金粉蕨素的提取制备方法及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种金粉蕨素的提取制备方法，及其在制备治疗艾滋病药物中的应用。所述金粉蕨素是按如下方法制备的：以通经草为原料，用10%-80%乙醇提取，通过大孔吸附树脂、硅胶等色谱纯化得到。本发明所提供的金粉蕨素对制备治疗艾滋病药物具有重要意义。
【专利说明】金粉蕨素的提取制备方法及其应用
【技术领域】
[0001]本发明属于生物医药领域，涉及一种金粉蕨素的提取制备方法及其在制备治疗艾滋病药物中的应用。
【背景技术】
[0002]艾滋病，即获得性免疫缺陷综合征，英文名称Acquired Immune DeficiencySyndrome, AIDS。是人类因为感染人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus,HIV)后导致免疫缺陷，并发一系列机会性感染及肿瘤，严重者可导致死亡的综合征。目前，艾滋病已成为严重威胁世界人民健康的公共卫生问题。1983年，人类首次发现HIV。目前，艾滋病已经从一种致死性疾病变为一种可控的慢性病。HIV属于逆转录病毒科慢病毒属中的人类慢病毒组，分为I型和2型。目前世界范围内主要流行HIV-1。HIV-1为直径约10(Tl20nm球形颗粒，由核心和包 膜两部分组成。核心包括两条单股RNA链、核心结构蛋白和病毒复制所必须的酶类，含有逆转录酶、整合酶和蛋白酶。HIV-1是一种变异性很强的病毒，不规范的抗病毒治疗是导致病毒耐药的重要原因。HIV-2主要存在于西非，目前在美国、欧洲、南非、印度等地均有发现。HIV-2的超微结构及细胞嗜性与HIV-1相似，其核苷酸和氨基酸序列与HIV-1相比明显不同。
[0003]WHO报告2010年全世界存活HIV携带者及艾滋病患者共3400万，新感染270万，全年死亡180万人。每天有超过7000人新发感染，全世界各地区均有流行，但97%以上在中、低收入国家，尤以非洲为重。专家估计，全球流行重灾区可能会从非洲移向亚洲。中国⑶C估计，截止至2011年底，我国存活HIV携带者及艾滋病患者约78万人，全年新发感染者
4.8万人，死亡2.8万人。疫情已覆盖全国所有省、自治区、直辖市，目前我国面临艾滋病发病和死亡的高峰期，且已由吸毒、暗娼等高危人群开始向一般人群扩散。
[0004]世界各国的医药学家均致力于研究与探索抗艾滋病新药，不断有新的药品试用或问世。抗艾滋病药物主要有以下几类:核苷类逆转录抑制剂，如叠氮胸苷(AZT，齐多夫定)、拉米夫定等；非核苷类逆转录酶抑制剂，如地拉韦定，奈韦拉等；蛋白酶抑制剂，如沙奎那韦、利托那韦、喷噪那韦等；整合酶抑制剂，如齐多夫定单核昔酸等；侵入抑制药，如T20等。叠氮胸苷是1987年在临床最先使用的抗HIV药物，单一或二联治疗HIV感染，由于这种治疗通常在6个月内即出现明显的耐药性，而且对机体的免疫重建不佳，因而很少取得疗效。齐多夫定、拉米夫定为双脱氧核苷类，主要治疗AIDS及其相关综合征，减少机会性感染，但仍无法根治AIDS，且大多数有严重不良反应，需长期或终身用药。沙奎那韦、利托那韦和吲哚那韦与核苷类联用可有效抑制HIV复制，并减少不良反应。
[0005]此外，免疫调节药物，如干扰素、白细胞介素2和丙种球蛋白等，都具有抗病毒、抗细菌感染和增强免疫调节的作用。其中白细胞介素2还可使患者淋巴细胞数增加，改善人体免疫功能。
[0006]目前，艾滋病治疗有美国先进的进入细胞抑制剂T20治疗，T20是一种肽类，不能口服，只能注射，价格昂贵。每位患者每年的治疗费用都在20000美元以上，药价的昂贵使得绝大多数艾滋病患者都无法得到有效治疗。
