专利名称：联苯双酯纳米脂质载体及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种联苯双酯纳米脂质载体及其制备方法。
技术背景 联苯双酯(Bifendate，简称DDB)是人工合成五味子丙素的中间体，是我国首创的 具有新型结构的高效、低毒的保肝药。其化学名为4，4’_ 二甲氧基-5，6，5’，6’_ 二次甲二 氧-2，2’_ 二甲酸甲酯联苯，分子式为=C2tlH18Oltl，分子量为418. 36。本品为一种白色结晶性 粉末，无臭无味，几乎不溶于水，微溶于甲醇及乙醇，易溶于氯仿、二甲基甲酰胺季吡啶，呈 一定的脂溶性。临床研究表明联苯双酯的主要药理作用有⑴具有显著的保肝降酶作用能明 显降低血清谷丙转氨酶(glutamic pyrumic transaminase,GPT)和谷草转氨酶(glutamic Oxalictransaminase, GOT) ； (2)增强肝脏的解毒功能在体内可使P_450等肝微粒体的含 量显著增加，进而增强肝脏的解毒能力；(3)保护肝脏免受毒物损伤减轻由四氯化碳、抗 癌药、抗结核药等化学物质引起的肝损伤；(4)抗细胞突变、坏死的作用。该药毒性甚低，无 致畸胎、致突变作用，是一种比较安全的药物，且价格低廉，易为患者接受，因而具有良好的 研究及应用前景。目前该药临床用于慢性迁延性肝炎伴随的谷丙转氨酶活性升高者，也可 用于化学毒物、药物引起的谷丙转氨酶活性升高。联苯双酯几乎不溶于水的性质使其制剂体外溶出差，虽在胃肠道内不被破坏，但 口服后严重的肝脏首过效应，导致该药口服生物利用度低，一般只有25% 30%。联苯双 酯进入体内后在肝脏迅速被代谢转化，血浆半衰期只有5小时左右，24小时后70%自粪便 排出。虽然仅吸收25%左右，却表现出很强的降GPT作用，说明其生物活性很高，是一有研 究价值药物。目前使用或研究的制剂主要有联苯双酯片、联苯双酯胶囊、联苯双酯滴丸、复 方联苯双酯片、复方联苯双酯冲剂、联苯双酯口服混悬液等，CN 200410070669. 4(公开号 CN1586472)公开了一种联苯双酯口腔崩解片，CN 03145971. 4(公开号CN1476831)公开了 一种联苯双酯缓释制剂，由于联苯双酯不溶于水，因此这些制剂普遍存在生物利用度低的 缺点。CN 03146030. 5公开了一种联苯双酯乳剂，CN 100998561A公开了一种联苯双酯静脉 注射乳剂，液体制剂储存和运输不方便，也容易导致药物不稳定。CN 200610038662. 3(公 开号CN1850071)公开了一种联苯双酯固体分散体，CN 200810234507. 8 (公开号 CN101401788)公开了一种联苯双酯自乳化制剂，以提高其生物利用度和稳定性。联苯双酯作为一种长期使用的药物，临床需要一种给药次数少、生物利用度高、稳 定性好、制备简单的有利于患者使用的制剂。纳米粒(nanoparticles)是利用天然高分子或合成的化学物质为载体制成的载 药微粒，直径10 lOOOnm。纳米粒具有靶向性，能直接向靶器官、靶细胞或细胞内靶结构输 送药物，同时具有缓释、保护药物、提高疗效、降低毒副作用等优点。血管内注射纳米粒后， 纳米粒主要被网状内皮系统(RES)吞噬，RES为来自于骨髓吞噬功能很强的单核细胞的统 称。肝中有数目众多的网状内皮细胞，且位置固定，被称作Kupffer细胞，因此药物能在肝脏内聚集，然后逐步释放入血液循环，使肝脏药物浓度增加，对其他脏器不良反应减少，对 肝脏有被动靶向作用；当纳米粒足够小(100 150nm)且表面覆以特殊包被后，便可逃过 Kupffer细胞的吞噬，靠其连接的特异性抗体等物质定位于肝实质细胞发挥作用，从而具有 主动靶向作用。因此，纳米粒对于治疗各种肝脏疾病具有特殊意义。
