一种止血材料及其制备方法与应用与流程

本发明属于生物材料领域，具体涉及一种止血材料及其制备方法与应用，进一步具体涉及一种止血材料及其制备方法以及一种用于制备该止血材料的止血试剂盒。

背景技术：

止血材料经过几段发展，由天然棉麻制品到人工高分子材料再到天然高分子材料。现在越来越多的研究者将眼光投在对天然高分子的改性上，通过改性在保留原有无毒、环境友好、生物相容性好、易降解等优点的基础上，增强其对于伤口止血的能力。

现有的止血材料凝血速度低、力学性能差、透析纯化时间长，使用后伤口愈合速度慢。

技术实现要素：

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足提供了一种止血材料及其制备方法。该止血材料凝血速度高、力学性能好、透析纯化时间短，使用后伤口愈合速度较快。

为此，本发明第一方面提供了一种止血材料，其由醛改性海藻酸钠和醛改性透明质酸钠形成的醛改性混合物与胺改性聚天冬酰肼进行希夫碱反应得到。

本发明中，所述醛改性海藻酸钠如式(I)所示；所述醛改性透明质酸钠如式(II)所示；所述胺改性聚天冬酰肼如式(III)所示：

在本发明一些实施例中，所述醛改性混合物中醛改性海藻酸钠与醛改性透明质酸钠的重量比为1∶1。

在本发明一些实施例中，所述醛改性混合物与胺改性聚天冬酰肼的重量比为1∶1。

本发明中，醛改性海藻酸钠的接枝率30-50％。

本发明中，醛改性透明质酸钠的接枝率在30-50％。

本发明中，胺改性聚天冬酰肼的接枝率为80-92％。

在本发明一些实施例中，醛改性海藻酸钠分子量为5100-24700Da。

在本发明一些实施例中，醛改性透明质酸钠分子量为150000-480000Da。

在本发明一些实施例中，胺改性聚天冬酰肼分子量为20000-100000Da，优选胺改性聚天冬酰肼分子量为60000-100000Da，进一步优选胺改性聚天冬酰肼分子量为60000Da。

本发明中，所述止血材料成凝胶态，凝胶强度为1000-6000Pa。

本发明第二方面提供了一种本发明第一方面所述止血材料的制备方法，其包括将醛改性海藻酸钠水溶液和醛改性透明质酸钠水溶液混合形成的醛改性混合物水溶液与胺改性聚天冬酰肼水溶液混合后进行希夫碱反应制得凝胶态止血材料的步骤。

在本发明的一些实施例中，所述醛改性混合物中醛改性海藻酸钠与醛改性透明质酸钠的重量比为1∶1。

在本发明的一些实施例中，所述醛改性混合物与胺改性聚天冬酰肼的重量比为1∶1。

在本发明的一些实施例中，醛改性海藻酸钠水溶液的浓度为0.05-0.25g/mL，优选醛改性海藻酸钠水溶液的浓度为0.10-0.25g/mL。

在本发明的一些实施例中，醛改性透明质酸钠水溶液的浓度为0.05-0.25g/mL，优选醛改性透明质酸钠水溶液的浓度为0.10-0.25g/mL。

在本发明的一些实施例中，胺改性聚天冬酰肼水溶液的浓度为0.1-0.5g/mL，优选胺改性聚天冬酰肼水溶液的浓度0.2-0.5g/mL。

本发明中，所述希夫碱反应的温度为室温。

在本发明的一些实施例中，所述希夫碱反应的时间低于170s，优选所述希夫碱反应的时间低于15s，进一步优选所述希夫碱反应的时间为5-10s。

本发明第三方面提供了一种止血试剂盒，其包括单独或并列设置的料仓A和料仓B，其中，料仓A中含有醛改性海藻酸钠和醛改性透明质酸钠形成的醛改性混合物或含有醛改性海藻酸钠和醛改性透明质酸钠的醛改性混合物水溶液，料仓B含有胺改性聚天冬酰肼或胺改性聚天冬酰肼水溶液。