[0007]中医中药是一个伟大的宝库，继承和发扬祖国几千年的传统医学，挖掘医学宝库，利用现代的分离分析手段，筛选出有效治疗艾滋病的中药提取物或有效成分，开发出治疗艾滋病的有效药物。目前已报道的从中药中提取的有效部位和成分有松塔多糖、香菇多糖、人参皂苷、天花粉蛋白、喜树碱、罂粟碱等。 [0008]通经草系中国蕨科植物银粉背蕨Aleuritopteris argentea (Gmel.) Fee的干燥全草。秋季采收，除去杂质晒干。收载于1998年《中华人民共和国卫生部药品标准蒙药分册》。其性平，味微苦，具有明目、愈伤、止血、活血调经、止咳、利湿、解毒消肿等功效，可用于目赤、视力减退、胸伤、骨伤、肺痨咳嗽、吐血。为我国藏蒙等少数民族地区的常用药物。但有关通经草的基础研究尚十分有限，使该药材的后续推广和应用受到限制。现代研究表明，通经草含有粉背蕨酸(alepterolic acid),鹿糖(sucrose)和黄酮类化合物,其他化学成分不详；药理作用研究表明，通经草黄酮是一种天然有效的自由基清除剂通经草黄酮对羟基自由基、超氧阴离子自由基、过氧化氢具有很强的清除作用，其EC5tl分别为0.0099,0.0060和0.0190mg/mL，且呈浓度依赖关系，其他药理作用未见报道。
[0009]专利申请号为CN96102241.8的专利公开了一种治疗肝胆结石和抗复发的特效药物组方，其中含有通经草。专利申请号为CN200310110176.4的专利申请公开了公开了一种治疗鼻窦炎的药物组方，其中含有通经草。专利申请号为CN200310110531.8的专利公开了一种用于治疗再生障碍性贫血的中草药剂，其由回生草、神仙草、通经草等近20种中草药经水熬煮加白酒配制而成。专利申请号为CN97107327.9的专利公开了一种治疗妇女痛经的中草药，配方的组成包括:通经草、苍术、鸡内金等。专利申请号为CN201210440734.2的专利公开了一种治疗儿童急性良性肌炎的药物，其原料配方和重量配比为:通经草6~10份，丝瓜络8~15份，走马风8~15份等。专利申请号为CN201210462718.3的专利公开了一种治疗乳房疾病的药物，其特征在于组分和重量配比是:通经草1:灯笼草2:白术1.5
坐寸ο
[0010]上述文献及专利等，尚未见从通经草中提取制备金粉蕨素及用于制备治疗艾滋病药物的报道。
【发明内容】
[0011]本发明的目的在于公开一种金粉蕨素的提取制备方法及其在制备治疗艾滋病药物中的应用。
[0012]本发明是通过如下技术方案实现的:
本发明所用原料通经草为中国蕨科植物银粉背蕨(Aleuritopteris argentea(Gmel.)Fee)的干燥全草。
[0013]本发明通经草提取物是按如下方法制备得到:
(1)通经草，用浓度10%-80%乙醇作为溶剂，在30°C-90°C提取，提取次数为1_3次，每次提取时间为1-4小时，每次溶剂用量为通经草重量的6-15倍；滤过，合并提取液，回收乙醇，浓缩，干燥，得通经草提取物A ；
(2)将步骤(1)得到的通经草提取物A加10-20倍量水溶解，滤过，得药液A，药液A通过大孔吸附树脂柱，用水洗脱，再用浓度50%-70%的乙醇溶液进行洗脱，收集不同乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得通经草提取物；
(3)将步骤(2)得到的通经草提取物再经200-300目硅胶柱层析，以三氯甲烷-甲醇(100:1-3:1)梯度洗脱，薄层跟踪检测，合并相同流份，收集三氯甲烷-甲醇(10:1)梯度洗脱液，静置析晶，抽滤，甲醇重结晶，得到金粉蕨素。
[0014]金粉蕨素的化学结构经质谱和核磁共振等波谱手段确证，纯度经高效液相色谱检测均大于98%。
[0015]金粉蕨素:C27H32O13, M564，白色针状结晶(甲醇)，mp.279_280°C ;乙醇溶液中υνλ.:213，286，330nm ；IR:3420, 3360，1655，1647，1632，1574，1500，994，978。EIMS:564.447, 418.400 (Μ-鼠李糖)，368，354，256 (Μ-鼠李糖-葡萄糖)，238，179，153，152，I29, 104, 85, 77, 71.55 ； 1HNMR(DMS0-d6, δ ): 12.459 (s)，7.548 (d,7.6),7.548 (d，7.6)，
