专利名称：：用于治疗青光眼的血清淀粉状蛋白A的RNAi抑制的制作方法用于治疗青光眼的血清淀粉状蛋白A的RNAi抑制发明领域本发明涉及干扰RNA组合物用于抑制青光眼、尤其是原发性开角型青光眼中血清淀粉状蛋白A(SAA)表达的领域。发明背景青光眼是共有某些临床特征的一组多样的视神经病。青光眼中视力损失的原因是神经视网膜中视网膜神经节细胞的选择性死亡，该选择性死亡在临床上通过视野特征性改变、神经纤维层缺陷和视神经头(ONH)进行性杯化来诊断。青光眼t艮的一个主要风险因素是高眼压症(升高的眼内压力，IOP)的存在。需要足够的眼内压力以维持眼的形状并提供压力梯度以允许房水流向无血管的角膜和晶状体。IOP似乎还参与正常张力青光眼的发病机制，此时常认为患者具有正常的IOP。与青光^bf目关的升高的IOP的原因是位于眼前房虹膜角膜角内一小片特化组织-小梁网(TM)中升高的房水流出阻力。TM的青光眼性改变包括TM细胞的损失和胞外残片(包括蛋白斑样物质)沉积和聚集.此外，还发生青光B艮性ONH的改变，在青光眼性眼中，ONM神经胶质细胞中存在形态学改变和运动性改变.作为对升高的IOP和/或短暂缺血性损伤的反细胞轴突形态学发生改变，原发性青光眼因具有解剖学或生理学基础的眼内液体流动紊乱造成。继发性青光眼因眼的外伤或创伤或宿疾发生。原发性开角型青光眼(POAG)，也称作慢性或单纯性青光眼，占全部原发性青光眼的90%。POAG以小梁网的退化为特征，该退化导致对来自眼的液体排出有异常高的阻力。这种阻力的后果是IOP的增加，这种增加为推动由眼正常产生的液体克服这种增加的阻力所需要。目前的抗青光眼疗法包括通过使用房水形成抑制剂或增强葡萄膜巩膜流出的药剂降低IOP、激光小梁成型术或作为旨在改善排出的滤过手术的小梁切除术。药物抗青光眼方法已经显示出多种有害副作用。例如，缩瞳药如毛果芸香碱可以引起视力模糊和其它不利的视觉副作用。全身施用的碳酸酐酶抑制剂还可以引起恶心、消化不良、疲劳和代谢性酸中毒.另夕卜，某些)8-阻断剂已经日益与严重的肺部副作用相关，其原因是i3-阻断剂对肺组织中/3-2受体的影响，拟交感神经药引起心动过速、心律不齐和高血压。此类副作用可以导致患者适从性降低或终止治疗。更重要地是，目前的抗青光眼疗法不直接解决持续无法緩解的对小梁网、视神经的病理性损伤以及视网膜神经节细胞和轴突的损失。鉴于青光眼的重要性以及目前治疗方法的不当，拥有对付青光眼JSJL^础性原因的治疗青光眼的改良方法会受到欢迎。发明简述本发明涉及把向SAAmRNA并因此干扰SAAmRNA表达的千扰RNA。本发明的干扰RNA用于治疗SAA相关性青光眼。本发明的实施方案提供减弱受试者眼中血清淀粉状蛋白AmRNA表达的方法，该方法包括向受试者眼中施用包含有效量的19至49个核苷酸长度的干扰RNA(如双链(ds)siRNA或单链(ss)siRNA)和可药用载体的组合物.双链siRNA包含有义核苷酸序列、反义核苷酸序列和至少19个核苷酸接近完全连续互补的区域。此外，反义序列在生理条件下与对应于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的一部分杂交，并具有与分别对应于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的杂交部分有至少19个核苷酸接近完全连续互补的区域，其中SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3是分别编码SAAl、SAA2和SAA4的DNA的有义链(GenBank参考号NM—000331、BC020795和NM_006512)。此组合物的施用减弱受试者眼中血清淀粉状蛋白AmRNA的表达。当干扰RNA是单链时，干扰RNA包含具有与对应于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的杂交部分有至少19个核苷酸接近完全连续互补的区域的核苷酸序列。在本发明的一个实施方案中，将反义siRNA设计成靶向对应于SEQIDNO:1的mRNA中在230、357、362、380、447、470、527、531、548或557位核苷酸处起始的核苷酸序列。在本发明另一个实施方案中，将反义siRNA设计成靶向对应于SEQIDNO:2的mRNA中在43、170、175、193、260、283、339或370位核苷^起始的核苷酸序列。在本发明又一个实施方案中，将反义siRNA设计成靶向对应于SEQIDNO:2的mRNA中在252、271、276、325或343位核苷酸处起始的核苷酸序列。在本发明的又一个实施方案中，将反义siRNA设计成靶向对应于SEQIDNO:3的mRNA中在153、166、222、227、251、268、297、335、356、384、3卯、396、406或423位核香酸处起始的核苷酸序列。本发明的又一个实施方案是治疗有此需要的受试者中血清淀粉状蛋白A相关性青光眼的方法。该方法包括向受试者眼中施用包含有效量的19至49个核苷酸长度的干扰RNA和可药用载体的组合物，其中干扰RNA包含有义核苷酸序列、反义核苷酸序列和至少19个核苷酸接近完全连续互补的区域。反5Uf列在生理^Hf下与对应于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的一部分杂交，并具有与分别对应于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的杂交部分有至少19个核苷酸接近完全连续互补的区域。血清淀粉状蛋白A相关性青光眼因此得到治疗。附图简述图1提供SAA2mRNA/18srRNA比率的QPCR分析以检查siRNA对用靶向SAAmRNA的SMARTPOOLsiRNA转染的NTM765正常小梁网细胞中内源性SAAmRNA的影响。使用三个不同浓度的Dharmafect#l试剂将小梁网细胞用100nMsiRNA转染24小时Con:对照；处理l:以0.05#1/100孔处理的处理1;处理2:以0.2pi/100/tl孔处理的处理2;处理3:以0.4#1/100/il孔处理的处理3。图2提供SAA2mRNA/18srRNA比率的QPCR分析以检查siRNA对用靶向SAAmRNA的SMARTPOOLsiRNA转染的GTM686青光眼小梁网细胞中内源性SAAmRNA的影响。使用三个不同浓度的Dharmafect弁l试剂将小梁网细胞用100nMsiRNA转染24小时Con:对照；处理l:以0.05#1/100/d孔处理的处理1;处理2:以0.2#1孔处理的处理2;处理3:以0.4/d/100孔处理的处理3。*:通过单因素方差分析和Newman-Keuls多重比较检验，相对于对照和处理1p<0.05。图3提供SAAsiRNA处理对正常小梁网细胞(NTM765-04)和青光目艮小梁网细胞(GTM686-03)的生长和形态学影响的实时电子监测(RE-CESTM)。使用三个不同浓度的Dharmafect#1试剂将细胞用100nM把向SAAmRNA的SMARTPOOLsiRNA转染48小时Tl:0.05/il/100/d孔；T2:0.2#1/100|d孔；T3:0.4/d/100/d孔。图4拔_供经siRNA处理的NTM765正常小梁网细胞裂解物中内源性SAA蛋白水平的ELISA测定结果。使用三个不同浓度的Dharmafect#1试剂将细胞用100nM靶向SAAmRNA的SMARTPOOLsiRNA转染48小时处理l:以0.05/d/100/d孔处理的处理l;处理2:以0.2/d/100jl孔处理的处理2;处理3:以0.4/*1/100pl孔处理的处理3。图5提供经siRNA处理的GTM686青光眼小梁网细胞裂解物中内源性SAA蛋白水平的ELISA测定结果J吏用三个不同浓度的Dharmafect弁l试剂将细胞用100nM靶向SAAmRNA的SMARTPOOLsiRNA转染48小时处理l:以0.05id/100pl孔处理的处理l;处理2:以0.2/tl/100孔处理的处理2;处理3:以0.4pi孔处理的处理3。*:通过方差分析和Bonferroni's多重比较检验，相对于对照p<0.05;**:相对于对照p<0.01。发明详述称作"RNAi"的RNA干扰是用于降低受单链或双链小RNA分子作用的乾基因表达的方法。干扰RNA包括双链或单链的小干扰RNA(dssiRNA或sssiRNA)、微RNA(miRNA)、小发夹RNA(shRNA)及其它。不希望受理论的约束，RNA干扰似乎在体内发生，伴随着dsRNA前体被切割成为长度约20至25个核苷酸的小RNA。