一种聚乙二醇修饰的抑制vegfr2酪氨酸激酶多肽及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及药物领域，具体涉及具有抑制VEGFR2酪氨酸激酶活性，治疗实体肿瘤的多肽。此多肽经过了聚乙二醇修饰，其序列为mPEG-SC10k-MVIVEFCK是全新的序列，它们可以在体外抑制VEGFR2酪氨酸激酶活性，并在体内试验中提高荷瘤小鼠生存率，具有潜在的新药开发价值。
【专利说明】一种聚乙二醇修饰的抑制VEGFR2酪氨酸激酶多肽及其应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及聚乙二醇修饰的VEGFR2酪氨酸激酶抑制剂及其应用，具体涉及具有抑制VEGFR2酪氨酸激酶活性、可治疗实体肿瘤的的多肽。
【背景技术】
[0002]研究表明，实体瘤的生长依赖于新生血管生成，新生血管不仅可以提供肿瘤所需要的营养和氧气，排泄代谢产物，而且是远处转移的途径。因此，阻断新生血管形成可能成为阻止肿瘤生长和转移的手段，从而激发了对促血管生成分子和抗血管生成分子的广泛研究。
[0003]相比传统肿瘤治药物疗，肿瘤血管生成抑制剂最大优点在于:①选择性作用于血管内皮细胞，全身毒副作用小；②靶细胞为血管内皮细胞，药物易从血液中到达与之接触发生作用；+1'血管内皮细胞无或少突变，不易产生耐药性，可长期用药；?可与放化疗方法联合应用并减轻后者的毒副反应。
[0004] 血管内皮生长因子受体2 (VEGFR2)亦称含激酶插入域的受体(KDR)，属于受体酪氨酸激酶超家族。血管内皮生长因子受体2在新生血管生成过程中起着主要的作用。其配体VEGF通过刺激细胞表面VEGFR2活化内皮细胞，发生生化信号的复杂级联与细胞外基质组分和可溶性因子相互作用，导致腔管形成并且分化成成熟的血管。另外，这些被活化的细胞经过细胞增殖过程，来提高细胞粘附分子的表达，增加蛋白水解酶的分泌，增加细胞迁移和侵袭。目前，靶向KDR的抑制剂已成为开发新兴抗血管新生药物的研究热点。尽管如此，并没有成熟开发的血管内皮生长因子受体2酪氨酸激酶多肽抑制剂问世，用于治疗实体瘤。
[0005]MVIVEFCK是一个全新的序列，前期的研究表明，该多肽经反复体内外活性评价证实具有较好的抑瘤效果，能够显著抑制VEGFR2酪氨酸激酶活性。然而上述多肽的半衰期短，拟用临床人的给药是每天静脉滴注，这给患者带来了一定的痛苦。
[0006]文献报道中，对分子结构进行修饰或改造是解决半衰期较短、需连续给药问题的常用方法，其中以化学修饰应用最为广泛，常用的化学修饰剂有聚乙二醇(polye thyleneglycol, PEG)、葡聚糖、聚氨基酸、聚酸酐等。PEG具有无毒、无免疫原性、水溶性好的特点，被美国食品与药物管理局(FDA)认可作为药品的辅助原料和修饰剂。蛋白质类药物经PEG修饰后，分子量增加，肾小球的滤过率减少，PEG的屏障作用保护了蛋白质不易被蛋白水解酶水解，同时减少了中和抗体的产生，这些均有助于蛋白质类药物生物半衰期的延长。目前已有多种PEG修饰的蛋白质类药物上市销售。但PEG修饰同时也可能影响蛋白质的生物学活性，其影响大小与修饰剂、修饰条件及蛋白质本身的性质有关。对于具体的蛋白质，其最佳修饰需通过制备PEG修饰的蛋白质及生物活性研究来决定。合成小分子多肽的PEG修饰研究起步较晚，但已引起不少研究者的关注。
【发明内容】
[0007]发明目的
