一种有效抗猪流感病毒的中药复方的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种有效防治猪流感病的中药复方，包括中药复方的中药种类和含量。中药复方由下列药物组成：金银花42重量份，赤芍药42重量份，绵马贯众16重量份。体内和体外试验证明，本发明的中药复方制剂能有效防治猪流感病。
【专利说明】一种有效抗猪流感病毒的中药复方
【技术领域】
[0001]本发明属于兽用中药领域，涉及一种体内和体外抑制猪流感病毒的中药复方。
【背景技术】
[0002]猪流感(swine influenza，SI)又称猪流行性感冒，是由正黏病毒科A型流感病毒属的猪流感病毒(swine influenza virus, SIV)引起的一种急性、热性、高度接触性呼吸道传染病，临床以突发、高热、咳嗽、呼吸困难、反复发作、发病率高、死亡率低为特征。如:我们2009年至2013年10月期间广东省11个地级市共采集血清样品5048份，应用ELISA试剂盒或HI试验检测H1、H3亚型猪流感抗体，结果发现:H1、H3和H1+H3的阳性率分别为42.09%、15.25%和6.62%。此病在世界各地都有发生，危害严重，经济损失巨大，并对人类的健康构成威胁。
[0003]其突出的流行特点是常以亚临床形式存在并常引起其他呼吸道细菌和病毒的继发或混合感染，如猪繁殖与呼吸综合症、猪圆环病毒病和猪传染性胸膜肺炎等，使疫情变得复杂,死亡率增高。
[0004]在临床实践猪流感的防治上，由于抗生素具有控制并发症的特点而被广泛使用，同时配合大量的解热镇痛、糖皮质激素类等药物。这些处理方式在抑制机体炎症反应的同时也加重了免疫抑制，导致病情更加的恶化。中草药作为天然产物，具有药源丰富，残毒较低或无残毒，副作用小，不易产生耐药性等优点；同时能调节机体免疫功能，抑制病毒复制，改善临床症状，在治疗病毒感染性疾病上应用广泛。因此，应用中草药防治猪流感，前景极为广阔。
[0005]纵观现在中药复方抗病毒的实验研究，对人甲型流感病毒和禽流感病毒的研究多，而对猪流感病毒的实验研究较少。并且大多分别采用体内试验或体外试验的方法独立研究，不能全面评价中药复方抗猪流感病毒的效果。
[0006]为解决上述问题，迫切需要筛选出有效防治猪流感的中药复方。并且同时采用体外试验和体内试验，从作用机理和临床实际上综合研究中药复方抗猪流感病毒的效果，为临床防治提供理论和实际依据。
【发明内容】
[0007]本发明的目的是提供一种有效防治猪流感的中药复方。
[0008]本发明所提供的用于抗猪流感病毒的中药复方，其组成为:金银花42重量份，赤芍药42重量份，绵马贯众16重量份。
[0009]所述的复方是指所含的中药种类及其中药比重。
[0010]本申请书所述的重量份是指复方中各种药物占整个复方的重量比例。
[0011]作为本发明的另一目的，还包括一种用于抗猪流感病毒的中药复方的提取方法，采用水煎煮方法进行粗提，具体步骤是:
(I)按金银花42重量份、赤芍药42重量份、绵马贯众16重量份的比例，称取各中药，组成100g中药复方；
(2)将100g中药复方粉碎到20目，浸泡lh，水煎2次，每次煮沸30min，合并2次煎
液；
(3)将煎液在常压真空抽滤及浓缩，定容至200mL水煎液，每毫升相当于0.5g生药(SP500mg/mL)；
(4)将水煎液进行高压灭菌，保存至温度为4°C冰箱内备用。
[0012]本发明采用的金银花:金银花，又名忍冬花，性寒，味甘，入肺、胃、大肠经。具有清热解毒，凉散风热的功效，为清热解毒的良药。本发明研究表明:金银花对猪流感病毒具有阻断和直接杀灭作用。
[0013]本发明采用的赤芍药:赤芍药，性微寒，味苦，归肝经。为毛茛科植物芍药或川赤芍干燥根，有行瘀止痛、凉血消肿的功效。本发明的研究结果显示:赤芍药在体外对猪流感病毒具有阻断、抑制和直接杀灭作用