7.412(t,7.6),7.412 (t,7.6),7.364 (t,7.6),6.731 (d, 1.6),6.672 (d, 1.6),6.377(s)，5.696 (d,7.6),5.40 (dd, 12.8),2.8,3.20 (dd, 17.2, 12.8),2.888 (dd, 17.2, 12.8)；13CNMR(DMS0-d6，δ ):196.52 (s), 166.22 (s), 164.43 (s), 163.32 (s),79.40 (d),43.45(t)，97.85 (d)，96.23 (d), 104.35 (s), 139.24 (s), 126.75 (d), 129.07 (d), 128.98 (d),
129.07(d), 126.75 (d),99.40 (d),77.80 (d),79.07 (d),74.01 (d),78.75 (d),62.03(t), 102.36 (d),72.31 (d),72.68 (d),71.10 (d),69.81 (d), 18.78 (q)。以上数据和文献报道的金粉蕨素(onychin) —致；TLC检查，Rf值与金粉蕨素标准品相同。
[0016]优选的本发明通经草提取物制备方法:
(1)通经草，用浓度60%乙醇作为溶剂，在70°C提取，提取次数为2次，每次提取时间为2小时，每次溶剂用量为通经草重量的12倍；滤过，合并提取液，回收乙醇，浓缩，干燥，得通经草提取物A ;
(2)将步骤(1)得到的通经草提取物A加15倍量水溶解，滤过，得药液A，药液A通过HPD600大孔吸附树脂，用水洗脱，再用浓度70%的乙醇溶液进行洗脱，收集70%浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得通经草提取物；
(3)将步骤(2)得到的通经草提取物再经200-300目硅胶柱层析，以三氯甲烷-甲醇(100:1-3:1)梯度洗脱，薄层跟踪检测，合并相同流份，收集三氯甲烷-甲醇(10:1)梯度洗脱液，静置析晶，抽滤，甲醇重结晶，得到金粉蕨素。
[0017]金粉蕨素的化学结构经质谱和核磁共振等波谱手段确证，纯度经高效液相色谱检测均大于98%。
[0018]金粉蕨素:C27H32O13, M564，白色针状结晶(甲醇)，mp.279_280°C ;乙醇溶液中υνλ.:213，286，330nm ；IR:3420, 3360，1655，1647，1632，1574，1500，994，978。EIMS:564.447, 418.400 (Μ-鼠李糖)，368，354，256 (Μ-鼠李糖-葡萄糖)，238，179，153，152，I29, 104, 85, 77, 71.55 ； 1HNMR(DMS0-d6, δ ): 12.459 (s)，7.548 (d,7.6),7.548 (d，7.6)，
7.412(t,7.6),7.412 (t,`7.6),7.364 (t,7.6),6.731 (d, 1.6),6.672 (d, 1.6),6.377(s)，5.696 (d，7.6),5.40 (dd, 12.8),2.8,3.20 (dd, 17.2, 12.8),2.888 (dd, 17.2, 12.8)；13CNMR(DMS0-d6，δ ):196.52 (s), 166.22 (s), 164.43 (s), 163.32 (s),79.40 (d),43.45(t)，97.85 (d)，96.23 (d), 104.35 (s), 139.24 (s), 126.75 (d), 129.07 (d), 128.98 (d),