本发明针对mPEG-SC-MVIVEFCK做了进一步研究，发现其在降低给药频率的情况下对多种肿瘤有治疗作用。
[0008]技术方案
一种聚乙二醇修饰的抑制VEGFR2酪氨酸激酶多肽，其特征在于其序列为mPEG-SC1(lk-MVIVEFCK。mPEG-SC 的分子量为 5000-20000。一种聚乙二醇修饰的抑制 VEGFR2酪氨酸激酶多肽在制备治疗肿瘤药物中的应用，其特征在于所述的肿瘤为起源于人的胃部、皮肤、头颈部、甲状腺、胰腺、肺脏、食管、乳腺、肾脏、胆囊、结肠/直肠、卵巢、子宫、子宫颈、前列腺、膀胱、睾丸的原发/继发的癌或肉瘤。
[0009]有益效果
为了延长多肽MVIVEFCK的半衰期，我们采用不同分子量的聚乙二醇(PEG)对此多肽进行了修饰，发现mPEG-SC1Qk-MVI VEFCK具有延长半衰期，但又不影响其体内外活性的特点。一个多肽的修饰产物属于一个新型分子，往往与修饰前的分子在活性上产生不同的效果。本发明针对上述聚乙二醇修饰的VEGFR2酪氨酸激酶抑制剂mPEG-SC1Qk-MVIVEFCK对多种肿瘤有治疗作用进行了大量的体内外活性研究，发现给药频率降低的情况下，mPEG-SC10k-MVIVEFCK对抑制多种肿瘤生长保持了很好的活性，拓展了其社会价值和经济价值。
【具体实施方式】
[0010]本发明涉及多肽由吉尔生化(上海)有限公司合成。
[0011]实施例1` 聚乙二醇修饰的VEGFR2酪氨酸激酶抑制剂对体外培养肿瘤细胞的生长和存活IC50。
[0012]采用MTT比色法。将对数生长的U937细胞，以1.0X 105加入96孔培养板中，培养24h，实验孔、阳性药物对照孔分别加入不同浓度的实验药物聚乙二醇修饰的VEGFR2酪氨酸激酶抑制剂和阳性对照药物紫杉醇；空白组加入相同体积的溶剂。每孔设五个复孔，培养4811，分别在他、211、811、1411、2011、2411、3611、，4811每孔加入MTT，作用4h后，加入DMS0，孵育30min，在酶标仪620nm处测定吸光度A值，按公式肿瘤细胞生长抑制率=(1-实验组吸光值/对照组吸光值)X 100%。计算出实验药物的IC50为2.23 μ M。
[0013]实施例2
用肿瘤模型检测聚乙二醇修饰的VEGFR2酪氨酸激酶抑制剂的体内活力。
[0014]建立U937肿瘤模型，阳性对照药物紫杉醇；空白组加入相同体积的溶剂，实验组设3个剂量:0.75、1.5 μ Μ、3 μ M mg/Kg。21天后，观察小鼠存活数量，计算存活率。结果显示，聚乙二醇修饰的VEGFR2酪氨酸激酶抑制剂可有效地保护小白鼠，提高荷瘤小鼠的生存率，生存率达到89.1%。
【权利要求】
1.一种聚乙二醇修饰的抑制VEGFR2酪氨酸激酶多肽，其特征在于其序列为mPEG-SC-MVIVEFCK。
2.根据权利要求1所述的一种聚乙二醇修饰的抑制VEGFR2酪氨酸激酶多肽，其特征在于所述的mPEG-SC的分子量为10000。
3.根据权利要求1所述的一种聚乙二醇修饰的抑制VEGFR2酪氨酸激酶多肽在制备治疗肿瘤药物中的应用，其特征在于所述的肿瘤为起源于人的胃部、皮肤、头颈部、甲状腺、胰腺、肺脏、食管、乳腺、肾脏、胆囊、结肠/直肠、卵巢、子宫、子宫颈、前列腺、膀胱、睾丸的原发/继发的癌或肉瘤。
【文档编号】A61P35/00GK103739672SQ201310748724
【公开日】2014年4月23日 申请日期:2013年12月31日 优先权日:2013年12月31日
【发明者】罗瑞雪 申请人:罗瑞雪