紫红参提取物在制备治疗轻度认知障碍药物中的应用的制作方法

本发明属于医药领域，尤其涉及紫红参提取物在制备治疗轻度认知能障碍药物中的应用。

背景技术：

紫红参(purpleredginseng)是人参通过另一种炮制方法而得到的加工品，由现代工艺与传统蒸制相结合而制成，人参炮制加工成紫红参的过程中，因其加入酸性氨基酸，例如天冬氨酸，加快了人参中大分子降解速度，部分化学成分会发生变化，减少了蒸煮次数，更加容易发生美拉德反应及降解反应等，外观呈紫红色，故得名。目前只见到有关紫红参提取物抗肿瘤作用研究的报道(张强，等，紫红参提取物抗肿瘤作用研究，浙江中医药大学学报，2013，3(1)：9-12)以及紫红参提取物具有促进男性性功能作用(功能性人参及制备方法及其治疗男性功能障碍的用途，zl201310231195.6)。

人参作为促进学习记忆药物的研究已有近200年历史，据报道，人参作用于学习记忆的多种环节，对多种任务学习记忆获得、巩固和再现有明显的易化作用，人参的促智作用已经被世人公认，关于人参的促智机理研究越来越多，主要包括人参对中枢神经递质、脑核酸和蛋白质的合成、谷氨酸能神经系统以及脑第二信使系统、神经细胞内钙超负荷调节有关(李竹，郭月英，人参促智作用机理研究进展，沈阳药科大学学报，1998，15(1)：73-76)。单体人参皂苷的促智作用研究也不断深入，据报道单体人参皂苷也通过不同的作用机制发挥促智作用(杨迎，等.人参皂甙rb1和rg1促智作用机制的探讨-对小鼠脑神经发育的影响.药学学报，1994，29(4)：241-245；姜红柳，等，人参皂苷re对小鼠学习记忆障碍的作用.中国药理学通报，2008，24(10)：1999-40；朱建民.人参皂甙促智作用研究进展，江西中医学院学报，1995(增刊)：46-47；)。

中医认为人参可“强精补肾、大补元气、生津益血”(王晓英.人参皂甙促智、壮阳作用及其机制研究[d]，南京:中国协和医科大学,2001)，而人参在“强精补肾”的同时，可行抗肿瘤﹑抗病毒﹑降血脂、免疫调节、改善微循环、增加心肌功能等多种提高生命质量的功效，另有报道，黑参提取物中的人参皂苷rg3、rg5、rk1通过抑制胆碱酯酶，从而修复由乙醇引起的记忆损伤，起到神经保护的作用(袁媛，等，hplc法测定19个人参新炮制品-黑参样品中的人参皂苷含量[j].辽宁中医杂志，2013，40(10)：1993-1995)，紫红参含有更丰富的人参皂苷rg3、rg5、rk1、rh2、ppd、ppt等稀有人参皂苷有效成分，是作为保健食品、保健品的最佳原料，尤其含有人参皂苷rg3、rh2的组合物作为健脑的保健品也不断涌现(丁辉，史大静，一种提高免疫力的保健品，申请号：201310167345.1)。

近年来，我国社会老龄化人口规模迅速扩大，国民物质生活和精神文化生活水平不断得到提高，人们也越来越注重养生保健和生活质量，对这两者有了越来越高的要求，性活动也越来越受到人们的重视。

未见到有关利用紫红参提取物在制备治疗轻度认知障碍药物中的报道。紫红参提取物可按常规方法获得，经水提取、过滤、浓缩后得到浸膏。

技术实现要素：

本发明提供一种紫红参提取物在制备治疗轻度认知障碍药物中的应用，目的在于提供紫红参提取物新的药物用途。

本发明采取的技术方案是：紫红参提取物在制备治疗轻度认知障碍药物中的应用。

紫红参水提取物在制备治疗轻度认知障碍保健品，食品添加剂或复方制剂中的用途。

所述的紫红参水提取物是将生晒参浸泡于5％天冬氨酸溶液中10～12h，然后在90～100℃蒸制3～4h，取出室内常温放凉，同样条件重复4次，50～80℃干燥12～15h，同样条件重复4次。

所述紫红参提取物应用剂量范围为20～200mg/人/天。

所述紫红参提取物应用剂量优选为30～150mg/人/天。

当本发明用于制备治疗轻度认知障碍药物中的药物时，其口服或胃肠外给药，均是安全的，在口服情况下，其可以任何常规形式给药，如片剂、胶囊、注射剂、冻干粉针、注射用乳剂、粉剂、滴丸、颗粒剂、软胶囊、糖浆、口嚼剂和贴剂。