129.07(d), 126.75 (d),99.40 (d),77.80 (d),79.07 (d),74.01 (d),78.75 (d),62.03(t), 102.36 (d),72.31 (d),72.68 (d),71.10 (d),69.81 (d), 18.78 (q)。以上数据和文献报道的金粉蕨素(onychin) —致；TLC检查，Rf值与金粉蕨素标准品相同。
[0019]本发明的通经草提取物，其制备方法特征在于:所采用的大孔吸附树脂为DM130大孔吸附树脂、DlOl大孔吸附树脂、HPD600大孔吸附树脂。
[0020]本发明的通经草提取物，可以通过加入药剂学允许的各种辅料，制成药剂学上的各种口服剂型。
[0021]本发明首次探索研究以中国蕨科植物银粉背蕨(Aleuritopteris argentea(Gmel.)Fee)的干燥全草为原料提取制备金粉蕨素，并用于治疗艾滋病。本实验研究表明，本发明方法制备的金粉蕨素，在MAGI细胞中对HIV-1 IIIB毒株有明显抑制作用，浓度为50 μ g/ml时，抑制率90%以上；在阶4细胞中对HIV-1 IIIB毒株有明显的抑制作用，浓度为100 μ g/ml时，抑制率95%以上。
[0022]本发明的金粉蕨素与化学药或中药或天然药物组成治疗艾滋病药物。
【具体实施方式】
[0023]下面通过具体实验例和实施例对金粉蕨素的提取制备方法及其在制备治疗艾滋病药物中的应用做进一步说明，但不限于本发明。
[0024]实施例1:通经草提取物及金粉蕨素的制备
以中国蕨科植物银粉背蕨(Aleuritopteris argentea (Gmel.) Fee)的干燥全草为原料，采用如下步骤方法制备:
(1)通经草10kg，用浓度60%乙醇作为溶剂，在70°C提取，提取次数为2次，每次提取时间为2小时，每次溶剂用量为`通经草重量的12倍；滤过，合并提取液，回收乙醇,浓缩,干燥，得通经草提取物A ;
(2)将步骤(1)得到的通经草提取物A加15倍量水溶解，滤过，得药液A，药液A通过HPD600大孔吸附树脂柱，用水洗脱，再用浓度70%的乙醇溶液进行洗脱，收集70%浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得通经草提取物；
(3)将步骤(2)得到的通经草提取物再经200-300目硅胶柱层析，以三氯甲烷-甲醇(100:1-3:1)梯度洗脱，薄层跟踪检测，合并相同流份，收集三氯甲烷-甲醇(10:1)梯度洗脱液，静置析晶，抽滤，甲醇重结晶，得到金粉蕨素。
[0025]化学结构经质谱和核磁共振等波谱手段确证:
金粉蕨素=C27H32O13, M564，白色针状结晶(甲醇)，mp.279-280 °C ;乙醇溶液中υνλ.:213，286，330nm ；IR:3420, 3360，1655，1647，1632，1574，1500，994，978。EIMS:564.447, 418.400 (Μ-鼠李糖)，368，354，256 (Μ-鼠李糖-葡萄糖)，238，179，153，152，I29, 104, 85, 77, 71.55 ； 1HNMR(DMS0-d6, δ ): 12.459 (s)，7.548 (d,7.6),7.548 (d，7.6)，
7.412(t,7.6),7.412 (t,7.6),7.364 (t,7.6),6.731 (d, 1.6),6.672 (d, 1.6),6.377(s)，5.696 (d，7.6),5.40 (dd, 12.8),2.8,3.20 (dd, 17.2, 12.8),2.888 (dd, 17.2, 12.8)；13CNMR(DMS0-d6，δ ):196.52 (s), 166.22 (s), 164.43 (s), 163.32 (s),79.40 (d),43.45(t)，97.85 (d)，96.23 (d), 104.35 (s), 139.24 (s), 126.75 (d), 129.07 (d), 128.98 (d),
