包埋共轭亚油酸的蜡质玉米纳米淀粉的制备工艺流程的制作方法
【专利摘要】一种包埋共轭亚油酸的蜡质玉米纳米淀粉的制备工艺流程，包括：称取脱脂的蜡质玉米淀粉10-20g溶于100ml缓冲溶液中，将蜡质玉米淀粉悬液沸水浴充分糊化40min后冷却至58℃保温，加入30aspu/g干基淀粉的普鲁兰酶进行脱支处理4-12h，离心2-5min后弃去沉淀，保留上清液，沸水浴灭酶处理10-15min，再次离心2min弃去变性的酶，保留上清液，煮沸，称取1g-3g共轭亚油酸溶于5ml，70％乙醇溶液中，将混合溶液加入煮沸的上清液中，边加入边搅拌，处理20-60min，冷却至室温，置于4℃的冰箱中，回生处理8-10h，回生后的纳米颗粒用70％的乙醇溶液水洗3-4次，将水洗后的纳米颗粒经-70℃冷冻后，真空冷冻干燥制得成品。
【专利说明】包埋共辆亚油酸的蜡质玉米纳米淀粉的制备工艺流程
【技术领域】
[0001] 本发明涉及纳米胶囊化技术对共辆亚油酸进行包埋处理领域，尤其涉及一种包埋 共辆亚油酸的蜡质玉米纳米淀粉的制备工艺流程。
【背景技术】
[0002] 共辆亚油酸是亚油酸的同分异构体，是一系列在碳9、11或10、12位具有双键的亚 油酸的几何异构体，是含有共辆双键的一系列十八碳二帰酸的混合物，是普遍存在于人和 动物体内的营养物质。
[0003] 大量研究表明共辆亚油酸具有多种重要生理生化功能，例如抗肿瘤、抗氧化、抗动 脉粥样硬化、提高免疫力、防止骨质疏松、防治高血压和糖尿病等。而共辆亚油酸几乎不溶 于水，易于氧化，且在胃肠道中稳定性较低，利用率较低，从而造成损失。将共辆亚油酸进行 包埋，可W有效地保护和运送共辆亚油酸，并减少其在胃部消化，实现共辆亚油酸的肠道内 释放，将有效提高共辆亚油酸的利用率。
[0004] 纳米淀粉在医学检验诊断技术方面、药物治疗方面、健康预防方面都起着关键的 作用，尤其是在药物治疗方面取得了很大的成功。纳米淀粉因其原料价格低廉、生物兼容性 好并可生物降解而具有较好的载药性。由于纳米淀粉微粒体积小、比表面积大，因而其吸附 能力比普通淀粉微粒高很多。
[0005] 现有技术中已经有制备纳米淀粉的方法，比如利用酸溶解淀粉颗粒无定形区制备 淀粉纳米晶，但其产率较低，较难大规模制备，随着酸解时间的延长，淀粉纳米颗粒的结晶 度逐渐升高，酸水解IOd后结晶度达到78. 7%。透射电镜照片显示所得淀粉纳米晶的形状 绝大部分为多边形，粒径一般为40?lOOnm。比如还有利用溶液交联法制备得到的纳米淀 粉微细颗粒，但是所制得的纳米淀粉微细颗粒仍然存在一定的结晶结构，而其天然淀粉的 结晶结构已被损坏，它的结晶度远低于天然淀粉。
[0006] 因此，有必要提供一种包埋共辆亚油酸的蜡质玉米纳米淀粉的制备工艺流程W解 决共辆亚油酸包埋的问题。
【发明内容】
[0007] 有鉴于此，本发明的目的在于提供一种包埋共辆亚油酸的蜡质玉米纳米淀粉的制 备工艺流程，通过采用纳米淀粉包埋共辆亚油酸，可W提高其生物利用率。
[000引为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
[0009] -种包埋共辆亚油酸蜡质玉米纳米淀粉的制备工艺流程，包括步骤：
[0010] Sl ;称取脱脂的蜡质玉米淀粉10-20g溶于IOOml缓冲溶液中，将蜡质玉米淀粉息 液沸水浴充分糊化40min后冷却后至58C保温；
[0011] S2 ;加入30aspu/g干基淀粉的普鲁兰酶进行脱支处理4-12h，离也2-5min后弃去 沉淀，保留上清液，沸水浴灭酶处理l〇-15min，随后再次离也2min弃去变性的酶，保留上清 液，煮沸；