在本发明的一些实施例中，所述醛改性混合物中醛改性海藻酸钠与醛改性透明质酸钠的重量比为1∶1。

在本发明的一些实施例中，所述醛改性混合物与胺改性聚天冬酰肼的重量比为1∶1。

在本发明的一些实施例中，醛改性海藻酸钠水溶液的浓度为0.05-0.25g/mL，优选醛改性海藻酸钠水溶液的浓度为0.10-0.25g/mL。

在本发明的一些实施例中，醛改性透明质酸钠水溶液的浓度为0.05-0.25g/mL，优选醛改性透明质酸钠水溶液的浓度为0.10-0.25g/mL。

在本发明的一些实施例中，胺改性聚天冬酰肼水溶液的浓度为0.1-0.5g/mL，优选胺改性聚天冬酰肼水溶液的浓度0.2-0.5g/mL。

在本发明的一些实施例中，所述试剂盒还包括与料仓A相连通用于输出醛改性混合物水溶液的注射头A′和与料仓B相连通用于输出胺改性聚天冬酰肼水溶液的注射头B′。

在本发明的另一些实施例中，所述试剂盒还包括同时与料仓A和料仓B相连通用于输出醛改性混合物水溶液和胺改性聚天冬酰肼水溶液的注射头M。

本发明的有益效果是：

(1)本发明所提供的止血材料由醛改性海藻酸钠和醛改性透明质酸钠形成的醛改性混合物与胺改性聚天冬酰肼进行希夫碱反应制得，其凝血速度高、力学性能好，最高能达到6000Pa、透析纯化时间短，使用后伤口愈合速度较快，最快5s凝血，小鼠活体实验肉眼伤口面积观察比纱布快3天比市售海藻酸钠敷料快1天。

(2)本发明所提供的止血试剂盒，操作和使用简便，凝血速度高、使用后伤口愈合速度较快。

附图说明

下面将结合附图来说明本发明。

图1为醛改性海藻酸钠制备原理图。

图2为醛改性透明质酸钠制备原理图。

图3为胺基改姓的聚天冬酰肼制备原理图。

图4为本发明醛改性海藻酸钠和醛改性透明质酸钠中的醛基与胺改性聚天冬酰肼中的酰肼基团反应原理图。

图5为含两个注射头的止血试剂盒的示意图：

图6为含一个注射头的止血试剂盒的示意图；

图5和图6中的附图标记的含义为：A料仓A；B料仓B；A′与料仓A相连通的注射头A′；B′与料仓B相连通的注射头B′；M同时与料仓A和料仓B相连通的注射头M。

图7显示出市售与实验组伤口初期对比结果。

图8显示出市售与实验组伤口处期对比结果。

具体实施方式

为使本发明容易理解，下面将结合附图来详细说明本发明。

如前所述，现有的止血材料凝血速度低、力学性能差、透析纯化时间长，使用后伤口愈合速度慢。鉴于此，本发明人针对止血材料进行了大量实验研究，本发明人研究发现，将醛改性海藻酸钠和醛改性透明质酸钠混合后与胺改性聚天冬酰肼进行希夫碱反应，可以在极短的时间内凝结成胶，由此使血液发生凝固，产生快速止血作用，且所得到的凝胶的凝胶强度高，力学性能好，促伤口愈合性优良。本发明正是基于上述发现做出的。

本领域技术人员应该了解，本发明所提供止血材料可以在需要止血的部位通过醛改性海藻酸钠和醛改性透明质酸钠混合后与胺改性聚天冬酰肼进行希夫碱快速反应得到，从而起到快速止血的作用。

本发明中所述醛改性海藻酸钠(ALG-CHO)的结构式如式(I)所示，其由海藻酸钠(ALG)水溶液与高碘酸钠水溶液进行避光搅拌反应，并以乙二醇终止反应，再经超滤和冻干获得。上述反应的原理如图1所示。

在本发明的一些实施例中，例如，30℃下，向质量浓度5％海藻酸钠水溶液中加入等摩尔的高碘酸钠水溶液，避光搅拌反应3小时后加入乙二醇终止反应，用超滤杯进行超滤，冷冻干燥得到醛改性海藻酸钠。

本发明中所述醛改性透明质酸钠(HA-CHO^+，或HAALD)的结构式如式(II)所示，其由透明质酸(HA)水溶液与高碘酸钠水溶液进行避光搅拌反应，并以乙二醇终止反应，再经超滤和冻干获得。上述反应的原理如图2所示。

在本发明的一些实施例中，例如，30℃下，向质量浓度5％透明质酸水溶液中加入等摩尔的高碘酸钠水溶液，避光搅拌反应3小时后加入乙二醇终止反应，用超滤杯进行超滤，冷冻干燥得到醛改性透明质酸钠。

本发明中所述胺改性聚天冬氨酸(PAHy)的结构式如式(III)所示，其通过将聚琥珀酰亚胺(PSI)的N，N-二甲基甲酰胺溶液与水合肼(NH₂-NH₂·H₂O)进行接触反应，反应物抽虑后再经超滤和干燥制得。上述反应的原理如图3所示。

本发明中醛改性海藻酸钠和醛改性透明质酸钠中的醛基与胺改性聚天冬酰肼中的酰肼基团的希夫碱反应原理如图4所示。由于酰肼基团与醛基的反应速度快，产物化学性质稳定，并且机体表面的蛋白质也可以参与水凝胶周围未反应基团的希夫碱反应，这能更有助于材料与表皮作用不易脱落。

