茜素紫在制备治疗癌症药物中的应用的制作方法

本发明属于生物制药
技术领域：
，更加具体地说，涉及茜素紫在制备治疗癌症药物中的应用。
背景技术：
：卫生部《中国癌症预防与控制规划纲要》中明确指出“癌症正在成为人类第一杀手而中国癌症的危害日趋严重”。癌症属于恶性肿瘤，目前在我国，每5个死亡的人中就有一个是癌症患者。而在0-64岁人群中，每4个死亡的人中就有一个是癌症患者.目前已知的癌症种类超过200种，在此其中肾癌，肺癌，肝癌，胃癌被我国列为多发的癌症类型。在过去20年间，癌症发病率以平均每年6.5％的速度迅猛增长。癌症其临床特征表现除了细胞无节制扩增，形成局部肿瘤肿块以外，还伴随着多种并发症。针对于癌症存在着如下的研究现状：1、基础研究缺乏，生物标记物未明：相对于其他的疾病，若干癌症目前仍然缺少可以信赖的生物标记物可以用来进行预测。绝大多数患者错失了治疗最宝贵时期，不得不采取手术或者其他具有风险的治疗方式。2、临床治疗手段单一，术后复发明显。3、治疗药物功效有待验证，副作用不可避免。技术实现要素：本发明的目的在于克服现有技术的不足，针对癌症治疗的需要，提供茜素紫在制备治疗癌症药物中的应用。本发明的技术目的通过下述技术方案予以实现：茜素紫在制备治疗癌症药物中的应用，所述茜素紫的化学式如下：选择将茜素紫溶解在HCL-PBS缓冲溶液(即盐酸磷酸盐的缓冲溶液)中，pH值为2—4，优选2.5—3。治疗癌症的药物，由如下结构式的药效成分茜素紫(Gallein，化学式是C20H12O7)和药剂学上可接受的辅料组成药物有效成分茜素紫溶解在HCL-PBS缓冲溶液(即盐酸磷酸盐的缓冲溶液)中，pH值为2—4，优选2.5—3。治疗癌症的药物的剂型为注射针剂。药物有效成分茜素紫溶解在HCL-PBS缓冲溶液(即盐酸磷酸盐的缓冲溶液)中，选择80—150mg茜素紫溶解在100—300ml的盐酸磷酸盐(HCL-PBS)缓冲液中，优选100—120mg茜素紫溶解在200—250ml的盐酸磷酸盐(HCL-PBS)缓冲液中。中国发明专利“一种治疗肾脏囊肿的药物”(申请号2013106492039，申请日2013年12月6日)公开了PH＝7.7中性磷酸盐缓冲液中溶解的茜素紫对于多囊肾这种多发的疾病有着很好的治疗效果。与之相比，在本发明的技术方案中，将茜素紫溶解在酸性溶液中(pH值为2—4的盐酸磷酸盐(HCL-PBS)缓冲液)可以发挥其在癌症(如肾癌、肺癌、胃癌和肝癌)方面的作用，使肿瘤面积大幅度降低，存活率也大大增加。附图说明图1是本发明中进行动物实验的实验设计流程图。图2是本发明中恶性肿瘤细胞(ACHN)皮下接种后无药物处理(右)和酸性溶液溶解的茜素紫处理过后(左)肿瘤大小的对比照片。具体实施方式下面结合具体实施例进一步说明本发明的技术方案。茜素紫原药保存于零下80度(保存期限约为2年左右)。需要进行药物实验时，先将药物从低温取出，室温加热进行配制。100mg茜素紫溶解在200ml，pH＝2、2.5、3和4的盐酸磷酸盐(HCL-PBS)缓冲液中。实施例1：酸性溶液溶解的茜素紫有效地抑制肾癌小鼠肿瘤增长本实验采取的是ACHN恶性肾癌细胞(1X109)皮下接种的肾癌小鼠模型。