专利名称：一种水溶性银杏提取物的制备方法
技术领域：
本发明涉及银杏提取物的制备方法。
背景技术：
银杏叶又称白果叶，是银杏科植物银杏(Ginkgo biloba L.)的叶子，其味苦涩、性 平，因其含黄酮苷和萜内酯成分而入药，有益心敛肺、化湿止泻的功效。近年来，人们不断研 究银杏叶的药用价值和提取方法，其中以银杏叶提取物(简称GBE)应用比较成功，使用广 泛。 银杏提取物是以银杏为原料，采用适当溶剂提取有效成分的一类产品。国际上公 认的银杏制剂的含量标准为黄酮类成分>24%，内酯类>6% (银杏提取物研究进展.中 国酿造，2009，1 :14-18)，可口服和注射使用，广泛应用于心脑血管疾病等多种疾病。供注射 使用的GBE对水溶性、蛋白质、鞣质都有较高要求，生物活性及使用安全性可更有保障，是 目前银杏提取物发展方向之一。 目前提取银杏叶GBE的方法甚多，许多工艺方法都申请了发明专利。通过检索， 国内已有超70件涉及银杏叶提取物的专利申请，例如CN02134490. 6号"一种银杏叶提取 物的制备方法"、CN02129905. 6号" 一种高活性银杏叶提取物制剂和用途"、CN03114825. 5 号"银杏叶提取物的制备方法"、CN03114826.3号"低酸银杏叶提取物的制备方法"、 CN200410069037. 6号"一种银杏叶提取物及其提取方法"等。这些申请都属于从银杏叶中 提取一般GBE的方法。 提取水溶性银杏叶提取物的有3篇专利申请号为02113533. 9的专利介绍了一 种"水溶性银杏叶提取物的生产工艺"，该工艺在粗品制备水溶性提取物时候为采用常规大 孔树脂吸附树脂，由于树脂对黄酮和内酯的吸附性，内酯与黄酮苷水溶解性等的差异都很 大，采取该工艺很难同时保证内酯的含量及成品的水溶性，有效成分损失比较大。
申请号为CN200510003243. 1报道了 "一种水溶性银杏叶提取物的生产方法"，该 工艺在粗品制备水溶性提取物时候为采用搅拌提取，静置，过滤，加明胶水溶液进行沉淀， 再静置，过滤，真空浓縮至干，再加无水乙醇溶解，过滤，真空浓縮并干燥，粉碎的方式制备 水溶性GBE。由于内酯对水及甲醇、乙醇的稀溶液不溶或难溶，加上明胶的沉淀作用，有效成 分，尤其是内酯损失比较大。也由于粗提取物的叶来源、品质及加工工艺的不同，造成成分 差异很大，无法采用此工艺控制得到含量规格及相对可控的成品。 申请号为200810060422. 2"—种水溶性银杏叶提取物的生产工艺"的专利，以银杏
叶子为原料，常规工艺得提取物后以乙醇使其充分溶解后回收乙醇至稠膏，再加适量乙醇，
提取2 4次后过滤，滤液浓縮至稠膏；将稠膏以纯化水提取2 4次，提取液冷却过滤，浓
縮，干燥即得水溶性银杏叶提取物。该工艺中因需经多次加热提取和浓縮过程，黄酮容易氧
化而损失，多次的过滤过程也容易导致总内酯成分的损失，鞣质含量较高。 在国内也有先用乙酸乙酯提取银杏总内酯，然后用碱性水溶解不溶部分，溶液过
酰胺型树脂，制备精致黄酮部分，然后混配为不要求水溶性的银杏提取物文献报道。如专利
