本发明具体涉及一种护肝微球的制备工艺。
背景技术：
：中医认为肝主疏泄，泛指肝气具有疏通、条达、升发、畅泄等综合生理功能。主要表现在调节精神情志，促进消化吸收，以及维持气血、津液的运行三方面。1.调节精神情志。中医认为，人的精神活动除由心所主外，还与肝的疏泄功能有关。肝的这一功能正常，人体就能较好地协调自身的精神、情志活动，表现为精神愉快、心情舒畅、理智灵敏；疏泄不及，则表现为精神抑郁、多愁善虑、沉闷欲哭、嗳气太息、胸胁胀闷等；疏泄太过，则表现为兴奋状态，如烦躁易怒、头晕胀痛、失眠多梦等。2.促进消化吸收。肝的疏泄功能有助于脾胃的升降和胆汁的分泌，以保持正常的消化、吸收功能。如肝失疏泄，可影响脾胃的升降和胆汁的排泄，从而出现消化功能异常的症状，如食欲不振、消化不良、嗳气泛酸，或腹胀、腹泻等，中医称为"肝胃不和"或"肝脾不调"。3.维持气血、津液的运行。肝的疏泄功能直接影响着气机的调畅。如肝失疏泄，气机阻滞，可出现胸胁、乳房或少腹胀痛。气是血液运行的动力，气行则血行，气滞则血瘀。若肝失疏泄，气滞血瘀，则可见胸胁刺痛，甚至症积、肿块，女子还可出现经行不畅、痛经和经闭等。肝的疏泄功能还有疏利三焦、通调水道的作用。故肝失疏泄，有时还可出现腹水、水肿等。而随着生活压力不断增大，越来越多的人压力过大，养成了饮酒过量等习惯，这些都严重侵蚀着人类的身体，造成肝脏的负担，因此，人们对于护肝产品的需求也越老越多。技术实现要素：要解决的技术问题：本发明的目的是提供一种护肝微球的制备工艺，所制备的护肝微球包封性好，护肝效果佳。技术方案：一种护肝微球的制备工艺，包括以下步骤：(1)将核桃仁200g和苏子100g干燥后粉碎，过60目筛，在温度35-45℃，压力10-20mpa下超临界co2萃取1-3h，得萃取物a；(2)取五味子200-300g、山药200-300g、丹参200-300g和莲子200-300g混合，用小火炒制15-25min；(3)加入三七50-100g、甘草50-100g、垂盆草100-200g、黄芪300g和1000-1500ml水小火熬制1-2h，取药液b；(4)取党参300g，加入1-2l95％乙醇超声波提取30-40min，取滤液，药渣中加入1-2l95％乙醇再重复提取2次，合并3次滤液，得党参乙醇提取物；(5)取新鲜芦荟500-1000g，去皮，将芦荟肉和30-50g新鲜细叶百合绞碎过滤取汁，得汁液c；(6)取冬虫夏草5g，粉碎后过40目筛，加入100ml80％的乙醇回流提取60min，取滤渣，加入100ml蒸馏水，在功率为300-500w的微波反应器中浸提2h；(7)将浸提液在转速4000-5000r/min下离心10min，取上清液d；(8)将药液b、党参乙醇提取物、汁液c和上清液d混合，搅拌后蒸干，冷冻干燥得混合物e；(9)将萃取物a、混合物e、猪胆粉1-2g、大豆磷脂1-2g和蒸馏水100-200ml混合，在转速1500-2000r/min下搅拌5-10min，过0.22μm微孔滤膜作为喷雾相；(10)将1-2g聚乳酸、1-2g果胶、1-2g三聚磷酸钠、0.5-1g聚氧乙烯山梨醇酐单硬脂酸酯和100-200ml蒸馏水混合，在转速500-700r/min下搅拌溶解作为凝聚相；(11)将喷雾相喷入凝聚相中，固化5-6h，洗涤干燥即得。进一步优选的，步骤(1)中温度40℃，压力15mpa下超临界co2萃取2h。进一步优选的，步骤(2)中所述山药为铁棍干山药，所述莲子去除莲心。进一步优选的，步骤(9)中转速为1700r/min。进一步优选的，步骤(10)中转速为600r/min。