出生后14天的裸鼠(胸腺敲除老鼠)皮下注射1X109数量的ACHN恶性肾癌细胞。7天后裸鼠形成皮下肿瘤，进行解剖分析。本发明涉及的实验均分为四组，阴性对照组(无细胞注射裸鼠，无肾癌表型，不给药)；阴性给药组(无细胞注射裸鼠，无肾癌表型，给药)；阳性对照组(ACHN细胞注射裸鼠，有肾癌表型，不给药)；阳性给药组(ACHN细胞注射裸鼠，有肾癌表型，给药)。本发明中主要比对是阳性对照组(ACHN细胞注射裸鼠，有肾癌表型，不给药)；阳性给药组(ACHN细胞注射裸鼠，有肾癌表型，给药)两组的肾脏表型用来证实酸性溶液溶解的茜素紫的药物疗效(如附图1所示，下面实施例中的抑制癌症实验采用相同的设计流程)。腹腔注射的小鼠注射前要进行称重，按照每千克小鼠每天腹腔注射茜素紫100mg给药。茜素紫提前溶解在200ml，PH＝2.5盐酸磷酸盐(HCL-PBS)缓冲液,从出生后14天(皮下注射的那天开始)给药，药物持续一周。一周后进行病理分析。各个实验组小鼠数目如下：阴性对照组(无细胞注射裸鼠，无肾癌表型，不给药)56只；阴性给药组(无细胞注射裸鼠，无肾癌表型，给药)62只；阳性对照组(ACHN细胞注射裸鼠，有肾癌表型，不给药)71只；阳性给药组(ACHN细胞注射裸鼠，有肾癌表型，给药)75只。与人体非常接近，恶性肾癌在小鼠中致死率极高，经过恶性肾癌细胞注射的裸鼠7天后存活率不到10％，而且各项生命指标急剧下降。但是经过酸性溶液溶解的茜素紫腹腔注射以后，肾癌小鼠的存活周期大大延长，可以存活到注射后20天左右(几种癌症小鼠总结见最后的存活率和存活时间的汇总表)。与此同时，我们可以发现酸性茜素紫不仅对于小鼠机体没有明显的毒副作用，注射后还大大提升了生命指标(体重，进食度，体表温度等都非常接近正常野生态小鼠水平)。除了存活率检测，我们随机从四个实验组小鼠中随机抽取若干小鼠进行肿瘤的解剖 病理分析(每个组抽取10个小鼠分析)。我们发现恶性肾癌细胞注射的裸鼠很好的模拟了人体肾癌的形态，肿瘤细胞增值速度很快，小鼠基本上2-3天成瘤明显，我们选取了第7天主要便于对照分析。经过对比可以清晰的发现相比于阳性对照组，阳性给药组的小鼠经过茜素紫处理后(腹腔注射)，肾癌病情大大缓解，肿瘤有了明显的抑制(对比图2中右边和左边肿瘤大小)。pH值注射药物后肿瘤体积/未注射药物肿瘤体积20.372.50.2530.3340.39实施例2：酸性溶液溶解的茜素紫有效地抑制肺癌小鼠肿瘤增长本实验采取的是A549肺癌细胞(1X109)皮下接种的肺癌小鼠模型。出生后14天的裸鼠(胸腺敲除老鼠)皮下注射1X109数量的A549恶性肺癌细胞。7天后裸鼠形成皮下肿瘤，进行解剖分析。本发明涉及的实验均分为四组，阴性对照组(无细胞注射裸鼠，无肺癌表型，不给药)；阴性给药组(无细胞注射裸鼠，无肺癌表型，给药)；阳性对照组(A549细胞注射裸鼠，有肺癌表型，不给药)；阳性给药组(A549细胞注射裸鼠，有肺癌表型，给药)。本发明中主要比对是阳性对照组(A549细胞注射裸鼠，有肺癌表型，不给药)；阳性给药组(A549细胞注射裸鼠，有肺癌表型，给药)两组的肺部表型用来证实酸性溶液溶解的茜素紫的药物疗效。