[0012] S3 ;称取l-3g共辆亚油酸溶于5ml，70 %己醇溶液中，将混合溶液加入煮沸的上清 液中，边加入边揽拌，处理20-60min，冷却至室温，置于4-5CTC的环境中，回生处理8-36h， 回生后的纳米颗粒用70%的己醇溶液水洗3-4次，W除去缓冲溶液，保留水洗液于大烧杯 中备用，W测定共辆亚油酸包埋率，水洗后的纳米颗粒经-7〇°C冷冻后，真空冷冻干燥制得 成品。
[0013] 从上述技术方案可W看出，本发明可W探究包埋有共辆亚油酸的蜡质玉米纳米淀 粉的理化指标及性质，W期为天然抗氧化活性成分纳米淀粉缓释胶囊的研制提供一定参 考。
【专利附图】
【附图说明】
[0014] 图1为本发明包埋共辆亚油酸的蜡质玉米纳米淀粉的制备工艺流程图。
[0015] 图2为不同浓度共辆亚油酸吸光度。
[0016] 图3为蜡质玉米淀粉纳米颗粒粒径分析图。
[0017] 图4为共辆亚油酸纳米缓释胶囊粒径分析图。
[0018] 图5为蜡质玉米纳米淀粉及包埋共辆亚油酸的蜡质玉米纳米淀粉颗粒X射线衍射 图。
[0019] 图6为蜡质玉米纳米淀粉淀粉、蜡质玉米纳米淀粉淀粉，包埋共辆亚油酸的蜡质 玉米纳米淀粉W及包埋共辆亚油酸的蜡质玉米纳米淀粉颗粒吸热谱图。
[0020] 图7为蜡质玉米纳米淀粉扫描电镜图。
[0021] 图8为共辆亚油酸蜡质玉米纳米淀粉扫描电镜图。
[0022] 图9为不同消化时间共辆亚油酸吸光度。
【具体实施方式】
[0023] 本发明公开了一种包埋共辆亚油酸的蜡质玉米纳米淀粉的制备工艺流程，通过采 用纳米淀粉包埋共辆亚油酸，可W提高其生物利用率。
[0024] 如图1所示，本发明公开的一种包埋共辆亚油酸蜡质玉米纳米淀粉的制备工艺流 程，其包括步骤：
[002引 Sl ;称取脱脂的蜡质玉米淀粉10-20g溶于IOOml缓冲溶液中，将蜡质玉米淀粉息 液沸水浴充分糊化40min后冷却后至58C保温；
[0026] S2 ;加入30aspu/g干基淀粉的普鲁兰酶进行脱支处理4-12h，离也2-5min后弃去 沉淀，保留上清液，沸水浴灭酶处理l〇-15min，随后再次离也2min弃去变性的酶，保留上清 液，煮沸；
[0027] S3 ;称取l-3g共辆亚油酸溶于5ml，70 %己醇溶液中，将混合溶液加入煮沸的上清 液中，边加入边揽拌，处理20-60min，冷却至室温，置于4-5CTC的环境中，回生处理8-36h， 回生后的纳米颗粒用70%的己醇溶液水洗3-4次，W除去缓冲溶液，保留水洗液于大烧杯 中备用，W测定共辆亚油酸包埋率，水洗后的纳米颗粒经-7〇°C冷冻后，真空冷冻干燥制得 成品。
[0028] 所述步骤Sl中采用索氏抽提法对蜡质玉米淀粉进行脱脂处理备用。
[0029] 所述步骤Sl中制备缓冲溶液的方法为；称取7. Ig磯酸氨二轴溶于250ml水中，称 取4. 803g巧樣酸溶于250ml水中，二者混合，调节抑至4. 6,制备磯酸氨二轴-巧樣酸缓冲 溶液。按照比例，相应增加一倍，水量增加一倍，都可W，只要浓度对就行，抑保持在4. 6。
[0030] 所述步骤S3中，置于4C的冰箱中时，回生处理时间为8-lOh ;置于25C的环境 中，回生时间为16h ;置于5(TC的环境中，回生时间为36h。
[0031] 上述技术方案的一个具体实施例为：采用索氏抽提法对蜡质玉米淀粉进行脱脂处 理备用。称取7. Ig磯酸氨二轴溶于250ml水中，称取4. 803g巧樣酸溶于250ml水中，二者 混合，调节抑至4. 6,制备磯酸氨二轴-巧樣酸缓冲溶液。称取脱脂的蜡质玉米淀粉15g溶 于IOOml缓冲溶液中。将蜡质玉米淀粉息液沸水浴充分糊化40min后冷却至58C保温，力口 入30aspu/g干基淀粉的普鲁兰酶进行脱支处理4-5h。离也2min后弃去沉淀，保留上清液， 沸水浴灭酶处理15min，随后再次离也2min弃去变性的酶，保留上清液，煮沸。称取2. 5g共 辆亚油酸溶于5ml，70 %己醇溶液中，将混合溶液加入煮沸的上清液中，边加入边揽拌，处理 20min。冷却至室温，置于4°C的冰箱中，回生处理8-lOh。回生后的纳米颗粒用70%的己 醇溶液水洗3-4次，W除去缓冲溶液。保留水洗液于大烧杯中备用，W测定共辆亚油酸包埋 率。水洗后的纳米颗粒经-7〇°C冷冻后，真空冷冻干燥制得成品，备用。
