专利名称：白藜芦醇白蛋白冻干粉的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种白藜芦醇产品的制备方法。
背景技术：
白藜芦醇是一种天然的抗氧化剂，可降低血液粘稠度，抑制血小板凝结和血管舒张，保持血液畅通，可预防癌症的发生及发展，具有抗动脉粥样硬化和冠心病，缺血性心脏病，高血脂的防治作用。抑制肿瘤的作用还具有雌激素样作用，可用于治疗乳腺癌等疾病。白藜戸醇通常难溶于水或微溶于水，生物利用度低，且不够稳定。目前，将白藜芦醇加工成脂质体、纳米粒、微乳剂等以提高白藜戸醇的生物利用度；但是，白藜戸醇脂质体和纳米粒为液体制剂的形式，保持期短，运输不方便。白藜芦醇微乳剂含有油相，对人体有较大的刺激性。并且现有制备白藜芦醇纳米粒方法存在粒径大(一般在400 500nm)、包封率低(33. 97%)、溶解度低(在纯水中溶解度为0.2021mg/mL)，从而降低生物利用度；及稳定性差(24小时内稳定)不利于长期保存的问题。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有制备白藜芦醇纳米粒方法存在粒径大、包封率低、溶解度低，从而降低生物利用度，稳定性差不利于长期保存的问题；而提供一种白藜戸醇白蛋白冻干粉的制备方法。
本发明中白藜芦醇白蛋白冻干粉的制备方法是按下述步骤进行的 一、按每升双蒸水溶解2.5 3. 5g牛血清白蛋白(BSA)的比例将牛血清白蛋白溶于双蒸水中得到牛血清白蛋白溶液;二、按每升无水乙醇溶解2.0 2. 5g白藜芦醇(resveratrol，Res)的比例将白藜芦醇溶于无水乙醇中得到白藜戸醇溶液；三、采用蠕动泵以15 25mL/min的速率匀速将步骤二制得的白藜芦醇溶液滴加到步骤一制得牛血清白蛋白溶液中，然后加入质量浓度为O. 15% 0. 30%戊二醛溶液，搅拌下交联10 12小时，其中，白藜芦醇与牛血清白蛋白质量比为11 15: 20，戊二醛溶液与步骤一所用的双蒸水的体积比为l: 160;四、在lX10、/min条件下离心10min，然后加入与沉淀体积相等的水分散沉淀；五、重复步骤四操作3 5次后得到分散液；六、按2mL分散液加入0. 4 0. 5mL甘露醇的比例将分散液加入甘露醇中，冻干40 48h后即得到白藜芦醇白蛋白冻干粉。
本发明方法制备的白藜戸醇白蛋白冻干粉的平均粒径为200 300nm，包封率70% 85%，载药量为33% 35%;相对于白藜戸醇，本发明方法制备白藜戸醇白蛋白冻干粉的溶解度提高 了66.7倍(白藜戸醇常温下纯水中的溶解度为0.0169mg/mL)以上，溶解的改善，更有利于 Res在生物体内的吸收和代谢，提高了生物利用度，并且实现了静脉注射，可取冻干粉针用 5mL注射用生理盐水或是葡萄糖注射用水复溶进行静脉注射或是再稀释至250mL进行静脉滴注 ，从而载药量高，溶媒的毒副作用小从而减小了对人体的伤害，缓释长效。本发明方法制备 的白藜戸醇白蛋白冻干粉保存时间长，在4。C和避光条件下保存期至少为12个月，并且减少 产品体积，利于运输。
图l是具体实施方式
五制备白藜戸醇白蛋白冻干粉的粒径分布图，图2是对照品含量测试 的标准曲线图。
具体实施例方式
具体实施方式