在本发明的一些实施例中，例如，将4g聚琥珀酰亚胺溶于20mLN，N-二甲基甲酰胺(DMF)，加入4mL水合肼，40℃反应4小时，抽滤保留固体溶解于水中超滤，冷冻干燥，得到胺改性聚天冬氨酸。

本法中参与希夫碱反应的各反应物以水溶液的方式进行反应得到止血材料，具体包括将醛改性海藻酸钠水溶液和醛改性透明质酸钠水溶液混合形成的醛改性混合物水溶液与胺改性聚天冬酰肼水溶液混合后进行希夫碱反应制得凝胶态止血材料的步骤。

在本发明的一些实施例中，所述醛改性混合物中醛改性海藻酸钠与醛改性透明质酸钠的重量比为1∶1，所述醛改性混合物与胺改性聚天冬酰肼的重量比为1∶1。

在本发明的一些实施例中，醛改性海藻酸钠水溶液的浓度为0.05-0.25g/mL，优选醛改性海藻酸钠水溶液的浓度为0.10-0.25g/mL，进一步优选醛改性海藻酸钠水溶液的浓度为0.25g/mL。

在本发明的一些实施例中，醛改性透明质酸钠水溶液的浓度为0.05-0.25g/mL，优选醛改性透明质酸钠水溶液的浓度为0.10-0.25g/mL，进一步优选醛改性透明质酸钠水溶液的浓度为0.25g/mL。

在本发明的一些实施例中，胺改性聚天冬酰肼水溶液的浓度为0.1-0.5g/mL，优选胺改性聚天冬酰肼水溶液的浓度为0.2-0.5g/mL，进一步优选胺改性聚天冬酰肼水溶液的浓度为0.5g/mL。

本发明中对希夫碱反应的温度没有特别的限制，通常所述希夫碱反应的温度为室温。

本领域技术人员应该了解上述希夫碱反应的温度可以为20-25℃。

本发明人研究发现中，上述希夫碱反应速度很快，醛改性海藻酸钠水溶液和醛改性透明质酸钠水溶液混合形成的醛改性混合物水溶液与胺改性聚天冬酰肼水溶液混合后在不超过170s的时间内就可以完成希夫碱反应得到凝胶态止血材料。在一些优选的实施例中，醛改性海藻酸钠水溶液和醛改性透明质酸钠水溶液混合形成的醛改性混合物水溶液与胺改性聚天冬酰肼水溶液混合后在10s以内，甚至5s以内就可以完成希夫碱反应得到凝胶态止血材料。

由于本发明止血材料止血的机理是醛改性海藻酸钠水溶液和醛改性透明质酸钠水溶液混合形成的醛改性混合物水溶液与胺改性聚天冬酰肼水溶液进行希夫碱快速反应，能够在极短的时间内凝结成胶，由此使血液发生凝固。因此，容易理解，醛改性海藻酸钠水溶液和醛改性透明质酸钠水溶液混合形成的醛改性混合物水溶液与胺改性聚天冬酰肼水溶液进行希夫碱快速反应成胶的时间就是凝血、止血的时间。

在本发明的一些具体实施例中，将0.5mL浓度为0.25g/mL的醛改性海藻酸钠水溶液与0.5mL浓度0.25g/mL的醛改性透明质酸钠水溶液混匀后加入1mL浓度0.5g/mL的胺改性聚天冬氨酸水溶液中混合，可以在10s以内反应成胶，产生凝血、止血作用。

本领域技术人还应该了解的是，本发明所提供的止血试剂盒是为方便施用本发明止血材料而设计的，其所提供的两个料仓中所含的试剂为可以在待处理创面或伤口进行原位希夫碱反应而成胶的两种物质，其中的一个料仓中装的是含有醛改性海藻酸钠和醛改性透明质酸钠形成的醛改性混合物或含有醛改性海藻酸钠和醛改性透明质酸钠的醛改性混合物水溶液，另一个料仓中装的是胺改性聚天冬酰肼或胺改性聚天冬酰肼水溶液。因此，本发明所提供的止血试剂盒也可以理解为一种可以用于原位成胶止血的施药装置。

容易理解，当料仓中装的是含有醛改性海藻酸钠和醛改性透明质酸钠形成的醛改性混合物或胺改性聚天冬酰肼时，可以在使用时，加入作为医药可接受载体的蒸馏水配制而成相应的含有醛改性海藻酸钠和醛改性透明质酸钠的醛改性混合物水溶液或胺改性聚天冬酰肼水溶液。