[0032] 上述技术方案的又一个具体实施例为；采用索氏抽提法对蜡质玉米淀粉进行脱脂 处理备用。称取7. Ig磯酸氨二轴溶于250ml水中，称取4. 803g巧樣酸溶于250ml水中，二 者混合，调节抑至4. 6,制备磯酸氨二轴-巧樣酸缓冲溶液。称取脱脂的蜡质玉米淀粉20g 溶于IOOml缓冲溶液中。将蜡质玉米淀粉息液沸水浴充分糊化40min后冷却至58C保温， 加入30aspu/g干基淀粉的普鲁兰酶进行脱支处理5-12h。离也4min后弃去沉淀，保留上清 液，沸水浴灭酶处理lOmin，随后再次离也2min弃去变性的酶，保留上清液，煮沸。称取2g 共辆亚油酸溶于5ml，70 %己醇溶液中，将混合溶液加入煮沸的上清液中，边加入边揽拌，处 理40min。冷却至室温，置于25C的环境中，回生处理16h。回生后的纳米颗粒用70%的己 醇溶液水洗3-4次，W除去缓冲溶液。保留水洗液于大烧杯中备用，W测定共辆亚油酸包埋 率。水洗后的纳米颗粒经-7〇°C冷冻后，真空冷冻干燥制得成品，备用。
[0033] 基于蜡质玉米纳米淀粉测定共辆亚油酸包埋率的过程如下。
[0034] 绘制共辆亚油酸标准曲线的方法为：
[00巧]称取0.25肖共辆亚油酸溶于1〇1111，70%的己醇溶液中，制成25111肖/1111的标准溶液， 摇匀备用。分别取 1. 〇ml、2. 0ml、3. 0ml、4. 0ml、5. 0ml、6. 0ml、7. 0ml、8. 0ml、9. 0ml、10. Oml 标准溶液于容量瓶中，加入70%己醇溶液配制成IOOml溶液，分别取Iml各容量瓶中溶 液，再次定容至 IOOml，制成浓度为 2. 5ug/ml、5. Oug/ml、7.加g/ml、10. Oug/ml、12. 5ug/ml、 15. Oug/ml、17. 5ug/ml、20. 0ug/ml、22. 5ug/ml、25. Oug/ml 的溶液。在 234nm波长下，W 70% 己醇溶液为空白，对其吸光度进行测定，并绘制标准曲线。
[0036] 包埋共辆亚油酸的蜡质玉米纳米淀粉的制备工艺流程包埋率的计算方法为：
[0037] 将上述中回生后的淀粉纳米颗粒的水洗液，定容至1000ml。吸取Iml定容后的水 洗液稀释10倍，在234nm波长下测定其吸光度，并代入共辆亚油酸标准曲线计算共辆亚油 酸的含量，按下式求得包埋率。
[0038] 包埋率=(ml-m2)/mlX100%
[0039] 其中，ml为进行包埋的共辆亚油酸总量（g) ;m2为上述具体实施例中，水洗液中共 辆亚油酸的含量（g)。
[0040] 共辆亚油酸纳米缓释胶囊粒径的变化为：
[0041] 采用动态光散射仪测定其粒径。配制0. 1 %的共辆亚油酸纳米缓释胶囊息液，在室 温条件下，超声处理5min，用移液枪吸取Iml溶液沿比色皿边缘一角慢慢注入，放入测试台 中间进行测试，每个样品分别测试3次，取平均值。
[0042] 射线衍射仪测定：
[004引平衡样品水分含量至20%恒定，X-射线衍射测定条为；CuK。福射，管压40kV，管流 30mA，扫描速度4° /min,扫描范围2 0 ;4?40。，步长0.02。，接受狭缝0.2mm，通过软件 MDI化de 5.0计算结晶度。
[0044] 共辆亚油酸纳米缓释胶囊的吸热谱图：