129.07(d), 126.75 (d),99.40 (d),77.80 (d),79.07 (d),74.01 (d),78.75 (d),62.03(t), 102.36 (d),72.31 (d),72.68 (d),71.10 (d),69.81 (d), 18.78 (q)。以上数据和文献报道的金粉蕨素(onychin) —致；TLC检查，Rf值与金粉蕨素标准品相同。[0026]金粉蕨素纯度经高效液相色谱检测为99.7%。
[0027]实施例2:通经草提取物及金粉蕨素的制备
以中国蕨科植物银粉背蕨(Aleuritopteris argentea (Gmel.) Fee)的干燥全草为原料，采用如下步骤方法制备:
(1)通经草10kg，用浓度10%乙醇作为溶剂，在90°C提取，提取次数为I次，每次提取时间为4小时，每次溶剂用量为通经草重量的15倍；滤过，合并提取液，回收乙醇,浓缩,干燥，得通经草提取物A ;
(2)将步骤(1)得到的通经草提取物A加10倍量水溶解，滤过，得药液A，药液A通过DM130大孔吸附树脂柱，用水洗脱，再用浓度50%的乙醇溶液进行洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得通经草提取物；
(3)将步骤(2)得到的通经草提取物再经200-300目硅胶柱层析，以三氯甲烷-甲醇梯度洗脱(100:1-3:1 )，薄层跟踪检测，合并相同流份，收集三氯甲烷-甲醇(10:1)梯度洗脱液，静置析晶，抽滤，甲醇重结晶，得到金粉蕨素。
[0028]化学结构经质谱和核磁共振等波谱手段确证:
金粉蕨素=C27H32O13, M564，白色针状结晶(甲醇)，mp.279-280 °C ;乙醇溶液中υνλ.:213，286，330nm ；IR:3420, 3360，1655，1647，1632，1574，1500，994，978。EIMS:564.447, 418.400 (Μ-鼠李糖)，368，354，256 (Μ-鼠李糖-葡萄糖)，238，179，153，152，I29, 104, 85, 77, 71.55 ； 1HNMR(DMS0-d6, δ ): 12.459 (s)，7.548 (d,7.6),7.548 (d，7.6)，
7.412(t,7.6),7.412 (t,7.6),7.364 (t,7.6),6.731 (d, 1.6),6.672 (d, 1.6),6.377(s)，5.696 (d，7.6),5.40 (dd, 12.8),2.8,3.20 (dd, 17.2, 12.8),2.888 (dd, 17.2, 12.8)；13CNMR(DMS0-d6，δ ):196.52 (s), `166.22 (s), 164.43 (s), 163.32 (s),79.40 (d),43.45(t)，97.85 (d)，96.23 (d), 104.35 (s), 139.24 (s), 126.75 (d), 129.07 (d), 128.98 (d),
129.07(d), 126.75 (d),99.40 (d),77.80 (d),79.07 (d),74.01 (d),78.75 (d),62.03(t), 102.36 (d),72.31 (d),72.68 (d),71.10 (d),69.81 (d), 18.78 (q)。以上数据和文献报道的金粉蕨素(onychin) —致；TLC检查，Rf值与金粉蕨素标准品相同。
[0029]金粉蕨素纯度经高效液相色谱检测均大于98.8%。
[0030]实施例3:通经草提取物及金粉蕨素的制备