本发明采用的绵马贯众:绵马贯众，性微寒，味苦，归肝、胃经。为鳞毛蕨科多年生草本植物粗茎鳞毛蕨、蹄盖蕨科多年生草本植物蛾眉蕨、乌毛蕨科多年生草本植物单芽狗脊、紫萁科多年生草本植物紫萁的根茎及叶柄 基部，具有清热解毒、抗病毒、抗癌、驱虫、凉血、止血等作用。本发明的研究结果显示:绵马贯众在体外对猪流感病毒具有贯众对猪流感病毒具有阻断、抑制和直接杀灭作用。
[0014]本发明的有益效果:
本发明提供的中药复方可以有效抗猪流感病毒，并在临床上可有效防治猪流感。
【具体实施方式】
[0015]下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
[0016]一种用于防治猪流感病的中药复方，包含如下药物:金银花42重量份，赤芍药42重量份，绵马贯众16重量份。
[0017]所述的复方是指所含的中药种类及其中药比重。
[0018]所述的重量份是指复方中各种药物占整个复方的重量比例。
[0019]下述实施例中所用实验材料如下:
(一)试验动物
9^11日龄SPF鸡胚购自广东大华农禽蛋有限公司；SPF级15g±2g BALB/c小鼠购自广东省医学实验动物中心。
[0020](二)溶液或试剂配制
1.PBS 的配制:称取 NaCl 8.0g、Na2HP04 3.63g、KCl 0.2g KH2P04 0.24g 溶于适量超纯水，调pH值至7.4，定容至1000mL ； 100ml/瓶分装，15磅高压灭菌30min，4°C保存备用。
[0021]2.1%鸡红细胞悬液的配制:先用灭菌注射器吸取3.8%枸橼酸钠溶液(其用量为所需血量的1/5)，从鸡翅静脉抽血至所需要血量，置灭菌离心管内，加灭菌PBS为抗凝血的2倍，以2000r/min离心IOmin,弃上清液,再加生理盐水悬浮血球，同上法离心沉淀，如此将红细胞洗涤三次，最后根据所需用量，用灭菌PBS配成1%悬液，现配现用。
[0022]3.中药的提取:采用水煎煮方法进行粗提，具体步骤是:
(I)按麻黄30重量份、桂枝25重量份、杏仁30重量份、炙甘草15重量份比例，称取各中药，组成100g中药复方；
(2)将100g中药复方粉碎到20目，浸泡lh，水煎2次，每次煮沸30min，合并2次煎
液；
(3)将煎液在常压真空抽滤及浓缩，定容至200mL水煎液，每毫升相当于0.5g生药(SP500mg/mL)；
(4)将水煎液进行高压灭菌，保存至温度为4°C冰箱内备用。
[0023]实施例1中药复方在体外抗猪流感病毒的效果 1.SIV对鸡胚半数感染量(EID50 )的测定
将病毒液依次作10倍倍比稀释，接种于10日龄鸡胚尿囊腔内，每个稀释度接种0.2ml/枚，作4个重复，同时设正常鸡胚对照。置37°C恒温箱内孵化72h，弃去24h内死亡胚，收获24h后死亡胚及72h活胚的尿囊液,进行HA效价的测定。按Reed-Muench两氏法计算EID50。
[0024]2.中药复方制剂对鸡胚的最大安全浓度的测定
将中药提取液依次作2倍倍比稀释，稀释成原浓度、1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64等7个浓度，然后接种于10日龄鸡胚尿囊腔内，每个稀释度接种0.2ml/枚，作4个重复，同时设生理盐水对照。置37°C恒温箱孵育72 h，每天观察存活情况，弃去24h内死亡胚。鸡胚全部存活的最高药物浓度为正式试验的起始浓度，即中药对鸡胚的最大安全浓度。
[0025]3.中药复方制剂在鸡胚内抗猪流感病毒的试验 将鸡胚随机分成三组，采用三种加药方式:` 方式一、先加中药再加病毒(中药对SIV的阻断作用):先将各中药提取液接种于10日龄鸡胚，0.2ml/枚，作4个重复，置37°C恒温箱孵育2h，然后接种100EID50病毒液0.2ml/枚，37 °C恒温培养72h，测定鸡胚尿囊液的血凝(HA)效价。