切割由RNA酶III-RNA解螺旋酶Dicer完成。siRNA的"有义，，链(即与把mRNA序列完全相同的链)被除去，留下与靶mRNA互补的"反义"链以发挥降低mRNA表达的作用。siRNA的反义链似乎将称作RISC(RNA诱导性沉默复合体)的蛋白质复合体引导至mRNA，该复合体随后通过RISC的Argonaute蛋白质切割mRNA,因而降低通过该mRNA的蛋白质产生，干扰RNA是催化性的并且降低mRNA的表达可以用相对于mRNA而言亚化学计量数量的千扰RNA实现。mRNA表达的降低还可以通过翻译和转录机制实现。本发明涉及干扰RNA用于在眼病中抑制血清淀粉状蛋白A(SAA)表达的用途。根据本发明，外源提供的siRNA在眼结构中引起SAAmRNA沉默。本发明人先前已经证实在青光眼性TM组织和细胞中血清淀粉状蛋白A(SAA)mRNA和蛋白质的表达显著上调(于2003年12约17日提出的名为"UseofSerumAmyloidAGeneinDiagnosisandTreatmentofGlaucomaandIdentificationofAnti-GlaucomaAgents"的悬而未决的美国专利申请USSN60/530,430)。本发明人已经证实使用Affymetrix基因芯片通过实时定量聚合酶链式反应(QPCR)观察到差异性mRNA表达并通过SAAELISA观察到增加的SAA蛋白质水平(如上提及的悬而未决的美国专利申请，本文中完整地引用作为参考).除非另外说明，本文中提及的核酸序列以5，至3，方向书写。术语"核酸"，如本文中所用，指DNA或RNA或其修饰的形式，包含存在于DNA中的嘌呤或嘧咬^^(腺嘌呤"A"、胞嘧咬"C"、鸟噤呤"G"、胸腺嘧咬"T")或存在于RNA中的噤呤或嘧咬g(腺噤呤"A"、胞嘧咬"C"、鸟噪呤"G"、尿嘧咬"U，，)。虽然"T"碱基未天然地存在于RNA中，但本文中提供的千扰RNA包含"T"碱基，尤其在3'端包含"T"碱基。"核酸"包括术语"寡核苷酸，，和"多核苷酸"并且可以指单链分子或双链分子。双链分子通过A和T碱基、C和G碱基以及A和U4^之间的Watson-Crick碱基配对形成。双链分子的链可以具有彼此部分的、大部分的或完全的互补性并且形成杂种双链体，其结合强度取决于M序列互补性的性质和程度。mRNA序列通过获知编码该mRNA的DNA的有义链或反义链序列容易地加以确定。例如，SEQIDNO:1提供对应于血清淀粉状蛋白AlmRNA的DNA的有义M列。mRNA的序列与将"T"4^换成"U"^后的DNA有义链的序列完全相同，因此，血清淀粉状蛋白Al的mRNA序列从SEQIDNO:1中获知，血清淀粉状蛋白A2的mRNA序列从SEQIDNO:2中获知，血清淀粉状蛋白A4的mRNA序列从SEQIDNO:3中获知。血清淀粉状蛋白AmRNA:人血清淀粉状蛋白A包含众多差异性表达的小的脱脂栽脂蛋白，其由位于11号染色体短臂上的基因编码，SAA存在四种同种型。在ncbi.nlm.nih.gov上的国立生物技术信息中心GenBank数据库提供血清淀粉状蛋白Al的信使RNA的相应DNA序列，参考号NM一000331，作为SEQIDNO:1提供如下。血清淀粉状蛋白Al的编码序列来自核苷酸225-593。SAA1:SEQIDNO:1:1aaggctcagt61cagcacagat121ctttcccwc181taccattctg241gcctggtttt301gcgaggcttt361atttacatcgg421gacctggggg481tctttggcca541gtggcaaaga601cttcactctg661gagagggtac721caggtgsLggaaaggtgtcttctgctccttgtgatggggcttgcctgggcttggtgcggagcccca^tcacctctcaggagacaatgggtagccaccgctctttccttt貼atctcctctggtcctgggtgcgggacatgttacttccatggcagaagtgagactcgctggttccgacctgatctggctgttct貼taaatcctggcagrgcgagtgattttatctagagagtcagcagccgggagagcctactcgggggaatcagcgatgcctga^tcaggcctggcctgccacttaagaggagggacccgctaaaacttactatcctggggcaccatgaag貼gcttctttctctgacatgctatgatgctcagagagaattgccaatgaatgaga^atacgggcagggatagctcagctatctgttttctcatacagccacttctcacggtcgttccttgsgagaagccagccaaaagggatccagsigattggggcaggatgagcttcctaca站gcggg上述SAAlmRNA序列的等效物是可变剪接形式、等位基因形式或其同族形式。同族形式是来自另一个哺乳动物物种的与SEQIDNO:1同源的血清淀粉状蛋白AlmRNA。与SEQIDNO:l相关的SAAl核,列是具有GenBank登录号NM—009117(来自小鼠)、NM—199161(人转录变体2)、BC007022.1、BG533276.1、BG567902.1、BQ691948.1、CD102084.1、M10卯6,1、M23698.1、X51439.1、X51441,1、X51442.1、X51443.1和X56652.1的那些SAAl核酸序列。GenBank数据库提供血清淀粉状蛋白A2的信使RNA的相应DNA序列，参考号NM—BC020795,作为SEQIDNO:2提供如下。血清淀粉状蛋白A2的编码序列来自核苷酸38-406。SAA2:SEQIDNO:2611211812413013S1421481541tttctgctccttttgatgggcggctcagsicgggtgcctggccatggtgcgagaccccaatctgctctcagtatgtccagaagctcagctattggtcctgagctcgggacaaaatacttccgccgcsg貼ggaggactcgccacttccgacgagacctggcgadgetgagacagcacagatgtgtcagcagtgtggagagceitgctcggggtgatcagcaatggecgateactgctggccttatgaggececagcaccatgccgaagcttcctactctgacgaactatgattgccagageigggctgccaatgectgagaaateggggcagg5L5ltaggC5LtCaagcttctcattttcgttccgctgcc5L5Lei5Leiata^tccagaaaatggggcatactgagcttgatacaaagttaataaatgccgggcctggtttggcgaggcccaattacatggggscctgggactcacaggggagtggcagcctcttcacttagtgaggtcttaagaggtc上述SAA2mRNA序列的等效物是可变剪接形式、等位基因形式或其同族形式。同族形式是来自另一个哺乳动物物种的与SEQIDNO:2同源的血清淀粉状蛋白A2mRNA。与SEQIDNO:2相关的SAA2核酸序列是具有GenBank登录号NM—030754(人)、BC058008.1、J03474.1、L05921.1、M23699.1、M2370(K1、M26152.1、X5144(U、X51444.1、X51445.1和X56653.1的那些SAA2核酸序列。SEQIDNO:l和SEQIDNO:2的蛋白质产物(SAA1和SAA2)称作急性期反应物并且类似于C反应蛋白，它们由促炎症细胞因子显著上调。SAA1和SAA2蛋白质在氨基酸水平93.5%相同并且基因在核苷酸水平96.7%相同。GenBank数据库提供血清淀粉状蛋白A4的信使RNA的相应DNA序列，参考号NMJ)06512，作为SEQIDNO:3提供如下。血清淀粉状蛋白A4的编码序列来自核苷酸76-468。