药物多肽干粉气溶胶制剂及制备方法

专利名称：药物多肽干粉气溶胶制剂及制备方法
背景 发明领域 本发明一般涉及用于治疗包括过敏性疾病如哮喘的肺部(呼吸性)病症的方法和组合物，更具体地说，包括人IL-4的突变蛋白的干粉气溶胶组合物。
背景信息 白细胞介素-4(IL-4)和白细胞介素-13(IL-13)是对在几种肺病的发病中重要的几种靶细胞具有广谱的类似生物效应的多效性细胞因子。与这两种细胞因子的结合和信号传导有关的效应的过剩能够通过它们共有共同的受体组分来解释。最近，在突变的人IL-4(mIL-4)蛋白中已经观察到了某些拮抗和部分拮抗特性，其中在野生型的120、121、122、123、124、125、126、127或128位的一个或多个位置上天然存在的氨基酸已经被一个或多个天然氨基酸替换。因此，这些mIL-4蛋白已经被描述为有价值的治疗剂，用作治疗过调的或错误调节的免疫反应和自身免疫疾病的药物。
为了充分地获得这种突变蛋白的所希望的生理效应，需要以其活性形式施用该蛋白的制剂和方法。虽然全身递送而非口服递送是可行的，但mIL-4蛋白具有短半衰期，需要频繁注射。因为使用这些突变蛋白全身递送是不理想的，所以应该尝试肺部药物递送系统。此外，递送药物到疾病部位可以具有选择性优点。
概述 根据本发明的实施方案，提供了包括mIL-4突变蛋白的药物组合物，其适合于长期吸入施用于需要它的患者。在一些实施方案中，提供了适合被需要它的患者吸入的可分散的粉剂组合物，该组合物包括人白细胞介素突变蛋白(mIL-4)，其中该组合物的玻璃化转变温度比储存组合物的储存温度高至少50℃。该组合物的总储存期是至少两年，且该组合物在储存温度储存三个月的期间之后，该组合物保持其初始比活性的至少80％。
根据本发明的其它实施方案，除了mIL-4以外，该组合物还包括缓冲剂，例如柠檬酸盐、醋酸盐、乳酸盐或琥珀酸盐、马来酸盐或酒石酸盐，和稳定剂如糖类，例如蔗糖、甘露醇或海藻糖。该组合物还可以任选地包括赋形剂，例如氨基酸(如亮氨酸)或聚(氨基酸)；该组合物还可以任选地包括镁的盐，例如硫酸镁。
根据本发明的其它实施方案，提供了制造方法，其允许生产可容易分散的足够纯度的和可吸入粒度的药物组合物，使得该药物在肺部具有高沉积百分率，该方法允许保持高的药物活性百分率。
根据本发明的其它实施方案，可以将该组合物装入药盒中以便被需要该组合物的患者使用，该药盒包括该组合物、用于由患者吸入的吸入装置和用于储存该组合物的储存装置。在一些实施方案中，该储存装置包括适于配合该吸入装置的初级胶囊以及二级储存容器。该药盒还可任选地包括贴附于该储存装置且提供患者使用说明书的标签。
附图简述

图1A显示了wt IL-4的核酸和氨基酸序列。
图1B显示了突变mIL-4的核酸和氨基酸序列。
图2示意性地显示了根据本发明的一些实施方案的递送药盒。
图3显示了根据本发明的一些实施方案的一种制剂的高压液相色谱法的色谱图。
图4显示了用于根据本发明的一些实施方案的制剂的原料溶液和喷雾干粉的SDS PAGE凝胶。
图5显示了根据本发明的一些实施方案的喷雾干燥的mIL-4制剂的差示扫描量热法(DSC)的热分析图。
图6显示了根据本发明的一些实施方案的喷雾干燥的mIL-4制剂的DSC热分析图。
图7显示了根据本发明的一些实施方案的制剂的粒度分布。
图8是可用于施用根据本发明的一些实施方案的粉剂制剂的吸入器装置的分解透视图。
图9是可用于施用根据本发明的一些实施方案的粉剂制剂的吸入器装置的另一透视图，其中该吸入器装置在其打开状态即在其装载胶囊的位置显示。
图10是类似于图9的图，但图示了在使用其的过程中的根据本发明的吸入器装置。
图11是可用于施用根据本发明的一些实施方案的粉剂制剂的吸入器装置的正视横剖面图，其中显示了具有布置在其中的胶囊的吸入器装置，但是在非穿孔状态下。
图12是类似于图11的图，但图示了在胶囊穿孔操作过程中的根据本发明的吸入器装置。
图13是可用于施用根据本发明的一些实施方案的粉剂制剂的吸入器装置的部分剖开的俯视图。
图14是IL-4突变蛋白干粉组合物的血浆浓度与时间的曲线。
发明详述 术语肺部和呼吸的被定义为与肺有关。术语“突变蛋白”被定义为作为对由本领域技术人员产生的对任何蛋白的定点氨基酸替代的结果所得到的任何蛋白。“糖基化”是指将糖基添加到蛋白上以形成糖蛋白。这样，该术语包括天然存在的糖基化和合成糖基化，例如将碳水化合物骨架连接于天冬酰胺残基的侧链(“N-糖基化”)或者将糖，优选N-乙酰基半乳糖胺、半乳糖或木糖偶联于丝氨酸、苏氨酸、4-羟基脯氨酸或5-羟基赖氨酸(O-糖基化)。
用作激动剂的人IL-4的突变体在本领域中是已知的。术语“IL-4突变蛋白”、“IL-4突变体”、“mIL-4”、“突变的人IL-4蛋白”、“mhIL-4”，“修饰的人IL-4受体拮抗剂”、“IL-4RA”、“IL-4拮抗剂”以及它们的等同物可互换地施用，并且是在本发明的范围内。这些多肽可选择地包括超出野生型蛋白的“N”和“C”端的其它残基。这些多糖及其功能片段是指其中已经对野生型人IL-4蛋白(“wt IL-4”；图1A)作出了特定氨基酸替代的多肽。这些多肽包括本发明的mhIL-4组合物，其被施用于例如需要治疗哮喘的受治疗者。尤其，本发明的示例性mhIL-4，包括至少如图1B所示的用N-端甲硫氨酸替代的R121D/Y124D对(“IL-4RA”或“met-R121D/Y124D”)。
为了本申请的目的，术语“功能片段”被定义为具有IL-4拮抗活性的多肽，包括较小的肽。mIL-4的修饰的mIL-4的这些和其它方面在美国专利第6,313,272号和第6,208,176号中被描述，这些专利的全部内容在此处通过引用并入。
为了本申请的目的，术语“野生型IL-4”或“wtIL-4”及其等同物互换地使用，且表示具有如在美国专利第5,017,691号中所公开的天然人IL-4的129个正常存在的氨基酸序列的天然或重组的人白细胞介素-4，所述专利的全部内容在此处通过引用并入。此外，修饰的人mIL-4受体拮抗剂不引起在如本文所述的它结合的同源受体的信号传导，其可以具有各种插入和/或删除和/或与非蛋白聚合物的偶联，并且根据wtIL-4编号，这意味着，选择的特定氨基酸是天然存在于wtIL-4中的相同氨基酸。因此，本领域技术人员将理解，在例如121位(精氨酸)、124位(酪氨酸)和/或125位(丝氨酸)的正常存在的氨基酸可以在突变蛋白中移位。因此，半胱氨酸残基在例如38、102和/或104的氨基酸部位的插入在突变蛋白中可以移位。然而，移位的Ser(S)、Arg(R)、Tyr(Y)或插入的Cys(C)的位置可以通过将侧翼氨基酸与wtIL-4中侧翼Ser、Arg、Tyr或Cys的氨基酸的检查和关联来确定。
为了本申请的目的，术语“初级粒度”被定义为通过各种技术如激光衍射、扫描电子显微镜检查和沉降所测定的颗粒的粒度。
为了本申请的目的，术语“空气动力学”被定义为在空气中具有与要测量的气溶胶颗粒相同的沉降速度的单位密度的球体的直径。空气动力学直径通过阶式碰撞取样器(cascade impactor)来测定。术语“质量中值空气动力学直径”或“MMAD”被定义为相对于空气动力学直径的质量分布的中值。使用中值空气动力学直径和几何标准差来基于颗粒的质量和粒度描述气溶胶的粒度分布。根据这种描述，按质量计50％的颗粒将小于所述中值空气动力学直径，且50％的颗粒将大于所述中值空气动力学直径。
此外，编码人mIL-4的DNA序列可以包括或不包括编码信号序列的DNA序列。这种信号序列如果存在应该是被选择用于表达mIL-4突变蛋白的细胞所识别的信号序列。它可以是原核生物的、真核生物的或者二者的组合。它还可以是天然IL-4的信号序列。信号序列的包含取决于是否需要从重组细胞中分泌mIL-4突变蛋白，在所述重组细胞中mIL-4突变蛋白被制备。如果选择的细胞是原核生物的，通常优选DNA序列不编码信号序列，但包括N端甲硫氨酸以指导表达。如果选择的细胞是真核生物的，通常优选信号序列被编码，最优选使用野生型IL-4信号序列，如在此处通过引用并入的美国专利第6,208,176号中所公开的。
在一个示例性实施例中，本发明的突变的人mIL-4蛋白包括具有修饰的野生型hIL-4的氨基酸序列，其中第一修饰是用其它天然氨基酸对存在于野生型hIL-4蛋白中121、124或125位上的一个或多个氨基酸的替代，且还任选地包括N-端甲硫氨酸。在另一个实施例中，突变蛋白进一步包括选自由以下组成的组中的第二修饰 i)其中的C端的修饰； ii)其中的潜在的糖基化部位的删除； iii)蛋白与非蛋白聚合物的偶联； iv)选自由在13、16、81和89位及它们的任意组合的替代组成的组中的至少一个氨基酸替代，使mIL-4蛋白成为野生型hIL-4的拮抗剂，且还任选地包含N-端甲硫氨酸。
还在又一个实施例中，所述突变蛋白包括含有根据野生型hIL-4编号的替代R121D和Y124D的蛋白的第一修饰。
这里使用的术语“受治疗者”或“患者”是指对其实施所试方法的任何个体或患者。通常，受治疗者是人，但如本领域技术人员所理解的，该受治疗者可以是动物。因此，非人灵长类动物(包括猴、黑猩猩、猩猩、大猩猩)均包括在受治疗者的定义内。
术语“施用(administration)”或“施用(administering)”被定义为包括将本发明的化合物或药物组合物提供给需要治疗的受治疗者的行动。术语“治疗有效量”或“有效量”是指将引起研究人员、兽医、医生或其它临床医生所寻求的组织、系统、动物或人的生物学或医学反应的化合物或药物组合物的量。
为了本申请的目的，术语“粉剂”被定义为被配制为尺寸小于约10微米的细碎的固体颗粒的固体物质，例如被配制为尺寸小于约6微米的细碎的干燥固体颗粒的固体物质。
为了本申请的目的，术语“玻璃化转变温度”被定义为当被加热到一定温度且经历从玻璃样状态到弹性体状态的转变时在物质中发生的可逆改变的温度范围的近似中点。使用差示扫描量热法(DSC)来测定玻璃化转变(Tg)。Tg的定义总是随意的，目前没有国际惯例。
