含有茶氨酸衍生物的皮肤外用剂组合物的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种将茶氨酸衍生物作为有效成分含有的皮肤外用剂组合物，更具体地，涉及将茶氨酸衍生物作为有效成分含有，从而具有抗老化、改善皮肤皱纹、强化皮肤屏障、强化皮肤免疫力、皮肤保湿及改善特应性的效果的皮肤外用剂组合物。
【专利说明】含有茶氨酸衍生物的皮肤外用剂组合物
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种将茶氨酸衍生物作为有效成分含有的皮肤外用剂组合物，更具体地，涉及将茶氨酸衍生物作为有效成分含有，从而具有抗老化、改善皮肤皱纹、强化皮肤屏障、强化皮肤免疫力、皮肤保湿及改善特应性的效果的皮肤外用剂组合物。
【背景技术】
[0002]茶氨酸(theanine)是绿茶(Camellia sinesis)中含有的氨基酸，通过谷氨酰胺(L-glutamine)和乙胺(ethylamine)的酶反应而生成，通常占绿茶叶干燥重量的约I~2%，并且具有主要以游离氨基酸形式存在的特征。据报道，茶氨酸抑制因咖啡因引起的兴奋作用(Toxicol Lett.2001123(2-3)，159-167，Biosc1.Biotechnol.Biochem.20002 月；64 (2): 287-93)，在大脑中增加阿尔法波(alpha-waves) (NipponNogeikagaku Kaishil998 ；72:153-157)而缓解紧张，具有抑制因压力引起的心脏脉搏数增加及减少压力反应因子等抗压作用(Biol Psychol.200774(1):39-45)。此外，减少癌细胞内部的麸胱甘肽数值而起到抗癌作用(Cancer Lett.2004212 (2)，177-184)，降血压(Biosci Biotechnol Biocheml99559 (4) 615-618)，还具有一部分抑制低密度脂蛋白胆固醇(LDL-cho Iestero I)的氧化的效果(Exp Toxicol Pathol 1997 ;49:329-335),最近还在 抗肥胖作用(In Vivo2004,18 (1)55-62)及乙醇分解酶增加(Biol PharmBull200528 (9) 1702，1706)等生理活性进行研究。
[0003]正在进行关于茶氨酸具有多种生理活性的可能性验证及具体研究，但是除了对于皮肤领域除茶氨酸和绿茶成分儿茶酸的单独或混合处理时的脂肪分解效果(韩国公开专利公报第2004-0092538号)和皮肤老化改善(韩国公开专利公报第2007-0028901号)、脯氨酸循环促进效果(韩国公开专利公报第2009-0064743号)的报道之外，至今没有对于茶氨酸的皮肤效能的研究事例及作用机制的报道，美国专利申请US2006/0134095A1记载有茶氨酸的保湿效果，并且将茶氨酸衍生物作为细胞活性剂，但是对于非茶氨酸自身的茶氨酸的衍生物的优异皮肤效能至今也没有公开。
【发明内容】
[0004]要解决的技术问题
[0005]鉴于此，本发明发明人超越因茶氨酸衍生物的生理活性而模仿茶氨酸母核的效果，发现具有作为更优异且具有区别的生理效能，即发现具有抗老化、改善皮肤皱纹、强化皮肤屏障、强化皮肤免疫力、皮肤保湿及特应性改善效果，从而完成了本发明。
[0006]因此，本发明的目的在于提供一种将茶氨酸衍生物作为有效成分含有而抗老化、改善皮肤皱纹、强化皮肤屏障、强化皮肤免疫力、皮肤保湿及特应性改善效果出色的皮肤外用剂组合物。
[0007]技术方案
[0008]本发明涉及一种将茶氨酸衍生物作为有效成分含有的用于抗老化、改善皮肤皱纹、强化皮肤屏障、强化皮肤免疫力、皮肤保湿及改善特应性的皮肤外用剂组合物。
[0009]发明的效果
[0010] 本发明的含有茶氨酸衍生物的皮肤外用剂组合物因茶氨酸衍生物的生理活性而超越模仿茶氨酸母核的效果，具有作为更优异且具有区别的生理效能，即具有抗老化、改善皮肤皱纹、强化皮肤屏障、强化皮肤免疫力、皮肤保湿及特应性改善效果。
【专利附图】