腹腔注射的小鼠注射前要进行称重，按照每千克小鼠每天腹腔注射茜素紫100mg给药。茜素紫提前溶解在200ml，PH＝2.5盐酸磷酸盐(HCL-PBS)缓冲液,从出生后14天(皮下注射的那天开始)给药，药物持续一周。一周后进行病理分析。各个实验组小鼠数目如下：阴性对照组(无细胞注射裸鼠，无肺癌表型，不给药)45只；阴性给药组(无细胞注射裸鼠，无肺癌表型，给药)46只；阳性对照组(A549细胞注射裸鼠，有肺癌表型，不给药)61只；阳性给药组(A549细胞注射裸鼠，有肺癌表型，给药)66只。与人体非常接近，恶性肺癌在小鼠中致死率极高，经过恶性肺癌细胞注射的裸鼠7天 后存活率不到8％，而且各项生命指标急剧下降。但是经过酸性溶液溶解的茜素紫腹腔注射以后，肺癌小鼠的存活周期大大延长，可以存活到注射后18天左右(几种癌症小鼠总结见表2)。与此同时，我们可以发现酸性茜素紫不仅对于小鼠机体没有明显的毒副作用，注射后还大大提升了生命指标(体重，进食度，体表温度等都非常接近正常野生态小鼠水平)。采用实施例1的方法进行肺癌的解剖病理分析，发现与实施例1基本相同的情况，并进行肿瘤体积的对比，如下表所示：pH值注射药物后肿瘤体积/未注射药物肿瘤体积20.342.50.2830.3240.36实施例3：酸性溶液溶解的茜素紫有效地抑制肝癌小鼠肿瘤增长本实验采取的是HepG2肝癌细胞(1X109)皮下接种的肺癌小鼠模型。出生后14天的裸鼠(胸腺敲除老鼠)皮下注射1X109数量的HepG2恶性肝癌细胞。7天后裸鼠形成皮下肿瘤，进行解剖分析。本发明涉及的实验均分为四组，阴性对照组(无细胞注射裸鼠，无肝癌表型，不给药)；阴性给药组(无细胞注射裸鼠，无肝癌表型，给药)；阳性对照组(HepG2细胞注射裸鼠，有肝癌表型，不给药)；阳性给药组(HepG2细胞注射裸鼠，有肝癌表型，给药)。本发明中主要比对是阳性对照组(HepG2细胞注射裸鼠，有肝癌表型，不给药)；阳性给药组(HepG2细胞注射裸鼠，有肝癌表型，给药)两组的肝部表型用来证实酸性溶液溶解的茜素紫的药物疗效。腹腔注射的小鼠注射前要进行称重，按照每千克小鼠每天腹腔注射茜素紫100mg给药。茜素紫提前溶解在200ml，PH＝2.5盐酸磷酸盐(HCL-PBS)缓冲液,从出生后14天(皮下注射的那天开始)给药，药物持续一周。一周后进行病理分析。各个实验组小鼠数目如下：阴性对照组(无细胞注射裸鼠，无肝癌表型，不给药)38只；阴性给药组(无细胞注射裸鼠，无肝癌表型，给药)41只；阳性对照组(HepG2 细胞注射裸鼠，有肝癌表型，不给药)67只；阳性给药组(HepG2细胞注射裸鼠，有肝癌表型，给药)61只。与人体非常接近，恶性肝癌在小鼠中致死率极高，经过恶性肝癌细胞注射的裸鼠7天后存活率不到15％。而且各项生命指标急剧下降。但是经过酸性溶液溶解的茜素紫腹腔注射以后，肝癌小鼠的存活周期大大延长，可以存活到注射后25天左右(几种癌症小鼠总结见表2)。与此同时，我们可以发现酸性茜素紫不仅对于小鼠机体没有明显的毒副作用，注射后还大大提升了生命指标(体重，进食度，体表温度等都非常接近正常野生态小鼠水平)。