哮喘是一种气道的慢性炎症或过敏性病症，其中许多细胞和细胞基本组分发挥作用，特别是肥大细胞，嗜酸性粒细胞，T淋巴细胞，气道巨噬细胞，中性粒细胞和上皮细胞。在易感个体中，该炎症引起了哮鸣、呼吸暂停、胸闷和咳嗽的反复发作，尤其在夜间或凌晨。这些发作通常与广泛但可变的气流阻塞有关，该气流阻塞常常自发或用治疗可逆转。该炎症还引起了过量的粘液分泌和对各种刺激的现有的支气管高反应性的相关增高。
根据本发明的实施方案，提供了表现良好的温度和结构稳定性(包括耐水分和聚集性)的药学可分散的干粉组合物。该组合物含有包括人白细胞介素-4突变蛋白(mIL-4)的治疗剂。通过通常具有小于约10μm的，例如在约2μm和约6μm之间的，例如在约2μm和约4μm之间的初级粒度和/或空气动力学直径粒度的平均值的颗粒来形成该粉剂。粒度分布的几何标准差是在约1和3之间，例如在约1.5和2.5之间。
多个实施方案一般能够表征和说明本发明的特征。在一个实施方案中，提供了一种适合被需要其的受治疗者吸入的可分散的粉剂组合物，该组合物含有包括人白细胞介素突变蛋白(mIL-4)的治疗剂，其中该组合物的玻璃化转变温度比该组合物被储存的储存温度高至少50℃，且其中在该组合物在所述储存温度下储存三个月的期间之后，该组合物保持初始比活性的至少80％。
根据另一个实施方案，提供了一种适合被需要其的患者吸入的可分散的粉剂组合物，该组合物含有包括突变的人白细胞介素-4(mIL-4)蛋白的治疗剂，所述蛋白由具有两种修饰的野生型hIL-4的氨基酸序列组成，其中第一修饰选自由存在于野生型hIL-4蛋白的121、124或125位的一个或多个氨基酸被其它天然氨基酸的替代组成的组，且第二修饰是选自由以下组成的组中的至少一个修饰其中的C端的修饰；其中的潜在的糖基化位点的删除；和/或蛋白与非蛋白聚合物的偶联，以及它们的任意组合；选自由在13、16、81和89位及它们的任意组合的替代组成的组中的至少一个氨基酸替代，使得mIL-4蛋白成为野生型hIL-4的拮抗剂且还任选地包含N-端甲硫氨酸。这种组合物可以进一步具有比储存组合物的储存温度高至少50℃的玻璃化转变温度，其中在该组合物在所述储存温度下储存三个月的期间之后，该组合物保持初始比活性的至少80％。
在一些实施方案中，上述任意组合物，除了上述mhIL-4或mIL-4以外，还可以包括缓冲剂，如柠檬酸盐、醋酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐或马来酸盐，以及稳定剂，如碳水化合物，例如蔗糖、甘露醇或海藻糖，或者镁盐，例如硫酸镁。在一些实施方案中，任何组合物，不管它包括或不包括缓冲剂和/或稳定剂，可以除了上述mhIL-4以外进一步包括选自由氨基酸如亮氨酸或聚(氨基酸)组成的组的赋形剂。
上述任何实施方案的组合物具有比所述储存温度(即，该组合物被储存的温度，它可以是室温或更低，例如在约2℃和8℃之间，可选择地，在储存期的第一部分储存温度是在约2℃和8℃之间，且储存温度在储存期的第二部分期间为室温)高至少75℃的组合物的玻璃化转变温度，例如比所述储存温度高至少100℃，且在至少两年的总储存期之后，上述任何实施方案的组合物在总储存期到期之后保持初始比活性的至少95％，例如保持初始比活性的至少98％。
上述任意实施方案的组合物具有在约10％和约98％之间，例如在约10％和约75％之间，例如在约10％和约60％之间的治疗活性材料在组合物中的质量浓度。
上述任意实施方案的组合物具有在约1％和约10％之间，例如在约1％和约5％之间，例如在约1％和约3％之间的水分含量。
上述任意实施方案的组合物在至少两年的总储存期到期之后具有约3％或更低的，例如约1％或更低的，或约0％的聚集度。
上述任意实施方案的组合物在组合物的总储存期到期之后具有相对于原料药约5％或更低的治疗活性材料的氧化度，其中所述总储存期是至少两年。例如，这种氧化度可以是约3％或更低，或约2％。
上述任意实施方案的组合物是用具有小于约10μm，例如在约2μm和约6μm之间，例如在约2μm和约4μm之间的直径平均值的颗粒所形成的粉剂。
上述任意实施方案的组合物包括具有在约1和3之间，例如在约1.5和2.5之间的粒度的几何标准差的颗粒。
上述任意实施方案的组合物当被患者吸入时提供了该组合物的喷射量为约70质量％或更高，例如约80质量％或更高，例如约90质量％或更高。
上述任意实施方案的组合物当被患者吸入时提供了具有不超过约5μm的直径值的颗粒的沉积百分率，其是在约25质量％和约60质量％之间，例如在约40质量％和约60质量％之间，例如在约50质量％和约60质量％之间。
上述任意实施方案的组合物具有在约3和6之间，例如在约4和5之间的pH值。
上述任意实施方案的组合物具有在约0.3mg和30mg之间，例如在约0.3mg和5mg之间，例如在约0.5mg和3mg之间的活性物质的额定剂量。
在上述任意实施方案的组合物中，IL-4突变蛋白包括具有修饰的野生型hIL-4的氨基酸序列，其中第一修饰是存在于野生型hIL-4蛋白的121、124或125位的一个或多个氨基酸被其它天然氨基酸的替代，且还可任选地含有N-端甲硫氨酸。而且，IL-4突变蛋白可以包括选自由以下组成的组中的第二修饰其中的C端的修饰；其中的潜在的糖基化位点的删除；和/或蛋白与非蛋白聚合物的偶联；选自由在13、16、81和89位及它们的任意组合的替代组成的组中的至少一个氨基酸替代。所述第一修饰可以包括根据野生型hIL-4编号的替代R121D和Y124D，或者根据野生型hIL-4编号的替代R121D和Y124D以及N-端甲硫氨酸。
上述任意实施方案的组合物可以通过冷冻干燥、喷雾干燥和冷冻喷雾干燥来制备，且还可任选地包括研磨或冻干与研磨。
还提供了治疗疾病的方法，包括将治疗有效量的上述任意实施方案的组合物施用于需要这种治疗的患者。
在一些实施方案中，提供了吸入器装置，其包括吸入器主体，所述吸入器主体界定了凹槽用于在其中容纳含有上述任意实施方案的可分散的粉剂组合物的胶囊，以及与所述胶囊连通的喷嘴，其中所述吸入器装置还包括穿孔装置，所述穿孔装置与吸入器主体结合且适合于将所述胶囊穿孔以允许外部空气流与可分散的粉剂组合物混合，用于通过所述喷嘴吸入。这种装置被设计成确保，当适当配制的干粉组合物被患者吸入时，该组合物的喷射剂量为约70质量％或更高。在一些实施方案中，吸入器装置中的穿孔装置包括穿孔针，用于横向滑动对抗弹性元件的偏置并且在用所述吸入器主体固定的对接元件和相应的操作按钮元件之间操作，每一个穿孔针具有包括有斜面的尖头的外形，用于促进胶囊包衣的穿孔。
在另外的实施方案中，在吸入器装置中的喷嘴相对于吸入器主体可移动，以提供至少两种操作状态，该两种操作状态包括开放状态和关闭使用状态，在开放状态中，用于胶囊的凹槽可容易达到在其中接合新的胶囊或者由此退出用过的胶囊，在关闭使用状态中，所述吸入器喷嘴被弹簧锁锁定。喷嘴可以进一步在其关闭位置被弹簧锁装置锁定，所述弹簧锁装置包括喷嘴的凸缘的钩部分，具有在吸入器主体中形成的闭锁座位内部形成的相应的脊。在另外的实施方案中，吸入器喷嘴的凸缘可以包括可接合在吸入器主体中形成的孔内的插脚。在其它实施方案中，所述孔可以界定纵向狭槽，所述纵向狭槽适于允许所述插脚的横向齿通过狭槽，且所述孔包括底部环形凹槽，所述底部环形凹槽适于允许所述齿滑入，从而允许所述插脚接合到所述孔中。在其它实施方案中，所述销可以在所述孔中可旋转，且所述喷嘴相对于所述吸入器主体可旋转。在另外的实施方案中，所述装置的吸入器主体的用于胶囊的凹槽可以通过在所述凸缘的吸入器喷嘴中提供的穿孔板或栅格与外部连通，且适于将胶囊凹槽与喷嘴的导管分开，所述胶囊凹槽具有通过一个或多个进气孔与外部连通的底部。
在一些实施方案中，提供了药盒，其包括上述任意实施方案的可分散的粉剂组合物、用于被患者吸入的吸入装置和用于储存该组合物的储存装置，所述储存装置包括初级容器和二级储存容器，且还可任选地包括在所述储存装置中含有、贴附且提供患者使用说明书的标签，且进一步的附带条件是所述初级胶囊适合于配合所述吸入装置。在另外的实施方案中，与药盒一起使用的组合物为胶囊的形式，各胶囊含有在约5mg和25mg之间的组合物，例如在约5mg和约20mg之间的组合物，例如在约10mg和约20mg之间的组合物。
本发明的干粉组合物中的活性物质的量正常是在约0.3和30mg之间，例如在约0.3和5mg之间，例如在约0.5和3mg之间。在一个实施方案中，在本发明的干粉组合物中的活性物质的最少量能够是约0.3mg；在其它实施方案中，这种最少量能够是约0.5mg、约0.7mg、约0.75mg、约1mg、约1.5mg或约2mg。在一个实施方案中，本发明的干粉组合物中的活性物质的最大量能够是约3mg；在其它实施方案中，这种最大量能够是约5mg、约7.5mg、约10mg、约12mg、约15mg或约30mg。总之，该组合物中的mIL-4的质量浓度能够是在约10％和约98％之间，例如在约10％和约75％之间，例如在约10％和约60％之间。在另一实施方案中，该组合物中的mIL-4的质量浓度能够是在约5％和约98％之间，例如在约5％和约75％之间，例如在约5％和约60％之间，或者在约5％和约50％之间，或者约5％，或者约10％，或者约15％，或者约30％。在本上下文中，m-IL4化合物的百分率(按重量计)是指自由化合物的量，排除可以存在的抗衡离子的重量。
本发明的干粉组合物通常、但不必包括至少一种生理学上可接受的载体。例如，干粉组合物可以包括一种或多种赋形剂和/或改进mIL-4化合物的效力的任何其它组分。这种赋形剂可以在希望减低递送到患者的粉剂中的活性剂浓度的时候简单用作增量剂。这种赋形剂还可以改进粉末在粉剂分散装置内的粉剂分散性，以便提供更有效和可再现的活性剂的递送以及改进活性剂的处理特性(例如流动性和稠度)，从而有利于制造和粉剂填充。尤其，该赋形剂材料通常能够起到改进mIL-4的物理和化学稳定性的作用，使残留水分含量最小化以及阻止水分吸收，以及增强粒度、聚集度、表面性能(例如粗糙度)、吸入的方便和将颗粒向深处肺部的靶向。