需要了解的是，上述试剂盒中的醛改性海藻酸钠和醛改性透明质酸钠或醛改性海藻酸钠水溶液和醛改性透明质酸钠水溶液可以单独存在，可以在施用前配制成醛改性混合物或醛改性混合物水溶液，装入试剂盒中的一个料仓中使用。

在本发明的一些具体实施例中，本发明所提供的止血试剂盒，包括单独或并列设置的料仓A和料仓B，其中，料仓A中含有醛改性海藻酸钠和醛改性透明质酸钠形成的醛改性混合物或含有醛改性海藻酸钠和醛改性透明质酸钠的醛改性混合物水溶液，料仓B含有胺改性聚天冬酰肼或胺改性聚天冬酰肼水溶液。所述试剂盒还包括与料仓A相连通用于输出醛改性混合物水溶液的注射头A′和与料仓B相连通用于输出胺改性聚天冬酰肼水溶液的注射头B′。

在本发明的一些进一步具体的实施例中，本发明所提供的试剂盒的使用方法是，采用两个注射头A′和B′同时或分别将含有醛改性海藻酸钠和醛改性透明质酸钠的醛改性混合物水溶液胺改性聚天冬酰肼水溶液注射到在待处理创面或伤口位置，通过二者快速反应成胶而使血液发生凝固，从而产生止血作用。

在本发明的一些实施例中，本发明所提供的止血试剂盒包括并列设置的料仓A和料仓B，其中，料仓A中含有醛改性海藻酸钠和醛改性透明质酸钠形成的醛改性混合物或含有醛改性海藻酸钠和醛改性透明质酸钠的醛改性混合物水溶液，料仓B含有胺改性聚天冬酰肼或胺改性聚天冬酰肼水溶液。所述试剂盒还包括同时与料仓A和料仓B相连通用于输出醛改性混合物水溶液与胺改性聚天冬酰肼水溶液的注射头M。

在本发明的一些进一步具体的实施例中，本发明所提供的试剂盒的使用方法是，采用一个注射头M同时将含有醛改性海藻酸钠和醛改性透明质酸钠的醛改性混合物水溶液和胺改性聚天冬酰肼水溶液注射到在待处理创面或伤口位置，通过二者快速反应成胶而使血液发生凝固，从而产生止血作用。

本发明中，含有醛改性海藻酸钠和醛改性透明质酸钠的醛改性混合物水溶液与胺改性聚天冬酰肼水溶液混合后为液态，反应成胶是在一瞬间完成。因此，本发明所述用语“成胶时间”是指开始混合到成胶这瞬间的时间。

本发明中采用凝胶色谱法测定各物质的分子量：采用凝胶色谱仪(E2695，沃特世公司)，色谱柱选用watersGPC凝胶色谱柱，标准品为葡聚糖标准品。在25℃室温条件下检测。

本发明采用旋转式流变仪(AR2000ex，美国TA仪器公司)在25℃室温环境下测定止血材料产品的凝胶强度。

本发明采用旋转式流变仪(AR2000ex，美国TA仪器公司)在25℃室温环境下测定止血材料产品的成胶时间。

实施例

为使本发明更加容易理解，下面将结合附图和实施例来进一步详细说明本发明，这些实施例仅起说明性作用，并不局限于本发明的应用范围。本发明中所使用的原料或组分若无特殊说明均可以通过商业途径或常规方法制得。

实施例1：利用醛改性透明质酸钠和醛改性海藻酸钠与胺改性聚天冬酰肼制备一种止血材料。

(1)30℃下，向质量浓度5％海藻酸钠水溶液中加入6.5g高碘酸钠，避光搅拌反应3小时后加入乙二醇终止反应，用超滤杯进行超滤，冷冻干燥得到接枝率为30％的醛改性海藻酸钠，分子量为24700Da；

(2)30℃下，向质量浓度5％透明质酸水溶液中加入7.5g高碘酸钠，避光搅拌反应3小时后加入乙二醇终止反应，用超滤杯进行超滤，冷冻干燥得到接枝率为30％的醛改性透明质酸钠，分子量为480000Da；

(3)将4g聚琥珀酰亚胺溶于20mLN，N-二甲基甲酰胺，加入4mL水合肼，40℃反应4小时，抽滤保留固体溶解于水中超滤，冷冻干燥，得到接枝率为80-92％的胺改性聚天冬酰肼，分子量为60000Da；

(4)将1mL浓度为0.05g/mL的醛改性海藻酸钠水溶液与1mL浓度0.05g/mL的醛改性透明质酸钠水溶液混匀后加入1mL浓度0.1g/mL的胺改性聚天冬酰肼水溶液中混合。反应成胶时间为170s。

