控制影响角化细胞和/或成纤维细胞和真皮的皮肤失调和皮肤老化的组合产品和美容组合物的制作方法

本发明涉及一种美容组合产品，该美容组合产品包括含氨基葡萄糖或其盐的第一美容组合物、含透明质酸的第二美容组合物，和可选的含胶原蛋白的第三美容组合物；一种美容组合物，该美容组合物含氨基葡萄糖或其盐、透明质酸，和可选的胶原蛋白；以及该美容组合产品和该美容组合物的应用，尤其用于诱导透明质酸合成，从而对抗(lutter contre)影响角化细胞和/或成纤维细胞和真皮的皮肤老化；以及一种采用这些组合产品和组合物的美容方法。

背景技术：

透明质酸是由糖元重复链构成的大分子，具有水合和组织支持方面的重要性质。含约50％透明质酸的人体皮肤是透明质酸最丰富的器官之一。皮肤中透明质酸的更新迅速，并且每天都在进行。随着衰老，透明质酸的更新发生变化。

因此，需要促进有机体更新透明质酸的量，尤其来防止皮下基质组织的松弛、皱纹出现或皮肤水分的流失。

由此，很多美容品提供了含透明质酸的乳霜，以帮助维持皮肤的水合并且对抗皮肤老化。

但是，口服再引入透明质酸的尝试常常是失败的。实际上，该多糖大分子不能有效穿过肠的屏障。此外，透明质酸由于其生物性质而被迅速降解。

为了克服这一问题，很常用的整形技术包括使用注射器(使用术语“填充剂”)将透明质酸聚合物填充到皱纹或某些皮肤区，以直接使这些皱纹或某些皮肤区丰满起来。

但是，上述技术具有缺点，因为新注射的透明质酸也会随着时间降解，因此必须约每六个月更新一次。

技术实现要素：

因此，本发明的技术问题在于，尤其通过口服，例如作为已存在的局部干预或整形注射的补充物，能刺激透明质酸的内源性合成，从而延长它在皮肤中的合成。

氨基葡萄糖尤其通过口服常用于对抗骨关节炎。实际上，氨基葡萄糖是透明质酸的两种天然成分之一，其中透明质酸对应于由N-乙酰氨基葡萄糖和D-葡萄糖醛酸通过糖苷键连接在一起所构成的双糖二聚物的聚合物链。

与透明质酸的大分子相反，氨基葡萄糖可非常迅速地被生物获取，并且在吸收之后很快在血液循环中发现。它甚至在几个小时后还在血液循环中继续存在(Persiani S.et al.Glucosamine oral bioavailability and plasma pharmacokinetics after increasing doses of crystalline glucosamine sulfate in man.OsteoArthtitis and Cartilage.2005；13:1041-1049)。

由此，氨基葡萄糖可在用于关节健康的透明质酸的内源性合成中用作口服前体。实际上，尤其通过体外植入骨细胞来诱导透明质酸合成是已知的(UItterlinden et al.Glucosamine increases hyaluronic acid production in human osteoarthritic synovium explants.BMC musculoskeletal disorders 2008,9:120-125)。

为了解决与皮肤中合成透明质酸更特别相关的问题，本发明的发明人非常令人惊奇且出乎意料地示出氨基葡萄糖或其盐与透明质酸之间的联合能诱导皮肤细胞(角化细胞)合成透明质酸，而在胶原蛋的存在下，氨基葡萄糖或其盐与透明质酸之间的联合能诱导真皮细胞(成纤维细胞)合成透明质酸。

实际上，尽管本申请的发明人观察到使用氨基葡萄糖或其盐可以诱导角化细胞合成透明质酸，但他们观察到人成纤维细胞对这一效果没有响应。此外，他们还观察到，角化细胞与单独的透明质酸接触不会刺激透明质酸的适当合成，并且，单独的透明质酸或含透明质酸和胶原蛋白的软骨提取物通过与成纤维细胞接触也不会刺激透明质酸的合成。

由此，本发明的发明人非常令人惊奇地发现，氨基葡萄糖或其盐与透明质酸的联合协同性地大幅刺激角化细胞合成透明质酸，并且只有氨基葡萄糖或其盐与透明质酸和胶原蛋白的联合协同性地大幅刺激成纤维细胞合成透明质酸。

