值为5.0～6.0，0.45μm微孔滤膜过滤，滤液分装入100ml输液瓶，压盖、灭菌，即得。
实施例3阿胶蛋白水解物注射液规格10ml∶0.25g 10ml∶0.5g2ml∶50mg5ml∶0.1g处方(2ml∶50mg)阿胶蛋白水解物 25gEDTA-Na 2g焦亚硫酸钠 5g0.1mol盐酸溶液 适量加注射用水至 1000ml制成 500支制备方法将处方量的EDTA-Na、焦亚硫酸钠溶解于注射用水，再取经酶解后得到的阿胶蛋白水解物，加入以上溶液中，用0.1mol盐酸溶液调PH值为6.0～8.0，0.45μm微孔滤膜过滤，滤液分装入安瓿封口、灭菌，即得。
实施例4注射用阿胶蛋白水解物(一)规格50mg处方(50mg)阿胶蛋白水解物 25g0.1mol盐酸溶液 适量加注射用水至1000ml制成500瓶制备方法取经酶解后得到的阿胶蛋白水解物，用注射用水溶解，再用0.1mol盐酸溶液调pH值为6.0～8.0，0.22μm微孔滤膜过滤，滤液分装入西林瓶，冻干、压盖，即得。
实施例5注射用阿胶蛋白水解物(二)规格1g，2g，5g制备方法取阿胶蛋白水解物溶液，0.22μm微孔滤膜过滤后分装入托盘，冷冻干燥，冻干物粉碎后分装入西林瓶，压盖即得。
权利要求
1.一种阿胶注射剂，其特征在于含阿胶蛋白水解物。
2.如权利要求1所述的阿胶注射剂，其特征在于阿胶蛋白水解物的主要有效成分为将阿胶酶分解所得的多肽、氨基酸和微量元素。
3.如权利要求2所述的阿胶注射剂，其特征在于阿胶蛋白水解物主要有效成分的多肽在10KD以下。
4.如权利要求1所述的阿胶注射剂，其特征在于阿胶蛋白水解物采用阿胶为原料，加入生物酶，在适宜酶解条件下，将阿胶分解成10KD以下的多肽和氨基酸。
5.如权利要求4所述的阿胶注射剂，其特征在于，所述的生物酶为胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶等生物酶。
6.如权利要求1所述的阿胶注射剂，其特征在于含阿胶蛋白水解物和药学上可接受的辅剂，制备成符合人体注射用要求的制剂，包括静脉大输液剂、冻干粉针剂、无菌粉针剂、水针剂。
7.如权利要求1至6所述的阿胶注射剂的制备方法，其特征在于取经酶解后得到的阿胶蛋白水解物，用注射用水溶解，再加入注射用氯化钠，搅拌溶解，用10％氢氧化钠溶液调pH值为6.0～8.0，0.45цm微孔滤膜过滤，滤液分装入100ml输液瓶，压盖、灭菌，即得。
8.如权利要求1至6所述的阿胶注射剂的制备方法，其特征在于取经酶解后得到的阿胶蛋白水解物，用注射用水溶解，再加入注射用葡萄糖，搅拌溶解，用0.1mol盐酸溶液调pH值为5.0～6.0，0.45цm微孔滤膜过滤，滤液分装入100ml输液瓶，压盖、灭菌，即得。
全文摘要
本发明涉及阿胶注射剂，主要有效成分为将阿胶分解所得的多肽、氨基酸和微量元素的液体，不含过敏原，符合人体注射用药的质量要求，制剂形式为静脉给药的注射剂。主要应用于不适宜口服给药期间的病人和全身情况虚弱的病人，例如胃肠道部分切除术后伤口尚未愈合的病人和恶性肿瘤化疗后的病人，适应症包括生血，升白细胞，促进伤口愈合，增强免疫机能等。本发明还公开了该注射剂的制剂方法。
文档编号A61P37/04GK1583162SQ20041002274
公开日2005年2月23日 申请日期2004年6月7日 优先权日2004年6月7日
发明者唐小海, 丁平 申请人:成都市药友科技发展有限公司