纳米脂质载体(nanostructured lipid carriers，NLC)是由固体脂质纳米粒 (solid lipidnanoparticles, SLN)发展而来的一种新型胶体载体系统。固体脂质纳米粒 存在的问题在于，SLN是由单一的固态脂质或不同种类的固态脂质混合制成，其高度有序、 规则的脂质结晶不仅限制了载药能力，而且会引起被包裹药物的外排。而NLC是将常温下 的液态脂质加入到固态脂质中，从而造成晶体的混乱度增加，使载体具有较高的晶体缺陷， 因而可以容纳更多的药物分子。正是由于NLC是由固态脂质和与其空间不相容的液态脂质 混合组成，使其具有特殊的纳米结构，其优势在于(1)难溶性药物在液体脂质中的溶解度 较固体脂质大，引入液体脂质可以增加药物的包封率和载药量；(2)液态脂质的加入能够 延缓固态脂质由α晶形向晶形β的转化，可以延缓药物的泄漏；(3)适量液体脂质的引入 不会改变纳米粒固体内核的性质，因此NLC仍具备与SLN相似的缓控释特性。由此可见，NLC不仅具有SLN物理稳定性高、保护敏感药物不被降解、控制释放、良 好的生物相容性、易于大规模生产等优点，还改善了 SLN载药能力有限、在贮存过程中药物 容易泄露、包封率降低等问题。因此NLC的这种作用特点，不仅克服了传统SLN的不足之处， 而且扩大了其应用领域。综上所述，将联苯双酯制成纳米脂质载体，预期可以达到改变药物体内分布、延长 药物作用时间、提高生物利用度等目的。虽然将药物制成纳米脂质载体是常规的技术手段， 但要研制出一种具有疗效好、释药可控、生物相容性好、稳定等优点的配方及制备方法并不 是很容易的，需要付出创造性劳动，进行大量的试验和条件筛选。
发明内容
针对上述现有技术，本发明提供了一种联苯双酯的新剂型，即联苯双酯纳米脂质 载体，该制剂使联苯双酯具有更高的化学稳定性，不易降解；生物相容性好、稳定、释药可 控，并可通过控制纳米粒的粒径达到肝组织被动靶向、提高生物利用度、改善患者顺应性的 目的。并且可以克服固体脂质纳米粒放置过程中药物外排、包封率降低的现象，使制剂可稳 定贮存。本发明还提供了该联苯双酯纳米脂质载体的制备方法，该方法可采用常规的工艺 设备，适合工业大规模高效益生产。本发明是通过以下技术方案实现的一种联苯双酯纳米脂质载体，主要是由联苯双酯、固态脂质材料、液态脂质、水溶 性乳化剂、脂溶性乳化剂和注射用水组成的，以IOOml纳米脂质载体制剂计，其组成如下联苯双酯0.002 0.5g固态脂质材料0.05 2g液态脂质0 Ig水溶性乳化剂0.05 5g脂溶性乳化剂0.05 5g
附加剂0 5g注射用水余量。优选的，以IOOml纳米脂质载体制剂计，其组成如下
联苯双酯0. 002 0. 2g固态脂质材料0. 05 Ig液态脂质0. 01 0. 5g水溶性乳化剂0. 05 2g脂溶性乳化剂0. 05 2g附加剂0 2. 5g注射用水余量。所述固态脂质材料为甘油三酯类、部分甘油酯、脂肪酸类、蜡质类或固醇类中的任 一种或任意组合。所述甘油三酯类包括三棕榈酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、三油酸 甘油酯等；所述部分甘油酯包括单硬脂酸甘油酯、含有单、二、三酰甘油酯的合成甘油酯及 其混合物；所述脂肪酸类包括硬脂酸、棕榈酸；所述蜡质类包括鲸蜡醇十六酸酯、鲸蜡醇棕 榈酸酯；所述固醇类为胆固醇。