专利名称：一种用于治疗脓毒症的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及药物化学领域。具体而言，本发明涉及乌司他丁、α1胸腺肽或两者联合应用的新医药用途，即乌司他丁、α1胸腺肽或两者联合应用在制备治疗和/或预防脓毒症药物中的应用，以及含有它们的药物组合物。
背景技术：
乌司他丁，又名人尿胰蛋白酶抑制剂(Human Urinary Trypsin Inhibitor，UTI；Urinastatin；或Ulinastatin)，是从人体尿液中分离纯化的一种胰蛋白酶抑制剂，由143个氨基酸组成的一种糖蛋白，N端为丙氨酸，C端为亮氨酸，在第10位丝氨酸和45位天冬氨酸上有糖链。乌司他丁的分子量为40～50KD，是一种对热稳定的酸性蛋白。
乌司他丁对多种水解酶具有有效的抑制作用，对细胞膜、溶酶体膜有明显的稳定作用。乌司他丁在人体内不仅仅是一种酶抑制剂，同时还是参与细胞表达分泌调控的重要生理活性物质，在炎症等疾病状态下，乌司他丁由粒细胞酶水解释放到血液中，参与炎症反应的调控；在机体遭遇重大打击，发生全身炎症反应时，减轻过度释放的炎症介质对机体组织造成的损伤。乌司他丁在临床上用于急性胰腺炎、急性循环障碍的治疗，以及大中型手术期的器官保护和危重症中多器官功能障碍综合症的预防等。
α1胸腺肽(Thymosinα1)是人工合成的含有28个氨基酸的小分子多肽，是胸腺素主要的生物活性成分，为人体内重要的免疫调节物质。它能阻止特异性免疫细胞凋亡、逆转免疫抑制。目前，α1胸腺肽主要用于慢性乙型肝炎及肿瘤患者，而对脓毒症患者的治疗尚缺乏报道。
脓毒症(Sepsis)是感染所引发的全身性炎症反应综合征，多由肺炎、创伤、烧伤、外科手术、癌症等疾病引起。事实上，因患上述疾病而死亡的病例中，大部分是因脓毒症致死。如创伤后死亡的患者，80％的死因是脓毒症。当代医学对脓毒症还缺少有力的治疗和/或预防手段。
发明内容
本发明人经过认真研究和动物试验发现，乌司他丁、α1胸腺肽或两者的联合对脓毒症有明显的治疗和/或预防作用。
因此，本发明的目的是提供乌司他丁和/或α1胸腺肽用于制备治疗和/或预防脓毒症的药物的用途。
所述的脓毒症是感染所引发的全身性炎症反应综合征，多由病原微生物感染和肺炎、创伤、烧伤、外科手术、癌症等疾病引起。
本发明的另一目的是提供一种用于治疗和/或预防脓毒症的含有乌司他丁和/或α1胸腺肽的药物组合物，该目的是通过以下技术方案实现一种治疗和/或预防脓毒症的药物组合物，其含有治疗有效量的乌司他丁和/或α1胸腺肽，以及药学上可接受的载体。
具体说，本发明的一种技术方案涉及治疗和/或预防脓毒症的药物组合物，其一个药物剂量单位中含有10万-300万单位，优选20-100万单位乌司他丁，以及药学上可接受的载体。
本发明的另一种技术方案涉及治疗和/或预防脓毒症的药物组合物，其一个药物剂量单位中含有0.1mg-5.0mg，优选1mg-2mgα1胸腺肽，以及药学上可接受的载体。
本发明的再一种技术方案涉及治疗和/或预防脓毒症的药物组合物，其一个药物剂量单位中含有10万-300万单位，优选20-100万单位乌司他丁；0.1mg-5.0mg，优选1mg-2mgα1胸腺肽，以及药学上可接受的载体。