SAA4:SEQIDNO:31tatagctccacggccagaagataccagcag61站ggtccacagcetc站tgaggcttttcacsi121gtcaccagtgaaagctggcgttcgtttttc181ggcagagcct6ittggg沃cataatgatatcc241gctcggggSLCtatgeitgc:tgcccaaaga301atcagccgfttccagggtctatcttcaggga3515Lgcactgtattggaggactcgaagtccaac421aaagaccccgaccgcttcagacctgacggc481tctgctctcagggaaactgggctgtgagcc541ggtcactgagctttgtgtccccaggaactg601gtttgtc站attgactctgcctttactgetaatttcagctggagaggcattgttttctgctccttggtcatgggaaaggaggctctcc站ggggttggggacatgaatcaccaaaattcacagatatctctatggacctgggggtgtctgggctgctactcttaatagractacta±ttatttggaaacagrcgag说agctgagg&atggrggccggagtggcctgcctaagaaatactgagcttcctgctccacacacttctccccccagsccSLgggacacaggtatagggcacctagaggtgttcaataaatSAA4是低水平组成型表达的基因。上述SAA4mRNA序列的等效物是可变剪接形式、等位基因形式或其同族形式。同族形式是来自另一个哺乳动物物种的与SEQIDNO:3同源的血清淀粉状蛋白A4mRNA,与SEQIDNO:3相关的SAA4核酸序列是具有GenBank登录号BC007026、M81349.1和S48983.1的那些SAA4核酸序列。减弱mRNA的表达短语"减弱mRNA的表达"，如本文中所用，意指施用一定量的干扰RNA以在细胞中引起把基因的全长mRNA水平减少，因而与具有杂乱序列的对照mRNA相比，减少mRNA翻译成为蛋白质。降低mRNA表i^it常称作"敲低"mRNA。通过本文中实施方案预期敲低的表达量包括并且在50%至100%之间。然而，为了本发明的目的，无需实现此敲低水平。此外，两套干扰RNA可以各自适度有效地进行敲低，然而共同施用时，可以显著更有效地进行敲低。在一个实施方案中，单个dssiRNA有效地敲低达70%。在另一个实施方案中，两种或多种dssiRNA共同有效地敲低达70%。敲低通常由通过定量聚合SI^式反应(QPCR)扩增测定的mRNA水平或通过蛋白质印迹或酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定的蛋白质水平测量，蛋白质水平的分析提供对因RNA诱导性沉默复M(RISC)和翻译抑制所致的mRNA降解的评估。其它用于测量敲低的技术包括RNA溶液杂交、核酸酶保护、RNA印迹杂交、逆转录、用微阵列监测基因表达、抗体结合、it射免疫测定和荧光激活的细胞分析，SAA的抑制还在人或哺乳动物中因观察到青光眼症状的改善，例如眼内压力的改善、视野损失的改善或旨经头改变的改善加以推测。本发明实施方案的干扰RNA以催化方式起作用，即干扰RNA能够以化学计量的量实现乾mRNA的抑制。与反义治疗相比，需要显著较少量的干扰RNA以产生治疗效果.双链干扰RNA:双链干扰RNA(又称作dssiRNA),如本文中所用，具有有义核苷^列和反义核苷酸序列，有义序列和反义序列包含至少19个核苷酸接近完全连续互补的区域。千扰RNA的长度包含19至49个核苷酸，并且可以包含19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48或49个核苷酸。dssiRNA的反义序列在生理条件下与SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的一部分杂交，并且具有与分别对应于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的杂交部分有至少19个核苷酸接近完全连续互补的区域。siRNA的反义链是siRNA活性的定向剂，因为反义链结合至细胞内的RISC复合体，并引导结合的复合体在与反义RNA序列互补的序列处特异性地结合至mRNA，因而允许随后通过结合的复合体切割mRNA。用来选择siRNA的靼序列的技术通过Tuschl,T.等"ThesiRNAUserGuide，，(2004年5月6日修订，在洛克菲勒大学网站上可获得)、通过Ambion公司网站上的506号技^^^艮"siRNADesignGuidelines"、通过Invitrogen网站(使用錄G/C含量最小350/0，最大55%)以及通过Dharmacon网站提供。乾序列可以位于mRNA的编码区内或5'或3'非翻译区内。用于SAA1的DNA把序列的实施方案存在于SEQIDNO:1的核苷酸531至549处5'-TGGGGCAGGAGTGGCAAAG-3，SEQIDNO:4。用于靶向SEQDDNO:4的相应mRNA序列并在每一链上具有3，UU突出端的本发明双链siRNA是5'-UGGGGCAGGAGUGGCAAAGUU-3'SEQIDNO:53'國UUACCCCGUCCUCACCGUUUC-5'SEQIDNO:6。该3，突出端可以具有多个"U，，残基，例如在2、3、4、5和6间并包含2、3、4、5和6个的多个"U，，絲。5'端还可以具有5，核苷酸突出端。用于靶向SEQDDNO:4的相应mRNA序列并在每一链上具有3'TT突出端的本发明双链siRNA是5'-UGGGGCAGGAGUGGCAAAGTT曙3'SEQIDNO:73，-TTACCCCGUCCUCACCGUUUC-5，SEQIDNO:8。双链siRNA的链可以通过发夹环连接以形成如下单链siRNA:5，-UGGGGCAGGAGUGGCAAAGUUNNN\N3'-UUACCCCGUCCUCACCGUUUCNNNNN/SEQIDNO:9。N是核苷酸A、T、C、G、U或本领域普通技术人员所知的修饰形式。核苷酸数目N在如下数字之间并包括这些数字3至23、或5至15、或7至13、或4至9、或9至11，或者核苷酸数目N是9。表1列出SEQIDNO:1、SEQIDNO:2和SEQIDNO:3的SAADNA耙序列的实例，以如上所述形式从SEQIDNO:1、SEQIDNO:2和SEQIDNO:3设计本发明的siRNA。表l用于siRNA的SAA耙序列<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>如以上实例中引用，技术人员能够使用表l中提供的把序列信息，通过参考SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3中的序列位置并添加或缺失分别与SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3互补或接近互补的核苷酸，设计长度比表l中提供的序列更短或更长的干扰RNA。由dssiRNA或sssiRNA指导的靶RNA切割反应是高度序列特异性的。通常，含有与靶mRNA的一部分完全相同的有义核苷酸序列及与mRNA有义序列完全互补的反义部分的siRNA是用于抑制SAAmRNA的siRNA实施方案。然而，实施本发明不需要siRNA的反义链与把mRNA间100%序列互补。因此本发明允许因遗传突变、抹多态性或进化趋异可以预期的序列变异。例如，相对于靶序列具有插入、缺失或单点突变的siRNA序列对抑制是有效的。在本发明的某些实施方案中，反义序列包含CUUUGCCACUCCUGCCCCA(SEQIDNO:37)或UCGGAAGUGAUUGGGGUCU(SEQIDNO:38)并且反5Lf列与对应于SEQIDNO:1的mRNA的,分杂交，在本发明的更多实施方案中，反义序列包含UUUGUCUGAGCCGAUGUAA(SEQIDNO:39)AACCAGGCCCGUGAGAAGC(SEQIDNO:40)CUGAGCCGAUGUAAUUGGC(SEQIDNO:41)CCCCCGAGCAUGGAAGUAU(SEQIDNO:42)CUCUGGCAUUGCUGAUCAC(SEQIDNO43)GCCUGUGAGUCUCUGGAUA(SEQIDNO:44)GCCACUCCUGCCCCMJUUA(SEQIDNO:45)GCCAGCAGGUCGGAAGUGA(SEQIDNO:46)，并且反5Cf列与对应于SEQIDNO:1的mRNA的一部分或对应于SEQIDNO:2的mRNA的一部分杂交。