因此，基于所获得的效果，这些协同组合能够分别对抗影响角化细胞的皮肤老化，尤其对抗与基质组织损耗相关的老化迹象，并且对抗影响成纤维细胞的皮肤老化，尤其对抗与真皮结缔组织损耗相关的老化迹象。

由此，本发明涉及一种同时施用、独立施用或随时间分散施用的美容组合产品，所述美容组合产品包括含氨基葡萄糖或其盐的第一美容组合物和含透明质酸的第二美容组合物，可选地进一步包括含胶原蛋白的第三美容组合物。

本发明还涉及一种美容组合物，所述美容组合物包括氨基葡萄糖或其盐和透明质酸，可选地进一步包括胶原蛋白。

术语“美容组合产品”或“美容组合物”指要与人体的各表面部位(尤其是表皮、头发和指甲系统、嘴唇和外生殖器)或与口腔中的牙齿和粘膜进行接触的物质或制剂，完全或主要用于对它们进行清洁、美化、使它们散发香气、修饰它们的外表、保护它们、使它们的状态保持良好或消除体臭。还例如提及营养组合物，例如膳食补充剂。

术语“膳食补充剂”在本文中指用于补充正常饮食的食物，该食物是以剂型形式在市场上出售的单独或组合的营养物(即维生素和/或矿物质)的浓缩来源，和/或具有营养或生理效果的其他物质，所述剂型诸如为凝胶胶囊、锭剂、片剂、软胶囊、丸剂和其他类似形式，以及要进行稀释的粉末冲剂(sachets de poudre)、液体安瓿、具有滴管的瓶子和液体配制剂的其他类似形式，或为饮品形式。

本发明不涉及治疗领域。

术语“氨基葡萄糖的盐”指可被配制到美容组合物中的氨基葡萄糖的任意盐，诸如氨基葡萄糖硫酸盐或氨基葡萄糖盐酸盐。具体地，在根据本发明的美容组合产品和美容组合物中所含的氨基葡萄糖盐是氨基葡萄糖硫酸盐。

在本发明的美容组合产品和美容组合物中所含的透明质酸可有多种来源。该透明质酸例如可以是通过生物技术获得的，诸如由细菌合成获得。具体地，在根据本发明的美容组合产品和美容组合物中所含的透明质酸是细菌来源的。在某些实施方式中，透明质酸可包含在含有或能产生例如软骨的任意成分中，所述软骨来自鱼或诸如猪(porc)、食用牛(boeuf)的哺乳动物或家禽，并且更优选来自雏鸡(poulet)的食用来源。

在根据本发明的美容组合产品和美容组合物中所含的胶原蛋白可有多种来源。该胶原蛋白可被包含在含有或能产生例如软骨的任意成分中，所述软骨优选来自鱼或诸如猪、食用牛的哺乳动物或家禽，并且更优选雏鸡的食用来源。胶原蛋白也可来自生物技术生产法，尤其获自细菌菌株。

根据本发明的含氨基葡萄糖或其盐、透明质酸和胶原蛋白的美容组合产品的实施方式，透明质酸和胶原蛋白被包含在同一美容组合物中，并且来自软骨提取物，尤其雏鸡的软骨提取物。

根据本发明的含氨基葡萄糖或其盐、透明质酸和胶原蛋白的美容组合产品的实施方式，透明质酸和胶原蛋白来自软骨提取物，诸如雏鸡的软骨提取物。

具体地，本发明的美容组合产品或美容组合物包括0.0001％～99％的氨基葡萄糖或其盐，尤其包括0.001％～50％的氨基葡萄糖或其盐，更尤其包括0.1％～10％的氨基葡萄糖或其盐。

此外具体地，相对于美容组合产品或美容组合物的总重量，本发明的美容组合产品或美容组合物，更尤其含氨基葡萄糖或其盐、透明质酸和胶原蛋白的美容组合产品或美容组合物包括至少0.1wt％的透明质酸，尤其包括至少2wt％的透明质酸，更尤其包括至少4wt％的透明质酸。

另外，具体地，根据本发明的美容组合产品或美容组合物，更尤其含氨基葡萄糖或其盐和透明质酸的美容组合产品或美容组合物包括0.1％～99％的透明质酸，尤其包括10％～30％的透明质酸，更尤其包括16％～25％的透明质酸。