实施例2：利用醛改性透明质酸钠和的醛改性海藻酸钠与胺改性聚天冬酰肼制备一种止血材料。

(1)30℃下，向质量浓度5％海藻酸钠水溶液中加入7.5g高碘酸钠，避光搅拌反应3小时后加入乙二醇终止反应，用超滤杯进行超滤，冷冻干燥得到接枝率为36％的醛改性海藻酸钠，分子量为18200Da；

(2)30℃下，向质量浓度5％透明质酸水溶液中加入8.5g高碘酸钠，避光搅拌反应3小时后加入乙二醇终止反应，用超滤杯进行超滤，冷冻干燥得到接枝率为36％的醛改性透明质酸钠，分子量为320000Da；

(3)将4g聚琥珀酰亚胺溶于20mLN，N-二甲基甲酰胺，加入4mL水合肼，40℃反应4小时，抽滤保留固体溶解于水中超滤，冷冻干燥，得到接枝率为80-92％的胺改性聚天冬酰肼，分子量为60000Da；

(4)将1mL浓度为0.05g/mL的醛改性海藻酸钠水溶液与1mL浓度0.05g/mL的醛改性透明质酸钠水溶液混匀后加入1mL浓度0.1g/mL的胺改性聚天冬酰肼水溶液中混合。反应成胶时间为145s。

实施例3：利用醛改性透明质酸钠和醛改性海藻酸钠与胺改性聚天冬酰肼制备一种止血材料。

(1)30℃下，向质量浓度5％海藻酸钠水溶液中加入8.5g高碘酸钠，避光搅拌反应3小时后加入乙二醇终止反应，用超滤杯进行超滤，冷冻干燥得到醛改性海藻酸钠，分子量为9800Da；

(2)30℃下，向质量浓度5％透明质酸水溶液中加入9.5g高碘酸钠，避光搅拌反应3小时后加入乙二醇终止反应，用超滤杯进行超滤，冷冻干燥得到接枝率为42％的醛改性透明质酸钠，分子量为230000Da；

(3)将4g聚琥珀酰亚胺溶于20mLN，N-二甲基甲酰胺，加入4mL水合肼，40℃反应4小时，抽滤保留固体溶解于水中超滤，冷冻干燥，得到接枝率为42％的胺改性聚天冬酰肼，分子量为60000Da；

(4)将1mL浓度为0.05g/mL的醛改性海藻酸钠水溶液与1mL浓度0.05g/mL的醛改性透明质酸钠水溶液混匀后加入1mL浓度0.1g/mL的胺改性聚天冬酰肼水溶液中混合。反应成胶时间为125s。

实施例4：利用醛改性透明质酸钠和醛改性海藻酸钠与胺改性聚天冬酰肼制备一种止血材料。

(1)30℃下，向质量浓度5％海藻酸钠水溶液中加入9.5g高碘酸钠，避光搅拌反应3小时后加入乙二醇终止反应，用超滤杯进行超滤，冷冻干燥得到接枝率为50％的醛改性海藻酸钠，分子量为5100Da；

(2)30℃下，向质量浓度5％透明质酸水溶液中加入10.5g高碘酸钠，避光搅拌反应3小时后加入乙二醇终止反应，用超滤杯进行超滤，冷冻干燥得到接枝率为50％的醛改性透明质酸钠，分子量为150000Da；

(3)将4g聚琥珀酰亚胺溶于20mLN，N-二甲基甲酰胺，加入4mL水合肼，40℃反应4小时，抽滤保留固体溶解于水中超滤，冷冻干燥，得到接枝率为36％的胺改性聚天冬酰肼，分子量为60000Da；

(4)将1mL浓度为0.05g/mL的醛改性海藻酸钠水溶液与1mL浓度0.05g/mL的醛改性透明质酸钠水溶液混匀后加入1mL浓度0.1g/mL的胺改性聚天冬酰肼水溶液中混合。反应成胶时间为110s。

实施例5：利用醛改性透明质酸钠和醛改性海藻酸钠与胺改性聚天冬酰肼制备一种止血材料。

(1)30℃下，向质量浓度5％海藻酸钠水溶液中加入6.5g高碘酸钠，避光搅拌反应3小时后加入乙二醇终止反应，用超滤杯进行超滤，冷冻干燥得到接枝率为30％的醛改性海藻酸钠，分子量为24700Da；

(2)30℃下，向质量浓度5％透明质酸水溶液中加入7.5g高碘酸钠，避光搅拌反应3小时后加入乙二醇终止反应，用超滤杯进行超滤，冷冻干燥得到接枝率为30％的醛改性透明质酸钠，分子量为480000Da；

(3)将4g聚琥珀酰亚胺溶于20mLN，N-二甲基甲酰胺，加入4mL水合肼，40℃反应4小时，抽滤保留固体溶解于水中超滤，冷冻干燥，得到接枝率为80-92％的胺改性聚天冬酰肼，分子量为60000Da；