[0026]方式二、先加病毒再加中药(中药对SIV的抑制作用):先将100EID50病毒液接种于10日龄鸡胚，0.2ml/枚，作4个重复，置37°C恒温箱孵育2h，然后接种各中药提取液
0.2ml/枚，37°C恒温培养72h，测定鸡胚尿囊液的血凝(HA)效价。
[0027]方式三、中药病毒混合后一起加(中药对SIV的直接杀灭作用):先将各中药提取液与等量100EID50病毒液混合后，置37°C 2h后，接种于10日龄鸡胚，0.2ml/枚，作4个重复。37°C恒温培养72h，测定鸡胚尿囊液的血凝(HA)效价。
[0028]同时设立病毒对照和阴性对照。
[0029]4.数据处理
数据以X (—)土 S.E表示，用SPSS 17.0软件统计分析。
[0030]如表一所示:
表1中药复方制剂在鸡胚内抗猪流感病毒的效果
1.—
#积/::μ"
注:以上数据为测得HA平均值；与病毒对照相比，*表示P < 0.01，差异极显著。
[0031]表1显示本发明所述的中药复方在鸡胚内抗猪流感病毒效果，结果显示中药复方与病毒对照组相比，差异极显著或显著，具有明显的抗猪流感病毒效果。[0032]实施例2中药复方对小鼠感染猪流感病毒的抵抗效果
1.中药复方对猪流感病毒感染小鼠的死亡保护作用和延长寿命作用
(1)实验动物分组
将BALB/c小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、病毒唑组、中药复方组，共4组，每组10只。
[0033](2)实验动物给药
各组小鼠均以灌胃给药，2次/d，0.2 ml/次。中药各组于感染前I d开始给药，连续5d。同时，正常对照组、模型对照组给予等量蒸馏水
(3)实验动物攻毒
将小鼠用乙醚麻醉后，除正常对照组外，各组滴鼻接种10 LD50流感病毒50μ 1，正常对照组接种50 μ I灭菌PBS。
[0034](4)试验观察
逐日观察小鼠发病情况，记录死亡数、存活时间，计算死亡率=(各组死亡数/各组总数X 100%);死亡保护率=(模型对照组死亡率-给药组死亡率)/模型对照组死亡率X 100%];延长寿命率=(给药组平均存活时间-模型对照组平均存活时间)/模型对照组平均存活时间X 100%,详见表2:
表2中药复方制剂对猪流感病毒感染小鼠的死亡保护作用和延长寿命作用
【权利要求】
1.一种用于抗猪流感病毒的中药复方，包含如下药物:金银花42重量份，赤芍药42重量份，绵马贯众16重量份。
2.如权利要求1所述的一种用于抗猪流感病毒的中药复方，其特征在于，所述的复方是指所含的中药种类及其中药比重。
3.如权利要求1所述一种用于抗猪流感的中药复方，所述的重量份是指复方中各种药物占整个复方的重 量比例。
4.一种权利要求1所述的用于抗猪流感病毒的中药复方的提取方法，其特征在于，采用水煎煮方法进行粗提，具体步骤是: (1)按金银花42重量份、赤芍药42重量份和绵马贯众16重量份的比例，称取各中药，组成100g中药复方；(2)将100g中药复方粉碎到20目，浸泡lh，水煎2次，每次煮沸30min，合并2次煎液； (3)将煎液在常压真空抽滤及浓缩，定容至200mL水煎液，每毫升相当于0.5g生药(SP500mg/mL)； (4)将水煎液进行高压灭菌，保存至温度为4°C冰箱内备用。
【文档编号】A61K36/71GK103655757SQ201310672831
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2013年12月12日 优先权日:2013年12月12日
【发明者】王丙云, 陈志胜, 陈胜锋, 计慧琴, 徐振娜, 冼琼珍 申请人:佛山科学技术学院