更具体地，相对于美容组合产品或美容组合物的总重量，本发明的美容组合产品或美容组合物，更尤其含氨基葡萄糖或其盐、透明质酸和胶原蛋白的美容组合产品或美容组合物包括至少0.1wt％的胶原蛋白，优选包括0.1wt％～99wt％的胶原蛋白，尤其包括1wt％～60wt％的胶原蛋白，更尤其包括1wt％～10wt％的胶原蛋白。

根据本发明的实施方式，根据本发明的美容组合产品的美容组合物用于口服施用。

根据本发明的另一实施方式，根据本发明的美容组合产品的美容组合物用于局部施用。

根据本发明的又一实施方式，在本发明的美容组合产品中，含氨基葡萄糖或其盐的美容组合物用于口服施用，而含透明质酸和可选的胶原蛋白的美容组合物用于局部施用。

根据本发明的又一实施方式，在本发明的美容组合产品中，含透明质酸和胶原蛋白的组合物用于口服施用，而含氨基葡萄糖或其盐的组合物用于局部施用。

根据本发明的实施方式，在本发明的含美容组合物(含氨基葡萄糖或其盐、透明质酸和胶原蛋白的美容组合物)的美容组合产品中，含氨基葡萄糖或其盐和胶原蛋白的组合物用于口服施用，而含透明质酸的组合物用于局部施用。

根据本发明的独立实施方式中，在本发明的美容组合产品中，含氨基葡萄糖或其盐和可选的胶原蛋白的美容组合物用于口服施用，而尤其在使用透明质酸制备填充剂的条件下，含透明质酸的美容组合物是要施用到皮肤中的美容填充组合物。

术语“填充组合物”或“填充剂”指填充皱纹(皱纹和永久性沟纹)的组合物，该组合物尤其为凝胶形式。

由此，本发明的美容产品的美容组合物全部口服施用，全部局部施用，或通过不同的施用路径来施用，如上所述，所述美容组合物可彼此独立地同时、独立或以交错的方式来施用。

此外，根据本发明的实施方式，本发明的含氨基葡萄糖或其盐和透明质酸，且可选地进一步含胶原蛋白的美容组合物用于口服施用。

此外，根据本发明的另一实施方式，本发明的含氨基葡萄糖或其盐和透明质酸，且可选地进一步含胶原蛋白的美容组合物用于局部施用，尤其以贴片形式局部施用。

根据本发明的实施方式，美容组合产品或美容组合物不包括除上述列出的成分之外的其他活性成分。

对于口服施用，本发明的美容组合物(包括本发明的美容组合产品的那些形成部分)可为任意合适的形式，并且可采取糖包衣丸剂、凝胶胶囊、悬浮剂、凝胶、乳剂、口服液、要吞咽或要咀嚼的片剂、胶囊(尤其为硬胶囊或软胶囊)、要溶解的颗粒剂、糖浆、片剂或可饮用的安瓿的形式。

优选可为软胶囊或硬胶囊的形式，优选为软胶囊的形式。

具体地，本发明的组合物可以以食物补充剂的所有形式，或压缩或未压缩的粉末形式来使用。所述粉末可稀释在水或苏打中。根据一个实施方式，本发明的口服施用的组合物可配制为糖包衣丸剂、凝胶胶囊、凝胶、乳剂、片剂、胶囊、水凝胶、压缩或未压缩的粉末、悬浮剂或液体溶液。

上述口服组合物可为无水形式或含水形式。

本发明的组合物可与这样的口服组合物(诸如膳食补充剂)的常规赋形剂一起配制，所述常规赋形剂尤其为在营养学领域中常规使用的脂肪性和/或含水组分、湿润剂、增稠剂、防腐剂、纹理剂(des agents de texture)、调味剂和/或包衣剂、抗氧化剂、防腐剂和色素。

在适用于口服施用的组合物的情况中，使用可吸收的载体是有利的。根据所讨论的组合物的类型，可吸收的载体可具有多种性质。

上述组合物的配制可通过本领域技术人员已知的任意常规方法来进行。

对于局部施用至皮肤，本发明的美容组合物可尤其采取以下形式，搽液或乳液类型的水性或油性的溶液或分散剂，通过将脂肪相分散在水相中(O/W)或将水相分散在脂肪相中(W/O)获得的乳状物类型的液体或半液体粘稠度的乳剂，或软式霜，或含水或无水凝胶类型的悬浮剂或乳液，或微囊剂或微粒，或离子型和/或非离子型的泡状分散剂，或泡沫体。这些组合物按照常规方法来制备。