本发明的还一种技术方案涉及治疗和/或预防脓毒症的药物组合物，其包括一个剂量单位的乌司他丁，其中含有10万-300万单位，优选20-100万单位乌司他丁活性成分；和一个剂量单位的α1胸腺肽，其中含有0.1mg-5.0mg，优选1mg-2mgα1胸腺肽活性成分，两者是同时或依次给药。
在本发明涉及的乌司他丁和/或α1胸腺肽在制备治疗和/或预防脓毒症的药物的用途中，其治疗剂量根据病情的严重程度、治疗时间而定，一般乌司他丁静脉注射给药，每次10万-300万单位，优选20-100万单位，每天给药1-4次；α1胸腺肽皮下注射给药，每次0.1mg-5.0mg，优选1mg-2mg，每天给药1-4次，两者可同时或依次给药。
本发明的乌司他丁对脓毒症有明显的治疗和/或预防作用。
本发明的α1胸腺肽对脓毒症有明显的治疗和/或预防作用。
本发明的乌司他丁和α1胸腺肽两者联合应用比二者单独应用对脓毒症有更好的治疗和/或预防作用。
本发明的乌司他丁可以以药物组合物的形式使用，这种组合物含有治疗有效量的作为活性成分的乌司他丁和一种或多种制药可接受的载体或添加剂。含有乌司他丁的药物组合物通常以静脉注射途径给药，主要剂型包括乌司他丁冻干粉针剂和注射液剂。
乌司他丁冻干粉针剂药物组合物中可以含有一种或多种制药可接受的载体或添加剂，特别是甘露醇、乳糖、水解明胶、氯化钠或葡萄糖中的一种或其任意混合物，在使用时可以溶解于灭菌水或其他注射用灭菌介质中。
乌司他丁冻干粉针剂制备方法是取过滤灭菌乌司他丁水溶液10000万单位，加20克甘露醇溶解，调节pH至中性，加注射用水至2000毫升，加氯化钠调节等渗，无菌过滤，分装1000个西林瓶中，无菌条件下冷冻干燥，即得。
乌司他丁注射液剂药物组合物中可以含有一种或多种制药可接受的载体或添加剂，特别是注射用水、甘露醇、氯化钠或葡萄糖中的一种或其任意混合物。
乌司他丁注射液制备方法是取过滤灭菌乌司他丁水溶液10000万单位，加20克甘露醇溶解，调节pH至中性，加注射用水至2000毫升，加氯化钠调节等渗，无菌过滤，分装1000个西林瓶中，即得。
本发明的α1胸腺肽可以以药物组合物的形式使用，这种组合物含有治疗有效量的作为活性成分的α1胸腺肽和一种或多种制药可接受的载体或添加剂。含有α1胸腺肽的药物组合物通常以静脉注射途径给药，主要剂型包括α1胸腺肽冻干粉针剂和注射液剂。
α1胸腺肽冻干粉针剂药物组合物中含有α1胸腺肽、缓冲剂、等渗调节剂和稳定剂。所述的缓冲剂选自磷酸氢二钠、氢氧化钠、碳酸钠、氨水或其任意混合物。所述的等渗调节剂选自碳水化合物、多元醇或其任意混合物；其中碳水化合物选自半乳糖、阿拉伯糖或乳糖；多元醇选自甘露醇、山梨醇、肌醇、甘油、木糖醇或聚乙二醇。所述的稳定剂选自甘氨酸、谷氨酸或醋酸铵等。
α1胸腺肽冻干粉针剂制备方法是称取0.1-10mg/mlα1胸腺肽、0.1-50mg/ml缓冲剂、5-50mg/ml等渗调节剂、5-50mg/ml稳定剂，加入注射用水溶解，然后用缓冲溶液调至pH为5.0-7.5，补加注射用水至1000ml，过菌过滤，分装1000个西林瓶中，无菌条件下冷冻干燥，即得。
α1胸腺肽注射液剂药物组合物中含有α1胸腺肽、缓冲剂、等渗调节剂和稳定剂。所述的缓冲剂选自磷酸氢二钠、氢氧化钠、碳酸钠、氨水或其任意混合物。所述的等渗调节剂选自碳水化合物、多元醇或其任意混合物；其中碳水化合物选自半乳糖、阿拉伯糖或乳糖；多元醇选自甘露醇、山梨醇、肌醇、甘油、木糖醇或聚乙二醇。所述的稳定剂选自甘氨酸、谷氨酸或醋酸铵等。