3申请CN200710191922. 5 "—种银杏叶提取物及其制备方法"，也以市售银杏提取物为原料， 经过石油醚脱酸、乙酸乙酯提内酯。乙酸乙酯部位再经过丙酮溶解，过氧化铝等精制处理得 精致内酯。而不溶于乙酸乙酯的固体，用碳酸钠溶液溶解，过AB-8柱，然后过聚酰胺柱，得 精制的黄酮。二部分再混配成银杏提取物。该方案由于采用碳酸钠水溶液溶解不溶于乙酸 乙酯物，混配后得到的是在水(PH = 7)水溶性相对较差的用于口服的银杏提取物。该工艺 目标为可测定含量高的提取物，而不要求水溶性，其工艺也更复杂，此外，该方案采用的脱 酸方法是提取物直接用石油醚萃取，黄酮类成分容易受热而氧化，使有效成分转移率下降。 因此，目前工艺均不能完全满足银杏提取物深加工升级换代产品对原料的要求。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术存在的不足，提供一种可溶性黄酮及总内酯的转移
率高，原料利用率高，生产成本低的可供注射用的水溶性银杏提取物的制备方法。
—种水溶性银杏提取物的制备方法，包括如下步骤 (1)以银杏提取物为原料，以乙酸乙酯为溶剂提取，滤过，滤液经浓縮、干燥后得固 体，固体用C2_C8烷烃脱银杏酚酸，得脱酚酸银杏总内酯； (2)上述乙酸乙酯提取的不溶物加水搅拌提取，过滤或离心，得到上柱清液；
(3)清液上酰胺型树脂柱，先用低浓度醇溶液洗脱除杂，再用中等浓度醇溶液洗 脱，收集中等浓度醇溶液的洗脱液，浓縮后得到浓縮水溶性黄酮部分； (4)脱酚酸银杏总内酯用醇溶液溶解，与浓縮后的水溶性黄酮部分混合，干燥得水 溶性银杏提取物。 在上述水溶性银杏提取物的制备方法中，所述银杏提取物为市售银杏提取物，其 黄酮含量为22. 0-26. 0 % ，内酯含量为4. 0-7. 0 % (黄酮、内酯及总酚酸含量测定方法见 2005版〈中国药典 > 银杏提取物相关项目)。 在上述水溶性银杏提取物的制备方法中，步骤(1)中以乙酸乙酯为溶剂提取的时 间优选为0. 5 5小时。 在上述水溶性银杏提取物的制备方法中，步骤(1)中所述C厂C8烷烃优选为石油醚 或汽油。 在上述水溶性银杏提取物的制备方法中，步骤(1)中所述固体与C厂C8烷烃的重量
体积比优选为i : 4 i : 20。 在上述水溶性银杏提取物的制备方法中，步骤(2)中乙酸乙酯提取的不溶物加 4 20倍体积的水搅拌3(Tl20min后出料。 在上述水溶性银杏提取物的制备方法中，步骤(3)中所述酰胺型树脂优选为 ADS-F8。 在上述水溶性银杏提取物的制备方法中，步骤(3)中所述低浓度醇溶液为醇占总 体积比0 30%的醇溶液，所述中浓度醇溶液为50 70%的醇溶液。
在上述水溶性银杏提取物的制备方法中，步骤(4)中所述脱酚酸银杏总内酯先用 20 100%醇溶液溶解，再与中等浓度醇洗脱液浓縮后的部分混合。 在上述水溶性银杏提取物的制备方法中，步骤(3)或(4)中所述醇溶液优选为甲 醇溶液或乙醇溶液。
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在上述水溶性银杏提取物的制备方法中，步骤(4)中所述干燥优选为喷雾干燥、 真空干燥或冷冻干燥。 与现有技术相比，本发明具有如下有益效果 1.利用本发明的制备方法得到的水溶性银杏提取物，其黄酮含量为24_45%及内 酯含量为6_12%，水溶度> 5%，银杏酚酸《lppm，不含有蛋白质和鞣质，可供注射用。
2.利用本发明的制备方法得到的可溶性黄酮及总内酯的转移率高，原料利用率 高，可降低生产成本。 下面通过具体实施例进一步阐述本发明的技术方案。