所述液态脂质为天然植物油、链长在C8 Cltl之间的中等链长脂肪酸甘油酯、油 酸、亚油酸、维生素E或维生素酯类中的任一种或任意组合。优选链长在C8 Cltl之间的中 等链长脂肪酸甘油酯或维生素E。所述水溶性乳化剂为聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物类(如Poloxammer系列)、聚氧 乙烯脂肪酸酯类或聚氧乙烯脂肪醇醚类(如Brij系列)中的任一种或任意组合。所述脂溶性乳化剂为磷脂类、脂肪酸山梨坦类或聚山梨酯类中的任一种或任意组
I=I O所述磷脂类包括大豆磷脂、蛋黄磷脂、卵磷脂；所述脂肪酸山梨坦包括Span60和 Span80 ；所述聚山梨酯包括Tween60和Tween80。为更好地适于静脉用药，乳化剂优选大豆磷脂和泊洛沙姆188的组合。所述附加剂为渗透压调节剂、金属离子络合剂、抗氧剂或防腐剂中的任一种或任 意组合。所述附加剂可起到增加制剂稳定性、调节渗透压、抗氧化等作用。所述渗透压调节剂包括丙二醇、丙三醇、甘露醇等。所述金属离子络合剂包括EDTA、乙二铵四乙酸二钠盐等。所述抗氧剂包括维生素C、维生素E等。所述防腐剂包括苯扎溴铵、对羟基苯甲酸酯类、山梨酸等。联苯双酯纳米脂质载体的制备方法，包括以下步骤(1)将联苯双酯、固态脂质材料、液态脂质、脂溶性乳化剂溶于有机溶剂中，加热至 60 100°C使溶解，以构成有机相；(2)将水溶性乳化剂、附加剂溶于注射用水中，加热至60 100°C，以构成水相；(3)在60 100°C的温度下，在转速为400 1200r/min搅拌下将有机相注入水 相中，搅拌0. 5h 6h，使有机溶剂完全挥发，得到初乳；(4)将初乳倾入0 2°C的冰水中，在转速为400 1200r/min下搅拌0. 5h 4h，即制得联苯双酯纳米脂质载体。还包括以下步骤将制得的联苯双酯纳米脂质载体进一步加入冻干保护剂，以制 成冻干制剂。其中，对所制得的联苯双酯纳米脂质载体进行冻干处理的工艺可为将1 IOwt% (重量比)的冻干保护剂溶于联苯双酯纳米脂质载体的水分散体中，然后分装于西 林瓶中，置-80°C的超低温冰箱中预冻24h，取出，迅速移入冷冻干燥机中，冻干48h，加塞密 封即可。
所述有机溶剂为氯仿、丙酮、乙醇、乙酸乙酯或异丙醇中的任一种或任意组合。所述冻干保护剂为乳糖、葡萄糖、甘露醇、蔗糖、海藻糖、右旋糖苷或山梨醇中的任 一种或任意组合。本发明具有以下优点(1)本发明的联苯双酯纳米脂质载体生物相容性好，易降解，降低了联苯双酯的毒 副作用，提高了机体的耐受性。(2)本发明的联苯双酯纳米脂质载体粒径在200nm左右，能被动靶向于肝组织，提 高疗效，大大降低毒副作用，可提高联苯双酯的生物利用度。且在体内具备缓释功能，可延 长药物的体内循环时间。采用透析法测定药物的体外释放度，结果显示纳米脂质载体表现 出明显的缓释特点(参见图4)。(3)本发明采用混合脂质作为联苯双酯的载药材料，通过向固体脂质材料中加入 一定比例的液态脂质，在一定程度上破坏了材料的晶型，提高载药量和包封率，且避免了药 物在放置过程中外排、包封率降低的现象，使制剂可稳定贮存。(4)本发明的工艺为改造的微乳技术_乳化蒸发_低温固化法，具有制备工艺简 单，成本低，工艺参数易于控制等特点，适合工业大规模高效益生产。