可用于实施本发明的药物赋形剂和添加剂包括但不限于蛋白、肽、氨基酸、脂质、聚合物和碳水化合物(例如糖，包括单糖、二糖、三糖、四糖和寡糖；衍生糖如醛糖醇、醛糖酸、酯化糖；和多糖或糖聚合物)，它们可以单独或组合存在。示例性蛋白赋形剂包括血清白蛋白如人血清白蛋白(HSA)、重组人白蛋白(rHA)、明胶和酪蛋白。代表性氨基酸/多肽组分包括丙氨酸、甘氨酸、精氨酸、甜菜碱、组氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、赖氨酸、亮氨酸、脯氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、阿斯巴甜。代表性氨基酸的聚氨基酸如二亮氨酸和三亮氨酸也适合用于本发明。
适合用于本发明的碳水化合物赋形剂包括例如单糖如果糖、麦芽糖、半乳糖、葡萄糖、D-甘露糖和山梨糖；二糖如乳糖、蔗糖、海藻糖、纤维二糖；多糖如棉子糖、松三糖、麦芽糊精、右旋糖酐和淀粉；以及醛糖醇如甘露醇、木糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇、木糖醇、山梨醇(葡萄糖醇)和肌醇。
mIL-4干粉组合物还可以包括缓冲剂或pH调节剂；通常，该缓冲剂是由有机酸或碱制备的盐。代表性缓冲剂包括有机酸盐如柠檬酸、抗坏血酸、葡糖酸、碳酸、酒石酸、琥珀酸、醋酸或邻苯二甲酸的盐；Tris、氨基丁三醇盐酸盐或磷酸盐缓冲剂。
另外，可用于实施本发明的mIL-4干粉组合物可以包括聚合赋形剂/添加剂如聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、Ficolls(聚合糖)、右旋糖酐、葡萄糖结合剂(例如环糊精类如2-羟丙基-β-环糊精、羟乙基淀粉)、聚乙二醇、果胶、盐(例如氯化钠)、抗氧化剂、抗静电剂、表面活性剂(例如聚山梨醇酯如“吐温20”和“吐温80”、卵磷脂、油酸、苯扎氯铵和脱水山梨醇酯)、脂质(例如磷脂、脂肪酸)、类固醇(例如胆固醇)和螯合剂(例如EDTA)。适合用于mIL-4干粉组合物的药物赋形剂和/或添加剂的其它例子列举在“RemingtonThe Science&Practice of Pharmacy(雷明顿药物科学与实践)”，第19版，Williams&Williams，(1995)以及“Physician′s Desk Reference(内科医生案头参考资料)”，第52版，Medical Economics，Montvale，N.J.(1998)中，它们的公开内容在此处通过引用并入。
本发明的干粉组合物进一步包括其它组分，例如缓冲剂、稳定剂和/或增量剂。实施例提供了这些试剂的一些优选的量和/或组合。
所述缓冲剂典型地选自柠檬酸盐、醋酸盐、乳酸盐和/或酒石酸盐的至少一种。根据本发明的实施方案，稳定剂典型地包括至少一种碳水化合物，例如蔗糖、甘露醇和/或海藻糖，且所述赋形剂是氨基酸，例如亮氨酸或聚(氨基酸)，或者稳定剂可以是镁盐，例如硫酸镁、氯化镁和醋酸镁。
在一个优选实施方案中，所述干粉组合物将包括约5％至约50％mIL-4，更优选约10％至约30％。所述稳定剂在该实施方案中以约10％至约85％，优选约15％至约80％的范围存在。在一些实施方案中，所述稳定剂以约15％至约50％的范围存在。增量剂，优选以氨基酸的形式，在该实施方案中是任选的。如果加入，它是以约10％至约25％的范围被包括。以约10％至约85％的范围包括缓冲剂，约20％至约50％是优选的。缓冲剂与稳定剂的比率是从约1∶8.5至约8.5∶1，更优选是约1∶8.5至约4∶1。实施方案包括约1∶4至约4∶1、约1∶4至约2∶1、约1∶2至约2∶1和约2∶3至约1∶1的缓冲剂与稳定剂比率。在本实施方案中，优选的胶囊或泡罩的填充范围是约5mg至约25mg干粉组合物，更优选约6mg至约15mg。在该实施方案中，任选量的镁离子可以作为稳定剂添加。该离子可以从约1mM至约220mM，更优选从约10mM至约200mM的量存在。镁离子与缓冲剂的化学计量在该实施方案中可以是1、2、4、6、8或10。在该实施方案中的优选的mIL-4分子是图1B中所示的分子。有效量的该实施方案的组合物的剂量可以是一天一次、一天两次或一天三次。
本发明的干粉组合物可以通过某些特性来表征，包括组合物的玻璃化转变温度、能够储存组合物的温度、储存持续时间以及它们保持初始比活性的能力和在组合物储存之后的蛋白完整性。
在一些实施方案中，本发明的干粉组合物具有在下述任何储存温度下比储存组合物的储存温度高至少50℃的，优选比储存温度高至少75℃的，甚至更优选比储存温度高至少100℃的玻璃化转变温度。
对于推荐的储存温度，在一些实施方案中，本发明的干粉组合物的储存温度是大约室温(15℃-25℃)或更低，例如在约2℃和8℃之间。在一些实施方案中，本发明的干粉组合物可以在储存期的第一初始部分期间在约2℃和8℃之间储存，随后在储存期的第二部分期间在室温下储存。本领域技术人员能够确定储存期的第一部分和第二部分的持续时间。
本发明的实施方案进一步提供了在药品的制造期之后至少两年的本发明的干粉组合物的总储存期，在此期间，该组合物的储存保持在组合物于储存温度下储存三个月之后的初始比活性的至少80％，例如至少90％。在一些实施方案中，在总储存期到期之后组合物保持至少95％的初始比活性，例如保持至少98％的初始比活性。
表征本发明的干粉组合物的一些其它特性包括水分含量、pH值、蛋白的聚集度以及蛋白的氧化度。在一些实施方案中，水分含量是在约1％和约10％之间，例如在约1％和约5％之间，例如在约1％和约3％之间。在一个实施方案中，水分含量低于1％。本发明的干粉组合物的pH值一般是在约3和6之间，例如在约4和5之间。在可选择的实施方案中，pH范围可以是在约3和7之间，例如在约6和7之间的pH范围。对于蛋白的聚集度，该组合物一般显示在总储存期到期之后显示了约3％或更低的聚集，例如约1％或更低，例如低于约1％。
在一些实施方案中，在本发明的干粉组合物中的治疗活性材料的氧化度在组合物的总储存期到期之后相对于药品为约10％或更低，例如约5％或更低，例如约3％。
可以使用任何适当的方法来制备本发明的干粉组合物。优选的方法包括例如含有mIL-4的治疗活性材料的水溶液经受诸如冷冻干燥、喷雾干燥或冷冻喷雾干燥的过程，并且还能够任选地包括研磨或冻干与研磨。在一个优选工序中，制备具有在约1和5％之间固体的固体质量浓度的溶液，在该溶液中，活性组分(即mIL-4)的百分率如上所述。固体的剩余百分率包括其它组分，例如缓冲剂、稳定剂和/或增量剂，视具体情况而定。
该溶液然后被引导通过喷嘴，该喷嘴设定在特定压力和温度下以产生液滴。液滴进入建立在规定温度下的室中以干燥。在旋流器中收集特定粒度范围的干燥颗粒。该粉剂然后在规定填充重量下填充到初级容器内。该初级容器可以是是提供用于在规定填充重量下储存且提供用于释放其中含有的材料到吸入器中的任何适当的容器。初级储存容器的一个特别优选实施方案是能够在其已经插入到吸入器中之后被刺穿或弄破的胶囊。本领域普通技术人员能够确定用于形成液滴的压力和温度以及干燥温度。
可以使用适合的吸入器装置例如从RS01Model 7吸入器吸入该粉剂，如在美国专利申请第2003-0000523号和相应的欧洲专利申请第EP1270034号中所述的。所述吸入器被设计成确保，当根据本发明的任何实施方案的粉剂被患者吸入时，该组合物的喷射剂量为约70质量％或更高。该吸入器可以更详细地参考如下所示的图8-13来描述。
如图8所示，该吸入器装置1包括吸入器喷嘴3，其包括凸缘4，所述凸缘4具有插脚5，所述插脚5能够接合在吸入器主体2中形成的相应孔6中。如图9所示，孔6备有纵向狭槽，在所述纵向狭槽中能够接合插脚5的正交齿8；以及底部环状凹槽(未显示)，其中齿8能够滑入。因此，通过使齿8通过纵向狭槽可以将插脚5接合到孔6中，在达到底部时，可以使插脚5在其孔6中完全地旋转，从而也相对于吸入器主体2旋转吸入器喷嘴3。
通过弹簧型的锁定装置可将吸入器喷嘴3锁定在其关闭状态，如进一步在图8-13中所示，所述弹簧型的锁定装置包括具有小脊(未显示)的凸缘4的钩部分18(图10)，用于接合在吸入器主体2中界定的闭锁凹槽19(图8)内部形成的相应脊20(图8)。所述吸入器主体2还配有用于胶囊的凹槽，所述凹槽向上开放并通过穿孔板或栅格11与外部连通(图11-13)，所述穿孔板或栅格11包括在凸缘4的吸入器喷嘴3中并设计用于将胶囊凹槽9(图9)与喷嘴3的导管12(图9)分开。
胶囊13(图12)可以接合在凹槽9中，所述胶囊是已知类型的且适于被穿孔以允许保持在其中的药物内容物容易地被进入，其中穿孔操作通过任何适合的穿孔装置来进行。在所示吸入器1中，穿孔装置包括一对穿孔针14(图8和11-13)，如由弹性元件所反向推动的，所述穿孔针14能够横向滑动，所述弹性元件在该实施方案中包括与穿孔针14同轴的螺旋弹簧15(图8和11-13)并且在用吸入器主体2固定的各自对接元件16(图11-13)和中空的按钮元件17(图8-13)之间操作。穿孔针14类似于皮下注射器针头且具有有斜面的尖头，以有利于所述穿孔针头14将胶囊13的包衣穿孔。
吸入器装置1的操作可以进一步描述如下。在开放状态下，如图9所示，胶囊接合到胶囊凹槽9中且喷嘴3锁扣在吸入器主体2上。通过按压按钮元件17，施压于穿孔针14使穿孔胶囊13，从而它的内容物如本发明的干粉将与胶囊凹槽连通。通过对喷嘴3应用抽吸，将产生通过孔10来自于外部的空气流，该空气流进入胶囊凹槽，从而与胶囊内容物混合，通过栅格11和导管12，允许产品被吸入。
如果需要，吸入器装置1可以使用皮下注射器针头作为穿孔针14。因为该类型的针提供了非常小的耐穿孔性和非常精确的操作，所以可能使用具有较大直径的针头，不损坏胶囊，从而提供非常简单的穿孔操作。少量的穿孔针的使用，例如仅仅两个，允许减少针头和胶囊之间的接触表面，穿孔截面是相同的，结果减少了摩擦和影响现有吸入器的问题。