有益效果：本方法制备的护肝微球包封率高达45.0％，包封性好，mda是氧化应激常用的标志物，由多不饱和脂肪酸过氧化分解产生，是细胞膜脂质过氧化的终产物之一，可间接反映机体的自由基代谢变化及细胞的损伤程度，护肝微球能够显著降低肝脏组织中的mda水平，减轻过氧化反应，减轻mda对机体的损伤。sod广泛存在于需氧有机体中，是一种抗氧化的酶。机体内sod和mda的水平能够反映机体清除自由基的能力和受到自由基损伤的程度。护肝微球能够显著提高肝脏组织sod水平，使细胞中有足够的sod对抗过氧化反应，清除氧自由基，保护细胞膜免受自由基的攻击，最终实现对肝脏的保护作用。具体实施方式实施例1一种护肝微球的制备工艺，包括以下步骤：(1)将核桃仁200g和苏子100g干燥后粉碎，过60目筛，在温度35℃，压力10mpa下超临界co2萃取1h，得萃取物a；(2)取五味子200g、山药200g、丹参200g和莲子200g混合，用小火炒制15min；(3)加入三七50g、甘草50g、垂盆草100g、黄芪300g和1000ml水小火熬制1h，取药液b；(4)取党参300g，加入1l95％乙醇超声波提取30min，取滤液，药渣中加入1l95％乙醇再重复提取2次，合并3次滤液，得党参乙醇提取物；(5)取新鲜芦荟500g，去皮，将芦荟肉和30g新鲜细叶百合绞碎过滤取汁，得汁液c；(6)取冬虫夏草5g，粉碎后过40目筛，加入100ml80％的乙醇回流提取60min，取滤渣，加入100ml蒸馏水，在功率为300w的微波反应器中浸提2h；(7)将浸提液在转速4000r/min下离心10min，取上清液d；(8)将药液b、党参乙醇提取物、汁液c和上清液d混合，搅拌后蒸干，冷冻干燥得混合物e；(9)将萃取物a、混合物e、猪胆粉1g、大豆磷脂1g和蒸馏水100ml混合，在转速1500r/min下搅拌5min，过0.22μm微孔滤膜作为喷雾相；(10)将1g聚乳酸、1g果胶、1g三聚磷酸钠、0.5g聚氧乙烯山梨醇酐单硬脂酸酯和100ml蒸馏水混合，在转速500r/min下搅拌溶解作为凝聚相；(11)将喷雾相喷入凝聚相中，固化5h，洗涤干燥即得。实施例2一种护肝微球的制备工艺，包括以下步骤：(1)将核桃仁200g和苏子100g干燥后粉碎，过60目筛，在温度40℃，压力15mpa下超临界co2萃取2h，得萃取物a；(2)取五味子250g、山药250g、丹参250g和莲子250g混合，用小火炒制20min；(3)加入三七75g、甘草75g、垂盆草150g、黄芪300g和1300ml水小火熬制1.5h，取药液b；(4)取党参300g，加入1.5l95％乙醇超声波提取35min，取滤液，药渣中加入1.5l95％乙醇再重复提取2次，合并3次滤液，得党参乙醇提取物；(5)取新鲜芦荟750g，去皮，将芦荟肉和40g新鲜细叶百合绞碎过滤取汁，得汁液c；(6)取冬虫夏草5g，粉碎后过40目筛，加入100ml80％的乙醇回流提取60min，取滤渣，加入100ml蒸馏水，在功率为400w的微波反应器中浸提2h；(7)将浸提液在转速4500r/min下离心10min，取上清液d；(8)将药液b、党参乙醇提取物、汁液c和上清液d混合，搅拌后蒸干，冷冻干燥得混合物e；(9)将萃取物a、混合物e、猪胆粉1.5g、大豆磷脂1.5g和蒸馏水150ml混合，在转速1700r/min下搅拌10min，过0.22μm微孔滤膜作为喷雾相；(10)将1.5g聚乳酸、1.5g果胶、1.5g三聚磷酸钠、0.8g聚氧乙烯山梨醇酐单硬脂酸酯和150ml蒸馏水混合，在转速600r/min下搅拌溶解作为凝聚相；(11)将喷雾相喷入凝聚相中，固化5.5h，洗涤干燥即得。