这些美容组合物可例如构成面部的清洁/卸妆、化妆、防护、治疗或护理的霜(例如日霜、晚霜、卸妆霜、粉底霜、防晒霜)，粉底液，卸妆乳，用于防护或护理的身体乳液，防晒乳，搽液，用于皮肤护理的凝胶或泡沫体，诸如卸妆液、防晒露、人工晒黑液、沐浴组合物、含杀菌剂的除臭组合物、须后凝胶或须后液。

上述组合物还可被包装为气溶胶组合物的形式，该气溶胶组合物还含有加压的推进剂。

本发明的美容组合物还可含有美容品领域常用的添加剂，诸如亲水性或亲脂性凝胶剂、亲水性或亲脂性添加剂、防腐剂、抗氧化剂、溶剂、香料、膨胀剂、过滤剂、去味剂和染料。这些多种添加剂的量是美容领域常规使用的那些量，例如为组合物总重量的0.01％～10％。这些添加剂根据它们的性质，可被引入到脂肪相、水相和/或脂质球中。

当然，本领域技术人员可仔细选择这些可能的赋形剂和配制试剂，和/或它们的量，以便本发明的美容组合产品或本发明的美容组合物的活性组分的有利性质不被或基本不被所考虑的赋形剂和配制试剂的添加改变。

例如，根据本发明的美容组合产品具有以下组成：

用于口服施用的片剂产品：

氨基葡萄糖硫酸盐250mg

透明质酸100mg

赋形剂QSP 380mg

例如，根据本发明的美容组合产品具有以下组成：

用于口服施用的片剂产品：

氨基葡萄糖硫酸盐125mg

透明质酸60mg

胶原蛋白5mg

赋形剂QSP 380mg

例如，根据本发明的美容组合物具有以下组成：

局部组合物(保湿乳液)：

透明质酸0.05％

氨基葡萄糖硫酸盐5％

甘油2％

矿物油2.5％

香料0.015％

去矿质水QSP 50mL

例如，根据本发明的另一美容组合物具有以下组成：

局部组合物(保湿乳液)：

透明质酸5％

氨基葡萄糖硫酸盐2％

胶原蛋白0.4％

甘油2％

矿物油2.5％

香料0.015％

去矿质水QSP 50mL

如上所述，本发明的发明人完全令人惊奇且出乎意料地证明了根据本发明的美容组合产品和美容组合物能诱导透明质酸的合成。

更具体地，所述组合产品和组合物可用于诱导皮肤或表皮的透明质酸合成，尤其诱导真皮和/或真皮与表皮交界部上的透明质酸合成。

更具体地，当所述组合产品或美容组合物包括氨基葡萄糖和透明质酸时，所述组合产品和组合物可用于诱导在真皮与表皮的交界部中的表皮的透明质酸合成。

更具体地，当所述组合产品或美容组合物包括氨基葡萄糖、透明质酸和胶原蛋白时，所述组合产品和组合物可用于诱导在真皮以及真皮与表皮的交界部中的皮肤的透明质酸合成。

由此，本发明还涉及如在本发明的上下文中所述的美容组合产品或如在本发明的上下文中所述的美容组合物的美容应用，用于诱导透明质酸合成，尤其用于诱导皮肤或表皮的透明质酸合成，更尤其用于诱导真皮和/或真皮与表皮的交界部中的皮肤或表皮的透明质酸合成。

仍然更具体地，在本发明的上下文中，当所述组合产品或所述美容组合物包括氨基葡萄糖和透明质酸时，由皮肤的角化细胞诱导透明质酸合成；或者，当所述组合产品或所述美容组合物包括氨基葡萄糖、透明质酸和胶原蛋白时，由真皮的皮肤成纤维细胞诱导透明质酸合成。

由此，本发明还涉及根据本发明的美容组合产品或根据本发明的美容组合物的美容应用，用于增强真皮与表皮交界部的透明质酸合成，和/或增强真皮-表皮交界部的真皮和结缔组织中的透明质酸合成。

具体地，当根据本发明的美容组合产品或根据本发明的美容组合物包括氨基葡萄糖和透明质酸时，所述美容组合产品和所述美容组合物可用于加强真皮与表皮交界部的结缔组织的合成，和/或加强真皮-表皮交界部的结缔组织的合成。