α1胸腺肽注射液制备方法是称取0.1-10mg/mlα1胸腺肽、0.1-50mg/ml缓冲剂、5-50mg/ml等渗调节剂、5-50mg/ml稳定剂，加入注射用水溶解，然后用缓冲溶液调至pH为5.0-7.5，补加注射用水至1000ml，过菌过滤，分装1000个西林瓶中，即得。
本发明的乌司他丁和α1胸腺肽联合应用时，两者可同时或依次给药。乌司他丁通常以静脉注射途径给药，主要剂型包括乌司他丁冻干粉针剂和注射液剂。每次静脉给药10万-300万单位，优选20-100万单位；α1胸腺肽皮下注射给药，主要剂型包括α1胸腺肽冻干粉针剂和注射液剂，每次给药0.1mg-5.0mg，优选1mg-2mg。
本发明采用乌司他丁、α1胸腺肽或两者的联合对脓毒症有明显的治疗和/或预防作用，尤其是采用乌司他丁和α1胸腺肽的联合，对脓毒症有特别突出的治疗效果，这在临床上为脓毒症的治疗提供了新途径。
具体实施例方式
下面用具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1制备乌司他丁干粉针取过滤灭菌乌司他丁水溶液10000万单位，加20克甘露醇溶解，调节pH至中性，加注射用水至2000毫升，加氯化钠调节等渗，无菌过滤，分装1000个西林瓶中，无菌条件下冷冻干燥，即得。
实施例2制备α1胸腺肽注射液取α1胸腺肽1.6g，甘露醇10.0g，甘氨酸10.0g，加800ml注射用水，用磷酸二氢钠缓冲剂溶液调至pH为6.5，加注射用水至1000ml，除菌过滤，分装至1000个西林瓶中，每瓶分装1.0ml，经加塞、压塞、加盖、扎盖，即得。
实施例3乌司他丁和/或α1胸腺肽对脓毒症大鼠的治疗实验动物和分组Wister性大鼠128只，体重240g-260g，雌雄各半。分别采用UTI和α1胸腺肽为抗炎和免疫刺激治疗剂，并将动物随机分为四组(每组32只大鼠)①模型组制模成功后正常饲养，并分别在建模后6小时、24小时、48小时、和72小时，通过尾静脉注射与UTI治疗组等量的生理盐水、腹部皮下与α1胸腺肽治疗组等量的生理盐水作对照。
②UTI治疗组制模成功后正常饲养，并分别在与对照组相同的时间点通过尾静脉给以UTI 0.4ml(2万单位)/只、腹部皮下给生理盐水0.2ml/只治疗。
③α1胸腺肽治疗组制模成功后正常饲养，并分别在对照组相同的时间点通过腹部皮下给以α1胸腺肽0.2ml(0.32mg)/只、尾静脉给以生理盐水0.4ml/只治疗。
④联合治疗组制模成功后正常饲养，并分别在与对照组相同的时间点同时尾静脉给以UTI 0.4ml(2万单位)/只、腹部皮下给α1胸腺肽0.2ml(0.32mg)/只治疗。
采用盲肠结扎穿孔制作脓毒症模型，取大鼠麻醉开腹后，在其盲肠离末端1.5cm-2.0cm处完全结扎，在末端用18#针头对穿2孔，缝合后腹部皮下给生理盐水9ml/只，死亡率40％-80％之间。
检测指标和方法记录实验结束时各组动物存活情况，计算其死亡率，并测定造模前、造模后24小时、48小时和72小时血液标本的淋巴细胞计数、CD4/CD8等指标。