在本发明另一个实施方案中，反义序列包含AGUCUCUGGAUAUUCUCUC(SE()IDNO47)、UUUAUUGGCAGCCUGAUCG(SEQIDNO48)、UUGCUGAUCACUUCUGCGG(SEQIDNO49)、CUGGAUAUUCUCUCUGGCA(SEQIDNO50)、UCUGCCACUCCUGCCCCAU(SEQIDNO51)或GCCACUCCUGCCCCAUUUA(SEQIDNO:69)并且反5C4列与对应于SEQIDNO:2的mRNA的一部分杂交。以上提及的方法包括如此实施方案，即其中反义序列包含AACCCCUUGGAGAGCCUCC(SEQIDNO:52)、UGCCCAUGUCCCCAACCCC(SEQIDNO:53)、AUAGAGAUAUCUGUUUGAA(SEQIDNO:54)、CGAGCAUAGAGAUAUCUGU(SEQIDNO:55)、CUUUGGGCAGCAUCAUAGU(SEQIDNO:56)、AGACACCCCCAGGUCCUCU(SEQIDNO:57)、CCUGGAACGGCUGAUGAGU(SEQIDNO:58)、CCAAAUAAAUAGUAGUCUA(SEQIDNO:59)、UCCAAUACAGUGCUGCUGU(SEQIDNO:60)、CUCAGCUUUCUCGUUGGAC(SEQIDNO:61)、CCAUUCCUCAGCUUUCUCG(SEQIDNO:62)、CCGGCCCCAUUCCUCAGCU(SEQIDNO:63)、CUUUGCCACUCCGGCCCCA(SEQIDNO:64)或UCUGAAGCGGUCGGGGUCU(SEQIDNO:65)，并且反5C^列与对应于SEQIDNO:3的mRNA的一部分杂交。siRNA的反义序列具有与mRNA的乾序列中至少19个核苷酸接近完全连续的互补性。"接近完全"如本文中所用意指siRNA的反义序列M上与靶mRNA的至少一部分互补，并且siRNA的有义序列基本上与靶mRNA的至少一部分完全相同。"同一性，，如本领域普通技术人员所知是如通it^列间核苷酸的顺序匹配而测定的核苷酸序列间序列相关性的程度.在一个实施方案中，将对于靶mRNA具有80%以及具有80%至100%间的互补性的反义RNA视为几乎完全互补，并且可以在本发明中使用。"完全"连续的互补性是邻近^对的标准Watson-Crick减基配对。"至少接近完全"连续的互补性包括如本文中所用的"完全"互补性。设计用于测定同一性或互补性的计算机方法，例如BLASTP和BLASTN(Altschul，S.F.等(1990)J.Mol.Biol.215:403-410)以及FASTA以提供最大程度的核苷酸序列匹配。对应于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的耙序列可以位于mRNA的5，或3'非翻译区以及在mRNA的编码区内。双链干扰RNA的一条或两^:可以具有1至6个核普酸的3'突出端，其中核苷酸可以是一核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸或其混合物。突出端的核苷酸不发生碱基配对。在本发明的一个实施方案中，干扰dsRNA包含TT或UU的3'突出端。双链siRNA的有义链和反义链可以是如上所述的两条单链的双链体形式或可以是单个分子，在所述单个分子中互补区域发生碱基配对并且通过发夹或环共价地连接以形成单一的链。据信发夹通过称作Dicer的蛋白质干扰RNA可以因添加、缺失、置换或修饰一个或多个核普酸而不同于天然存在的RNA,非核苷酸物质可以在5'端、3'端或在内部与干扰RNA结合。通常设计此类修饰以增加干扰RNA的核酸酶抗性、促进细胞摄取、增强细胞靶向性、辅助追踪干扰RNA或进一步改善稳定性。例如，干扰RNA可以在突出端的末尾包含噪呤核苷酸，例如，胆固醇通过他咯烷连接体缀合至dssiRNA分子有义链的3'端也对siRNA提供稳定性。其它修饰例如包括3'末端生物素分子、已知具有穿透细胞特性的肽、纳米粒子、模拟肽、荧光染料或树状聚体。核苷酸可以在分子的4^部分、其糖部分或磷酸部分被修饰并且在本发明实施方案中发挥作用。修饰例如包括用烷基、烷氧基、氨基、脱氮(deaza)、卣素、羟基、硫羟基或其组合置换。核苷酸可以例如用具有更高稳定性的类似物取代，如用2'脱氧-T取代U，或具有糖修饰，如2，OH由2'M或2'甲基、2'甲氧乙基或2'-0,4'-C亚甲基桥取代。核苷酸的嘌呤或嘧啶类似物实例是黄嘌呤、次黄嘌呤、氮杂嘌呤、甲M代腺嘌呤、7-脱氮-腺嘌呤以及O-和N-修饰的核苷酸。核苷酸的磷^可以通过用氮或用硫(硫代磷酸S旨)取代磷酸基的一个或多个氧进行修饰。修饰对改善功能是有用的，例如改善稳定性或通透性或者有用定位或靶向。反义siRNA中可以存在与SEQIDNO:1中一部分不互补的区域。非互补性区域可以位于互补区域的3'端、5'端或两端。千扰RNA可以合成产生，例如通过体外(iViv&n>)转录、siRNA表达栽体或PCR表达盒产生。作为转染的siRNA发挥良好作用的干扰RNA在作为体内表达的siRNA时同样发挥良好作用。干扰RNA可使用受保护的核糖核苷亚磷跣胺和常规DNA/RNA合成仪化学合成并且可以例如从商业供应商如AmbionInc.(Austin，Texas)、Invitrogen(Carlsbad，CA)或Dharmacon(Lafayette，Colo.，美国)得到，干扰RNA例如通过用溶剂或树脂提取、沉淀、电泳、层析或其组合加以纯化。备选地，干扰RNA可以几乎不进行纯化而加以使用以避免因样品加工引起的损失。干扰RNA可以通过使用本领域普通技术人员已知的组成型或诱导型启动子如U6或H1RNA聚合酶III启动子、巨细胞病毒启动子、SP6、T3或T7启动子从重组质粒上表达而向受试者提供。例如，来自InvivoGen(SanDiego，CA)的psiRNATM允许在细胞内从RNA聚合酶III启动子上产生siRNA。从重组质粒中表达的干扰RNA可以通过标准技术分离。用于表达干扰RNA的病毒载体可以使用如上所述的例如用于质粒的启动子衍生自腺病毒、船目关病毒、痘病毒、逆转录病毒(例如慢病毒、弹状病毒、鼠白血病病毒)、疱渗病毒等。病毒栽体的选择、用于由栽体表达干扰RNA的方法和用于递送栽体的方法在本领域普通技术人员能力范围内。干扰RNA的表达还通过使用SILENCEREXPRESSTM(Ambion，Austin，Texas)经具有人Hl、人U6或小鼠U6启动子的表达盒(SEC)通过PCR提供。沉默表达盒是在发夹siRNA模板两侧包含有启动子和终止子的PCR产物。一旦转染ii^细胞，发夹siRNA从PCR产物上表达并"i秀导特异性沉默。生理条件下杂交"杂交，，指这样的技术，在其中允许单链核酸(DNA或RNA)相互作用以致于氢键结合的复合体(称作杂化物)由具有互补或几乎互补g序列的这些核酸形成。杂^t^是敏感的和选择性的以致于特定目的序列在存在低浓度此序列的样品中得到鉴定。杂交的特异性(严格性)受例如体外预杂交溶液和杂交溶液中盐或甲酰胺的浓度、以及杂交温度的控制，并且在本领域内是众所周知的。具体而言，严格性通过降低盐的浓度、增加甲酰胺的浓度或升高杂交温度而增加。例如，高严^^件可以在约50。/。甲酰胺于37。C至42。C下发生。降低的严M件可以在约35%至25%甲酰胺于约30。C至35。C下发生。用于杂交的严格条件实例由Sambrook，J.，1989，MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.提供。严格杂交条件的其它实例包括400mMNaCl、40mMPIPESpH6.4、lmMEDTA、50。C或70。C持续12-16小时，随后洗涤，或于70°C在lxSSC或于50°C在lxSSC、50。/。甲酖胺中杂交，随后于70°C在0.3xSSC中洗涤，或于70。C在4xSSC或于50。C在4xSSC、50%甲酰胺中杂交，随后于67。C在lxSSC中洗涤。用于杂交的温度是低于杂合物解链温度(Tm)约5-10°C的温度，其中对于长度19至494UJtt的杂合物，Tm使用如下计算式确定Tm。C=81.5+16.6(log1()[Na+D+0.41(%G+C)-(600/N)，其中N是杂合物中碱基的数目，并且Na+l是杂交緩冲液中钠离子的浓度.在本发明的实施方案中，与SAAmRNA在体外高严旨fr下杂交的干扰RNA的反义链将在生理条件下在体内特异性地结合。鉴定或分离在高严旨降下不与核酸杂交的相关核酸在降低的严格性下实施。单链干扰RNA:如上所提及，干扰RNA最终作为单^C挥作用。已发现sssiRNA实现了mRNA沉默，尽管效率低于双链siRNA。