[0045] 用DSC测定共辆亚油酸纳米缓释胶囊吸热谱图，称取IOm左右的样品于铅制巧巧 中，加入两倍质量比的蒸觸水，将巧巧盖压紧后，平衡水分，过夜。然后W 10°c /min的速率 升温，温度范围为25?135C，分别测定T。（起始温度）、Tp (峰值温度）、Tf (终止温度）及 烙值（AH)的变化情况，并进行重新扫描。实验平行测定3次。
[0046] 共辆亚油酸纳米缓释胶囊的颗粒形貌：
[0047] 采用扫描电子显微镜观察，取IOmg的样品置于10血超纯水中，超声波处理10分 钟，取一滴样品于导电胶上，冷冻干燥后喷金，并将处理后样品存于干燥器中，电流设置为 3mA，加速电压为IOkv,观测并拍摄具有代表性淀粉颗粒形貌。
[0048] 体外模拟肠胃道环境测定释药性：
[0049] 胃蛋白酶溶液的配置：称取0.35g胃蛋白酶溶于50ml 0. OlmoVUPH = 2)的盐酸 中。膜蛋白酶溶液的配置；称取0. 〇27g磯酸二氨钟，0. 14?磯酸氨二轴，0.地氯化轴，0. 02g 氯化钟溶于IOOml蒸觸水中，称为PBS溶液。再称取2. 5g膜蛋白酶溶于50ml PBS溶液中。
[0050] 取适量胃蛋白酶溶液备用，均置于37C预热lOmin，备用。
[0051] 称取样品2. 5g溶于9ml，0. Olmol/UpH = 2. 0)的盐酸溶液作为消化底物备用。
[0052] 吸取胃蛋白酶溶液Iml加入底物中（酶：底物=1 : 35(w/w))，37°C保温，模拟胃 部环境消化化，然后用0. 9mol/L的碳酸氨轴溶液将消化液的抑调为5. 3,再用2mol/L的 氨氧化轴溶液再将消化液的抑调至7. 5。取Iml膜酶溶液加入到消化液中在37C模拟肠 消化化。
[0053] 均每隔一小时取样检测，每次取出的消化液样品置于沸水浴中灭酶处理lOmin，冷 却至室温后，按消化时间顺序分别标号1-6号。同时，将1-6号试管均用抑=2. 0的肥1 稀释4倍，并分别在234nm波长下，测定其吸光度。
[0054] 如图2所示，由图2可W看出，随着共辆亚油酸浓度的增加，其在70%己醇溶液中 的吸光度也逐渐增加，并呈现线性规律。
[00巧]对其在234nm出的吸光度值进行线性回归所得上图，其回归方程为y = 0. lOOlx+0. 0621，其相关系数R2 = 0. 9971，因此，在2. 5-22. 5ug/ml范围内线性关系良好。
[0056] 共辆亚油酸纳米缓释胶囊的包埋率：
[0057] 采用石英皿在234皿波长下，W 70%己醇溶液为空白测定，测得上述共辆亚油酸 纳米缓释胶囊包埋率的计算中水洗液吸光度为2. 699A。
[0058] 由共辆亚油酸标准曲线计算，当吸光度为2. 699A时，代入回归方程，求得其共辆 亚油酸浓度为26. 37ug/ml，则水洗液中共辆亚油酸的量为26. 37 X 10 X 1000 = 263700ug = 0.2637g。
[0059] 故包埋率=(2. 5-0. 2637)/2. 5X 100%= 89. 45%
[0060] 如图3及图4所示，包埋共辆亚油酸的蜡质玉米纳米淀粉的粒径变化。
[0061] 如图3所示，普通蜡质玉米淀粉纳米颗粒的粒径大部分分布在50nm-122nm范围 内，包埋共辆亚油酸的蜡质玉米淀粉纳米颗粒的粒径大部分分布在330nm-390nm范围内， 粒径波动范围较窄。包埋共辆亚油酸的蜡质玉米淀粉纳米颗粒的粒径明显比未包埋共辆亚 油酸蜡质玉米淀粉纳米颗粒的粒径大，但仍为纳米级，不会影响纳米缓释胶囊的缓释效果。
[0062] 射线衍射仪测定：