【附图说明】
[0011]图1是示出茶氨酸与本发明的茶氨酸衍生物的角蛋白l(keratinl)基因表达率的图表。
[0012]图2是示出茶氨酸与本发明的茶氨酸衍生物的转谷氨酰胺酶I (transglutaminasel)基因表达率的图表。
[0013]图3是示出茶氨酸与本发明的茶氨酸衍生物的丝聚蛋白基因表达率的图表。
[0014]图4是示出用茶氨酸和本发明的茶氨酸衍生物进行处理时的细胞内钙移动情况的结果。
【具体实施方式】
[0015]下面，对本发明进行更详细的说明。
[0016]本发明中使用的茶氨酸衍生物具有下述化学式I或化学式2的结构。
[0017][化学式I]
[0018]
"I
R2,N 丫"0
ΗΟ?α'.广。HiAf0
力、°Ri
OHOH
[0019](上述式中，Rl选自由氢、甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基及叔丁基组成的组，R2选自由氢、甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基及叔丁基组成的组)。
[0020][化学式2]
[0021]
"I
/N..0
R2 丫
H0、OHj
V〇j々0
°R1
OHOH
[0022](上述式中，札选自由氢、甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基及叔丁基组成的组，R2选自由氢、甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基及叔丁基组成的组)。
[0023]本发明的茶氨酸衍生物对于组合物总重量优选含有0.0001~20重量％。因为在不足0.0001重量％的情况下，不能期待期望的效果；在超过20重量％的情况下，难以进行化妆品剂型的粘度调节。
[0024]表皮层具有通过增殖和分化的过程而形成完整的角质层，并且在适当的时机脱落的恒定性。在此过程中，在基底层中分裂的角质形成细胞合成多种蛋白质和脂质而变化成角质细胞，从而形成角质层。在表皮的基底细胞中，越分化核和细胞内器官消失而变得扁平，并且角蛋白中间微细纤维增加。在这种分化中重要的是细胞内钙浓度，在钙浓度为低浓度的表皮下部，角质形成细胞的增殖被促进，并且在钙高浓度的上部表皮中增殖被抑制，从而发生分化。构成角蛋白中间微细纤维的角蛋白在基底层中角蛋白5、角蛋白14被表达，在颗粒层中角蛋白1、角蛋白10被表达。因此，角蛋白I作为对表皮分化的指标而活用。
[0025]皮肤的老化被分成光老化和自然老化，而此时都与年轻皮肤的表皮呈现不同的状态。在光老化中，表皮的厚度会异常得肥厚，在自然老化中，表皮的厚度减少并且成为已形成的角质细胞不容易掉落的状态。这都是因为没有形成表皮的正常转变(turn-over)过程，且分化调节不适当而导致的。此外，根据对裸小鼠照射慢性低剂量紫外线而研究皱纹形成的机制的论文(JDS,2001, Kambaytashi)中所记载,这种表皮的这种变化还与光老化的皱纹形成有关。根据该研究，被照射紫外线的皮肤会产生皱纹，此时可知角蛋白I和丝聚蛋白的量显著减少。
[0026]本发明的茶氨酸衍生物具有使角蛋白I的表达增加的效果，这种效果不仅能够带来改善表皮的增殖和分化的表皮平衡(epidermal homeostasis)的结果,通过这种表皮平衡的改善，改善自然老化皮肤，而且能够防止或缓解由紫外线引起的皱纹的产生。
[0027]皮肤执行的最重要的功能之一是防止皮肤内外的各种物质的自由移动的屏障功能。皮肤屏障从颗粒层迅速过渡至角质层，而角蛋白中间微细纤维结团而形成纤维束，并且与存在于角质游离颗粒中的蛋白质成分及其它细胞质内蛋白质交叉结合，而形成包围细胞膜的内侧的角质蛋白膜，从而细胞膜被替代。将角质蛋白膜和角质脂质膜合在一起形成构成角质细胞的边界的角质包膜(cornified envelope),完成完整的皮肤屏障结构。丝聚蛋白在角质层和颗粒层促进角蛋白微细纤维间的结合而执行强化屏障的功能，转谷氨酰胺酶I使角质包膜形成中所需的多种蛋白质交联(cross-linking),使长链(long chain)的轻基神经酰胺(hydroxyceramide)与蛋白质联系,从而有助于角质脂质膜的形成。