(4)将1mL浓度为0.1g/mL的醛改性海藻酸钠水溶液与1mL浓度0.1g/mL的醛改性透明质酸钠水溶液混匀后加入1mL浓度0.2g/mL的胺改性聚天冬酰肼水溶液中混合。反应成胶时间为54s。

实施例6：利用醛改性透明质酸钠和醛改性海藻酸钠与胺改性聚天冬酰肼制备一种止血材料。

(1)30℃下，向质量浓度5％海藻酸钠水溶液中加入7.5g高碘酸钠，避光搅拌反应3小时后加入乙二醇终止反应，用超滤杯进行超滤，冷冻干燥得到接枝率为36％的醛改性海藻酸钠分子量为18200Da；

(2)30℃下，向质量浓度5％透明质酸水溶液中加入8.5g高碘酸钠，避光搅拌反应3小时后加入乙二醇终止反应，用超滤杯进行超滤，冷冻干燥得到接枝率为36％的醛改性透明质酸钠，分子量为320000Da；

(3)将4g聚琥珀酰亚胺溶于20mLN，N-二甲基甲酰胺，加入4mL水合肼，40℃反应4小时，抽滤保留固体溶解于水中超滤，冷冻干燥，得到接枝率为80-92％的胺改性聚天冬酰肼，分子量为60000Da；

(4)将1mL浓度为0.1g/mL的醛改性海藻酸钠水溶液与1mL浓度0.1g/mL的醛改性透明质酸钠水溶液混匀后加入1mL浓度0.2g/mL的胺改性聚天冬酰肼水溶液中混合。反应成胶时间为40s。

实施例7：利用醛改性透明质酸钠和醛改性海藻酸钠与胺改性聚天冬酰肼制备一种止血材料。

(1)30℃下，向质量浓度5％海藻酸钠水溶液中加入8.5g高碘酸钠，避光搅拌反应3小时后加入乙二醇终止反应，用超滤杯进行超滤，冷冻干燥得到接枝率为42％的醛改性海藻酸钠，分子量为9800Da；

(2)30℃下，向质量浓度5％透明质酸水溶液中加入9.5g高碘酸钠，避光搅拌反应3小时后加入乙二醇终止反应，用超滤杯进行超滤，冷冻干燥得到接枝率为42％的醛改性透明质酸钠，分子量为230000Da；

(3)将4g聚琥珀酰亚胺溶于20mLN，N-二甲基甲酰胺，加入4mL水合肼，40℃反应4小时，抽滤保留固体溶解于水中超滤，冷冻干燥，得到接枝率为80-92％的胺改性聚天冬酰肼，分子量为60000Da；

(4)将1mL浓度为0.1g/mL的醛改性海藻酸钠水溶液与1mL浓度0.1g/mL的醛改性透明质酸钠水溶液混匀后加入1mL浓度0.2g/mL的胺改性聚天冬酰肼水溶液中混合。反应成胶时间为35s。

实施例8：利用醛改性透明质酸钠和醛改性海藻酸钠与胺改性聚天冬酰肼制备一种止血材料。

(1)30℃下，向质量浓度5％海藻酸钠水溶液中加入9.5g高碘酸钠，避光搅拌反应3小时后加入乙二醇终止反应，用超滤杯进行超滤，冷冻干燥得到接枝率为50％的醛改性海藻酸钠，分子量为5100Da；

(2)30℃下，向质量浓度5％透明质酸水溶液中加入10.5g高碘酸钠，避光搅拌反应3小时后加入乙二醇终止反应，用超滤杯进行超滤，冷冻干燥得到接枝率为50％的醛改性透明质酸钠，分子量为150000Da；

(3)将4g聚琥珀酰亚胺溶于20mLN，N-二甲基甲酰胺，加入4mL水合肼，40℃反应4小时，抽滤保留固体溶解于水中超滤，冷冻干燥，得到接枝率为80-92％的胺改性聚天冬酰肼，分子量为60000Da；

(4)将1mL浓度为0.1g/mL的醛改性海藻酸钠水溶液与1mL浓度0.1g/mL的醛改性透明质酸钠水溶液混匀后加入1mL浓度0.2g/mL的胺改性聚天冬酰肼水溶液中混合。反应成胶时间为30s。

实施例9：利用醛改性透明质酸钠和醛改性海藻酸钠与胺改性聚天冬酰肼制备一种止血材料。

(1)30℃下，向质量浓度5％海藻酸钠水溶液中加入6.5g高碘酸钠，避光搅拌反应3小时后加入乙二醇终止反应，用超滤杯进行超滤，冷冻干燥得到接枝率为30％的醛改性海藻酸钠，分子量为24700Da；