本发明制备治疗轻度认知障碍药物中的药物是由紫红参提取物或其药物组合物与固体或液体的赋形剂一起构成的，这里使用的固体或液体的赋形剂在本领域是众所周知的，下面举几个具体例子，散剂是内服的粉末剂，它的赋形剂有乳糖、淀粉、浆糊精、碳酸钙、合成或天然硫酸铝、氧化镁、硬脂酸镁，碳酸氢钠、干燥酵母等；软膏剂的赋形剂可以使用脂油，含水羊毛脂、凡士林、甘油、蜂腊、木腊、液体石腊、树脂、高级腊等组合成的疏水剂或亲水剂。

本发明的有益效果在于，紫红参提取物或其药物组合物作为治疗轻度认知障碍药物中药物，具有疗效显著、成本低廉、毒副作用小的显著优点，将紫红参提取物用于治疗轻度认知障碍新的药物用途属首次发现，同时扩大了紫红参新的药物用途。

附图说明

图1是混合标准品的负离子检测模式总离子流图；

图2是混合标准品的正离子检测模式总离子流图；

图3是紫红参的负离子检测模式总离子流图；

图4是生晒参的负离子检测模式总离子流图；

图5是紫红参的正离子检测模式总离子流图；

图6是生晒参的正离子检测模式总离子流图；

图7是小鼠水迷宫训练采取的迷宫示意图。

具体实施方式

紫红参水提取物可按现有文献报导的方式获得，也可按下列方式获得：

实施例1

紫红参水提取物是将生晒参浸泡于5％天冬氨酸溶液中10h，然后在90℃蒸制3h，取出室内常温放凉，同样条件重复4次，50℃干燥12h，同样条件重复4次。

实施例2

紫红参水提取物是将生晒参浸泡于5％天冬氨酸溶液中11h，然后在95℃蒸制3.5h，取出室内常温放凉，同样条件重复4次，65℃干燥13.5h，同样条件重复4次。

实施例3

紫红参水提取物是将生晒参浸泡于5％天冬氨酸溶液中12h，然后在100℃蒸制4h，取出室内常温放凉，同样条件重复4次，80℃干燥15h，同样条件重复4次。

下面通过实验例进一步说明本发明的效果。

实验例1、紫红参与生晒参化学成分的比较研究

1、实验仪器与试药

1.1仪器

watersacquityuplc超高效液相色谱仪系统，包括二元超高压泵系统、样品管理系统、masslynx4.1色谱工作站；watersxevotq-s串联四级杆质谱仪(美国waters公司)；re-52型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；kq-250b型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；fa1104n型电子天平(上海民桥精密科学仪器有限公司)；rct-3200型超纯水仪(长春博莱帕特科技发展有限公司)；离心机(上海安亭科学仪器厂)。

1.2试剂

乙腈、甲酸(色谱纯，德国fisher公司)；水为超纯水；其它试剂均为分析纯。

1.3试药

生晒参(吉林省皇封参集团股份有限公司，批号：110713)；紫红参(吉林省皇封参集团股份有限公司，批号：110820)。

2、实验方法

2.1供试品溶液的制备

取生晒参和紫红参粉末(过四号筛)各约0.5g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，密塞，超声处理(功率100w，频率40khz)45分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过0.22μm的微孔滤膜，取续滤液，即得。

2.2标准品溶液的制备

精密称取人参皂苷rb2对照品、人参皂苷rb3对照品、人参皂苷rc对照品、人参皂苷rd对照品、人参皂苷re对照品、人参皂苷rf对照品、人参皂苷f1对照品、20(s)-人参皂苷rg1对照品、20(s)-人参皂苷rg2对照品、20(s)-人参皂苷rg3对照品、20(r)-人参皂苷rg3对照品、20(s)-人参皂苷rh1对照品、20(s)-人参皂苷rh2对照品、原人参二醇对照品、原人参三醇对照品，加甲醇制成每1ml各含0.2mg的混合溶液，摇匀，再精密吸取10μl,加甲醇稀释至5ml，摇匀，即得。

2.3色谱条件

watersacquityuplcbehc18(2.1mm×50mm，1.7μm)色谱柱；柱温：30℃；样品管理器温度：15℃；流速：0.3ml·min-1；进样量：4μl；流动相a(0.1％甲酸)-b(乙腈)，梯度洗脱，洗脱程序见表1。

表.1梯度洗脱程序

2.4.质谱条件

电喷雾离子化源(esi)，正、负离子检测模式。扫描范围：m/z100～1500。毛细管电压:3.0kv；锥孔电压:40v；源温度：150℃；脱溶剂气温度：400℃；锥孔气流量：150l/h；脱溶剂气流量：800l/h；氩气流量：0.15ml/min。