[0028]本发明的茶氨酸衍生物，使丝聚蛋白、转谷氨酰胺酶I的表达增加的效果优异。因此，本发明的茶氨酸衍生物帮助角质包膜的形成而具有强化皮肤的主要功能即屏障功能的效果，并且由此使皮肤的物理防御膜坚固，能够强化皮肤的先天免疫力(innateimmunity)。
[0029]天然保湿因子(Natural moisturizing factor,NMF)作为皮肤保湿的重要要素之一，由氨基酸及其衍生物形成， 含有水分，维持皮肤保湿。此外，皮肤屏障的强化效能也是有助于皮肤保湿效能的因子。丝聚蛋白在角质层和颗粒层中促进角蛋白微细纤维间的结合而执行强化屏障的功能，而且被分解成氨基酸而形成天然保湿因子。此外，还有丝聚蛋白基因异常可能与特应性皮肤炎的前兆症状相关的研究报告。因此，丝聚蛋白不仅能强化表皮屏障功能，还作为天然保湿因子作用，而且与特应性皮肤炎也有很深的关联。[0030]如前所述，本发明的茶氨酸衍生物增加丝聚蛋白的表达，由于这种效果与强化表皮屏障功能一起，能够显示通过天然保湿因子增加的皮肤保湿效能，并且具有缓解由丝聚蛋白的减少引起的特应性皮肤炎的症状的效果。
[0031 ] 所述化妆品组合物对剂型没有特别的限定，可根据目的适当选择。例如，可被制备成由选自以下组的任意一个以上的剂型，但不限于此:爽肤水、柔肤水、化妆水、收敛水、乳液、润肤乳、保湿乳液、营养乳液、按摩霜、营养霜、保湿霜、护手霜、粉底、精华素、营养精华素、面膜、香皂、洁面泡沫、洁面乳、洁面霜、身体乳液及身体沐浴露。
[0032]当本发明的剂型是膏、霜或凝胶时，作为载体成分可以利用动物纤维、植物纤维、蜡、石蜡、淀粉、黄芪胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土、二氧化硅、滑石或氧化锌
坐寸ο
[0033]当本发明的剂型是粉或喷雾时，作为载体成分可以利用乳糖、滑石、二氧化硅、氢氧化铝、硅酸钙或聚酰胺粉，尤其在是喷雾时，另外还可含有含氯氟烃、丙烷/ 丁烷或二甲醚等推进剂。
[0034]当本发明的剂型是溶液或乳液时，作为载体成分利用溶剂、溶剂化剂或乳化剂，例如有水、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇油、甘油脂肪酸酯、聚乙二醇或山梨糖醇酐的脂肪酸酯。
[0035]当本发明的剂型是悬浮液时，作为载体成分可以利用水、乙醇或丙二醇等液相稀释剂、乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇酯(polyoxyethylene sorbitol ester)及聚氧乙烯山梨糖醇酐酯(pol yoxyethylene sorbitan ester)等悬浮液、微晶纤维素、甲基氢氧化铝(望早□丨岩Oil已旧丨H旱人IE)、膨润土、琼脂或黄芪胶等。
[0036]当本发明的剂型是含有表面活性剂的清洁用品时，作为载体成分可以利用脂肪族硫酸醇(天甬望丑害智.0丨巨)、脂肪族醇醚硫酸盐(天丨岜考望3詈Oi旧I巨智ΒΙΟΙ巨)、磺基琥珀酸单酯、羟乙基磺酸盐、咪唑啉衍生物、甲基牛磺酸盐、肌氨酸盐、脂肪酸酰胺硫酸酯、烷基酰胺甜菜碱、脂肪醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸二乙醇酰胺、植物性油、羊毛脂衍生物(己丨眚百异王刘)或脂肪酸乙氧基化甘油酷等。
[0037]所述化妆品组合物中除所述添加的茶氨酸衍生物之外，还可含有功能性添加物及普通化妆品中含有的成分。例如，作为所述功能性添加物可包括选自以下组的成分:水溶性维生素、油溶性维生素、高分子肽、高分子多糖、鞘脂及海草提取物。
[0038]本发明的化妆品组合物中，除了所述功能性添加物之外，根据需要还可配合普通化妆品组合物中含有的成分。作为除此之外含有的配合成分，可以例举油脂成分、保湿剂、润肤剂、表面活性剂、有机及无机颜料、有机粉剂、紫外线吸收剂、防腐剂、杀菌剂、抗氧化剂、植物提取物、pH调节剂、醇、色素、香料、血流促进剂、冷却剂、止汗剂、净化水等。