一本实施方式中白藜芦醇白蛋白冻干粉的制备方法是按下述步骤进行的 : 一、按每升双蒸水溶解2.5 3.5g牛血清白蛋白(BSA)的比例将牛血清白蛋白溶于双蒸水中 得到牛血清白蛋白溶液；二、按每升无水乙醇溶解2.0 2. 5g白藜戸醇(resveratrol，Res)的 比例将白藜戸醇溶于无水乙醇中得到白藜戸醇溶液；三、采用蠕动泵以15 25mL/min的速率 匀速将步骤二制得的白藜芦醇溶液滴加到步骤一制得牛血清白蛋白溶液中，然后加入质量浓 度为O. 15% 0. 30%戊二醛溶液，搅拌下交联10 12小时，其中，白藜戸醇与牛血清白蛋白质
量比为11 15: 20，戊二醛溶液与步骤一所用的双蒸水的体积比为l: 160;四、在l X
10、/min条件下离心10min，然后加入与沉淀体积相等的水分散沉淀；五、重复步骤四操作 3 5次后得到分散液；六、按2mL分散液加入0. 4 0. 5mL甘露醇的比例将分散液加入甘露醇 中，冻干40 48h后即得到白藜戸醇白蛋白冻干粉。
本实施方式方法方法制备的白藜芦醇白蛋白冻干粉的平均粒径为200 300nm，包封率 70% 85%，载药量为33% 35%;相对于白藜戸醇，本发明方法制备白藜戸醇白蛋白冻干粉的 溶解度提高66. 7倍以上。
具体实施方式
二本实施方式与具体实施方式
一不同的是步骤一中每升双蒸水溶解 3.0g牛血清白蛋白。其它与具体实施方式
一相同。
具体实施方式
三本实施方式与具体实施方式
一或二不同的是步骤二中每升无水乙醇 溶解2.2g白藜芦醇。其它与具体实施方式
一或二相同。
具体实施方式
四本实施方式与具体实施方式
一至三不同的是步骤三中戊二醛溶液质 量浓度为0.25%。其它与具体实施方式
一至三相同。
具体实施方式
五本实施方式中白藜芦醇白蛋白冻干粉的制备方法是按下述步骤进行的
: 一、将1000mg牛血清白蛋白溶于40mL双蒸水中得到牛血清白蛋白溶液；二、将550mg白藜 戸醇溶于40mL无水乙醇中得到白藜戸醇溶液；三、采用蠕动泵以20mL/min的速率匀速将步骤 二制得的白藜芦醇溶液滴加到步骤一制得牛血清白蛋白溶液中，然后加入2500 y L质量浓度 为0.25%戊二醛溶液，搅拌下交联12小时，戊二醛溶液与步骤一所用的双蒸水的体积比为l: 160;四、在lX10、/min条件下离心10min，然后加入与沉淀体积相等的水分散沉淀；五、 重复步骤四操作3次后得到分散液；六、按每瓶2mL分散液加入0. 4mL甘露醇的比例进行装瓶 ，冻干40 48h后即得到白藜戸醇白蛋白冻干粉。
采用下述试验测试本实施方式制备的白藜戸醇白蛋白冻干粉质控指标(粒径、包封率、 载药量)及溶解度
1、 采用激光粒度仪测试平均粒径，结果如图l，由图1可知，本实施方式白藜芦醇白蛋 白冻干粉的平均粒径为279. 2nm。
2、 通过下述方法计算包封率及载药量，具体操作如下
将5.0mg白藜芦醇对照样品置于25mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，分别取上述溶液 用流动相(体积比为25: 85的乙腈和水混合液)稀释后摇匀配制成系列浓度的对照品溶液， 经0.45ym微孔滤膜过滤，取10yL进样，进行HPLC (高效液相色谱)分析，以峰面积为纵坐标 (y)，浓度为横坐标(x)绘制标准曲线，如图2所示。 HPLC测试条件
色谱柱迪马C18柱；流动相(乙睛水=25: 85V/V)，检测波长305皿；流动相流速