本发明的干粉组合物经由吸入施用而施用于需要它的患者，例如遭受如下的患者哮喘或其它阻塞性肺病如支气管炎、肺气肿、支气管扩张症和囊性纤维变性；纤维化肺疾病如肺间质纤维化及其他来源不明的间质性肺病；结节病及混合呼吸道疾患如鼻息肉、肺嗜酸性粒细胞增多症和嗜酸细胞肉芽肿。可以通过当被患者吸入时该组合物的喷射剂量以及具有特定粒度的颗粒的沉积百分率来表征施用的效率。根据本发明的实施方案，当本发明的干粉组合物这样被吸入时，该组合物的喷射剂量是约70质量％或更高，例如约80质量％或更高，例如约90质量％或更高。由于实际限制，喷射剂量通常不超过90质量％或95质量％。根据本发明的实施方案，当本发明的干粉组合物这样被吸入时，进入肺部且具有不超过约5μm的直径值的颗粒的沉积百分率是在约25质量％和约60质量％之间，例如在约40质量％和约60质量％之间，例如在约50质量％和约60质量％之间。在一个实施方案中，具有不超过约5μm的直径值的颗粒的最小沉积百分率能够是约25质量％；在其它实施方案中，这种最小沉积百分率能够是约40质量％，或者约50质量％。在一个实施方案中，具有不超过约5μm的直径值的颗粒的最大沉积百分率能够是约60质量％；在其它实施方案中，这种最大沉积百分率能够是约70质量％，或者约80质量％。为了提供进一步的指导，在以下本申请的“实施例”部分中描述了制造本发明的干粉组合物的一些方法。
本发明的干粉组合物适用于需要其的患者，用于治疗和/或预防各种病症(包括过敏性疾病症)、疾病和病变。这种病症的优选例子是哮喘。其它病症的例子包括其它阻塞性肺病如如支气管炎、肺气肿、支气管扩张症和囊性纤维变性；纤维化肺疾病如肺间质纤维化及其他来源不明的间质性肺病；结节病及混合呼吸道疾病如鼻息肉、肺嗜酸性粒细胞增多症和嗜酸细胞肉芽肿。使用的递送的类型是吸入。
虽然本发明描述了各种剂量，本领域技术人员应该理解，对于需要治疗的任何特定受治疗者的具体剂量水平和剂量频率可以改变且将取决于各种因素。这些因素包括具体多肽或其功能片段的活性、该化合物的代谢稳定性和作用时间长度、年龄、体重、一般健康、性别、饮食、施用方式和时间、排泄率、药物组合、特定疾患的严重性和主体经历的治疗。
然而，通常，mIL-4的典型剂量将是大约0.005-1mg/kg。例如，为了施用mIL-4，通过气溶胶吸入的近似的额定剂量将是约0.3mg至60mg，例如约0.3mg至约0.7mg，或约0.6mg至约1.1mg，或约0.9mg至约1.6mg，或约1.4mg至约1.9mg，或约1.8mg至约2.3mg，或约2.2mg至约2.8mg，或约2.7mg至约3.2mg，或约3.1mg至约4.2mg，或约4.1mg至约5.2mg，或约5.1mg至约7.7mg，或约7.4mg至约10.2mg，或约10.1mg至约15.2mg，或约15.1mg至约20.2mg，或约20.1mg至约25.2mg，或约25.1mg至约30.2mg，或约30.1mg至约35.2mg，或约35.1mg至约40.2mg，或约40.1mg至约45.2mg，或约45.1mg至约50.2mg，或约50.1mg至约55.2mg，或约55.1mg至约60mg。
近似剂量包括，但不限于对受治疗者的约0.3mg、约0.5mg、约1.0mg、约1.5mg、约2mg、约2.5mg、约3.0mg、约4mg、约5mg、约7.5mg、约10mg、约15mg、约20mg、约25mg、约30mg、约35mg、约40mg、约45mg、约50mg、约55mg或约60mg。剂量可以一天施用三次，每日两次，每两天一次，每三天一次，每周两次，每周一次或视需要。施用mIL-4的治疗可以跨越数天、数周、数年，或者当症状持续时无限期地持续。
为了有效施用本发明的组合物，可以使用图2中示意性显示的递送药盒。药盒100包括用于被患者吸入的吸入元件和用于储存干粉组合物的储存容器。该储存容器进一步包括初级胶囊和二级储存容器，且进一步包括贴附于储存容器以提供患者使用说明书的任选的标签。初级胶囊被配置成配合吸入元件。
在图2所示的药盒100中，本发明的干粉组合物可以是未显示的胶囊形式，各胶囊含有额定在约5mg和25mg之间的组合物的，例如在约5mg和约20mg之间的，例如在约10mg和约20mg之间的组合物的填充重量。
可以使用多种规格和材料作为药物产品的初级包装。在药盒100中，优选的容器是#3规格胶囊。然而，还能够使用其它规格胶囊，例如规格1、2和4胶囊。能够由多种材料例如羟丙基甲基纤维素(HPMC)或明胶来制备任何胶囊。而且，可以使用其它形式的初级包装，例如泡罩包装。泡罩包装布置包括，其中形成泡罩的底箔连接于具有在泡罩内含有的药物的基本上平坦的盖箔的类型的单独可打开的泡罩的混合。
吸入装置的选择对于粉剂的解剖沉积、干粉制剂递送的稳定性和效率也是关键的，以确保在使用该装置时患者的顺从性。该优选的实施方案是上述RS01Model 7吸入器。然而，可以使用将产生不同的特性的各种其它吸入装置。
可以应用象RS01一样的使用胶囊的单一剂量装置，例如Aventis

Boehringer Ingelheim

或

此外，泡罩包装装置如Vectura

或GSK

或Diskus可以替代。另外，储器装置如Orion Pharma

Inovata Biomed

或Sofotec

可以容纳多个mIL-4剂量。对于所有吸入装置，分配约30天供应量以最小化患者误用、减低患者的成本、保持药物的稳定性和安全使用。
以下实施例用于进一步说明但不限制本发明的范围。
实施例1.制剂的制备 通过如表1所示将组分组合成溶液来制备各自包括活性成分mIL-4的四种制剂。在下面的实施例中论述的随后的试验和评价将它们称为制剂1-4，如表1所示。
表1.含有mIL-4的制剂的概述 实施例2.制备干粉的方法 在表2中总结了用于制造制剂1-4的喷雾干燥参数。
表2.用于喷雾干燥mIL-4制剂的参数 实施例3.组合物中的活性组分的质量和蛋白聚集的研究 通过用RP-HPLC测定方法分析约20mg的粉剂来测定各制剂的含量和纯度。每一粉剂进行三次测定，计算重量百分率。表3显示了每一制剂的测定结果。结果与理论值一致。
表3mIL-4制剂获得的测定数据的总结 1基于制备的水溶液的约2％mIL-4固体含量。
2通过在位点1的HPLC分析(n＝3次测定)。
3通过在位点2的HPLC分析(n＝3次测定)。
在制剂4中观察到了最大偏差，其中测量浓度比预计浓度低大约8％。使用反相HPLC降解方法来表征降解特性。除了制剂4以外，对于喷雾干燥粉剂没有观察到明显的降解迹象，该制剂4显示了指示在约7.6分钟的聚集的附加峰。获得的色谱图在图1中提供。
SDS PAGE(蛋白的聚集) 用阴离子洗涤剂十二烷基硫酸钠孵育样品。在非还原条件下在具有规定孔径的聚丙烯酰胺凝胶(例如ExcelGel SDS，15％聚丙烯酰胺，Pharmacia)中分离所述蛋白。该分离与蛋白的分子量成比例。在用考马斯亮兰染色之后，将凝胶扫描(例如Scanner JX-330，Sharp)，测定单个带的数目。对所有四种制剂进行蛋白的SDS PAGE评价。获得的结果在图2中提供。在喷雾干燥制剂4中观察到弱带，表明某些最少的蛋白分解。
水分含量 使用卡尔-费歇尔(Karl Fisher)滴定法来测定每一制剂的水分含量。将大约10mg的各制剂溶解在10mL的卡尔-费歇尔试剂中。通过将1mL样品溶液注入到库仑池(coulometric cell)中来分析样品。典型地，对每一制剂分析三个样品，重复三次注射样品溶液。使用由卡尔-费歇尔试剂组成的空白。
表4提供了关于每一制剂的水分含量的数据。
表4.mIL-4制剂的水分含量
实施例4.生物活性TF1功能生物测定的评价 使用TF-1细胞对IL-4或IL-13的增殖反应来评价mIL-4的功能拮抗剂活性。TF-1系由非粘附红白血病获得，且广泛用作模型系统，因为所述细胞响应包括IL-4和IL-13的许多炎症细胞因子来增殖。用和不用IL-4、IL-13和mIL-4培养TF-1细胞。绘制mIL-4的浓度(log nM)对平均相对荧光单位的图，且提取数据来测定50％拮抗剂效应。用于IL-4和IL-13的mIL-4的EC50(50％抑制效果)作为平均值报告，且报告95％置信区间。
在表5中提供TF1功能生物测定的结果。结果指示在喷雾干燥粉剂样品中没有由于喷雾干燥带来的活性损失。
表5TF1数据喷雾干燥粉剂的总结 实施例5.玻璃化转变温度测量 使用差示扫描量热法(DSC)测量玻璃化转变温度，该差示扫描量热法使用10℃/分钟的N2流速、用TA Instruments DSC2920仪器来进行。
通过图3和4示出了用于四种制剂和冻干起始原料的DSC热分析数据。在约75℃和125℃之间的范围，在指示玻璃转化温度的热流中具有变化(在储存温度以上50度)。
如能够从图4中进一步观察的，获得了从25℃到300℃的热分析图。结果指示，制剂1和2在它们的热行为上不同，因为在具有蔗糖的制剂中在约140℃发现了基线的改变(图3)。
实施例6.通过激光衍射测定初级粒度分布 使用湿分散体、激光衍射法来测定喷雾干燥的制剂的几何粒度分布。使用Malvern Mastersizer 2000与Hydro2000S湿池(wet cell)的组合。
通过将大约10mg-25mg的制剂称量到20mL玻璃瓶内来制备样品。添加10毫升的分散剂以产生悬浮液。样品使用探头超声波破碎仪在10％幅度(40瓦)下超生破碎2分钟，以促进颗粒分散。对于每一种制剂制备三份样品。
然后使用Malvern Mastersizer 2000在表6所示的设置下分析样品。
表6.用于测定几何粒度分布的参数 在表7中总结对于制剂1到4的测量结果。尽管制剂组成的差别，但观察到了仅仅很小的粒度分布差别。中值直径是在从2.3μm到2.8μm的范围内。平均D90值是在从4.4μm到4.9μm的范围内。平均跨度(SPAN)值，即颗粒分布的宽度的度量，小于或等于1.4，指示颗粒是相对单分散的。