[0039]【具体实施方式】
[0040]下面，通过实施例及实验例对本发明进行更具体的说明，但是本发明的权利范围不限于这些。
[0041][试验例I]确认在人新生儿上皮角质形成细胞(HEK)中角蛋白I基因表达
[0042]将人新生儿上皮角质形成细胞(HEK ;Lonza公司，NHEK-Neo-Neonatal NormalHuman Epidermal Keratinocytes, Pooled)在 6 孔(6-well)培养基(KBM-gold,龙沙公司)中分别接种lxlO5，在37°C下培养24小时后丢弃培养基，用分别含有茶氨酸衍生物100 μ Μ，500 μ M的培养基(KBM-gold，龙沙公司)进行处理，并且在37°C下培养5天。
[0043]在培养5天的角质形成细胞中利用RNeasy迷你试剂盒(凯杰(qiagen)公司)提取RNA,用Superscript III试剂盒(英杰(invitrogen)公司)进行RT-PCR,从而合成了cDNA。为了确认角蛋白I的表达量，用探针(TaqManTM荧光探针，Hs00196158_ml)进行定量实时PCR，观察了角蛋白I的表达情况，并且将结果显示在图1中。作为对照组使用了非处理组，以及替代茶氨酸衍生物分别处理100 μ Μ，500 μ M茶氨酸(西格玛，Τ6576)的。
[0044]从图1的结果中可以确认，与非处理组相比茶氨酸衍生物使角蛋白I的表达增加，并且可知茶氨酸衍生物与茶氨酸母核自身的情况相比，在相同浓度处理时显示非常优异的效果。
[0045][试验例2]确认在人新生儿上皮角质形成细胞(HEK)中转谷氨酰胺酶I基因表达
[0046]将人新生儿上皮角质形成细胞(HEK ;Lonza公司，NHEK-Neo-Neonatal NormalHuman Epidermal Keratinocytes, Pooled)在 6 孔(6-well)培养基(KBM-gold,龙沙公司)中分别接种lxlO5，在37°C下培养24小时后丢弃培养基，用分别含有茶氨酸衍生物100 μ Μ，500 μ M的培养基(KBM-gold，龙沙公司)进行处理，并且在37°C下培养5天。
[0047]在培养5天的角质形成细胞中利用RNeasy迷你试剂盒(凯杰(qiagen)公司)提取RNA,用Superscript III试剂盒(英杰(invitrogen)公司)进行RT-PCR,从而合成了CDNA0为了确认转谷氨酰胺酶I的表达量，用探针(TaqManTM荧光探针，HsOO 165929_ml)进行定量实时PCR，观察了 转谷氨酰胺酶的表达情况，并且将结果显示在图2中。作为对照组使用了非处理组，以及替代茶氨酸衍生物分别处理100 μ M，500 μ M茶氨酸(西格玛，Τ6576)的。
[0048]从图2的结果中可以确认，与非处理组相比茶氨酸衍生物使转谷氨酰胺酶I的表达增加，并且可知茶氨酸衍生物与茶氨酸母核自身的情况相比，在相同浓度处理时显示非常优异的效果。
[0049][试验例3]确认在人新生儿上皮角质形成细胞(HEK)中丝聚蛋白基因表达
[0050]将人新生儿上皮角质形成细胞(HEK ;Lonza公司，NHEK-Neo-Neonatal NormalHuman Epidermal Keratinocytes, Pooled)在 6 孔(6-well)培养基(KBM-gold,龙沙公司)中分别接种lxlO5，在37°C下培养24小时后丢弃培养基，用分别含有茶氨酸衍生物100 μ Μ，500 μ M的培养基(KBM-gold，龙沙公司)进行处理，并且在37°C下培养5天。
[0051]在培养5天的角质形成细胞中利用RNeasy迷你试剂盒(凯杰(qiagen)公司)提取RNA,用Superscript III试剂盒(英杰(invitrogen)公司)进行RT-PCR,从而合成了cDNA。为了确认丝聚蛋白的表达量，用探针(TaqManTM荧光，Hs00856927_gl)进行定量实时PCR，观察了丝聚蛋白的表达情况，并且将结果显示在图3中。作为对照组使用了非处理组，以及替代茶氨酸衍生物分别处理100 μ Μ，500 μ M茶氨酸(西格玛，Τ6576)的。