因此，本发明的实施方案还提供siRNA的施用，其中单链siRNA在生理条件下与SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的一部分杂交，并具有与分别对应于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的杂交部分有至少19个核苷酸接近完全连续互补的区域。sssiRNA具有如以上乾良dssiRNA相同的19至49个核苷酸长度。sssiRNA具有5'磷酸或在原位或在体内在5，位置处磷酸化。术语"5，磷酸化"用于描述例如具有通过酯键连接至5，糖(例如5，核糖或脱氧核糖，或其类似物)的C5羟基的磷酸基团的多核苷酸或寡核苷酸。sssiRNA可以具有单个、两个或三个磷酸基团。sssiRNA可如dssiRNA那样化学合成或通过载体合成。5'磷睃基团可以通过激酶添加或5'磷酸可以是核酸酶切割RNA的结果。递送如对于dssiRNA所述。在一个实施方案中，施用具有被保护末端和核酸酶抗性修饰的sssiRNA用于沉默。sssiRNA可以被干燥用于贮存或溶解于水溶液中。溶液可以含有緩冲剂或盐以便抑制退火或用于稳定.干扰性发夹RNA:干扰性发夹RNA是单链的并JLfr—^:内含有有:^列和反5Uf列.为了通过DNA栽体表达，将对应于有义siRNA序列的至少19个核苷酸的相应DNA寡核苷酸通过短间隔区与它的反向互补反义序列连接。对于所选择表达栽体，如果需要可以添加3'末端T和形成限制性位点的核苷酸。得到的RNA转录物自身回折以形成茎-环结构.施用模式干扰RNA可以通过眼组织注射直接递送至眼，如眼周、结膜、筋膜下、前房内、玻璃体内、视网膜下、目姊后或小管内注射；通过使用导管或其它的布放装置如视网膜颗粒剂(retinalpellet)、眼内插入物、栓剂或者包含多孔材料、非多孔材料或胶状材料的^体；通过局部使用的眼滴剂或眼骨；通过在盲管内的或^巩膜附近(经巩膜的)或眼内的緩释装置直接应用至眼。前房内注射可以穿过角膜抵达前房室以允许药物到达小梁网。前房内注射可以it/v流出施莱姆管的静脉收集通道或iiA施莱姆管。受试者因青光眼或有青光眼发展风险而需要治疗的受试者是具备患有与SAA表达或活性相关的青光眼即SAA相关性青光眼的病症或风险的人或其它动物。与此类疾病相关的眼结构可以包括例如视网膜、脉络膜、晶状体、角膜、小梁网、虹膜、视神经、视神经头、巩膜、眼房、玻璃体腔或睫状体。制剂和剂量药物制剂包含与生理可接受的眼用栽体介质如水、緩冲剂、盐水、甘油、透明质酸、甘露醇等混合的重量至多为99。/。的本发明干扰RNA或其盐。本发明的干扰RNA作为溶液剂、混悬剂或乳剂施用。如下是由本发明的可能的制剂的实例。量(重量百分比)干扰RNA至多99;0.1-99;0.1—50;0.5-10.0羟丙基曱基纤维素0.5氯化钠0.8糾氯铵0.01EDTA0.01NaOH/HCl调至pH7.4纯化水补足至100mL量(重量百分比)干扰RJNA至多99;0.1-99;0.1-50;0.5-10.0磷酸緩冲盐水1.0絲氯铵0.01聚山梨酯800.5纯化水补足至100%量(重量百分比)干扰RNA至多99;0.1-99;0.1—50;0.5-10.0磷酸二氢钠0.05磷酸氢二钠(无水)0.15氯化钠0.75EDTA二钠0.05CremophorEL0.1糾氯铵0.01HC1和/或NaOHpH7.3-7.4纯化水补足至100%量(重量百分比)干扰RNA至多99;0.1-99;0.1-50;0.5-10.0磷酸緩冲盐水1.0幾丙基-^环糊精4.0纯化水补足至100%通常，本发明实施方案的干扰RNA的有效量包含从20pM至100nM、或从1nM至50nM、或从5nM至约25nM的眼部或其附近细胞间浓度。面.制剂的pH为约pH4-9，或pH4,5至pH7.4,虽然精确给药方案由临床医生自行决定，但干扰RNA可以通过每曰四次每只眼各滴一滴施用，或按照临床医生指导施用。制剂的有效量取决于如下因素，如受试者的年龄、种族和性别或青光眼的严重性。在一个实施方案中，将干扰RNA以治疗剂量局部递送至眼睛并抵达小梁网、视网膜或视神经头，由此改善SAA相关性疾病过程。可接受的载体。可眼用的载体指至多引起轻微眼刺激至不引起眼刺激、根据需要提供适宜防腐作用、并且以均一剂量递送一种或多种本发明干扰RNA的栽体。用于施用本发明实施方案的干扰RNA的可接受载体包括MinisTransIT-TKOsiRNA转染试剂(MinisCorporation,Madison,Wisconsin)、LIPOFECTIN、lipofectamine、OLIGOFECTAMINETM(Invitrogen，Carlsbad,CA)、CELLFECTIN、DHARMAFECTTM(Dharmacon，Chicago,IL)或聚阳离子如^Jl氨酸、脂质体或脂溶试剂如胆固醇。脂质体例如从标准的形成载体的脂和固醇如胆固醇形成，并且可以例如包括把向性分子，如具有内皮细胞表面抗原结合亲和力的单克隆抗体。此外，脂质体可是PEG化的脂质体。对于眼用递送，干扰RNA可以与眼科可用的防腐剂、共溶剂、表面活性剂、增黏剂、渗透增强剂、緩沖剂、氯化钠或水组合以形成含水的无菌眼用混悬剂或溶液剂。眼用溶液制剂可以通过将抑制剂溶解于生理可接受的等渗含水緩冲液内加以制备。此外，目艮用溶液剂可包括眼科可用的表面活性剂以辅助抑制剂溶解。黏度形成剂如羟甲基纤维素、羟乙基纤维素、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等可以添加至本发明的组合物以改"S^f匕合物的滞留.为了制备无菌的眼用软骨制剂，将干扰RNA与合适载体如矿物油、液体羊毛脂或白fc5蜡中的防腐剂组合。无菌的眼用皿制剂可以通过将干扰RNA混悬于亲水性基质内制备，其中亲水性M根据本领域已知用于其它眼用制剂的方法例如从CARBOPOL-940(BFGoodrich,Charlotte,NC)等的组合中制备。VISCOAT⑧(AlconLaboratories,Inc.,FortWorth,TX)可以例如用于眼内注射。当干扰RNA在眼中穿透性较弱时，本发明的其它组合物可以含有渗透增强剂如Cremephor和TWEEN80(聚氧乙烯失水山梨糖醇单月桂酸酯，SigmaAldrich，St.Louis，MO)。试剂盒本发明的实施方案提供包含用于减弱细胞中SAAmRNA表达的试剂的试剂盒。试剂盒^^有DNA;^板，该;^板具有两个不同的启动子如T7启动子、T3启动子或SP6启动子，每一启动子有效连接至编码两条对应于干扰RNA的互补单链RNA的核苷酸序列。RNA从DNA;^板上转录并退火以形成有效减弱靶mRNA表达的双链RNA。试剂盒任选地含有用于从DNA模板扩增DNA序列的扩增引物和用于合成RNA的核苷三磷酸(即ATP、GTP、CTP和UTP)。任选地，试剂盒含有两种RNA聚合酶(其中每种聚合酶能够结合在DNA^^上的一个启动子并引起与该启动子有效连接的核普酸序列的转录)、用于纯化单链RNA的纯化柱如大小排阻柱、一种或多种緩冲液(例如用于单链RNA退火以产生双链RNA的緩冲液)、用于纯化双链RNA的RNA酶A或RNA酶T。SAA干扰RNA敲低例如人小梁网(TM)细胞中内源性SAA表达水平的能力如下实施。命名为GTM3或HTM-3的已转化的人TM细胞系(见Pang，LH.等，1994.Curr.EyeRes.13:51-63)的转染使用标准体外浓度(100nM)的如本文所述SAA干扰RNA以及LIPOFECTAMINETM2000(Invitrogen，Carlsbad,CAlifornia)以l:l(w/v)比例进行。杂乱siRNA和laminA/CsiRNA(Dharmacon)用作对照。QPCRTAQMAN⑧正向引物和反向引物以及包含靶位点的探针组用于评估mRNA切割的程度。此类引物/探针组可以由例如ABI(AppliedBiosystems，FosterCity,CA)合成。为减少非特异性脱靶效应的可能，对siRNA确定抑制SAAmRNA表达的siRNA的最低可能浓度。SAAmRNA敲低使用合适引物/探针组通过QPCR扩增评估。SAAsiRNA在GTM3细胞中的剂量反应在例如以0、1、3、10、30和100nM剂量范围的siRNA处理24小时后的GTM3细胞中观察到。数据使用GraphPadPrism4软件(GraphPadSoftware,Inc"SanDiego，CA)以可变斜率、sigmoidal剂量反应算法和100%最大约束(topconstraint)加以拟合。对于所测试的特定siRNA获得IC50。