表7.制剂1-4的平均(％RSD)Malvern结果
图5显示了用在正辛烷中的0.1％v/v卵磷脂作为分散剂制备的制剂2(mIL-4/柠檬酸盐/蔗糖)的结果，其中在将样品递送到湿池中之后立即通过激光衍射来进行测定。图5显示了3次测定的叠加。
实施例7.通过下一代冲击器测定空气动力学粒度分布 使用下一代冲击器(Next Generation Impactor)(NGI)测定每一种制剂的空气动力学性能。为了实现制剂的气溶胶化，使用Plastiape RS01Model 7，低抗耐性胶囊装置。将制剂填充到出自Shinogi的规格3的羟丙基甲基纤维素(HPMC)胶囊中。
通常，将约5mg的制剂称量到每一胶囊中。在调节的手套箱中进行(低于5％相对湿度，在15℃和25℃之间的温度下)胶囊填充和称量。将胶囊在制备之后立即装载到装置中，穿刺并取样到NGI中。
使用体积流量计测定对应4kPa压降的流速。将吸入器连接到USP IP的改良适配器允许直接测量压降。不用预分离器安装NGI。安装Copley临界流量控制器，通过该装置在试验期间吸引4升空气。使用RP HPLC测定方法分析NGI样品。需要大约100L/min的空气流速来产生穿越吸入器装置的4kPa压降。该流速在所有NGI试验中使用。
表8列举了对于这些实验计算的性能参数。由于在这些制剂之间的mIL-4浓度差，平均细颗粒剂量(FPD)改变。当作为细颗粒百分率(FPF)标准化时，制剂2具有在96％的最高FPF，随后是制剂1和3，分别是在85％和83％。平均MMAD估计由Malvern测定的D50值(参见表7)。这些结果指示，与该吸入器装置组合的制剂1、2和4适合于吸入递送。
表8制剂1、2和4的NGI结果的总结 a作为每制剂的胶囊填充wt×mIL-4浓度测定的理论质量。
实施例8.测定喷射剂量和细颗粒剂量 在表9中总结了使用不同填充重量在两种不同初级粒度下制造的制剂1(具有4.8μm的平均粒度的批料1和具有3.3μm的平均粒度的批料2)的喷射剂量和细颗粒剂量(沉积)结果的数据。在表10中总结了使用不同填充重量在两种不同初级粒度下制造的制剂2(具有2.9μm的平均粒度的批料1和具有4.2μm的平均粒度的批料2)的喷射剂量和细颗粒剂量(沉积)结果的数据。如在这些结果中所能看到的，填充重量影响了喷射质量和细颗粒百分率二者。
表9、不同填充重量的沉积结果(制剂1批料)
表10、不同填充重量的沉积结果(制剂2批料)

实施例9.储存条件和稳定性的研究 在类似条件下喷雾干燥之后评价四种制剂的物理和化学性能。所有制剂具有对于吸入递送来说满意的通过激光衍射测定的几何粒度分布。平均粒径(D50)值是在从2.3μm到2.8μm的范围，且平均第90百分位直径(D90)值是在从4.4μm到4.9μm的范围。所有制剂的水分含量低于按质量计2％。然而，制剂3的水分吸收曲线显示了在30-40％相对湿度(RH)时明显重量损失，指示了结晶。该制剂在进一步测试中被排除。
制剂1、2和4的空气动力学性能看起来适合于吸入递送。然而，制剂4通过RP-HPLC的化学分析显示了未知峰的存在。因此，制剂1和2被考虑用于在5℃和30℃/65％RH下的三个月稳定性试验。
表11中的稳定性数据结果涉及类似于制剂2的干粉的新批料，即75％mIL-4、15％蔗糖和10％柠檬酸盐，pH5.0。
表11mIL-4散装吸入干粉-稳定性结果


NT-不能测试的 实施例10.药盒内容物和包装 对喷雾干燥的材料进行动态湿气吸附分析(DVS)以评价水分吸收。使用以0.001％的dM/dT值从0％上升至90％RH的SMS DVS 2000系统分析样品。还表征冻干的mIL-4用于参考。四种IL-4的喷雾干燥制剂的动态湿气吸附(DVS)研究指示，制剂1、2和4的水分吸收性能相互一致且与mIL-4冻干饼一致。这些显示水分随相对湿度增加而增加且没有其它水分诱导的事件。
制剂3显示了在30-40％RH下的明显重量损失事件，这能够归因于对于该制剂的结晶和潜在不稳定性。表12和13提供了DVS数据的总结。
表12.mIL-4喷雾干燥制剂的DVS性能的对比 表13吸湿性数据的总结
这些制剂的水分吸收要求使用的包装结构必须使进入产品的水分最小化。这些干粉的不适当的包装和水分进入导致了如表14和15中见到的不稳定性。
表14和15显示了由在箔外包装中包装且在5℃、25℃/60％RH和40℃/75％RH下储存12周的制剂1和2获得的散装粉剂和填充胶囊的稳定性数据。还有，对于每一制剂，将一组胶囊样品在玻璃瓶内储存，但暴露于(无外包装，无干燥剂)25℃和60％相对湿度8周。在两种制剂中，在箔外包装中储存12周的时间的散装粉剂和胶囊显示了水分的明显增加，证明箔外包装不保护药物产品免遭水分进入。该数据显示，RP-HPLC和SDSPAGE代表了水分诱发的降解特性。胶囊样品不保护储存8周显示了水分的最大增加和显著的降解。用改进的包装，如表11所示，在加速储存条件下(30℃/65％RH)在相同时间范围内没有水分增加的证据和无蛋白降解。
表14.制剂1不适当的包装对蛋白完整性的效果

表15.制剂2不适当的包装对蛋白完整性的效果

实施例11.用干粉制剂对哮喘患者的治疗 由临床研究确定IL-4/IL-13拮抗剂干粉组合物的吸入的药代动力学(PK)和局部耐受性。方法十名具有轻度至中度哮喘(FEV1％预计73-105％，沙丁胺醇可逆性≥10％)的受治疗者经由图10的吸入器施用单剂量的10mg IL-4突变蛋白干粉组合物。该干粉组合物包括75％图1B中的mIL-4的药物装载、15％蔗糖和10％柠檬酸盐(以7∶3柠檬酸钠与柠檬酸的近似比率)。在给药后24小时的期间采集PK和肺功能(FEV1)的系列测量。结果达到峰血浓度的时间为2.0小时。血液中的半衰期(3-4小时)不受制剂和剂量水平的影响。总全身暴露((AUC0-∞；范围12-39nghr/mL)和受治疗者间变异性(关于AUCO-∞的几何变异系数(geometricCV)，48％)与基于体外粉剂和装置特征的预测一致。经过24小时的FEV1的典型变化≤10％，与在药物吸入递送之后的肺功能改变的先前报告一致(Wilkinson，J.等人，BMJ 1992；305931-932)。该干粉组合物在哮喘受治疗者中充分耐受，没有局部刺激的证据。图14示出了用于吸入的干粉组合物的平均(±SD)IL-4突变蛋白血浆浓度对时间曲线。
虽然参考以上实施例描述了本发明，但应该理解，改造和变化包括在本发明的精神和范围内。因此，本发明仅受以下权利要求的限制。
AERO1250-1WO_ST25
序列表
<110>艾罗文斯公司
C.B.莱勒
J.S.泰珀
W.A.弗勒兰德
<120>药物多肽干粉气溶胶制剂
及制备方法
<130>AERO1250-1WO
<150>US 60/959,267
<151>2007-07-11
<160>4
<170>PatentIn版本3.4
<210>1
<211>129
<212>PRT
<213>智人
<400>1
His Lys Cys Asp Ile Thr Leu Gln Glu Ile Ile Lys Thr Leu Asn Ser
1 5 10 15
Leu Thr Glu Gln Lys Thr Leu Cys Thr Glu Leu Thr Val Thr Asp Ile
20 25 30
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Cys Leu Gly Ala Thr Ala Gln Gln Phe His Arg His Lys Gln Leu Ile
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Arg Phe Leu Lys Arg Leu Asp Arg Asn Leu Trp Gly Leu Ala Gly Leu
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Asn Ser Cys Pro Val Lys Glu Ala Asn Gln Ser Thr Leu Glu Asn Phe
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Ser
<210>2
<211>387
<212>DNA
<213>智人
<400>2
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agagagaaat attcaaagtg ttcgagc387
<210>3
<211>130
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成构建物
<400>3
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1 5 10 15
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130
<210>4
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<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>合成构建物
<400>4
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atggacgaaa aagactctaa atgctcttct taataa 39权利要求
1.一种适合于由需要其的患者吸入的可分散的粉剂组合物，所述组合物含有包括人白细胞介素突变蛋白(mhIL-4)的治疗剂，
其中所述组合物的玻璃化转变温度比储存所述组合物的储存温度高至少50℃，且