(2)30℃下，向质量浓度5％透明质酸水溶液中加入7.5g高碘酸钠，避光搅拌反应3小时后加入乙二醇终止反应，用超滤杯进行超滤，冷冻干燥得到接枝率为30％的醛改性透明质酸钠，分子量为480000Da；

(3)将4g聚琥珀酰亚胺溶于20mLN，N-二甲基甲酰胺，加入4mL水合肼，40℃反应4小时，抽滤保留固体溶解于水中超滤，冷冻干燥，得到接枝率为80-92％的胺改性聚天冬酰肼，分子量为60000Da；

(4)将1mL浓度为0.2g/mL的醛改性海藻酸钠水溶液与1mL浓度0.2g/mL的醛改性透明质酸钠水溶液混匀后加入1mL浓度0.4g/mL的胺改性聚天冬酰肼水溶液中混合。反应成胶时间为20s。

实施例10：利用醛改性透明质酸钠和醛改性海藻酸钠与胺改性聚天冬酰肼制备一种止血材料。

(1)30℃下，向质量浓度5％海藻酸钠水溶液中加入7.5g高碘酸钠，避光搅拌反应3小时后加入乙二醇终止反应，用超滤杯进行超滤，冷冻干燥得到接枝率为36％的醛改性海藻酸钠分子量为18200Da；

(2)30℃下，向质量浓度5％透明质酸水溶液中加入8.5g高碘酸钠，避光搅拌反应3小时后加入乙二醇终止反应，用超滤杯进行超滤，冷冻干燥得到接枝率为36％的醛改性透明质酸钠，分子量为320000Da；

(3)将4g聚琥珀酰亚胺溶于20mLN，N-二甲基甲酰胺，加入4mL水合肼，40℃反应4小时，抽滤保留固体溶解于水中超滤，冷冻干燥，得到接枝率为80-92％的胺改性聚天冬酰肼，分子量为60000Da；

(4)将1mL浓度为0.2g/mL的醛改性海藻酸钠水溶液与1mL浓度0.2g/mL的醛改性透明质酸钠水溶液混匀后加入1mL浓度0.4g/mL的胺改性聚天冬酰肼水溶液中混合。反应成胶时间为18s。

实施例11：利用醛改性透明质酸钠和醛改性海藻酸钠与胺改性聚天冬酰肼制备一种止血材料。

(1)30℃下，向质量浓度5％海藻酸钠水溶液中加入8.5g高碘酸钠，避光搅拌反应3小时后加入乙二醇终止反应，用超滤杯进行超滤，冷冻干燥得到接枝率为42％的醛改性海藻酸钠，分子量为9800Da；

(2)30℃下，向质量浓度5％透明质酸水溶液中加入9.5g高碘酸钠，避光搅拌反应3小时后加入乙二醇终止反应，用超滤杯进行超滤，冷冻干燥得到接枝率为42％的醛改性透明质酸钠，分子量为230000Da；

(3)将4g聚琥珀酰亚胺溶于20mLN，N-二甲基甲酰胺，加入4mL水合肼，40℃反应4小时，抽滤保留固体溶解于水中超滤，冷冻干燥，得到接枝率为80-92％的胺改性聚天冬酰肼，分子量为60000Da；

(4)将1mL浓度为0.2g/mL的醛改性海藻酸钠水溶液与1mL浓度0.2g/mL的醛改性透明质酸钠水溶液混匀后加入1mL浓度0.4g/mL的胺改性聚天冬酰肼水溶液中混合。反应成胶时间为15s。

实施例12：利用醛改性透明质酸钠和醛改性海藻酸钠与胺改性聚天冬酰肼制备一种止血材料。

(1)30℃下，向质量浓度5％海藻酸钠水溶液中加入9.5g高碘酸钠，避光搅拌反应3小时后加入乙二醇终止反应，用超滤杯进行超滤，冷冻干燥得到接枝率为50％的醛改性海藻酸钠，分子量为5100Da；

(2)30℃下，向质量浓度5％透明质酸水溶液中加入10.5g高碘酸钠，避光搅拌反应3小时后加入乙二醇终止反应，用超滤杯进行超滤，冷冻干燥得到接枝率为50％的醛改性透明质酸钠，分子量为150000Da；

(3)将4g聚琥珀酰亚胺溶于20mLN，N-二甲基甲酰胺，加入4mL水合肼，40℃反应4小时，抽滤保留固体溶解于水中超滤，冷冻干燥，得到接枝率为80-92％的胺改性聚天冬酰肼，分子量为60000Da；