具体实施例方式
以下实施例所用的市售银杏提取物的黄酮含量为22.0-26.0%，内酯含量为 4.0-7.0% (黄酮、内酯及总酚酸含量测定方法见〈中国药典〉银杏提取物相关项目)。
下述乙醇的百分比为体积百分比。
实施例1 银杏提取物30kg，加入150L乙酸乙酯，搅拌速率60rm/min，提取60min，滤过，回收 乙酸乙酯至干后，用150L石油醚回流，弃去石油醚，得脱银杏酚酸总内酯。不溶于乙酸乙酯 固体加240L水，在搅拌速率60rm/min下，提取60min后出料，药液高速离心后，过ADS-F8 树脂，用水洗脱除杂，然后用60%乙醇洗脱，收集60%乙醇部位6(TC减压浓縮，与银杏总内 酯乙醇溶解液混均后，喷雾干燥得到水溶性银杏提取物。按照药典方法测定，黄酮含量为 27. 2%，内酯含量为6. 5，水溶解度^ 5%，银杏酸含量< l卯m，不含有蛋白和鞣质。
实施例2 银杏提取物30Kg，加入300L乙酸乙酯，在搅拌速率100rm/min下，提取30min，滤 过，回收乙酸乙酯至干后，用180L正己烷回流，弃去正己烷，得脱银杏酸总内酯。不溶于乙 酸乙酯的固体加水280L在搅拌速率100rm/min下，提取60min后出料，高速离心，药液过聚 酰胺树脂，用5%乙醇洗脱除杂，然后用60%乙醇洗脱，收集60%乙醇部位6(TC减压浓縮， 与脱酸总内酯的乙醇溶解液混均后，6(TC下减压干燥到水溶性银杏提取物。按照药典方法 测定，黄酮含量为29. 2%，内酯含量为7. 8%，水溶解度> 5%，银杏酸含量< l卯m，不含有 蛋白和鞣质。
实施例3 银杏提取物粉末30g，边搅拌边加入有200ml乙酸乙酯，在搅拌速率120rm/min下， 提取60min，回收乙酸乙酯至干后，用210mL汽油回流，弃去汽油，得脱酸总内酯。不溶于乙 酸乙酯的固体加去离子240mL水在搅拌速率120rm/min下，提取60min后出料，过滤，药液 过ADS-F8树脂，用10%乙醇除杂，然后用50%乙醇洗脱，收集50X乙醇部位6(TC减压浓 縮，与脱酸总内酯的乙醇溶解液混均后，喷雾干燥得到水溶性银杏提取物。按照药典方法测 定，其黄酮含量为28. 2%，内酯含量为6. 4%，水溶解度> 5%，银杏酸含量< l卯m，不含有 蛋白和鞣质。
实施例4 同实施例l所示，不同的是药液过ADS-F8树脂，用15%乙醇洗脱除杂，后用70% 乙醇洗脱，收集70X乙醇部位6(TC减压浓縮，与脱酸总内酯的乙醇溶解液混均后，冷冻干燥得到水溶性银杏提取物。按照药典方法测定，其黄酮含量为32. 2%，内酯含量为8. 4%， 水溶解度^ 5%，银杏酸含量< lPPm，不含有蛋白和鞣质。
实施例5 同实施例2所示，不同的是药液过聚酰胺树脂，采用20%乙醇洗脱除杂，再用 60%乙醇洗脱，收集60%乙醇部位6(TC减压浓縮，与脱酸总内酯的乙醇溶解液混均后， 6(TC真空干燥得到水溶性银杏提取物。按照药典方法测定，其黄酮含量为39. 7%，内酯含量 为10.4，水溶解度^ 5%，银杏酸含量< l卯m，不含有蛋白和鞣质。
实施例6 同实施例3所示，不同的是药液过ADS-F8树脂，用30%乙醇洗脱除杂，然后用 60%乙醇洗脱，收集60%乙醇部位6(TC减压浓縮，与脱酸总内酯的乙醇溶解液混均后，冷 冻干燥得到水溶性银杏提取物。按照药典方法测定，其黄酮含量为44.2%，内酯含量为 11.9%，水溶解度> 5%，银杏酸含量< l卯m，不含有蛋白和鞣质。