3、实验结果

3.1成分的鉴定

紫红参共检测出32个化学成分，根据uplc-esi-ms/ms结果结合文献报道，鉴定了其中22个化学成分。包括：电喷雾离子化源(esi)，负离子检测模式下检测出的28个成分(见表2)，根据uplc-esi-ms/ms结果结合文献报道，鉴定了其中18个化学成分；电喷雾离子化源(esi)，正离子检测模式下检测出4个成分(表2.)，根据uplc-esi-ms/ms结果结合文献报道，鉴定了这4个化学成分。

生晒参共检测出31个化学成分，都为电喷雾离子化源(esi)，负离子检测模式下检测出来(见表3)，根据uplc-ms/ms结果结合文献报道，鉴定了其中26个化学成分；电喷雾离子化源(esi)，正离子检测模式下未检测出皂苷元。

混合标准品的负离子检测模式总离子流图见图1。

混合标准品的正离子检测模式总离子流图见图2。

紫红参和生晒参样品uplc-esi-ms/ms总离子流色谱图分别见图3、图4、图5和图6。

表2紫红参中成分的鉴定

表3生晒参中成分的鉴定

3.2紫红参与生晒参中皂苷类成分的比较

对紫红参与生晒参中皂苷类成分的含量进行了对比分析，结果分别见表4、表5及表6。

表4生晒参和紫红参中共有皂苷类成分及含量

表5生晒参中其它已知皂苷类成分及含量

表6紫红参中其它活性成分及含量

3.3生晒参和紫红参中人参皂苷类成分分析

生晒参中检测出含量较高的人参皂苷有：rf、ro、re、rb1、rc、rb2、rk1、rg5、20(s)-人参皂苷rg3、三七皂苷r1和r2、乙酰化人参皂苷rb1、乙酰化人参皂苷rc等。此外还检测出含量较少的三七皂苷r3、人参皂苷rg1、20(s)-人参皂苷rh1、20(r)-人参皂苷rh1、姜状三七苷r1、人参皂苷rb3、20(s)-人参皂苷rg2、人参皂苷rd、20(r)-人参皂苷rg3、稀有人参皂苷rg6/f4、乙酰化人参皂苷rb2、乙酰化人参皂苷re、乙酰化人参皂苷rd以及其它未知的化合物。

与生晒参不同，紫红参中检测出含量较高的人参皂苷为20(s)-人参皂苷rg3、20(r)-人参皂苷rg3、20(r)-人参皂苷rh1、20(r)-人参皂苷rg2、人参皂苷rk1、人参皂苷rg5、人参皂苷rd、人参皂苷ro、姜状三七苷r1等稀有皂苷；含量较低的人参皂苷为三七皂苷r2、人参皂苷rf、20(s)-人参皂苷rh1、人参皂苷rg6/f4、20(s)-人参皂苷rg2、人参皂苷c、达玛-3β-6α-12β,20,25-五醇、西洋参皂苷f1等；而人参皂苷rg1、re、rb1、rb2、rb3、rc、三七皂苷r1、r3以及各乙酰化人参皂苷未被检测出来。

4、讨论

在紫红参中，未检测出二醇型人参皂苷rc、rb1、rb2和rb3等成分，是因为其20位糖链被水解，20位末端糖链水解产生人参皂苷rd,完全水解产生了含量较高的次级皂苷20(s)-人参皂苷rg3和20(r)-人参皂苷rg3一对差向异构体以及人参皂苷rk1和rg5。与生晒参比较，20(r)-人参皂苷rg3含量明显增多，可认为是加工过程中发生构型转化产生的紫红参特异性成分。对于三醇型人参皂苷re、三七皂苷r1、r3未被检出的原因是其糖链发生了降解，其降解产物rg2、rh1、rf、三七皂苷r2可检出。对于齐墩果酸型皂苷ro的降解产物为姜状三七苷r1，所以在紫红参中姜状三七苷r1含量有所增加。人参皂苷ro的含量有所增加，可能是紫红参加工过程的特有成分，有待于进一步研究。紫红参中，出现了20(s)-原人参三醇、20(r)-原人参三醇、20(s)-原人参二醇和20(r)-原人参二醇，是由于糖苷键断裂产生的。