其中在将所述组合物在所述储存温度下储存三个月的时间之后，所述组合物保持初始比活性的至少80％。
2.根据权利要求1所述的组合物，还包括缓冲剂和稳定剂。
3.根据权利要求2所述的组合物，其中所述缓冲剂是柠檬酸盐。
4.根据权利要求2所述的组合物，其中所述缓冲剂是醋酸盐。
5.根据权利要求2所述的组合物，其中所述缓冲剂是乳酸盐。
6.根据权利要求2所述的组合物，其中所述缓冲剂是酒石酸盐。
7.根据权利要求2-6的任一项所述的组合物，其中所述稳定剂选自由碳水化合物组成的组。
8.根据权利要求2-7的任一项所述的组合物，其中所述稳定剂是蔗糖。
9.根据权利要求2-7的任一项所述的组合物，其中所述稳定剂是甘露醇。
10.根据权利要求2-7的任一项所述的组合物，其中所述稳定剂是海藻糖。
11.根据前述权利要求的任一项所述的组合物，还包括选自由氨基酸或聚(氨基酸)组成的组的赋形剂。
12.根据权利要求11所述的组合物，其中所述氨基酸是亮氨酸。
13.根据前述权利要求的任一项所述的组合物，其中所述组合物的玻璃化转变温度比所述储存温度高至少75℃。
14.根据前述权利要求的任一项所述的组合物，其中所述组合物的玻璃化转变温度比所述储存温度高至少100℃。
15.根据前述权利要求的任一项所述的组合物，其中在总储存期到期之后，所述组合物保持初始比活性的至少95％，其中所述总储存期为至少两年。
16.根据权利要求15所述的组合物，其中所述组合物保持初始比活性的至少98％。
17.根据前述权利要求的任一项所述的组合物，其中治疗活性材料在所述组合物中的质量浓度是在约10％和约98％之间。
18.根据前述权利要求的任一项所述的组合物，其中治疗活性材料在所述组合物中的质量浓度是在约10％和约75％之间。
19.根据前述权利要求的任一项所述的组合物，其中治疗活性材料在所述组合物中的质量浓度是在约10％和约60％之间。
20.根据前述权利要求的任一项所述的组合物，其中所述组合物包括水分且其中所述水分含量是在约1％和约10％之间。
21.根据前述权利要求的任一项所述的组合物，其中所述组合物中的水分含量是在约1％和约5％之间。
22.根据前述权利要求的任一项所述的组合物，其中所述组合物中的水分含量是在约1％和约3％之间。
23.根据前述权利要求的任一项所述的组合物，其中在总储存期到期之后，所述组合物具有约3％或更低的聚集度，其中所述总储存期是至少两年。
24.根据权利要求23所述的组合物，其中所述聚集度是约1％或更低。
25.根据权利要求23或24的任一项所述的组合物，其中所述组合物的聚集度是约0％。
26.根据前述权利要求的任一项所述的组合物，其中所述储存温度为室温或更低。
27.根据前述权利要求的任一项所述的组合物，其中所述储存温度为室温。
28.根据权利要求1-26的任一项所述的组合物，其中所述储存温度是在约2℃和8℃之间。
29.根据权利要求1-26的任一项所述的组合物，其中所述储存温度在储存期的第一部分期间是在约2℃和8℃之间，且在储存期的第二部分期间为室温。
30.根据前述权利要求的任一项所述的组合物，其中在所述组合物的总储存期到期之后，治疗活性材料相对于药品的氧化度是约5％或更低，其中所述总储存期是至少两年。
31.根据权利要求30所述的组合物，其中所述氧化度是约3％或更低。
32.根据权利要求30或31的任一项所述的组合物，其中所述氧化度是约2％。
33.根据前述权利要求的任一项所述的组合物，其中通过具有小于约10μm的平均直径值的颗粒来形成所述粉剂。
34.根据前述权利要求的任一项所述的组合物，其中所述平均直径值是在约2μm和约6μm之间。
35.根据前述权利要求的任一项所述的组合物，其中所述平均直径值是在约2μm和约4μm之间。
36.根据前述权利要求的任一项所述的组合物，其中粒度的几何标准差是在约1和3之间。
37.根据前述权利要求的任一项所述的组合物，其中所述几何标准差是在约1.5和2.5之间。
38.根据前述权利要求的任一项所述的组合物，其中当被患者吸入时，所述组合物的喷射剂量是约70质量％或更高。
39.根据前述权利要求的任一项所述的组合物，其中所述组合物的喷射剂量是约80质量％或更高。
40.根据前述权利要求的任一项所述的组合物，其中所述组合物的喷射剂量是约90质量％或更高。
41.根据前述权利要求的任一项所述的组合物，其中，当所述组合物被患者吸入时，具有不超过约5μm的直径值的颗粒的沉积百分率是在约25质量％和约60质量％之间。
42.根据前述权利要求的任一项所述的组合物，其中所述沉积百分率是在约40质量％和约60质量％之间。
43.根据前述权利要求的任一项所述的组合物，其中所述沉积百分率是在约50质量％和约60质量％之间。
44.根据前述权利要求的任一项所述的组合物，其中所述组合物的pH是在约3和6之间。
45.根据前述权利要求的任一项所述的组合物，其中所述组合物的pH值是在约4和5之间。
46.一种药盒，其包括根据前述权利要求的任一项所述的可分散的粉剂组合物、用于患者吸入的吸入装置和用于储存所述组合物的储存装置，所述储存装置包括初级胶囊和二级储存容器，且还包括贴附于所述储存装置且提供患者使用说明书的标签，进一步的前提是所述初级胶囊适于配合所述吸入装置。
47.根据权利要求46所述的药盒，其中所述组合物为胶囊的形式，各胶囊含有在约5mg和25mg之间的所述组合物。
48.根据权利要求46或权利要求47的任一项所述的药盒，其中各胶囊含有在约5mg和约20mg之间的所述组合物。
49.根据权利要求46-48的任一项所述的药盒，其中各胶囊含有在约10mg和约20mg之间的组合物。
50.一种制备根据权利要求1-45的任一项所述的组合物的方法，包括将治疗活性材料的水溶液经历选自由冷冻干燥、喷雾干燥和冷冻喷雾干燥组成的组的过程。
51.根据权利要求50所述的方法，还包括研磨。
52.根据权利要求50或权利要求51的任一项所述的方法，其中所述过程是喷雾干燥。
53.根据权利要求1-45的任一项所述的组合物，其中所述治疗活性材料包括活性物质，其中所述活性物质的额定剂量是在约0.3mg和30mg之间。
54.根据权利要求1-45或53的任一项所述的组合物，其中所述额定剂量是在约0.3mg和5mg之间。
55.根据权利要求1-45、53或54的任一项所述的组合物，其中所述额定剂量是在约0.5mg和3mg之间。
56.根据权利要求1-46或53-554的任一项所述的组合物，其中所述IL-4突变蛋白包括具有修饰的野生型hIL-4的氨基酸序列，其中第一修饰是用其它天然氨基酸对存在于野生型hIL-4蛋白中121、124或125位上的一个或多个氨基酸的替代，且还可任选地包括N-端甲硫氨酸。
57.根据权利要求56所述的组合物，其中所述IL-4突变蛋白还包括选自由以下组成的组中的第二修饰
(i)其中的C端的修饰；
(ii)其中的潜在的糖基化位点的删除；
(iii)蛋白与非蛋白聚合物的偶联；
(iv)选自由在13、16、81和89位及它们的任意组合的替代组成的组中的至少一个氨基酸替代。
58.根据权利要求56或权利要求57的任一项所述的组合物，其中所述第一修饰包括根据野生型hIL-4编号的替代R121D和Y124D。
59.根据权利要求56-58的任一项所述的组合物，其中所述第一修饰包括根据野生型hIL-4编号的替代R121D和Y124D以及N-端甲硫氨酸。
60.一种适合被需要其的患者吸入的可分散的粉剂组合物，所述组合物含有包括突变的人白细胞介素-4(mIL-4)蛋白的治疗剂，所述蛋白由具有两种修饰的野生型hIL-4的氨基酸序列组成，其中第一修饰选自由存在于野生型hIL-4蛋白的121、124或125位的一个或多个氨基酸被其它天然氨基酸的替代组成的组，且第二修饰是选自由以下组成的组中的至少一个修饰
i)其中的C端的修饰；
ii)其中的潜在的糖基化位点的删除；和/或
iii)蛋白与非蛋白聚合物的偶联；
iv)选自由在13、16、81和89位及它们的任意组合的替代组成的组中的至少一个氨基酸替代，使得mIL-4蛋白是野生型hIL-4的拮抗剂且还任选地包含N-端甲硫氨酸，
其中所述组合物的玻璃化转变温度比储存所述组合物的储存温度高至少50℃，且
其中在将所述组合物在所述储存温度下储存三个月的时间之后，所述组合物保持初始比活性的至少80％。
61.一种适合被需要其的患者吸入的可分散的粉剂组合物，所述组合物含有包括人白细胞介素突变蛋白(mhIL-4)的治疗剂、缓冲剂和稳定剂。
62.根据权利要求61所述的组合物，其中所述缓冲剂是柠檬酸盐。
63.根据权利要求61所述的组合物，其中所述缓冲剂是醋酸盐。
64.根据权利要求61所述的组合物，其中所述缓冲剂是乳酸盐。
65.根据权利要求61所述的组合物，其中所述缓冲剂是酒石酸盐。
66.根据权利要求61-65的任一项所述的组合物，其中所述稳定剂选自由碳水化合物组成的组。
67.根据权利要求61-66的任一项所述的组合物，其中所述稳定剂是蔗糖。
68.根据权利要求61-66的任一项所述的组合物，其中所述稳定剂是甘露醇。
69.根据权利要求61-66的任一项所述的组合物，其中所述稳定剂是海藻糖。
70.根据权利要求61-69的任一项所述的组合物，还包括选自由氨基酸或聚(氨基酸)组成的组的赋形剂。
71.根据权利要求70所述的组合物，其中所述氨基酸是亮氨酸。
72.根据权利要求61-71的任一项所述的组合物，其中所述组合物的玻璃化转变温度比所述储存温度高至少75℃。
73.根据权利要求61-72的任一项所述的组合物，其中所述组合物的玻璃化转变温度比所述储存温度高至少100℃。
74.根据权利要求61-73的任一项所述的组合物，其中在总储存期到期之后，所述组合物保持初始比活性的至少95％，其中所述总储存期为至少两年。
75.根据权利要求74所述的组合物，其中所述组合物保持初始比活性的至少98％。
76.根据权利要求61-75的任一项所述的组合物，其中治疗活性材料在所述组合物中的质量浓度是在约10％和约98％之间。