采用实施例1的方法进行肝癌的解剖病理分析，发现与实施例1基本相同的情况，并进行肿瘤体积的对比，如下表所示：pH值注射药物后肿瘤体积/未注射药物肿瘤体积20.352.50.2430.3040.38实施例4：酸性溶液溶解的茜素紫有效地抑制胃癌小鼠肿瘤增长本实验采取的是MGC803胃癌细胞(1X109)皮下接种的胃癌小鼠模型。出生后14天的裸鼠(胸腺敲除老鼠)皮下注射1X109数量的MGC803恶性胃癌细胞。7天后裸鼠形成皮下肿瘤，进行解剖分析。本发明涉及的实验均分为四组，阴性对照组(无细胞注射裸鼠，无胃癌表型，不给药)；阴性给药组(无细胞注射裸鼠，无胃癌表型，给药)；阳性对照组(MGC803细胞注射裸鼠，有胃癌表型，不给药)；阳性给药组(MGC803细胞注射裸鼠，有胃癌表型，给药)。本发明中主要比对是阳性对照组(MGC803细胞注射裸鼠，有胃癌表型，不给药)；阳性给药组(MGC803细胞注射裸鼠，有胃癌表型，给药)两组的肝胃表型用来证实酸性溶液溶解的茜素紫的药物疗效。腹腔注射的小鼠注射前要进行称重，按照每千克小鼠每天腹腔注射茜素紫100mg给药。茜素紫提前溶解在200ml，PH＝2.5盐酸磷酸盐(HCL-PBS)缓冲液,从出生后14天 (皮下注射的那天开始)给药，药物持续一周。一周后进行病理分析。各个实验组小鼠数目如下：阴性对照组(无细胞注射裸鼠，无胃癌表型，不给药)41只；阴性给药组(无细胞注射裸鼠，无胃癌表型，给药)45只；阳性对照组(MGC803细胞注射裸鼠，有胃癌表型，不给药)63只；阳性给药组(MGC803细胞注射裸鼠，有胃癌表型，给药)70只；与人体非常接近，恶性胃癌在小鼠中致死率极高，经过恶性胃癌细胞注射的裸鼠7天后存活率不到10％。而且各项生命指标急剧下降。但是经过酸性溶液溶解的茜素紫腹腔注射以后，胃癌小鼠的存活周期大大延长，可以存活到注射后22天左右(几种癌症小鼠总结见表2)。与此同时，我们可以发现酸性茜素紫不仅对于小鼠机体没有明显的毒副作用，注射后还大大提升了生命指标(体重，进食度，体表温度等都非常接近正常野生态小鼠水平)。采用实施例1的方法进行胃癌的解剖病理分析，发现与实施例1基本相同的情况，并进行肿瘤体积的对比，如下表所示：pH值注射药物后肿瘤体积/未注射药物肿瘤体积20.332.50.2730.3140.36存活率和存活时间的汇总表癌症种类不同pH值的平均存活率(％)不同pH值的平均存活时间(天)肾癌9.720肺癌7.718肝癌14.625胃癌9.422经不同pH值酸性缓冲液溶解的茜素紫发挥特异性的功效，通过腹腔注射方法进入体内，并且被机体有效的吸收，有效抑制多种癌症肿瘤的大小并且大幅度提升存活周期，即肿瘤面积大幅度降低，存活率也大大增加。根据
发明内容调整茜素紫的质量和酸性溶 液的体积，得到的茜素紫酸性溶液，表现出与实施例基本一致的抗癌性能。茜素紫通过腹腔注射作用到了多种癌症小鼠模型中去，大大提升小鼠的存存活周期，并且有效地抑制了癌症肿瘤的增值和分化。以上对本发明做了示例性的描述，应该说明的是，在不脱离本发明的核心的情况下，任何简单的变形、修改或者其他本领域技术人员能够不花费创造性劳动的等同替换均落入本发明的保护范围。当前第1页1 2 3