图1为联苯双酯纳米脂质载体透射电镜图；图2为联苯双酯纳米脂质载体透射电镜图；图3为联苯双酯纳米脂质载体粒径分布图；其中，标题粒径分布(Size distribution (s)，横坐标粒径(Diameter)，纵坐标百分率(% in class)；图4为联苯双酯纳米脂质载体体外释放的释放百分率_时间曲线。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明做进一步的阐述，但本发明不局限于这些实施例。实施例1制备联苯双酯脂质载体步骤如下(1)取联苯双酯10mg、胆固醇160mg、油酸40mg、Tween80450mg溶于IOml丙酮-乙 醇(体积比1 1)中，75°c水浴上加热溶解，构成有机相。(2)将泊洛沙姆188150mg溶于15ml注射用水，水浴加热至和有机相相同的温度， 构成水相。(3)在转速为700r/min搅拌下，将有机相溪流状缓慢注入水相中，75°C恒温搅拌 4h，使有机溶剂完全挥发，制备初乳。
(4)将所得初乳倾入45ml 0 2°C的冰水中，冰浴下lOOOr/min搅拌2h，从而制得 联苯双酯纳米脂质载体，4°C密闭保存。实施例2制备联苯双酯脂质载体步骤如下(1)取联苯双酯50mg、单硬脂酸甘油酯240mg、MCT 60mg、大豆磷脂200mg溶于 IOml氯仿中， 75°C水浴上加热溶解，构成有机相。(2)将泊洛沙姆188450mg溶于15ml注射用水中，水浴加热至和有机相相同的温 度，构成水相。(3)在转速为700r/min搅拌下，将有机相溪流状缓慢注入水相中，75°C恒温搅拌 4h，使有机溶剂完全挥发，制备初乳；(4)将所得初乳倾入45ml O 2°C的冰水中，冰浴下lOOOr/min搅拌2h，从而制得
联苯双酯纳米脂质载体，4°C密闭保存。用水稀释后，以H-7000型透射电子显微镜观测其形态，如图1所示。由图1可知， 所得联苯双酯纳米脂质载体大小均一、形态圆整、粒径在200nm左右。实施例3制备联苯双酯脂质载体步骤如下(1)取联苯双酯20mg、三棕榈酸甘油酯120mg、硬脂酸60mg、大豆油30mg、 Span60250mg溶于IOml丙酮-氯仿(体积比1 1)中，80°C水浴上加热溶解，构成有机相。(2)将泊洛沙姆188450mg溶于15ml注射用水中，水浴加热至和有机相相同的温 度，构成水相。(3)在转速为700r/min搅拌下，将有机相溪流状缓慢注入水相中，80°C恒温搅拌 4h，使有机溶剂完全挥发，制备初乳。(4)将所得初乳倾入45ml O 2°C的冰水中，冰浴下700r/min搅拌2h，从而制得 联苯双酯纳米脂质载体，冻干。其中，冻干工艺为取10wt%的甘露醇与右旋糖酐(质量比为1 1)，溶于联苯双 酯纳米脂质载体水分散体中，然后分装于西林瓶中，置-80°C的超低温冰箱中预冻24h，取 出，迅速移入冷冻干燥机中，-40°C、0. IOmbar冻干48h，加塞密封即可。实施例4制备联苯双酯脂质载体步骤如下(1)取联苯双酯10mg、单硬脂酸甘油酯160mg、MCT 40mg、大豆磷脂200mg溶于 IOml丙酮-乙醇(体积比1 1)中，75°C水浴上加热溶解，构成有机相。(2)将泊洛沙姆188300mg溶于15ml注射用水中，水浴加热至和有机相相同的温 度，构成水相。(3)在转速为700r/min搅拌下，将有机相溪流状缓慢注入水相中，75°C恒温搅拌 4h，使有机溶剂完全挥发，制备初乳。(4)将所得初乳倾入45ml O 2°C的冰水中，冰浴下lOOOr/min搅拌2h，从而制得
联苯双酯纳米脂质载体，冻干。其中，冻干工艺为取5wt %的甘露醇，溶于联苯双酯纳米脂质载体水分散体 中，然后分装于西林瓶中，置-80°C的超低温冰箱中预冻24h，取出，迅速移入冷冻干燥机中，-40°C、0. IOmbar冻干48h，加塞密封即可。取适量冻干粉用水稀释后，以H-7000型透射电子显微镜观测其形态，如图2所示。 由图2可知所得联苯双酯纳米脂质载体大小均一、形态圆整、成型性好、粒径在200nm左右。实施例5制备联苯双酯脂质载体