:lml/min;柱温25°C;进样量10 u m，保留时间约为15. 6min。
取经步骤三处理后的液体500yL，在lX10、/min条件下离心10min，去上清液进行 HPLC (高效液相色谱)分析，按下述公式计算包封率及载药量。
包封率=(投入量-上清液量)/投入量X100呢
载药量=(投入量-上清液量)/冻干粉总质量X100呢
上清液中Res含量二 0. 974mg
每瓶Res含量4. 65mg
冻干粉中RES含量二4. 526mg
包封率=402. 05/550X100% = 73. 1%
载药量=402. 05/12. 12X100% = 33. 17%
3、 溶解度的测定取白藜芦醇白蛋白冻干粉制成过饱和溶液，离心后去上清液，稀释至2mg/mL，在306nm 下测试其紫外吸收值，再根据对照品标准曲线得出其饱和水溶液的浓度，折算出白藜芦醇白 蛋白冻干粉的溶解度，常温下纯水中的溶解度为1.127mg/mL，相对于白藜芦醇，本发明方法 制备白藜戸醇白蛋白冻干粉的溶解度提高了66. 7倍。
权利要求
1.白藜芦醇白蛋白冻干粉的制备方法，其特征在于白藜芦醇白蛋白冻干粉的制备方法是按下述步骤进行的一、按每升双蒸水溶解2.5～3.5g牛血清白蛋白的比例将牛血清白蛋白溶于双蒸水中得到牛血清白蛋白溶液；二、按每升无水乙醇溶解2.0～2.5g白藜芦醇的比例将白藜芦醇溶于无水乙醇中得到白藜芦醇溶液；三、采用蠕动泵以15～25mL/min的速率匀速将步骤二制得的白藜芦醇溶液滴加到步骤一制得牛血清白蛋白溶液中，然后加入质量浓度为0.15％～0.30％戊二醛溶液，搅拌下交联10～12小时，其中，白藜芦醇与牛血清白蛋白质量比为11～15∶20，戊二醛溶液与步骤一所用的双蒸水的体积比为1∶160；四、在1×104r/min条件下离心10min，然后加入与沉淀体积相等的水分散沉淀；五、重复步骤四操作3～5次后得到分散液；六、按2mL分散液加入0.4～0.5mL甘露醇的比例将分散液加入甘露醇中，冻干40～48h后即得到白藜芦醇白蛋白冻干粉。
2. 根据权利要求l所述的白藜芦醇白蛋白冻干粉的制备方法，其特征在于步骤一中每升双蒸水溶解3. Og牛血清白蛋白。
3. 根据权利要求1或2所述的白藜芦醇白蛋白冻干粉的制备方法，其特征在于步骤二中每升无水乙醇溶解2. 2g白藜芦醇。
4. 根据权利要求3所述的白藜芦醇白蛋白冻干粉的制备方法，其特征在于步骤三中戊二醛溶液质量浓度为O. 25%。
全文摘要
白藜芦醇白蛋白冻干粉的制备方法，它涉及一种白藜芦醇产品的制备方法。本发明解决了现有制备白藜芦醇纳米粒的方法存在的粒径大、包封率低、溶解度低，从而降低生物利用度；稳定性差不利于长期保存的问题。本发明方法如下一、制备牛血清白蛋白溶液；二、制备白藜芦醇溶液；三、用蠕动泵将白藜芦醇溶液滴加到步牛血清白蛋白溶液中，再加入戊二醛溶液，交联；四、离心，分散沉淀；五、重复步骤四操作3～5次后得到分散液；六、将分散液加入甘露醇中，冻干后即得到白藜芦醇白蛋白冻干粉。本发明制备冻干粉的平均粒径为200～300nm，包封率为70％～85％，其溶解度高，并且保存时间长，产品体积小，利于运输。
文档编号A61K9/19GK101658499SQ20091030780
公开日2010年3月3日 申请日期2009年9月27日 优先权日2009年9月27日
发明者倪延群, 吴效科, 姚晶萍, 王莹威 申请人:姚晶萍