具体地，当根据本发明的美容组合产品或根据本发明的美容组合物包括氨基葡萄糖、透明质酸和胶原蛋白时，所述组合产品和所述美容组合物可用于加强真皮与表皮交界部的透明质酸合成，和/或加强真皮-表皮交界部的真皮和结缔组织的透明质酸合成。

具体地，当根据本发明的美容组合产品或根据本发明的美容组合物包括氨基葡萄糖和透明质酸时，所述组合产品和所述美容组合物能够对抗影响角化细胞的皮肤老化；或者，当根据本发明的美容组合产品和根据本发明的美容组合物包括氨基葡萄糖、透明质酸和胶原蛋白时，所述组合产品或所述美容组合物可以对抗影响成纤维细胞的皮肤老化。

更具体地，尤其当根据本发明的美容组合产品或美容组合物包括氨基葡萄糖和透明质酸时，所述组合产品和所述美容组合物可以对抗与基质组织的损耗，皮肤的干燥层纹状的出现相关的老化迹象。

具体地，尤其当根据本发明的美容组合产品或美容组合物包括氨基葡萄糖和透明质酸时，所述组合产品和所述美容组合物可以对抗与基质组织损耗相关的老化迹象，与皱纹、细纹和皮肤松弛的出现相关的老化迹象。

具体地，尤其当根据本发明的美容组合产品或根据本发明的美容组合物包括氨基葡萄糖、透明质酸和胶原蛋白时，所述美容组合产品和所述美容组合物可以对抗与结合组织和真皮组织的损耗相关的老化迹象。

具体地，尤其当根据本发明的美容组合产品或根据本发明的美容组合物包括氨基葡萄糖和透明质酸时，所述美容组合产品和所述美容组合物可以对抗影响表皮的皮肤老化，尤其用于对抗表皮的水合失调和脱皮，尤其对抗由于强烈暴晒而恶化的表皮的水合失调和脱皮。

由此，所述产品和所述组合物可用于改善基于透明质酸的美容治疗的效果和持续时间，该美容治疗诸如为局部治疗、使用填充组合物(“填充剂”)的治疗、使用贴片的治疗等。

所述产品和所述组合物也在别处使用，以增强皮肤水合。

在本发明的上下文中，根据本发明的美容组合产品和美容组合物用于制备重建皮肤和皮下植入物。

因此，本发明还涉及根据本发明的美容组合产品或根据本发明的美容组合物的以下应用，用于对抗影响角化细胞或成纤维细胞的皮肤老化，尤其对抗与基质组织损耗或真皮结缔组织损耗相关的老化迹象，和/或改善基于透明质酸的美容治疗的效果，和/或加强皮肤的水合，和/或用于制备重建皮肤和皮肤植入物。

根据本发明的美容组合产品以及美容组合物也可在用于诱导透明质酸合成的美容方法中使用。

由此，根据本发明的各个方面之一，本发明还涉及一种用于透明质酸合成的美容方法，其中，施用本发明上下文中所述的美容组合产品或本发明上下文中所述的美容组合物，当所述美容组合物或所述美容组合产品包括氨基葡萄糖和透明质酸时，所述方法尤其通过皮肤角化细胞诱导透明质酸合成；或者，当所述美容组合物或美容组合产品进一步包括胶原蛋白时，所述方法尤其通过成纤维细胞诱导透明质酸合成。

具体地，本发明涉及诱导表皮的透明质酸合成，尤其诱导在真皮与表皮交界部的表皮的透明质酸合成的上述美容方法。

由此，根据这些方面之一，本发明涉及上述美容方法，用于加强真皮与表皮交界部，和/或真皮-表皮交界部的结缔组织的合成，和/或用于对抗影响角化细胞或成纤维细胞的皮肤老化，尤其对抗与基质组织损耗或真皮结缔组织损耗相关的老化迹象，和/或用于改善基于透明质酸的美容治疗的效果，和/或用于加强皮肤的水合，和/或用于制备重建皮肤和皮肤植入物。

具体地，根据本发明的美容组合产品以及美容组合物，尤其是含氨基葡萄糖、透明质酸和胶原蛋白的组合产品或美容组合物，也可在美容步骤中使用，该美容步骤经设计用于限制皱纹、细纹和面部松弛的出现，尤其用于对抗在将透明质酸注射到面部和/或所有身体部位上的皮肤中之后皱纹和面部松弛的再现，该面部和/或所有身体部位已经接受了修复性注射步骤，随后或同时接受了整形或美容步骤，但两个步骤之间不超过六个月。