实施例3一种护肝微球的制备工艺，包括以下步骤：(1)将核桃仁200g和苏子100g干燥后粉碎，过60目筛，在温度45℃，压力20mpa下超临界co2萃取3h，得萃取物a；(2)取五味子300g、山药300g、丹参300g和莲子300g混合，用小火炒制25min；(3)加入三七100g、甘草100g、垂盆草200g、黄芪300g和1500ml水小火熬制2h，取药液b；(4)取党参300g，加入2l95％乙醇超声波提取40min，取滤液，药渣中加入2l95％乙醇再重复提取2次，合并3次滤液，得党参乙醇提取物；(5)取新鲜芦荟1000g，去皮，将芦荟肉和50g新鲜细叶百合绞碎过滤取汁，得汁液c；(6)取冬虫夏草5g，粉碎后过40目筛，加入100ml80％的乙醇回流提取60min，取滤渣，加入100ml蒸馏水，在功率为500w的微波反应器中浸提2h；(7)将浸提液在转速5000r/min下离心10min，取上清液d；(8)将药液b、党参乙醇提取物、汁液c和上清液d混合，搅拌后蒸干，冷冻干燥得混合物e；(9)将萃取物a、混合物e、猪胆粉2g、大豆磷脂2g和蒸馏水200ml混合，在转速2000r/min下搅拌10min，过0.22μm微孔滤膜作为喷雾相；(10)将2g聚乳酸、2g果胶、2g三聚磷酸钠、1g聚氧乙烯山梨醇酐单硬脂酸酯和200ml蒸馏水混合，在转速700r/min下搅拌溶解作为凝聚相；(11)将喷雾相喷入凝聚相中，固化6h，洗涤干燥即得。对比例1一种护肝微球的制备工艺，包括以下步骤：(1)将核桃仁300g干燥后粉碎，过60目筛，在温度35℃，压力10mpa下超临界co2萃取1h，得萃取物a；(2)取五味子200g、山药200g、丹参200g和莲子200g混合，用小火炒制15min；(3)加入三七50g、甘草50g、垂盆草100g、黄芪300g和1000ml水小火熬制1h，取药液b；(4)取党参300g，加入1l95％乙醇超声波提取30min，取滤液，药渣中加入1l95％乙醇再重复提取2次，合并3次滤液，得党参乙醇提取物；(5)取新鲜芦荟500g，去皮，将芦荟肉和30g新鲜细叶百合绞碎过滤取汁，得汁液c；(6)取冬虫夏草5g，粉碎后过40目筛，加入100ml80％的乙醇回流提取60min，取滤渣，加入100ml蒸馏水，在功率为300w的微波反应器中浸提2h；(7)将浸提液在转速4000r/min下离心10min，取上清液d；(8)将药液b、党参乙醇提取物、汁液c和上清液d混合，搅拌后蒸干，冷冻干燥得混合物e；(9)将萃取物a、混合物e、猪胆粉1g、大豆磷脂1g和蒸馏水100ml混合，在转速1500r/min下搅拌5min，过0.22μm微孔滤膜作为喷雾相；(10)将1g聚乳酸、1g果胶、1g三聚磷酸钠、0.5g聚氧乙烯山梨醇酐单硬脂酸酯和100ml蒸馏水混合，在转速500r/min下搅拌溶解作为凝聚相；(11)将喷雾相喷入凝聚相中，固化5-6h，洗涤干燥即得。对比例2一种护肝微球的制备工艺，包括以下步骤：(1)将核桃仁200g和苏子100g干燥后粉碎，过60目筛，在温度35℃，压力10mpa下超临界co2萃取1h，得萃取物a；(2)取五味子200g、山药200g、丹参200g和莲子200g混合，用小火炒制15min；(3)加入三七50g、甘草50g、垂盆草100g、黄芪300g和1000ml水小火熬制1h，取药液b；(4)取新鲜芦荟500g，去皮，将芦荟肉和30g新鲜细叶百合绞碎过滤取汁，得汁液c；(5)取冬虫夏草5g，粉碎后过40目筛，加入100ml80％的乙醇回流提取60min，取滤渣，加入100ml蒸馏水，在功率为300w的微波反应器中浸提2h；(6)将浸提液