77.根据权利要求61-76的任一项所述的组合物，其中治疗活性材料在所述组合物中的质量浓度是在约10％和约75％之间。
78.根据权利要求61-77的任一项所述的组合物，其中治疗活性材料在所述组合物中的质量浓度是在约10％和约60％之间。
79.根据权利要求61-78的任一项所述的组合物，其中所述组合物包括水分且其中所述水分含量是在约1％和约10％之间。
80.根据权利要求61-79的任一项所述的组合物，其中所述组合物中的水分含量是在约1％和约5％之间。
81.根据权利要求61-80的任一项所述的组合物，其中所述组合物中的水分含量是在约1％和约3％之间。
82.根据权利要求61-81的任一项所述的组合物，其中在总储存期到期之后，所述组合物具有约3％或更低的聚集度，其中总储存期是至少两年。
83.根据权利要求82所述的组合物，其中所述聚集度是约1％或更低。
84.根据权利要求82或83的任一项所述的组合物，其中所述组合物的聚集度是约0％。
85.根据权利要求61-84的任一项所述的组合物，其中所述储存温度为室温或更低。
86.根据权利要求61-85的任一项所述的组合物，其中所述储存温度为室温。
87.根据权利要求61-85的任一项所述的组合物，其中所述储存温度是在约2℃和8℃之间。
88.根据权利要求61-85的任一项所述的组合物，其中所述储存温度在储存期的第一部分期间是在约2℃和8℃之间，且在储存期的第二部分期间为室温。
89.根据权利要求61-88的任一项所述的组合物，其中在所述组合物的总储存期到期之后，治疗活性材料相对于药品的氧化度是约5％或更低，其中所述总储存期是至少两年。
90.根据权利要求89所述的组合物，其中所述氧化度是约3％或更低。
91.根据权利要求89或90的任一项所述的组合物，其中所述氧化度是约2％。
92.根据权利要求61-91的任一项所述的组合物，其中通过具有小于约10μm的平均直径值的颗粒来形成所述粉剂。
93.根据权利要求61-92的任一项所述的组合物，其中所述平均直径值是在约2μm和约6μm之间。
94.根据权利要求61-93的任一项所述的组合物，其中所述平均直径值是在约2μm和约4μm之间。
95.根据权利要求61-94的任一项所述的组合物，其中粒度的几何标准差是在约1和3之间。
96.根据权利要求61-95的任一项所述的组合物，其中几何标准差是在约1.5和2.5之间。
97.根据权利要求61-96的任一项所述的组合物，其中当被患者吸入时，所述组合物的喷射剂量是约70质量％或更高。
98.根据权利要求61-97的任一项所述的组合物，其中所述组合物的喷射剂量是约80质量％或更高。
99.根据权利要求61-98的任一项所述的组合物，其中所述组合物的喷射剂量是约90质量％或更高。
100.根据权利要求61-99的任一项所述的组合物，其中当所述组合物被患者吸入时，具有不超过约5μm的直径值的颗粒的沉积百分率是在约25质量％和约60质量％之间。
101.根据权利要求61-100的任一项所述的组合物，其中所述沉积百分率是在约40质量％和约60质量％之间。
102.根据权利要求61-101的任一项所述的组合物，其中所述沉积百分率是在约50质量％和约60质量％之间。
103.根据权利要求61-102的任一项所述的组合物，其中所述组合物的pH是在约3和6之间。
104.根据权利要求61-103的任一项所述的组合物，其中所述组合物的pH值是在约4和5之间。
105.一种药盒，其包括根据权利要求61-104的任一项所述的可分散的粉剂组合物、用于受治疗者吸入的吸入装置和用于储存所述组合物的储存装置，所述储存装置包括初级容器和二级储存容器，且还任选地包括在所述储存装置中含有的或贴附于所述储存装置的患者使用说明书，进一步的前提是所述初级胶囊适于配合所述吸入装置。
106.根据权利要求105所述的药盒，其中所述初级容器能够被所述吸入装置刺破，且各初级容器含有在约5mg和25mg之间的所述组合物。
107.根据权利要求105或权利要求106的任一项所述的药盒，其中所述初级容器是含有约5mg和约20mg之间的所述组合物的胶囊。
108.根据权利要求105-107的任一项所述的药盒，其中各初级容器含有在约10mg和约20mg之间的组合物。
109.一种制备根据权利要求61-104的任一项所述的组合物的方法，包括将治疗活性材料的水溶液经历选自由冷冻干燥、喷雾干燥和冷冻喷雾干燥组成的组的过程。
110.根据权利要求109所述的方法，还包括研磨。
111.根据权利要求109或权利要求110的任一项所述的方法，其中所述过程是喷雾干燥。
112.根据权利要求61-104的任一项所述的组合物，其中所述治疗活性材料包括活性物质，其中所述活性物质的额定剂量是在约0.3mg和30mg之间。
113.根据权利要求61-104或112的任一项所述的组合物，其中所述额定剂量是在约0.3mg和5mg之间。
114.根据权利要求61-104、112或113的任一项所述的组合物，其中所述额定剂量是在约0.5mg和3mg之间。
115.根据权利要求61-104或112-114的任一项所述的组合物，其中所述IL-4突变蛋白包括具有修饰的野生型hIL-4的氨基酸序列，其中第一修饰是用其它天然氨基酸对存在于野生型hIL-4蛋白中121、124或125位上的一个或多个氨基酸的替代，且还任选地包括N-端甲硫氨酸。
116.根据权利要求115所述的组合物，其中所述IL-4突变蛋白还包括选自由以下组成的组的第二修饰
(i)其中的C端的修饰；
(ii)其中的潜在的糖基化位点的删除；
(iii)蛋白与非蛋白聚合物的偶联；
(iv)选自由在13、16、81和89位及它们的任意组合的替代组成的组中的至少一个氨基酸替代。
117.根据权利要求115或权利要求116的任一项所述的组合物，其中所述第一修饰包括根据野生型hIL-4编号的替代R121D和Y124D。
118.根据权利要求115-117的任一项所述的组合物，其中所述第一修饰包括根据野生型hIL-4编号的替代R121D和Y124D以及N-端甲硫氨酸。
119.一种适合被需要其的患者吸入的可分散的粉剂组合物，所述组合物含有包括突变的人白细胞介素-4(mIL-4)蛋白的治疗剂、缓冲剂和稳定剂，所述mIL-4蛋白由具有两种修饰的野生型hIL-4的氨基酸序列组成，其中第一修饰选自由存在于野生型hIL-4蛋白的121、124或125位的一个或多个氨基酸被其它天然氨基酸的替代组成的组，且第二修饰是选自由以下组成的组中的至少一个修饰
i)其中的C端的修饰；
ii)其中的潜在的糖基化位点的删除；和/或
iii)蛋白与非蛋白聚合物的偶联；
iv)选自由在13、16、81和89位及它们的任意组合的替代组成的组中的至少一个氨基酸替代，使得mIL-4蛋白是野生型hIL-4的拮抗剂且还任选地包含N-端甲硫氨酸。
120.一种适合被需要其的患者吸入的可分散的粉剂组合物，所述组合物含有包括人白细胞介素突变蛋白(mhIL-4)的治疗剂，其中当被患者吸入时，所述组合物的喷射剂量是约70质量％或更高。
121.根据权利要求120所述的组合物，其中所述组合物的喷射剂量是约80质量％或更高。
122.根据权利要求120或权利要求121的任一项所述的组合物，其中所述组合物的喷射剂量是约90质量％或更高。
123.根据权利要求120-122的任一项所述的组合物，其中当所述组合物被患者吸入时，具有不超过约5μm的直径值的颗粒的沉积百分率是在约25质量％和约60质量％之间。
124.根据权利要求120-123的任一项所述的组合物，其中所述沉积百分率是在约40质量％和约60质量％之间。
125.根据权利要求120-124的任一项所述的组合物，其中所述沉积百分率是在约50质量％和约60质量％之间。
126.一种药盒，其包括根据权利要求119-124的任一项所述的可分散的粉剂组合物、用于患者吸入的吸入装置和用于储存所述组合物的储存装置，所述储存装置包括初级容器和二级储存容器，且还任选地包括在所述储存装置中含有的、贴附于所述储存装置且提供患者使用说明书的标签，进一步的前提是所述初级胶囊适于配合所述吸入装置。
127.根据权利要求126所述的药盒，其中所述组合物为胶囊的形式，各胶囊含有在约5mg和25mg之间的所述组合物。
128.根据权利要求126或权利要求127的任一项所述的药盒，其中各胶囊含有约5mg和约20mg之间的所述组合物。
129.根据权利要求126-128的任一项所述的药盒，其中各胶囊含有在约10mg和约20mg之间的组合物。
130.一种制备根据权利要求120-125的任一项所述的组合物的方法，包括将治疗活性材料的水溶液经历选自由冷冻干燥、喷雾干燥和冷冻喷雾干燥组成的组的过程。
131.根据权利要求130所述的方法，还包括研磨。
132.根据权利要求130或权利要求131的任一项所述的方法，其中所述过程是喷雾干燥。
133.根据权利要求120-125的任一项所述的组合物，其中所述治疗活性材料包括活性物质，其中所述活性物质的额定剂量是在约0.3mg和30mg之间。
134.根据权利要求120-125或133的任一项所述的组合物，其中所述额定剂量是在约0.3mg和5mg之间。
135.根据权利要求120-125、133或134的任一项所述的组合物，其中所述额定剂量是在约0.5mg和3mg之间。
136.根据权利要求120-125或133-135的任一项所述的组合物，其中所述IL-4突变蛋白包括具有修饰的野生型hIL-4的氨基酸序列，其中第一修饰是用其它天然氨基酸对存在于野生型hIL-4蛋白中121、124或125位上的一个或多个氨基酸的替代，且还任选地包括N-端甲硫氨酸。
137.根据权利要求136所述的组合物，其中所述IL-4突变蛋白还包括选自由以下组成的组的第二修饰
(i)其中的C端的修饰；
(ii)其中的潜在的糖基化位点的删除；
(iii)蛋白与非蛋白聚合物的偶联；
(iv)选自由在13、16、81和89位及它们的任意组合的替代组成的组中的至少一个氨基酸替代。