结果各组脓毒症大鼠淋巴细胞计数、CD4/CD8和死亡率的检测结果如下表1。
表1脓毒症大鼠特异性免疫功能指标的检测结果
注*与同组造模前相比，P＜0.05；△与同时点①组比较，P＜0.05。
死亡率是评价药物疗效的基本指标，由于脓毒症的死亡率较高，故能有效降低患病大鼠死亡率的药物，表明该药物的抗炎能力越强。淋巴细胞是机体细胞免疫和体液免疫的基础细胞，测定外周血中淋巴细胞数量变化，结合细胞免疫功能检查，可以帮助观察机体免疫状态。T细胞亚群是免疫系统内功能最重要的一大细胞群。T细胞的免疫调节作用主要由CD4+细胞和CD8+细胞来完成。CD4+细胞协调B细胞分化产生抗体，CD8+细胞抑制抗体的合成、分泌及T细胞的增殖，两者的协调维持着机体的正常免疫应答。感染时CD4+/CD8+比值低于正常对照。
本实验发现，与模型组相比，UTI组、α1胸腺肽组和联合治疗组的死亡率都大幅降低，激活淋巴细胞的数目明显减少，并可显著提高了CD4+/CD8+比值(P＜0.05)，且联合治疗组的结果优于其它两组单独治疗组，说明UTI和/或α1胸腺肽可有效控制脓毒症大鼠的炎症反应进程，促进机体恢复，而二者联合应用治疗脓毒症的效果最佳。
实施例4乌司他丁和/或α1胸腺肽对脓毒症家兔的治疗实验动物和分组家兔32只，体重240g-260g，雌雄各半。分别采用UTI和α1胸腺肽为抗炎和免疫刺激治疗剂，并将动物随机分为四组(每组8只家兔)①模型组制模成功后正常饲养，并分别在建模后6小时、24小时、48小时、和72小时，通过静脉注射与UTI治疗组等量的生理盐水、腹部皮下与α1胸腺肽治疗组等量的生理盐水作对照。
②UTI治疗组制模成功后正常饲养，并分别在与对照组相同的时间点通过尾静脉给以UTI 0.4ml(8万单位)/只、腹部皮下给生理盐水1.0ml/只治疗。
③α1胸腺肽治疗组制模成功后正常饲养，并分别在对照组相同的时间点通过腹部皮下给以α1胸腺肽1.0ml(1.6mg)/只、尾静脉给以生理盐水0.4ml/只治疗。
④联合治疗组制模成功后正常饲养，并分别在与对照组相同的时间点同时尾静脉给以UTI 0.4ml(8万单位)/只、腹部皮下给α1胸腺肽1.0ml(1.6mg)/只治疗。
动物模型制备氯胺酮注射液80mg/kg腹腔注射麻醉，质量分数为10％的硫化钠背部脱毛。将家兔背部浸泡于沸水12S，造成30％总体表面积(TBSA)III度烫伤(病理证实)，烫伤后立即腹腔注射生理盐水50ml/kg进行液体复苏，12h后腹腔注射内毒素5mg/kg，以模拟烫伤脓毒症模型。
检测指标和方法建模前、建模后24小时和48小时分别留取血液标本，检测TNF-α、IL-6和IL-10等因子的水平。
结果各组脓毒症家兔TNF-α、IL-6和IL-10的检测结果如下表2。
表2各组脓毒症家兔TNF-α、IL-6和IL-10的检测结果
注*与同组造模前相比，P＜0.05；△与同时点①组比较，P＜0.05。
TNF-α和IL-6均是由巨噬细胞产生的一种具有广泛生物学活性的典型的致炎细胞因子，是炎症反应过程中重要的炎性介质，在组织损伤的早期即产生。在急性炎性反应中，TNF-α的水平与病情严重程度密切相关。IL-10是一种重要的负向调节细胞因子，主要由Th2、巨噬细胞等产生，它可抑制T细胞克隆的增殖，抑制多种细胞因子如IL-1、IL-2、IL-3、IL-6、IL-8、TNF-α、TNF-β以及γ-干扰素的合成及表达，从而在抗肿瘤、抗感染和神经免疫调节方面发挥重要作用。