步骤如下(1)取联苯双酯30mg、单硬脂酸甘油酯75mg、硬脂酸lOOmg、MCT 20mg、大豆磷脂 200mg溶于IOml丙酮-乙醇(体积比1 1)中，70°C水浴上加热溶解，构成有机相。(2)将泊洛沙姆188600mg溶于15ml注射用水中，水浴加热至和有机相相同的温 度，构成水相。(3)在转速为600r/min搅拌下，将有机相溪流状缓慢注入水相中，70°C恒温搅拌 4h，使有机溶剂完全挥发，制备初乳。(4)将所得初乳倾入45ml 0 2°C的冰水中，冰浴下lOOOr/min搅拌2h，从而制得
联苯双酯纳米脂质载体，4°C密闭保存。用水稀释后，以Zetasizer 3000HS型激光粒度分布仪测定粒径分布，测得平均粒 径为217. Onm，多分散性系数为0. 149，如图3所示。实施例6制备联苯双酯脂质载体步骤如下(1)取联苯双酯20mg、单硬脂酸甘油酯240mg、MCT 40mg、大豆磷脂250mg溶于 IOml丙酮-乙醇(体积比1 1)中，75°C水浴上加热溶解，构成有机相。(2)将泊洛沙姆188300mg溶于15ml注射用水中，水浴加热至和有机相相同的温 度，构成水相。(3)在转速为700r/min搅拌下，将有机相溪流状缓慢注入水相中，75°C恒温搅拌 4h，使有机溶剂完全挥发，制备初乳。(4)将所得初乳倾入45ml O 2°C的冰水中，冰浴下lOOOr/min搅拌2h，从而制得
联苯双酯纳米脂质载体，4°C密闭保存。采用反向动态透析法测定药物的释放度以含30%乙醇的PH为7. 4的磷酸盐缓 冲液(PBS) 200ml为释放介质，搅拌速度为lOOr/min，温度为37士0. 5°C。取样后进样20 μ 1 进行HPLC测定，计算累积释放百分率，如图4所示。实施例7制备联苯双酯脂质载体步骤如下(1)取联苯双酯10mg、单硬脂酸甘油酯80mg、硬脂酸80mg、MCT 60mg、大豆磷脂 200mg溶于IOml丙酮-乙醇(体积比1 1)中，75°C水浴上加热溶解，构成有机相。(2)将泊洛沙姆188450mg溶于15ml注射用水中，水浴加热至和有机相相同的温 度，构成水相。(3)在转速为800r/min搅拌下，将有机相溪流状缓慢注入水相中，75°C恒温搅拌 4h，使有机溶剂完全挥发，制备初乳。(4)将所得初乳倾入45ml O 2°C的冰水中，冰浴下lOOOr/min搅拌2h，从而制得
联苯双酯纳米脂质载体，4°C密闭保存。采用反向动态透析法测定药物的释放度以含30%乙醇的PH为7. 4的磷酸盐缓冲液(PBS) 200ml为释放介质，搅拌速度为lOOr/min，温度为37士0. 5°C。取样后进样20 μ 1 进行HPLC测定，计算累积释放百分率，如图4所示。由图可知联苯双酯纳米脂质载体体外 释放呈双相动力学，即最初为突释后为缓释；液态脂质占总脂质比重越大， 释药越快。
权利要求
一种联苯双酯纳米脂质载体，其特征在于主要是由联苯双酯、固态脂质材料、液态脂质、水溶性乳化剂、脂溶性乳化剂和注射用水组成的，以100ml纳米脂质载体制剂计，其组成如下联苯双酯 0.002～0.5g固态脂质材料 0.05～2g液态脂质 0～1g水溶性乳化剂 0.05～5g脂溶性乳化剂 0.05～5g附加剂 0～5g注射用水余量。
2.根据权利要求1所述的联苯双酯纳米脂质载体，其特征在于以IOOml纳米脂质载 体制剂计，其组成如下联苯双酯0. 002 0. 2g固态脂质材料0. 05 Ig液态脂质0. 01 0. 5g水溶性乳化剂0. 05 2g脂溶性乳化剂0. 1 2g附加剂0 2. 5g注射用水余量。