由此，根据本发明的各个方面之一，本发明还涉及一种美容方法，该美容方法用于限制细纹、皱纹和面部松弛的出现，尤其对抗在透明质酸注射到面部和/或身体的所有部位上的皮肤中之后，皱纹和面部松弛的再现，该面部和/或所有身体部位已经接受了修复性注射步骤，随后或同时接受了整形或美容步骤，但两个步骤之间不超过六个月；其中，施用如本发明上下文所述的美容组合产品或如本发明上下文所述的美容组合物，尤其是含氨基葡萄糖、透明质酸和胶原蛋白的组合产品或美容组合物。

根据本发明的美容组合产品以及美容组合物，尤其是含氨基葡萄糖、透明质酸和胶原蛋白的组合产品或美容组合物还可用于延长整形治疗的有效期的美容方法中，该整形治疗使用填充组合物(填充剂)进行，该填充组合物(填充剂)尤其基于注射到皮肤中以填充面部、身体和皱纹的透明质酸。

由此，根据本发明的各个方面的另一方面，本发明还涉及一种延长通过填充组合物(填充剂)进行的美容治疗有效性的持续时间的美容方法，所述填充组合物(填充剂)尤其基于注射到皮肤中以填充面部、身体和皱纹的透明质酸；其中，施用如本发明上下文所述的美容组合产品或如本发明上下文所述的美容组合物，尤其含氨基葡萄糖、透明质酸和胶原蛋白的组合产品或美容组合物。

根据本发明的美容方法的实施方式，口服施用前述组合产品的美容组合物。

根据本发明的美容方法的另一实施方式，局部施用前述组合产品的美容组合物。

根据本发明的美容方法的又一实施方式，在上述美容组合产品中，含氨基葡萄糖或其盐的组合物是口服施用的，而含透明质酸和可选的胶原蛋白的美容组合物是局部施用的。

根据本发明的美容方法的又一实施方式，在根据本发明的美容组合产品中，含透明质酸和可选的胶原蛋白的组合物用于口服施用，而含氨基葡萄糖或其盐的组合物用于局部施用。

根据本发明的美容方法的独立实施方式，在根据本发明的美容组合产品中，含氨基葡萄糖或其盐的组合物是口服施用的，而含透明质酸和可选的胶原蛋白的美容组合物是施用在皮肤中的美容填充组合物。

根据本发明的美容方法的实施方式，在根据本发明的美容组合产品中，含氨基葡萄糖或其盐的组合物和可选的胶原蛋白用于口服施用，而含透明质酸的组合物用于局部施用。

根据本发明的美容方法的另一实施方式，在根据本发明的美容组合产品中，含氨基葡萄糖或其盐和可选的胶原蛋白的美容组合物用于口服施用，而尤其在使用透明质酸制备填充剂的上下文中，含透明质酸的组合物是要施用到皮肤中的美容填充组合物。

此外，根据本发明的美容方法的实施方式，如在本发明上下文中所述的含氨基葡萄糖或其盐、透明质酸和可选的胶原蛋白的美容组合物是口服施用的。

根据本发明的美容方法的另一实施方式，如在本发明上下文中所述的含氨基葡萄糖或其盐、透明质酸和可选的胶原蛋白的美容组合物是局部施用的。

在本说明书中，以“在……至……之间”表示的数值范围包括所列出的下限和上限。

本发明的其他特征和优点将从下面的以例示方式给出的非限制性实施例中显现出来。

附图说明

图1：氨基葡萄糖硫酸盐和透明质酸对NHEK细胞(正常人表皮角化细胞)产生透明质酸的协同效果：(从左至右)示出以下四组结果：

-第一组：利用氨基葡萄糖硫酸盐(μg/ml)和透明质酸(ng/ml)(从左至右)比例如下的氨基葡萄糖硫酸盐和透明质酸的组合获得的NHEK细胞的透明质酸产生：0.25～25μg/ml和40～6000ng/ml；