以中国蕨科植物银粉背蕨(Aleuritopteris argentea (Gmel.) Fee)的干燥全草为原料，采用如下步骤方法制备:
(1)通经草，用浓度80%乙醇作为溶剂，在30°C提取，提取次数为3次，每次提取时间为I小时，每次溶剂用量为通经草重量的6倍；滤过，合并提取液，回收乙醇，浓缩，干燥，得通经草提取物A ；
(2)将步骤(1)得到的通经草提取物A加20倍量水溶解，滤过，得药液A，药液A通过DlOl大孔吸附树脂柱，用水洗脱，再用浓度70%的乙醇溶液进行洗脱，收集70%浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得通经草提取物；
(3)将步骤(2)得到的通经草提取物再经200-300目硅胶柱层析，以三氯甲烷-甲醇(100:1-3:1)梯度洗脱，薄层跟踪检测，合并相同流份，收集三氯甲烷-甲醇(10:1)梯度洗脱液，静置析晶，抽滤，甲醇重结晶，得到金粉蕨素。
[0031]化学结构经质谱和核磁共振等波谱手段确证:金粉蕨素=C27H32O13, M564，白色针状结晶(甲醇)，mp.279-280 °C ;乙醇溶液中υνλ.:213，286，330nm ；IR:3420, 3360，1655，1647，1632，1574，1500，994，978。EIMS:564.447, 418.400 (Μ-鼠李糖)，368，354，256 (Μ-鼠李糖-葡萄糖)，238，179，153，152，I29, 104, 85, 77, 71.55 ； 1HNMR(DMS0-d6, δ ): 12.459 (s)，7.548 (d,7.6),7.548 (d，7.6)，
7.412(t,7.6),7.412 (t,7.6),7.364 (t,7.6),6.731 (d, 1.6),6.672 (d, 1.6),6.377(s)，5.696 (d,7.6),5.40 (dd, 12.8),2.8,3.20 (dd, 17.2, 12.8),2.888 (dd, 17.2, 12.8)；13CNMR(DMS0-d6，δ ):196.52 (s), 166.22 (s), 164.43 (s), 163.32 (s),79.40 (d),43.45(t)，97.85 (d)，96.23 (d), 104.35 (s), 139.24 (s), 126.75 (d), 129.07 (d), 128.98 (d),
129.07(d), 126.75 (d),99.40 (d),77.80 (d),79.07 (d),74.01 (d),78.75 (d),62.03(t), 102.36 (d),72.31 (d),72.68 (d),71.10 (d),69.81 (d), 18.78 (q)。以上数据和文献报道的金粉蕨素(onychin) —致；TLC检查，Rf值与金粉蕨素标准品相同。
[0032]金粉蕨素纯度经高效液相色谱检测均大于99.5%。
[0033]实验例I金粉蕨素抗HIV-1活性试验
1、材料
细胞:MT_4 细胞、MAGI test (Multinuclear Activation of GalactosidaseIndicator)又称 Single Life Cycle,所用细胞为 Hela-QM-LTR-β-gal。北京工业大学生命科学与生物工程学院培养保存；
毒株北京工业大学生命科学与生物工程学院培养保存；
药物:本发明实施例1所得金粉蕨素。
[0034]2、金粉蕨素在MT4细胞中抗HIV-1B活性试验