在转速4000r/min下离心10min，取上清液d；(7)将药液b、汁液c和上清液d混合，搅拌后蒸干，冷冻干燥得混合物e；(8)将萃取物a、混合物e、猪胆粉1g、大豆磷脂1g和蒸馏水100ml混合，在转速1500r/min下搅拌5min，过0.22μm微孔滤膜作为喷雾相；(9)将1g聚乳酸、1g果胶、1g三聚磷酸钠、0.5g聚氧乙烯山梨醇酐单硬脂酸酯和100ml蒸馏水混合，在转速500r/min下搅拌溶解作为凝聚相；(10)将喷雾相喷入凝聚相中，固化5-6h，洗涤干燥即得。对比例3一种护肝微球的制备工艺，包括以下步骤：(1)将核桃仁200g和苏子100g干燥后粉碎，过60目筛，在温度35℃，压力10mpa下超临界co2萃取1h，得萃取物a；(2)取五味子200g、山药200g、丹参200g和莲子200g混合，用小火炒制15min；(3)加入三七50g、甘草50g、垂盆草100g、黄芪300g和1000ml水小火熬制1h，取药液b；(4)取党参300g，加入1l95％乙醇超声波提取30min，取滤液，药渣中加入1l95％乙醇再重复提取2次，合并3次滤液，得党参乙醇提取物；(5)取新鲜芦荟500g，去皮，将芦荟肉和30g新鲜细叶百合绞碎过滤取汁，得汁液c；(6)取冬虫夏草5g，粉碎后过40目筛，加入100ml80％的乙醇回流提取60min，取滤渣，加入100ml蒸馏水，在功率为300w的微波反应器中浸提2h；(7)将浸提液在转速4000r/min下离心10min，取上清液d；(8)将药液b、党参乙醇提取物、汁液c和上清液d混合，搅拌后蒸干，冷冻干燥得混合物e；(9)将萃取物a、混合物e、大豆磷脂1g和蒸馏水100ml混合，在转速1500r/min下搅拌5min，过0.22μm微孔滤膜作为喷雾相；(10)将1g聚乳酸、1g果胶、1g三聚磷酸钠、0.5g聚氧乙烯山梨醇酐单硬脂酸酯和100ml蒸馏水混合，在转速500r/min下搅拌溶解作为凝聚相；(11)将喷雾相喷入凝聚相中，固化5-6h，洗涤干燥即得。采用小鼠炭末肠推进度实验，研究护肝微球护肝功能的作用。取60只小鼠，雌雄各半，体重为18-22g，随机分为6组，每组10只：实施例1-4和对比例1-3分别灌胃2.0g/kg护肝微球和0.4g/kgccl4，空白组为0.2ml/10g的剂量灌胃生理盐水和0.4g/kgccl4，连续给药10周每周2次。末次给药，小鼠禁食24h后，计算肝脏指数(％)，检测肝脏组织中sod和mda的含量。表1本方法制备的护肝微球的部分性能指标包封率(％)肝脏指数(％)sod(u/mg)mda(nmol/mg)实施例144.43.2169.332.52实施例245.03.1170.262.50实施例344.83.2169.802.52对比例144.34.1142.324.03对比例244.53.9151.673.73对比例344.63.8153.983.44空白组-4.6120.545.65从上表1中，我们可以看到本发明所制备的护肝微球包封率高达45.0％，包封性好，mda是氧化应激常用的标志物，由多不饱和脂肪酸过氧化分解产生，是细胞膜脂质过氧化的终产物之一，可间接反映机体的自由基代谢变化及细胞的损伤程度，护肝微球能够显著降低肝脏组织中的mda水平，减轻过氧化反应，减轻mda对机体的损伤。sod广泛存在于需氧有机体中，是一种抗氧化的酶。机体内sod和mda的水平能够反映机体清除自由基的能力和受到自由基损伤的程度。护肝微球能够显著提高肝脏组织sod水平，使细胞中有足够的sod对抗过氧化反应，清除氧自由基，保护细胞膜免受自由基的攻击，最终实现对肝脏的保护作用。当前第1页12