本研究结果表明，与模型组比较，UTI组、α1胸腺肽组和联合治疗组的TNF-α和IL-6这两种促炎因子的浓度都明显降低，而抑炎因子IL-10的水平却显著升高，说明UTI和/或α1胸腺肽可促使促炎细胞因子下降和抗炎细胞因子上升，减轻了炎症介质所致的损伤反应。
本试验结果表明乌司他丁与α1胸腺肽联合应用能有效治疗脓毒症，二者联合应用治疗脓毒症的效果最佳。
权利要求
1.一种治疗和/或预防脓毒症的药物组合物，其含有治疗有效量的乌司他丁和/或α1胸腺肽，以及药学上可接受的载体。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其一个药物剂量单位中含有10万-300万单位，优选20-100万单位乌司他丁以及药学上可接受的载体，每天给药1-4个剂量单位。
3.根据权利要求2所述的药物组合物，其为冻干粉针剂，其载体选自甘露醇、乳糖、水解明胶、氯化钠或葡萄糖中的一种或其任意混合物。
4.根据权利要求2所述的药物组合物，其为注射液剂，其载体选自注射用水、甘露醇、氯化钠或葡萄糖中的一种或其任意混合物。
5.根据权利要求1所述的药物组合物，其一个药物剂量单位中含有0.1mg-5.0mg，优选1mg-2mgα1胸腺肽以及药学上可接受的载体，每天给药1-4个剂量单位。
6.根据权利要求5所述的药物组合物，其为冻干粉针剂或注射液剂型，还含有0.1-50mg/ml缓冲剂、5-50mg/ml等渗调节剂和5-50mg/ml稳定剂，所述的缓冲剂选自磷酸氢二钠、氢氧化钠、碳酸钠、氨水或其任意混合物。所述的等渗调节剂选自碳水化合物、多元醇或其任意混合物；其中碳水化合物选自半乳糖、阿拉伯糖或乳糖；多元醇选自甘露醇、山梨醇、肌醇、甘油、木糖醇或聚乙二醇，所述的稳定剂选自甘氨酸、谷氨酸或醋酸铵等。
7.根据权利要求1所述的药物组合物，其一个药物剂量单位中含有10万-300万单位，优选20-00万单位乌司他丁；0.1mg-5.0mg，优选1mg-2mgα1胸腺肽以及药学上可接受的载体，每天给药1-4个剂量单位。
8.根据权利要求1所述的药物组合物，其包括一个剂量单位的乌司他丁，其中含有10万-300万单位，优选20-100万单位乌司他丁活性成分；和一个剂量单位的α1胸腺肽，其中含有0.1mg-5.0mg，优选1mg-2mgα1胸腺肽活性成分，两者是同时或依次给药，每天各给药1-4个剂量单位。
9.乌司他丁和/或α1胸腺肽用于制备治疗和/或预防脓毒症的药物的用途。
全文摘要
本发明涉及乌司他丁(Urinary Trypsin Inhibitor，UTI)、α1胸腺肽或两者联合应用于制备治疗和/或预防脓毒症的药物用途及按该方法制备的药物。本发明的乌司他丁、α1胸腺肽或两者联合应用对脓毒症有明显的治疗作用。本发明的药物通常以冻干粉针剂或注射液剂的形式使用。
文档编号A61K47/26GK101020048SQ200710004938
公开日2007年8月22日 申请日期2007年2月12日 优先权日2007年2月12日
发明者傅和亮, 侯永敏, 吴蓉蓉, 王晓岩, 徐娟 申请人:广东天普生化医药股份有限公司