实施例l用于在小梁网细胞中沉默SAA的干扰RNA本研究检测SAA干扰RNA敲低人正常小梁网细胞和人青光眼性小梁网(TM)细胞中内源性SAA表达水平的能力。人正常TM细胞系(NTM765-04-OD,p5)和人青光眼性TM细胞系(GTM686-03-OS，p6)的转染使用SMARTPOOLSAA-干扰RNA库的标准体外浓度(100nM)和DHARMAFECT#1转染试剂(DharmaconResearchInc"Chicago,IL)实施。SMARTPOOLSAA-干扰RNA含有混合的四种同源双链siRNA，其中所述的双链siRNA被设计成靶向具有序列标识SEQIDNO:11、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19和SEQIDNO:20的SAAmRNA区域，并在三个不同浓度上(处理1:0.05/tl/100pi孔；处理2:0.2/d/100/d孑L;处理3:0.4(d/100/d孔)一式三份处理24或48小时。对照不作处理。对mRNA水平的影响对于SAAmRNA的QPCR分析，使用RNAqueous-4TMPCR(Ambion，Austin,TX)从处理24小时的细胞中提取总RNA并且用TaqMai^逆转录试剂(PEBiosystems，FosterCity，CA)合成cDNA,使用TaqMan通用PCR主混合物以及7700SDS(PEBiosystems)—式三份开展QPCR。使用核糖体RNA(18srRNA，PEBiosystems)作为多重QPCR中的归一化对照.QPCR分析使用两組TaqMan探针/引物(PEBiosystems)开展，第一组(P423)靶向SAAcDNA序列的编码区并且笫二组(P428)把向非编码区。如图1中所示，使用P423引物组，在处理3条件下用siRNA处理的NTM765-04正常细胞中观察到，相对于18srRNA约35%的SAAmRNA被抑制。如图2中所示，使用P423引物组，在处理3条件下用siRNA处理的GTM686-03青光眼性细胞中观察到，相对于18srRNA约41%的SAAmRNA被抑制。使用引物组P428得到相似结果。对SAA蛋白水平的影响使用ELISA测定法检测自处理48小时的细胞制备的细胞裂解物中内源性SAA蛋白质的水平。在经处理1、处理2和处理3siRNA处理的全部GTM686青光眼性细胞(图5)内观察到约66%的SAA蛋白质降低，而在NTM765细胞中(图4)^Ji见察到如此情况。内源性SAA蛋白质水平在两种小梁网细胞系、尤其在NTM765正常细胞系内极低。对细胞生长和形态学的影响SAAsiRNA对TM细胞形态学的影响通过实时电子感知系统(RT-CESTM，ACEABiosciences,Inc.,SanDiego,CA)监测。如图3中所示，:^M见察到因siRNA处理对TM细胞生长或形态学的毒性效应。本文中所4I^L参考文献以它们提供示例性方法或其它细节补充本文中所述的方法和细节的程度具体引用作为参考。本领域技术人员在本公开指示下将认识到可以对本文中公开的实施方案进行明显修改而不脱离本发明的精神和范围。本文中公开的全部实施方案可以在本公开指示下无需过度实验即得到实施和执行。本发明的全部范围在本公开及其等效实施方案中阐述。说明书不得解释为过于缩小本发明所授予4^P保护范围。如本文中所用并且除非另外说明，术语"a"和"an"具有"一"、"至少一"或"多于一"的意思。权利要求1.减弱受试者眼中血清淀粉状蛋白AmRNA表达的方法，包括向受试者眼中施用包含有效量的19至49个核苷酸长度的干扰RNA和可药用载体的组合物，其中血清淀粉状蛋白AmRNA的表达因此减弱；所述干扰RNA包含有义核苷財列、反义核苷,列以^4有义序列和反:JUf列间有至少19个核苷酸接近完全连续互补的区域;其中反义序列在生理条件下与对应于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的一部分杂交，并具有与分别对应于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的杂交部分有至少19个核苷酸接近完全连续互补的区域。2.如权利要求l中所述的方法，其中受试者患有青光眼。3.如权利要求l中所述的方法，其中受试者具有iUL成为青光眼的风险。4.如权利要求l中所述的方法，其中反:SC^列具有与对应于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的杂交部分有至少21至23个核苷酸接近完全连续互补的区域，并且在有义序列和反义序列各自的3，端包含额外的TT序列。5.如权利要求l中所述的方法，其中有义核苷酸序列和反义核苷^列由核苷酸序列环连接。6.如权利要求l中所述的方法，其中组合物经局部途径、玻璃体内途径或经巩膜途径施用。7.如权利要求1中所述的方法，其中将反义序列设计成靶向对应于SEQIDNO:1的mRNA中在230、357、362、380、447、470、527、531、548或557位核苷酸处起始的核苷酸序列。8.如权利要求1中所述的方法，其中将反义序列设计成靶向对应于SEQIDNO:2的mRNA中在43、170、175、193、260、283、339或370位核苷酸处起始的核苷酸序列。9.如权利要求1中所述的方法，其中将反义序列设计成靶向对应于SEQIDNO:2的mRNA中在252、271、276、325、343位核普酸处起始的核苷酸序列。10.如权利要求1中所述的方法，其中将反义序列设计成靶向对应于SEQIDNO:3的mRNA中在153、166、222、227、251、268、297、335、356、384、3卯、396、406或423位核普酸处起始的核苷酸序列。11.如权利要求l中所述的方法，其中反义序列包含CUUUGCCACUCCUGCCCCA(SEQIDNO:37)、UCGGAAGUGAUUGGGGUCU(SEQIDNO:38)、UUUGUCUGAGCCGAUGUAA(SEQIDNO:39)、AACCAGGCCCGUGAGAAGC(SEQIDNO:40)、CUGAGCCGAUGUAAUUGGC(SEQIDNO:41)、GCCACUCCUGCCCCAUUUA(SEQIDNO:69)、CCCCCGAGCAUGGAAGUAU(SEQIDNO:42)、CUCUGGCAUUGCUGAUCAC(SEQIDNO:43)、GCCUGUGAGUCUCUGGAUA(SEQIDNO:44)、GCCACUCCUGCCCCAUUUA(SEQIDNO:45)、GCCAGCAGGUCGGAAGUGA(SEQIDNO:46)、AGUCUCUGGAUAUUCUCUC(SEQIDNO:47)、UUUAUUGGCAGCCUGAUCG(SEQIDNO:48)、UUGCUGAUCACUUCUGCGG(SEQIDNO:49)、CUGGAUAUUCUCUCUGGCA(SEQIDNO:50)、UCUGCCACUCCUGCCCCAU(SEQIDNO:51)、AACCCCUUGGAGAGCCUCC(SEQIDNO:52)、UGCCCAUGUCCCCAACCCC(SEQIDNO:53)、AUAGAGAUAUCUGUUUGAA(SEQIDNO:54)、CGAGCAUAGAGAUAUCUGU(SEQIDNO:55)、CUUUGGGCAGCAUCAUAGU(SEQIDNO:56)、AGACACCCCCAGGUCCUCU(SEQIDNO:57)、CCUGGAACGGCUGAUGAGU(SEQIDNO:58)、CCAAAUAAAUAGUAGUCUA(SEQIDNO:59)、UCCAAUACAGUGCUGCUGU(SEQIDNO:60)、CUCAGCUUUCUCGUUGGAC(SEQIDNO:61)、CCAUUCCUCAGCUUUCUCG(SEQIDNO:62)、CCGGCCCCAUUCCUCAGCU(SEQIDNO:63)、CUUUGCCACUCCGGCCCCA(SEQIDNO:64)或UCUGAAGCGGUCGGGGUCU(SEQIDNO:65)。12.如权利要求l中所述的方法，其中干扰RNA包含在4^J^部分、在糖部分或在磷酸部分上的修饰。13.如权利要求1中所述的方法，其还包括向受试者眼中施用第二干扰RNA，所述第二干扰RNA具有19至49个核苷酸长度，并包含有义核苷酸序列、反义核苷,列以及在有义序列和反5C亭列间有至少19个核苷酸接近完全连续互补的区域；其中第二干扰RNA的反义序列在生理^fr下与对应于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的第二部分杂交，并且具有与分别对应于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的第二杂交部分有至少19个核苷酸接近完全连续互补的区域。