[0063] 如图4所示，淀粉结晶度受多种因素影响。现有技术中有人通过研究水分与淀粉 结晶度的关系发现，水分含量在10% -50 %范围内时，其含量对淀粉颗粒中的双螺旋结构 比例没有影响，而当其含量降低至1% -3%范围内时，就会明显降低双螺旋结构的比例。有 人对不同颗粒大小的淀粉进行研究表明，当淀粉颗粒从大到小变化时，淀粉的结晶度也随 之从大到小发生变化。淀粉颗粒的结晶度也会受到脂质体的含量的影响，因为颗粒中脂肪 和蛋白质可W与直链淀粉相互作用，从而使得V-型结构的晶体形成，含量过多就会影响淀 粉颗粒原有结构。
[0064] 由图4中可W看出蜡质玉米淀粉纳米颗粒在5.6°、15°、17°、22°、24°有明显 结晶峰，属于典型的B+V型淀粉结晶。而包埋共辆亚油酸的淀粉纳米颗粒的晶型基本不变， 特征峰强度增强；在19. 5°处的V型淀粉特征峰更加明显；结晶度显著提高，由未包埋前的 55. 41 %增大至77. 20%。其原因可能是共辆亚油酸加入后，被包埋入蜡质玉米淀粉短直链 螺旋空腔中，导致淀粉纳米颗粒晶型略微改变，结晶度显著提高。
[0065] 包埋共辆亚油酸的蜡质玉米纳米淀粉的吸热谱图分析：
[0066] 表1包埋共辆亚油酸的蜡质玉米纳米淀粉吸热谱图参数
[0067] Table. 1. The parameter of the waxy corn nano-starch with conjugated Iinoleic acid' s DSC
[006引
【权利要求】
1. 一种包埋共轭亚油酸蜡质玉米纳米淀粉的制备工艺流程，其特征在于：包括步骤： 51 :称取脱脂的蜡质玉米淀粉10_20g溶于100ml缓冲溶液中，将蜡质玉米淀粉悬液沸 水浴充分糊化40min后冷却后至58°C保温； 52 :加入30aspu/g干基淀粉的普鲁兰酶进行脱支处理4-12h，离心2-5min后弃去沉 淀，保留上清液，沸水浴灭酶处理l〇_15min，随后再次离心2min弃去变性的酶，保留上清 液，煮沸； 53 :称取l-3g共轭亚油酸溶于5ml，70%乙醇溶液中，将混合溶液加入煮沸的上清液 中，边加入边搅拌，处理20-60min，冷却至室温，置于4-50°C的环境中，回生处理8-36h，回 生后的纳米颗粒用70%的乙醇溶液水洗3-4次，以除去缓冲溶液，保留水洗液于大烧杯中 备用，以测定共轭亚油酸包埋率，水洗后的纳米颗粒经_70°C冷冻后，真空冷冻干燥制得成 品。
2. 根据权利要求1所述的包埋共轭亚油酸的蜡质玉米纳米淀粉的制备工艺流程，其特 征在于：所述步骤S1中采用索氏抽提法对蜡质玉米淀粉进行脱脂处理备用。
3. 根据权利要求1所述的包埋共轭亚油酸的蜡质玉米纳米淀粉的制备工艺流程，其特 征在于：所述步骤S1中制备缓冲溶液的方法为：称取7. lg磷酸氢二钠溶于250ml水中，称 取4. 803g柠檬酸溶于250ml水中，二者混合，调节pH至4. 6,制备磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲 溶液。
4. 根据权利要求1所述的包埋共轭亚油酸蜡质玉米纳米淀粉的制备工艺流程，其特征 在于：所述步骤S3中，置于4°C的冰箱中时，回生处理时间为8-10h。
5. 根据权利要求1所述的包埋共轭亚油酸蜡质玉米纳米淀粉的制备工艺流程，其特征 在于：所述步骤S3中，置于25°C的环境中，回生时间为16h。
6. 根据权利要求1所述的包埋共轭亚油酸蜡质玉米纳米淀粉的制备工艺流程，其特征 在于：所述步骤S3中，置于50°C的环境中，回生处理时间为36h。
【文档编号】A61K9/51GK104224751SQ201410478202
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2014年9月15日 优先权日:2014年9月15日
【发明者】孙庆杰, 熊柳, 李晓静, 秦洋, 姬娜 申请人:青岛农业大学