-第二组：通过透明质酸(ng/ml)比例如下(从左至右)的透明质酸独自获得的NHEK细胞的透明质酸产生：40～6000ng/ml；

-第三组：利用氨基葡萄糖硫酸盐(ug/ml)(从左至右)比例如下的氨基葡萄糖硫酸盐独自获得的NHEK细胞的透明质酸产生：0.25～25μg/ml；和

-第四组：RA对照。

图2：氨基葡萄糖硫酸盐、透明质酸和胶原蛋白对NHDF细胞(正常人真皮成纤维细胞)产生透明质酸的协同效果：(从左至右)示出以下六组结果：

-第一组：利用氨基葡萄糖硫酸盐比例(ug/ml)如下(从左至右)的氨基葡萄糖硫酸盐独自获得的NHDF细胞的透明质酸产生：0.1～100μg/ml；

-第二组：通过透明质酸比例(ng/ml)如下(从左至右)的透明质酸独自获得的NHDF细胞的透明质酸产生：40～6000ng/ml；

-第三组：利用氨基葡萄糖硫酸盐(μg/ml)和透明质酸(ng/ml)比例如下(从左至右)的氨基葡萄糖硫酸盐和透明质酸的组合获得的NHDF细胞的透明质酸产生：0.1～100μg/ml和40～6000ng/ml；

-第四组：仅利用以下比例(ng/ml)的透明质酸和胶原蛋白来源的组合获得的NHDF细胞的透明质酸产生：4～4000ng/ml；

-第五组：利用氨基葡萄糖硫酸盐(μg/ml)以及透明质酸和胶原蛋白来源(ng/ml)比例如下的透明质酸和胶原蛋白来源与氨基葡萄糖硫酸盐的组合获得的NHDF细胞的透明质酸产生：0.1～100μg/ml和4～4000ng/ml；和

-第六组：TGF-β对照。

具体实施方式

实施例

实施例1：氨基葡萄糖硫酸盐和透明质酸对NHEK细胞产生透明质酸的协同效果。

在37℃，5％CO₂条件下，在补充有表皮生长因子(EGF；0.25ng/ml)、垂体浸膏(25μg/ml)和抗生素(庆大霉素25μg/ml)的角化细胞-SFM培养基中，在96孔板中培养正常的人表皮角化细胞，在没有刺激下培养24h。

然后，将氨基葡萄糖和/或透明质酸单独或组合添加到培养基中，其中透明质酸的浓度为40～6000ng/ml，而氨基葡萄糖硫酸盐的浓度为0.25～25μg/ml。在这些条件下培养72小时之后，收集上清液，使用R&D System公司出售的ELISA Duoset Hyaluronan试剂盒(货号DY3614)对这些细胞产生的透明质酸进行量化。

所获得的结果示于图1中，其中示出了仅利用氨基葡萄糖硫酸盐在体外由人角化细胞诱导透明质酸产生。

它们还证明了角化细胞与单独的透明质酸接触不会刺激透明质酸的合成。

但是，通过将氨基葡萄糖硫酸盐和透明质酸组合，明显在体外由人角化细胞协同性地诱导了透明质酸产生。

实际上，本文所观察到的结果能得出如下结论，与施用单独的一种化合物所获得的结果相比，氨基葡萄糖硫酸盐和透明质酸之间具有协同效果，效果增加246％(p<0.001)。

实施例2：氨基葡萄糖硫酸盐、透明质酸和胶原蛋白对透明质酸合成的协同效果。

在37℃，5％CO₂条件下，在补充有谷氨酰胺(2mM)、小牛血清(1％)、青霉素(50U/ml)和链霉素(50mg/ml)的DMEM培养基中培养正常的人真皮成纤维细胞(NHDF)。

然后，将氨基葡萄糖(0.1～100μg/ml)和/或透明质酸(40～6000ng/ml)，和/或胶原蛋白和透明质酸的来源(比例为0.07％～15％)，以4～4000ng/ml的浓度单独或组合添加到培养基中。

在这些条件下培养72小时之后，收集上清液，使用R&D System公司出售的ELISA Duoset Hyaluronan试剂盒(货号DY3614)对这些细胞产生的透明质酸进行量化。

所获得的结果示于图2中，其中示出了通过将氨基葡萄糖硫酸盐、透明质酸和胶原蛋白组合，明显获得了在体外由人成纤维细胞协同性地诱导了透明质酸产生。

实际上，本文所观察到的结果能得出如下结论，与单独施用氨基葡萄糖硫酸盐，或单独施用含透明质酸和胶原蛋白的天然软骨提取物，或仅施用透明质酸和氨基葡萄糖的组合获得的刺激缺乏相比，氨基葡萄糖硫酸盐、透明质酸和胶原蛋白之间具有协同效果。