权利要求
一种水溶性银杏提取物的制备方法，其特征在于包括如下步骤(1)以银杏提取物为原料，以乙酸乙酯为溶剂提取，滤过，滤液经浓缩、干燥后得固体，固体用C2-C8烷烃脱银杏酚酸，得脱酚酸的银杏总内酯；(2)上述乙酸乙酯提取的不溶物加水搅拌提取，过滤或离心，得上柱清液；(3)清液上酰胺型树脂柱，先用低浓度醇溶液洗脱除杂，再用中等浓度醇溶液洗脱，收集中等浓度醇溶液的洗脱液，浓缩后得到浓缩水溶性黄酮部分；(4)脱酸银杏总内酯用醇溶液溶解，与浓缩水溶性黄酮部分混合均匀，干燥得水溶性银杏提取物。
2. 根据权利要求l所述的水溶性银杏提取物的制备方法，其特征在于步骤(1)中，以乙 酸乙酯为溶剂提取的时间为0. 5 5小时。
3. 根据权利要求l所述的水溶性银杏提取物的制备方法，其特征在于步骤(1)中，所述 C2_C8烷烃为石油醚或汽油。
4. 根据权利要求l所述的水溶性银杏提取物的制备方法，其特征在于步骤(l)中，所述 固体与C厂C8烷烃的重量体积比为1 : 4 1 : 20。
5. 根据权利要求l所述的水溶性银杏提取物的制备方法，其特征在于步骤(2)中，乙酸 乙酯提取的不溶物加4 20倍体积的水搅拌3(Tl20min后出料。
6. 根据权利要求l所述的水溶性银杏提取物的制备方法，其特征在于步骤(3)中，所述 酰胺型树脂为ADS-F8或聚酰胺。
7. 根据权利要求l所述的水溶性银杏提取物的制备方法，其特征在于步骤(3)中，所 述低浓度醇溶液为醇占总体积比为0 30%的溶液，所述中等浓度醇溶液为50 70%的醇溶 液。
8. 根据权利要求1所述的水溶性银杏提取物的制备方法，其特征在于步骤(4)中，所述 脱酸银杏总内酯先用20 100%醇溶液溶解，再与中等浓度醇洗脱液经浓縮后的部分混合。
9. 根据权利要求1或8所述的水溶性银杏提取物的制备方法，其特征在于步骤(3)或 (4)中，所述醇溶液为甲醇溶液或乙醇溶液。
10. 根据权利要求l所述的水溶性银杏提取物的制备方法，其特征在于步骤(4)所述干 燥为喷雾干燥、真空干燥或冷冻干燥。
全文摘要
本发明公开了一种水溶性银杏提取物的制备方法，包括(1)以银杏提取物为原料，以乙酸乙酯为溶剂提取，过滤，滤液浓缩干燥后得固体，固体用C2-C8烷烃脱银杏酚酸，得脱酚酸银杏总内酯；(2)不溶于乙酸乙酯物加水提取，过滤或离心，得到上柱清液；(3)清液上酰胺型树脂柱，先用低浓度醇溶液洗脱除杂，再用中等浓度醇溶液洗脱，收集中等浓度醇溶液的洗脱液，浓缩后得到浓缩水溶性黄酮部分；(4)脱酚酸银杏总内酯用醇溶液溶解，与浓缩水溶性黄酮部分混合均匀，干燥得水溶性银杏提取物，其黄酮含量为24~45％及内酯含量为6~12％，水溶度≥5％，银杏酚酸≤1ppm，不含有蛋白质和鞣质，可供注射用。得到的可溶性黄酮及总内酯的转移率高，原料利用率高，可降低生产成本。
文档编号A61K36/16GK101780122SQ20101011709
公开日2010年7月21日 申请日期2010年2月23日 优先权日2010年2月23日
发明者全一思, 李金华, 汪涛, 蔡鸿飞, 钟鸣, 黄展平 申请人:广州汉方现代中药研究开发有限公司