离心收集500万MT-4细胞，加入Iml含10000 TCID50 HIV-1 IIIB的RPMI 1640培养液，37°C、5% C02孵箱中孵育2小时。1500rpm离心后，RPMI 1640培养液洗涤一次，离心，加入IOml RPMI 1640培养液重悬，96孔板每孔加入100 u I细胞病毒悬液(含5 X IO4细胞/孔)。选用药物最高浓度为50 μ g/ml，5倍比稀释4个浓度，每个浓度4个复孔，每孔IOOul (药物终浓度减半)。同时设立病毒对照组(只加病毒，不加药物)、细胞对照组(不加病毒，不加药物)。于37°C、5% C02孵箱中继续培养5天，期间，第3天更换药液。逐日观察细胞生长与形态变化。细胞对照组细胞生长状态良好，病毒对照组于培养后第3-4天出现合胞体。培养第5天，收获培养上清，以测定p24抗原的方法，检测培养上清p24抗原含量，以示病毒的增殖情况。将给药组与病毒对照组进行比较，以下列公式计算药物的抑制率:
抑制率=(病毒对照组p24含量一给药组p24含量)+病毒对照组p24含量以P24抗原检测法测定药物对HIV-1 IIIB毒株的抑制作用，结果见表1。以药物浓度的对数为横坐标，以对病毒的抑制率为纵坐标绘制曲线，利用直线回归方法计算回归任线，计算各样品对HIV-1 IIIB毒株的50%抑制病毒浓度(IC5tl)。
[0035]表1金粉蕨素在MT4细胞中对HIV-1 IIIB毒株的抑制作用
【权利要求】
1.金粉蕨素的提取制备方法及其在制备治疗艾滋病药物中的应用。
2.根据权利要求1，所述金粉蕨素是按如下方法制备得到: 以中国蕨科植物银粉背蕨(Aleuritopteris argentea (Gmel.) Fee)的干燥全草为原料，采用如下步骤方法制备: (1)通经草，用浓度10%-80%乙醇作为溶剂，在30°C_90°C提取，提取次数为1_3次，每次提取时间为1-4小时，每次溶剂用量为通经草重量的6-15倍；滤过，合并提取液，回收乙醇，浓缩，干燥，得通经草提取物A ； (2)将步骤(1)得到的通经草提取物A加10-20倍量水溶解，滤过，得药液A，药液A通过大孔吸附树脂，用水洗脱，再用浓度50%-70%的乙醇溶液进行洗脱，收集不同浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得通经草提取物； (3)将步骤(2)得到的通经草提取物再经200-300目硅胶柱层析，以三氯甲烷-甲醇(100:1-3:1)梯度洗脱，薄层跟踪检测，合并相同流份，收集三氯甲烷-甲醇(10:1)梯度洗脱液，静置析晶，抽滤，甲醇重结晶，得到金粉蕨素。
3.根据权利要求1，所述金粉蕨素是按如下方法制备得到: 以中国蕨科植物银粉背蕨(Aleuritopteris argentea (Gmel.) Fee)的干燥全草为原料，采用如下步骤方法制备: (1)通经草，用浓度60%乙醇作为溶剂，在70°C提取，提取次数为2次，每次提取时间为2小时，每次溶剂用量为通经草重量的12倍；滤过，合并提取液，回收乙醇，浓缩，干燥，得通经草提取物A ； (2)将步骤(1)得到的通经草提取物A加15倍量水溶解，滤过，得药液A，药液A通过HPD600大孔吸附树脂，用水洗脱，再用浓度70%的乙醇溶液进行洗脱，收集70%浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得通经草提取物。
4.(3)将步骤(2)得到的通经草提取物再经200-300目硅胶柱层析，以三氯甲烷-甲醇(100:1-3:1)梯度洗脱，薄层跟踪检测，合并相同流份，收集三氯甲烷-甲醇(10:1)梯度洗脱液，静置析晶，抽滤，甲醇重结晶，得到金粉蕨素。
5.根据权利要求2所述的通经草提取物的制备方法，其特征在于:其所采用的大孔吸附树脂为DM130大孔吸附树脂、DlOl大孔吸附树脂、HPD600大孔吸附树脂。
6.根据权利要求1，所述的金粉蕨素与化学药或中药或天然药物组成的治疗艾滋病药物。
【文档编号】A61P31/18GK103588834SQ201310525386
【公开日】2014年2月19日 申请日期:2013年10月31日 优先权日:2013年10月31日
【发明者】孔倩倩 申请人:济南星懿医药技术有限公司