根据以上结果可知在紫红参的加工过程中，由于循环加热蒸煮，皂苷类成分发生了酯键和糖苷键的降解，人参皂苷的种类和数量发生了改变，产生了20(s)-人参皂苷rg3、20(r)-人参皂苷rg3、20(r)-人参皂苷rh1、20(r)-人参皂苷rg2、rk1、rg5、rd、ro、姜状三七苷r1、20(s)-原人参三醇、20(r)-原人参三醇、20(s)-原人参二醇和20(r)-原人参二醇等含量较高的活性成分。

实验例2紫红参提取物促进自然衰老的小鼠学习记忆作用的研究，

小鼠水迷宫法

目的：观察紫红参提取物在小鼠水迷宫中对抗自然衰老引起的记忆获得障碍的作用

动物和材料

动物：spf昆明种老年雄性小鼠，体重45-55，由吉林大学动物部提供，许可证：医动字第10-5107号实验前在本所动物房笼养两天。

试剂及配制

紫红参提取物(zhs)：紫红参经粉碎(过四号筛)，75％乙醇回流提取三次，每次3h，合并提取液，回收乙醇，蒸干，即得。批号：061018。

先用少量dmso助溶，再用蒸馏水稀释为12.5mg/kg、25mg/kg和50mg/kg灌胃给药。

脑复康：东北制药总厂，剂量为500mg/kg体重，用蒸馏水配成50mg/ml；0.2ml/20g体重。

仪器：smg-2小鼠水迷宫，由中国医学科学院药物研究所研制。

方法：spf昆明种老年雄性小鼠64只，随机分5组，正常老年对照组，紫红参提取物组(12.5mg/kg、25mg/kg和50mg/kg)，脑复康组(500mg/kg)，并加—spf昆明种小鼠正常年青对照组。正常老年和年青对照组灌服水。其余经口灌服给药，给药第11天到第15天进行小鼠水迷宫训练。

水迷宫由一黑色有机玻璃长方体水槽(73cm×42cm×20cm)组成，其中有若干隔板组成迷宫，如图7所示，其中1、2、3、4为盲端，迷宫的一角有一组台阶为终点。实验前，迷宫中灌水，水深10cm，水温24±1℃。

训练第一天用隔板将a点与b点的通道阻断，小鼠首先被置于台阶上10秒，使其了解此安全区域的存在，然后将小鼠放于起点a，让其自由游泳，记录其进入盲端1的次数(即错误次数)以及爬上安全台阶的时间(即潜伏期)，如果在训练时间2分钟内尚未找到台阶者，将会被引导到安全台阶处，其潜伏期被记为2分钟。第一次训练后休息片刻按同样方法训练第二次；依次训练其它小鼠。

在训练的第二天，将隔板置于b点，小鼠的游泳起点为b点，分别记录2分钟内小鼠进入盲端1、2、3的错误次数，爬上安全台阶的潜伏期，每只小鼠连续训练2次。如果在2分钟内找不到台阶者，将被引导到终点，其潜伏期被记为2分钟。

训练第三到第五天小鼠的游泳起点为c点，记录2分钟内小鼠进入盲端1、2、3、4的错误次数和找到安全台阶的潜伏期每只小鼠连续训练二次。

结果：

实验结果进行统计并比较各组小鼠找到安全台阶的潜伏期及进入盲端的次数即错误次数，结果见表7。

表7紫红参提取物在小鼠水迷宫实验中对抗自然衰老引起的记忆获得障碍的作用(n＝12)

与自然衰老组比较*p〈0.05，**p〈0.01

从以上结果可以看出与自然衰老组相比，在小鼠水迷宫实验中，紫红参提取物低剂量(12.5mg/kg)组在实验的第二天，中剂量(25mg/kg)组在实验的第一，三，四天以及高剂量(50mg/kg)组在实验的第一，三天均能显著性减少寻找安全台阶的潜伏期，说明紫红参提取物在小鼠水迷宫中有一定的对抗自然衰老所引起的记忆获得障碍的作用。

制备药剂的实施例1：

紫红参水提取物250.0g,加入淀粉50g，混匀后装入硬囊壳，制成1000粒，每粒0.3g。

制备药剂的实施例2：

紫红参水提取物150.0g,加入淀粉50g，混匀后装入硬囊壳，制成1000粒，每粒0.2g。

制备药剂的实施例3：

紫红参总皂苷150.0g,加入淀粉150g，混匀后装入硬囊壳，制成1000粒，每粒0.3g。

制备药剂的实施例4：

紫红参总皂苷200.0g,加入淀粉100g，混匀后装入硬囊壳，制成1000粒，每粒0.3g。

制备药剂的实施例5：

紫红参水提取物150.0g,紫红参总皂苷100.0g,加入淀粉50g，混匀后装入硬囊壳，制成1000粒，每粒0.3g。