3.根据权利要求1或2所述的联苯双酯纳米脂质载体，其特征在于所述固态脂质材 料为甘油三酯类、部分甘油酯、脂肪酸类、蜡质类或固醇类中的任一种或任意组合。
4.根据权利要求3所述的联苯双酯纳米脂质载体，其特征在于所述甘油三酯类为三 棕榈酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、三油酸甘油酯等；所述部分甘油酯为单 硬脂酸甘油酯、含有单、二、三酰甘油酯的合成甘油酯及其混合物；所述脂肪酸为硬脂酸、棕 榈酸；所述蜡质类为鲸蜡醇十六酸酯、鲸蜡醇棕榈酸酯；所述固醇类为胆固醇。
5.根据权利要求1或2所述的联苯双酯纳米脂质载体，其特征在于所述液态脂质为 天然植物油、链长在C8 Cltl之间的中等链长脂肪酸甘油酯、油酸、亚油酸、维生素E或维生 素酯类中的任一种或任意组合。
6.根据权利要求1或2所述的联苯双酯纳米脂质载体，其特征在于所述水溶性乳化 剂为聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物类、聚氧乙烯脂肪酸酯类或聚氧乙烯脂肪醇醚类中的任一 种或任意组合；所述脂溶性乳化剂为磷脂类、脂肪酸山梨坦类或聚山梨酯类中的任一种或任意组合； 所述附加剂为渗透压调节剂、金属离子络合剂、抗氧剂或防腐剂中的任一种或任意组合。
7.一种制备权利要求1或2所述的联苯双酯纳米脂质载体的方法，其特征在于包括 以下步骤(1)将联苯双酯、固态脂质材料、液态脂质、脂溶性乳化剂溶于有机溶剂中，加热至 60 100°C使溶解，以构成有机相；(2)将水溶性乳化剂、附加剂溶于注射用水中，加热至60 100°C，以构成水相；(3)在60 100°C的温度下，在转速为400 1200r/min搅拌下将有机相注入水相中， 搅拌0. 5h 6h，使有机溶剂完全挥发，得到初乳；(4)将初乳倾入0 2°C的冰水中，在转速为400 1200r/min下搅拌0. 5h 4h，即制 得联苯双酯纳米脂质载体。
8.根据权利要求7所述的联苯双酯纳米脂质载体的制备方法，其特征在于还包括以 下步骤将制得的联苯双酯纳米脂质载体进一步加入冻干保护剂，以制成冻干制剂。
9.根据权利要求8所述的联苯双酯纳米脂质载体，其特征在于所述冻干保护剂为乳 糖、葡萄糖、甘露醇、蔗糖、海藻糖、右旋糖苷、山梨醇中的任一种或任意组合。
10.根据权利要求7所述的联苯双酯纳米脂质载体，其特征在于所述有机溶剂为氯 仿、丙酮、乙醇、乙酸乙酯或异丙醇中的任一种或任意组合。
全文摘要
本发明公开了一种联苯双酯纳米脂质载体，主要是由联苯双酯、固态脂质材料、液态脂质、水溶性乳化剂、脂溶性乳化剂和注射用水组成的，其制备方法如下(1)将联苯双酯、固态脂质材料、液态脂质、脂溶性乳化剂溶于有机溶剂中，加热使溶解，以构成有机相；(2)将水溶性乳化剂、附加剂溶于注射用水中，加热，以构成水相；(3)在搅拌下将有机相注入水相中，搅拌使有机溶剂完全挥发，得到初乳；(4)将初乳倾入冰水中，搅拌，即制得联苯双酯纳米脂质载体。本发明的联苯双酯纳米脂质载体生物相容性好，易降解，降低了联苯双酯的毒副作用，提高了机体的耐受性。
文档编号A61P1/16GK101843588SQ20101019534
公开日2010年9月29日 申请日期2010年6月9日 优先权日2010年6月9日
发明者冯飞飞, 刘悦, 张典瑞, 段存贤, 王言才, 王飞虎, 荆凡波, 贾乐娇 申请人:山东大学