[0052]从图3的结果中可以确认，与非处理组相比茶氨酸衍生物使丝聚蛋白的表达增加，并且可知茶氨酸衍生物与茶氨酸母核自身的情况相比，在相同浓度处理时显示非常优异的效果。
[0053][试验例4]评价人新生儿上皮角质形成细胞(HEK)中钙流入(influx)
[0054]将经稳定化的人新生儿上皮角质形成细胞(HEK ;龙沙公司，NHEK-Neo-NeonatalNormal Human Epidermal Keratinocytes, Pooled)分别以 2xl04 放入共聚焦专用培养皿(confocal dishes),用茶氨酸2.5mM和茶氨酸衍生物0.5mM处理5分钟之后，用ΙμπιflU03-AM处理15分钟，在细胞内分解而与钙结合的fluo3用共焦显微镜(尼康，日本)进行观察，测量荧光差异，从而评价了细胞内钙移动，并将结果示于图4中。
[0055]从图4的结果中可知，茶氨酸和茶氨酸衍生物在细胞内钙移动方面显示出明确的不同结果。通过这种差异，可知本发明的茶氨酸衍生物并不是单纯地模仿茶氨酸母核的效果，而是具有与茶氨酸母核的效能不同的新的生理活性效能。
[0056][实施例1及比较例I]
[0057]根据下述表1的组成制备了实施例1和比较例I。
[0058][表 I]
【权利要求】
1.一种皮肤外用剂组合物，其特征在于，将具有下述化学式I或化学式2的结构的茶氨酸衍生物作为有效成分含有； [化学式I].N.R2-
2.根据权利要求1所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述茶氨酸衍生物对于组合物总重量含有0.0001~20重量％。
3.根据权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物促进角质蛋白I基因表达。
4.根据权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物促进转谷氨酰胺酶I基因表达。
5.根据权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物促进丝聚蛋白基因表达。
6.根据权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物调节细胞内钙移动。
7.根据权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物用于抗老化。
8.根据权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物用于改善皮肤皱纹。
9.根据权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物用于维持和改善表皮平衡。
10.根据权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物用于强化皮肤屏障。
11.根据权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物用于强化皮肤免疫力。
12.根据权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物用于皮肤保湿。
13.根据权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物用于改善特应性。
【文档编号】A61K31/35GK103957904SQ201280057063
【公开日】2014年7月30日 申请日期:2012年11月8日 优先权日:2011年11月23日
【发明者】李真锳, 俞载元, 崔向兑, 金韩星, 李成训, 金智晟, 裴芝贤 申请人:株式会社爱茉莉太平洋