14.如权利要求1中所述的方法，其中组合物包含有效量的至少四种干扰RNA的混合物和可药用载体，其中每一干扰RNA具有19至49个核苷酸长度，并且每一干扰RNA包含有义核苷酸序列、反义核苷M列以及在四种干扰RNA的每一干扰RNA的有义序列和反义序列间有至少19个核苷酸接近完全连续互补的区域；其中混合物的反M列在生理M下与对应于SEQIDNO:2的mRNA中分别在175、252、276和325位核苷酸处起始的一部分杂交，并具有与对应于SEQIDNO:2的mRNA中分别在175、252、276和325位核苷酸处起始的杂交部分有至少19个核苷酸接近完全连续互补的区域。15.减弱受试者眼中血清淀粉状蛋白AmRNA表达的方法，包括向受试者眼中施用包含有效量的19至49个核普酸长度的干扰RNA和可药用载体的组合物，其中血清淀粉状蛋白AmRNA的表达因此减弱；其中干扰RNA包含具有与对应于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA中的杂交部分有至少19个核香酸接近完全连续互补的区域的核苷酸序列。16.如权利要求15中所述的方法，其中组合物经局部途径、玻璃体内途径或经巩膜途径施用。17.如权利要求15中所述的方法，其中将干扰RNA设计成粑向对应于SEQIDNO:l的mRNA中在230、357、362、380、447、470、527、531、548或557位核苷酸处起始的核苷酸序列。18.如权利要求15中所述的方法，其中将干扰RNA设计成乾向对应于SEQIDNO:2的mRNA中在43、170、175、193、260、283、339或370位核苷酸处起始的核苷酸序列。19.如权利要求15中所述的方法，其中将干扰RNA设计成把向对应于SEQIDNO:2的mRNA中在252、271、276、325、343位核普酸处起始的核苷酸序列。20.如权利要求15中所述的方法，其中将干扰RNA设计成靶向对应于SEQIDNO:3的mRNA中在153、166、222、227、251、268、297、335、356、384、390、396、406或423位核苷酸处起始的核苷酸序列。21.如权利要求15中所述的方法，其还包括向受试者眼中施用第二干扰RNA,所述第二千扰RNA具有19至49个核苷酸长度，并包含具有与对应于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA中的第二杂交部分有至少19个核苷酸接近完全连续互补的区域的第二核苷酸序列。22.如权利要求15中所述的方法，其中组合物包含有效量的至少四种干扰RNA的混合物，每一千扰RNA具有19至49个核香酸长度，并且混合物包含具有与对应于SEQIDNO:2的mRNA中的分别在175、252、276和325位核苷酸处起始的杂交部分有至少19个核苷酸接近完全连续互补的区域的第一、第二、第三和第四核苷酸序列。23.治疗有此需要的受试者中血清淀粉状蛋白A相关性青光眼的方法，其包括向受试者眼中施用包含有效量的19至49个核苷酸长度的干扰RNA以及可药用载体的组合物，其中血清淀粉状蛋白A相关性青光眼因此得到治疗；所述干扰RNA包含有义核苷酸序列、反义核苷酸序列以及在有义序列和反义序列间有至少19个核苷酸接近完全连续互补的区域；其中反义序列在生理条件下与对应于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的一部分杂交，并具有与分别对应于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的杂交部分有至少19个核苷酸接近完全连续互补的区域。24.如权利要求23中所述的方法，其中组合物经局部途径、玻璃体内途径或经巩膜途径施用。25.如权利要求23中所述的方法，其中将干扰RNA设计成靶向对应于SEQIDNO:l的mRNA中在230、357、362、380、447、470、527、531、548或557位核苷酸处起始的核普酸序列。26.如权利要求23中所述的方法，其中将干扰RNA设计成靶向对应于SEQIDNO:2的mRNA中在43、170、175、193、260、283、339或370位核苷酸处起始的核普酸序列。27.如权利要求23中所述的方法，其中将干扰RNA设计成靶向对应于SEQIDNO:2的mRNA中在252、271、276、325、343位核普酸处起始的核苷酸序列。28.如权利要求23中所述的方法，其中将干扰RNA设计成靶向对应于SEQIDNO:3的mRNA中在153、166、222、227、251、268、297、335、356、384、390、396、406或423位核苷酸处起始的核苷酸序列。29.如权利要求23中所述的方法，其还包括向受试者眼中施用第二干扰RNA，所述第二干扰RNA具有19至49个核苷酸长度，并包含有义核苷i^列、反义核苷酸序列以及在有义序列和反义序列间有至少19个核苷酸接近完全连续互补的区域；其中第二干扰RNA的反义序列在生理M下与对应于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的第二部分杂交，并且具有与分别对应于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的第二杂交部分有至少19个核苷酸接近完全连续互补的区域。30.如权利要求23中所述的方法，其中组合物包含有效量的至少四种干扰RNA的混合物和可药用载体，其中每一干扰RNA具有19至49个核苷酸长度，并且每一干扰RNA包含有义核苷酸序列、反义核苷酸序列以及在四种干扰RNA的每一干扰RNA的有义序列和反义序列间有至少19个核苷酸接近完全连续互补的区域；其中混合物的反义序列在生理条件下与对应于SEQIDNO:2的mRNA中分别在175、252、276和325位核苷酸处起始的一部分杂交，并具有与对应于SEQIDNO:2的mRNA中分别在175、252、276和325位核苷酸处起始的杂交部分有至少19个核苷酸接近完全连续互补的区域。31.治疗有此需要的受试者中血清淀粉状蛋白A相关性青光眼的方法，包括向受试者眼中施用包^^有效量的19至49个核苷酸长度的干扰RNA和可药用载体的组合物，其中血清淀粉状蛋白AmRNA的表达因此减弱；其中干扰RNA包含具有与对应于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA中的杂交部分有至少19个核苷酸接近完全连续互补的区域的核苷酸序列。32.如权利要求31中所述的方法，其中组合物经局部途径、玻璃体内途径或经巩膜途径施用。33.如权利要求31中所述的方法，其中将干扰RNA设计成靶向对应于SEQIDNO:l的mRNA中在230、357、362、380、447、470、527、531、548或557位核苷酸处起始的核苷酸序列。34.如权利要求31中所述的方法，其中将干扰RNA设计成靶向对应于SEQIDNO:2的mRNA中在43、170、175、193、260、283、339或370位核苷酸处起始的核苷酸序列。35.如权利要求31中所述的方法，其中将干扰RNA设计成靶向对应于SEQIDNO:2的mRNA中在252、271、276、325、343位核苷酸处起始的核苷酸序列。36.如权利要求31中所述的方法，其中将干扰RNA设计成靶向对应于SEQIDNO:3的mRNA中在153、166、222、227、251、268、297、335、356、384、3卯、396、406或423位核苷酸处起始的核苷酸序列。37.如权利要求31中所述的方法，其还包括向受试者眼中施用第二干扰RNA，所述第二干扰RNA具有19至49个核苷酸长度，并包含具有与对应于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA中的笫二杂交部分有至少19个核苷酸接近完全连续互补的区域的第二该普酸序列。38.如权利要求31中所述的方法，其中组合物包含有效量的至少四种干扰RNA的混合物，每一干扰RNA具有19至49个核苷酸长度，并且混合物包含具有与对应于SEQIDNO:2的mRNA中的分别在175、252、276和325位核苷^t起始的杂交部分有至少19个核苷酸接近完全连续互补的区域的第一、第二、第三和第四核苷酸序列，39.