(4)将1mL浓度为0.2g/mL的醛改性海藻酸钠水溶液与1mL浓度0.2g/mL的醛改性透明质酸钠水溶液混匀后加入1mL浓度0.4g/mL的胺改性聚天冬酰肼水溶液中混合。反应成胶时间为10s。

实施例13：利用醛改性透明质酸钠和醛改性海藻酸钠与胺改性聚天冬酰肼制备一种止血材料。

(1)30℃下，向质量浓度5％海藻酸钠水溶液中加入9.5g高碘酸钠，避光搅拌反应3小时后加入乙二醇终止反应，用超滤杯进行超滤，冷冻干燥得到接枝率为50％的醛改性海藻酸钠，分子量为5100Da；

(2)30℃下，向质量浓度5％透明质酸水溶液中加入10.5g高碘酸钠，避光搅拌反应3小时后加入乙二醇终止反应，用超滤杯进行超滤，冷冻干燥得到接枝率为50％的醛改性透明质酸钠，分子量为150000Da；

(3)将4g聚琥珀酰亚胺溶于20mLN，N-二甲基甲酰胺，加入4mL水合肼，40℃反应4小时，抽滤保留固体溶解于水中超滤，冷冻干燥，得到接枝率为80-92％的胺改性聚天冬酰肼，分子量为60000Da；

(4)将1mL浓度为0.25g/mL的醛改性海藻酸钠水溶液与1mL浓度0.25g/mL的醛改性透明质酸钠水溶液混匀后加入1mL浓度0.5g/mL的胺改性聚天冬酰肼水溶液中混合。反应成胶时间为5s。

实施例14：

大鼠麻醉后置于无菌操作板上，于背后两侧切割直径为8mm的圆形伤口(深度大约达到切到筋膜的程度)。大鼠分为2组AB，每组4只大鼠不同天数。A组为对照组采用市售止血材料，B组为实验组，PAHy以及ALG-CHO粉末，需配制成0.2g/mL溶液混合后迅速涂抹至伤口上使用。

实验过程中无需更换材料，可适当采取纱布包扎防止材料被破坏，照相记录时需去掉纱布以便观察。伤口愈合率使用以下公式计算

计算公式：创面愈合率＝[(第0天创面面积-第n天创面面积)/第0天创面面积]*100％(n＝0，3，7，14)

活体实验过程及结果：

由于在伤口愈合时创面暴露在环境中，干燥失水，通常临时细胞外环境很难建立，因此许多促进愈合的生长因子不易在恶略环境下发挥应有的促愈合功能，因此在伤口处产生临时的细胞外环境，对伤口起到基本的物理保护有利于伤口的愈合。

将小鼠麻醉后将背部相应位置表皮毛除去后，切除筋膜层以上全部表皮组织，最终形成直径为8mm的圆孔性伤口，在一只老鼠背上有两个对照，总攻一个材料进行4只对照，一共8个平行伤口。

市售与实验组伤口初期对比结果如图7所示，图7中上部的为医院常用的市售海藻酸钠凝胶类敷料的实验情况，下部为本实验室制备的原料在伤口上进行原位交联后的情况。可以看出市售的材料并不能起到很好的止血作用，伤口会持续渗血，而止血凝胶则能够快速在伤口上交联起到止血作用。并且第三天时实验组伤口外侧有凝胶作为保护，没有发生恶性坏死，而市售材料则发生了变黑的情况。同时材料不需要其他换药处理，小鼠可自由活动。

市售与实验组伤口中期对比结果如图8所示，图8中上部的为医院常用的市售海藻酸钠凝胶类敷料的实验情况，下布为本实验室制备的原料在伤口上进行原位交联后的情况。可以看出市售的材料后期愈合情况与实验组相似，实验组稍快于市售组，能够起到正常的促愈合作用。

采用旋转式流变仪25℃室温环境测定上述实施例中所制备的止血材料的凝胶强度，结果表明上述实施例中所制备的止血材料的凝胶强度为1000-6000Pa；而小鼠活体实验结果显示，采用上述实施例中所制备的止血材料处理创面或伤口，本发明肉眼伤口面积观察比采用纱布处理快3天，比采用市售海藻酸钠敷料处理快1天。

应当注意的是，以上所述的实施例仅用于解释本发明，并不构成对本发明的任何限制。通过参照典型实施例对本发明进行了描述，但应当理解为其中所用的词语为描述性和解释性词汇，而不是限定性词汇。可以按规定在本发明权利要求的范围内对本发明作出修改，以及在不背离本发明的范围和精神内对本发明进行修订。尽管其中描述的本发明涉及特定的方法、材料和实施例，但是并不意味着本发明限于其中公开的特定例，相反，本发明可扩展至其他所有具有相同功能的方法和应用。