138.根据权利要求136或权利要求137的任一项所述的组合物，其中所述第一修饰包括根据野生型hIL-4编号的替代R121D和Y124D。
139.根据权利要求136-138的任一项所述的组合物，其中所述第一修饰包括根据野生型hIL-4编号的替代R121D和Y124D以及N-端甲硫氨酸。
140.一种适合被需要其的患者吸入的可分散的粉剂组合物，所述组合物含有包括突变的人白细胞介素-4(mIL-4)蛋白的治疗剂，所述mIL-4蛋白由具有两种修饰的野生型hIL-4的氨基酸序列组成，其中第一修饰选自由存在于野生型hIL-4蛋白的121、124或125位的一个或多个氨基酸被其它天然氨基酸的替代组成的组，且第二修饰是选自由以下组成的组的至少一个修饰
i)其中的C端的修饰；
ii)其中的潜在的糖基化位点的删除；和/或
iii)蛋白与非蛋白聚合物的偶联；
iv)选自由在13、16、81和89位及它们的任意组合的替代组成的组中的至少一个氨基酸替代，使得mIL-4蛋白是野生型hIL-4的拮抗剂且还任选地包含N-端甲硫氨酸，
其中当被患者吸入时，所述组合物的喷射剂量是约70质量％或更高。
141.一种适合被需要其的患者吸入的可分散的粉剂组合物，所述组合物含有包括人白细胞介素突变蛋白(mhIL-4)的治疗剂，其中当所述组合物被患者吸入时，具有不超过约5μm的直径值的颗粒的沉积百分率是在约25质量％和约60质量％之间。
142.根据权利要求141所述的组合物，其中所述沉积百分率是在约40质量％和约60质量％之间。
143.根据权利要求141或权利要求142的任一项所述的组合物，其中所述沉积百分率是在约50质量％和约60质量％之间。
144.一种药盒，其包括根据权利要求141-143的任一项所述的可分散的粉剂组合物、用于患者吸入的吸入装置和用于储存所述组合物的储存装置，所述储存装置包括初级胶囊和二级储存容器，且还包括贴附于所述储存装置且提供患者使用说明书的标签，进一步的前提是所述初级胶囊适于配合所述吸入装置。
145.根据权利要求144所述的药盒，其中所述组合物为胶囊的形式，各胶囊含有在约5mg和25mg之间的所述组合物。
146.根据权利要求144或权利要求145的任一项所述的药盒，其中各胶囊含有在约5mg和约20mg之间的所述组合物。
147.根据权利要求143-145的任一项所述的药盒，其中各胶囊含有在约10mg和约20mg之间的所述组合物。
148.一种制备根据权利要求141-143的任一项所述的组合物的方法，包括将治疗活性材料的水溶液经历选自由冷冻干燥、喷雾干燥和冷冻喷雾干燥组成的组的过程。
150.根据权利要求149所述的方法，还包括研磨。
151.根据权利要求149或权利要求150的任一项所述的方法，其中所述过程是喷雾干燥。
152.根据权利要求141-143的任一项所述的组合物，其中所述治疗活性材料包括活性物质，其中所述活性物质的额定剂量是在约0.3mg和30mg之间。
153.根据权利要求141-143或152的任一项所述的组合物，其中所述额定剂量是在约0.3mg和5mg之间。
154.根据权利要求141-143、152或153的任一项所述的组合物，其中所述额定剂量是在约0.5mg和3mg之间。
155.根据权利要求141-143或152-154的任一项所述的组合物，其中所述IL-4突变蛋白包括具有修饰的野生型hIL-4的氨基酸序列，其中第一修饰是用其它天然氨基酸对存在于野生型hIL-4蛋白中121、124或125位上的一个或多个氨基酸的替代，且还任选地包括N-端甲硫氨酸。
156.根据权利要求155所述的组合物，其中所述IL-4突变蛋白还包括选自由以下组成的组的第二修饰
(i)其中的C端的修饰；
(ii)其中的潜在的糖基化位点的删除；
(iii)蛋白与非蛋白聚合物的偶联；
(iv)选自由在13、16、81和89位及它们的任意组合的替代组成的组中的至少一个氨基酸替代。
157.根据权利要求155或权利要求156的任一项所述的组合物，其中所述第一修饰包括根据野生型hIL-4编号的替代R121D和Y124D。
158.根据权利要求155-157的任一项所述的组合物，其中所述第一修饰包括根据野生型hIL-4编号的替代R121D和Y124D以及N-端甲硫氨酸。
159.一种适合被需要其的患者吸入的可分散的粉剂组合物，所述组合物含有包括突变的人白细胞介素-4(mIL-4)蛋白的治疗剂，所述蛋白由具有两种修饰的野生型hIL-4的氨基酸序列组成，其中第一修饰选自由存在于野生型hIL-4蛋白的121、124或125位的一个或多个氨基酸被其它天然氨基酸的替代组成的组，且第二修饰是选自由以下组成的组的至少一个修饰
i)其中的C端的修饰；
ii)其中的潜在的糖基化位点的删除；和/或
iii)蛋白与非蛋白聚合物的偶联；
iv)选自由在13、16、81和89位及它们的任意组合的替代组成的组中的至少一个氨基酸替代，使得mIL-4蛋白是野生型hIL-4的拮抗剂且还任选地包含N-端甲硫氨酸，
其中，当所述组合物被患者吸入时，具有不超过约5μm的直径值的颗粒的沉积百分率是在约25质量％和约60质量％之间。
160.一种治疗疾病的方法，其包括将治疗有效量的根据权利要求1-45、53-104、112-125、133-143和152-159的任一项所述的组合物施用于需要这种治疗的患者，从而治疗所述疾病。
161.根据权利要求160所述的方法，其中所述疾病是哮喘。
162.根据权利要求160或权利要求161的任一项所述的方法，其中所述施用是吸入。
163.一种治疗疾病的方法，其包括将在根据权利要求46-49、105-108、126-129和144-147的任一项所述的药盒中所含有的治疗有效量的组合物施用于需要这种治疗的患者，从而治疗所述疾病。
164.一种吸入器装置，其包括吸入器主体，所述吸入器主体界定了用于在其中容纳含有根据权利要求1-45、53-104、112-125、133-143和152-159的任一项所述的可分散的粉剂组合物的胶囊的凹槽，以及与所述胶囊连通的喷嘴，其中所述吸入器装置还包括穿孔装置，所述穿孔装置与吸入器主体结合且适合于将所述胶囊穿孔以允许外部空气流与可分散的粉剂组合物混合，用于通过所述喷嘴吸入，其中当被患者吸入时，所述组合物的喷射剂量为约70质量％或更高。
165.根据权利要求164所述的吸入器装置，其中所述穿孔装置包括穿孔针，所述穿孔针用于横向滑动对抗弹性元件的偏置并且在与所述吸入器主体固定的对接元件和相应的操作按钮元件之间操作，每一个穿孔针具有包括有斜面的尖头的外形，用于促进胶囊包衣的穿孔。
166.根据权利要求164所述的吸入器装置，其中所述喷嘴相对于所述吸入器主体可移动，以提供至少两种操作状态，该两种操作状态包括开放状态和关闭使用状态，在开放状态中，用于胶囊的凹槽可容易达到在其中接合新的胶囊或者由此退出用过的胶囊，在关闭使用状态中，所述吸入器喷嘴被弹簧锁锁定。
167.根据权利要求166所述的吸入器装置，其中所述吸入器喷嘴在其关闭位置被弹簧锁装置锁定，所述弹簧锁装置包括喷嘴的凸缘的钩部分，具有在吸入器主体中形成的闭锁座位内部形成的相应的脊。
168.根据权利要求167所述的吸入器装置，其中所述吸入器喷嘴的凸缘包括可接合在吸入器主体中形成的孔内的插脚。
169.根据权利要求168所述的吸入器装置，其中所述孔界定纵向狭槽，所述纵向狭槽适于允许所述插脚的横向齿通过所述狭槽，且所述孔包括底部环形凹槽，所述底部环形凹槽适于允许所述齿滑入，从而允许所述插脚接合到所述孔中。
170.根据权利要求169所述的吸入器装置，其中销在孔中可旋转，且所述喷嘴相对于所述吸入器主体可旋转。
171.根据权利要求164所述的吸入器装置，其中所述吸入器主体的用于胶囊的凹槽通过在所述凸缘的吸入器喷嘴中提供的穿孔板或栅格与外部连通，且适于将胶囊凹槽与喷嘴的导管分开，所述胶囊凹槽具有通过一个或多个进气孔与外部连通的底部。
172.一种干粉药物组合物，其包括有效量的mIL-4、稳定剂和缓冲剂。
173.根据权利要求172所述的药物组合物，其包括在约5％和约50％之间的mIL-4、在约10％和约85％之间的稳定剂和在约10％和约85％之间的缓冲剂。
174.根据权利要求172或权利要求173的任一项所述的药物组合物，其中所述缓冲剂与稳定剂的比率是在约1∶8.5和约8.5∶1之间。
175.根据权利要求172或权利要求173的任一项所述的药物组合物，其中所述稳定剂还包括镁离子源。
176.根据权利要求175所述的药物组合物，其中所述镁离子源选自由硫酸镁、氯化镁和醋酸镁组成的组。
177.根据权利要求172-176的任一项所述的药物组合物，其中所述mIL-4由具有两种修饰的野生型hIL-4的氨基酸序列组成，其中第一修饰选自由存在于野生型hIL-4蛋白的121、124或125位的一个或多个氨基酸被其它天然氨基酸的替代组成的组，且第二修饰是选自由以下组成的组的至少一个修饰
i)其中的C端的修饰；
ii)其中的潜在的糖基化位点的删除；和/或
iii)蛋白与非蛋白聚合物的偶联；
iv)选自由在13、16、81和89位及它们的任意组合的替代组成的组中的至少一个氨基酸替代，使得mIL-4蛋白是野生型hIL-4的拮抗剂且还任选地包含N-端甲硫氨酸。
178.根据权利要求172-177的任一项所述的药物组合物，其中所述mIL-4是根据图1B中序列的mIL-4。
179.一种药盒，其包括含有约5mg和约25mg之间的根据权利要求172-177的任一项所述的药物组合物的胶囊或泡罩。
全文摘要
公开了适合于吸入的可分散的粉剂组合物，该组合物包括人白细胞介素突变蛋白(mhIL-4)。
文档编号A61K38/00GK101784280SQ200880103277
公开日2010年7月21日 申请日期2008年7月11日 优先权日2007年7月11日
发明者C·B·莱勒, J·S·泰珀, W·A·弗勒兰德 申请人:艾罗文斯公司