包含有效量的19至49个核苷酸长度的干扰RNA以及可药用载体的组合物在制造用于减弱受试者眼中血清淀粉状蛋白AmRNA表达的药物中的用途；所述干扰RNA包含有义核普酸序列、反义核苷酸序列以及在有义序列和反义序列间有至少19个核苷酸接近完全连续互补的区域；其中反义序列在生理条件下与对应于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的一部分杂交，并具有与分别对应于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的杂交部分有至少19个核苷酸接近完全连续互补的区域。40.如权利要求39中所述的用途，其中反义序列具有与对应于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的杂交部分有至少21至23个核苷酸接近完全连续互补的区域，并且在有义序列和反义序列各自的3，端包含额外的TT序列。41.如权利要求39中所述的用途，其中有义核苷酸序列和反义核苷酸序列由核苷酸序列环连接。42.如权利要求39中所述的用途，其中将组合物制备成用于经局部途径、玻璃体内途径或经巩膜途径的施用。43.如权利要求39中所述的用途，其中将反义序列设计成靶向对应于SEQIDNO:1的mRNA中在230、357、362、380、447、470、527、531、548或557位核苷酸处起始的核苷酸序列。44.如权利要求39中所述的用途，其中将反义序列设计成耙向对应于SEQIDNO:2的mRNA中在43、170、175、193、260、283、339或370位核苷酸处起始的核苷酸序列。45.如权利要求39中所述的用途，其中将反义序列设计成靶向对应于SEQIDNO:2的mRNA中在252、271、276、325、343位核苷酸处起始的核苷酸序列。46.如权利要求39中所述的用途，其中将反义序列设计成靶向对应于SEQIDNO:3的mRNA中在153、166、222、227、251、268、297、335、356、384、390、396、406或423位核苷酸处起始的核苷酸序列。47.如权利要求39中所述的用途，其中反义序列包含CUUUGCCACUCCUGCCCCA(SEQIDNO:37)、UCGGAAGUGAUUGGGGUCU(SEQIDNO:38)、UUUGUCUGAGCCGAUGUAA(SEQIDNO:39)、AACCAGGCCCGUGAGAAGC(SEQIDNO:40)、CUGAGCCGAUGUAAUUGGC(SEQIDNO:41)、GCCACUCCUGCCCCAUUUA(SEQIDNO:69)、CCCCCGAGCAUGGAAGUAU(SEQIDNO:42)、CUCUGGCAUUGCUGAUCAC(SEQIDNO:43)、GCCUGUGAGUCUCUGGAUA(SEQIDNO:44)、GCCACUCCUGCCCCAUUUA(SEQIDNO:45)、GCCAGCAGGUCGGAAGUGA(SEQIDNO:46)、AGUCUCUGGAUAUUCUCUC(SEQIDNO:47)、UUUAUUGGCAGCCUGAUCG(SEQIDNO:48)、UUGCUGAUCACUUCUGCGG(SEQIDNO:49)、CUGGAUAUUCUCUCUGGCA(SEQIDNO:50)、UCUGCCACUCCUGCCCCAU(SEQIDNO:51)、AACCCCUUGGAGAGCCUCC(SEQIDNO:52)、UGCCCAUGUCCCCAACCCC(SEQIDNO:53)、AUAGAGAUAUCUGUUUGAA(SEQIDNO:54)、CGAGCAUAGAGAUAUCUGU(SEQIDNO:55)、CUUUGGGCAGCAUCAUAGU(SEQIDNO:56)、AGACACCCCCAGGUCCUCU(SEQIDNO:57)、CCUGGAACGGCUGAUGAGU(SEQIDNO:58)、CCAAAUAAAUAGUAGUCUA(SEQIDNO:59)、UCCAAUACAGUGCUGCUGU(SEQIDNO:60)、CUCAGCUUUCUCGUUGGAC(SEQIDNO:61)、CCAUUCCUCAGCUUUCUCG(SEQIDNO:62)、CCGGCCCCAUUCCUCAGCU(SEQIDNO:63)、CUUUGCCACUCCGGCCCCA(SEQIDNO:64)或UCUGAAGCGGUCGGGGUCU(SEQIDNO:65)。48.如权利要求39中所述的用途，其中干扰RNA包含在^J^部分、在糖部分或在磷酸部分上的修饰，49.如权利要求39中所述的用途，其中组合物还包含第二干扰RNA,所述第二干扰RNA具有19至49个核苷酸长度，并包含有义核苷酸序列、反义核苷酸序列以及在有义序列和反义序列间有至少19个核苷酸接近完全连续互补的区域；其中第二千扰RNA的反义序列在生理条件下与对应于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的笫二部分杂交，并且具有与分别对应于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA的第二杂交部分有至少19个核苷酸接近完全连续互补的区域。50.如权利要求39中所述的用途，其中组合物包含有效量的至少四种干扰RNA的混合物和可药用载体，其中每一干扰RNA具有19至49个核苷酸长度，并且每一干扰RNA包含有义核苷酸序列、反义核苷酸序列以及在四种干扰RNA的每一干扰RNA的有义序列和反义序列间有至少19个核香酸接近完全连续互补的区域；其中混合物的反义序列在生理条件下与对应于SEQIDNO:2的mRNA中分别在175、252、276和325位核苷酸处起始的一部分杂交，并具有与对应于SEQIDNO:2的mRNA中分别在175、252、276和325位核苷酸处起始的杂交部分有至少19个核普酸接近完全连续互补的区域。51.包含有效量的19至49个核苷酸长度的干扰RNA和可药用载体的组合物在制造用于减弱受试者眼中血清淀粉状蛋白AmRNA表达的药物中的用途；其中干扰RNA包含具有与对应于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA中的杂交部分有至少19个核苷酸接近完全连续互补的区域的核苷酸序列。52.如权利要求51中所述的用途，其中将组合物制备成用于经局部途径、玻璃体内途径或经巩膜途径施用。53.如权利要求51中所述的用途，其中将干扰RNA设计成靶向对应于SEQIDNO:l的mRNA中在230、357、362、380、447、470、527、531、548或557处开始的核普酸序列。54.如权利要求51中所述的用途，其中将干扰RNA设计成靶向对应于SEQIDNO:2的mRNA中在43、170、175、193、260、283、339或370位核苷酸处起始的核苷酸序列。55.如权利要求51中所述的用途，其中将干扰RNA设计成靶向对应于SEQIDNO:2的mRNA中在252、271、276、325、343位核苷酸处起始的核苷*列。56.如权利要求51中所述的用途，其中将干扰RNA设计成乾向对应于SEQIDNO:3的mRNA中在153、166、222、227、251、268、297、335、356、384、390、396、406或423位核苷酸处起始的核苷酸序列。57.如权利要求51中所述的用途，其中组合物还包含第二干扰RNA，所述第二干扰RNA具有19至49个核苷酸长度，并包含具有与对应于SEQIDNO:1、SEQIDNO:2或SEQIDNO:3的mRNA中的第二杂交部分有至少19个核苷酸接近完全连续互补的区域的第二核苷酸序列。58.如权利要求51中所述的用途，其中组合物包含有效量的至少四种干扰RNA的混合物，每一干扰RNA具有19至49个核苷酸长度，并且混合物包含具有与对应于SEQIDNO:2的mRNA中的分别在175、252、276和325位核苷酸处起始的杂交部分有至少19个核苷酸接近完全连续互补的区域的第一、第二、第三和第四核苷酸序列。59.权利要求39至58中任一项所述的用途，其中受试者患有血清淀粉状蛋白A相关性青光眼。全文摘要本发明提供用于在涉及SAA表达的青光眼中抑制血清淀粉状蛋白AmRNA表达的RNA干扰。文档编号A61K31/713GK101124322SQ200580048548公开日2008年2月13日申请日期2005年12月19日优先权日2004年12月23日发明者A·F·克拉克,L·麦克纳特,王万恒申请人:爱尔康公司