专利名称：突破多药抗性的抗心律失常、止痛作用的2,3-二氮杂萘酮类衍生物的制作方法
2，3-二氮杂萘酮衍生物氮
斯汀(azelastin，国际非专利药名)已成功地用于防治支气管哮喘，和过敏性、季节性鼻炎。它可按德国专利2，164，058描述的方法进行合成。
随后开发的D-18024盐酸盐(氟利
斯汀flezelastin，国际非专利药名)为外消旋混合物。它的制备方法描述在欧洲专利222，191中。
现在，人们已惊异地发现，具有通式Ⅰ结构的2，3-二氮杂萘酮衍生物Ⅰ
其中，A＝苯基(未取代的或卤素单取代的或卤素多取代的)，氢、C1-3烷基、2-呋喃基或2-噻吩基，
Y＝氢或C1-6烷基，其中烷基上可带一个(取代的)苯环，一个羟基或一个烷氧羰基，以及在下面列出的所有与生理用酸加成的盐结构Ⅱ
结构Ⅲ
和氮
斯汀及氟利
斯汀的旋光异构体都有抗心律失常的作用。它们大体上可归为第三类抗心律失常作用化合物。
这些化合物也有止痛作用。
本发明的这些化合物也有止吐作用。止吐作用是通过口服或静脉注射这些化合物后能抑制清醒态家猪经顺氯氨铂诱导产生的呕吐而发现的。
清醒态家猪经顺氯氨铂诱导的呕吐的抑制作用。下面数据提供了在观察期间的呕吐次数。给出的数据是五次实验的平均值。
在对照液中经过60分钟平衡，动物心脏制备物沉浸在10μM的试验化合物中60分钟。除了影响有效不应期的测定外(只在第30分钟和第60分钟测定)，其余的所有参数都是每隔15分钟测定一次，即在被测定的化俣物的一定浓度下测量4次。
以下表中和图中给出的数据是平均值±S.E。所有化合物的各种参数经统计学t检验(Student-Welch法)，P＜0.05，作用明显。
结果列于表一。
外周止痛作用在Writhing试验模型(IWRAC)和Randall-Selitto炎症疼痛试验模型(IRS)中得到证明。
见表二。
结构通式Ⅰ的2，3-二氮杂萘酮类衍生物的外周止痛作用
aIWRAC＝乙酸诱导的Writhing试验。百分数据指小鼠口服给药，剂量为6mg/kg。ED50为mg/kg。
bIRS＝Randall-Selitto炎症疼痛试验。百分数据指大鼠口服给药，剂量为10mg/kg。ED50值为mg/kg。
在使用细胞抑制剂治疗的过程中，可以看到最初的治疗完成后，肿瘤对治疗产生了抗性。使用其它的细胞抑制剂治疗也没有成功的希望。
这种现象叫做多药抗性(MDR)。(Vendrik，Bergers，deJong，SteerenbergResistancetoCytostaticdrugsattheCellularlevel，CancerChemother.Pharmacol.(1992)29，413-429)。
本发明的这些化合物同样适合于制备抗这种MDR现象的药物制剂。
这些化合物对突破MDR现象的药物制剂的适合性可被下述实验确定。
急性布朗-挪威(BrownNorway)脊髓白血病(BNML)，其生长特性及对化疗的反应类似于人类的骨髓细胞白血病(关于BNML的最近综述，参见Martens等人，Leukemia4，241-257，1990)。为建立一个临床相关的白血病抗药模型，从BNML中挑选出一个细胞系，命名为LT12。这个细胞系具有体内、体外都能生长的优势。
(体外)将人类mdr1基因通过转导引入染色体组-DNA，使LT12细胞对物质产生抗性。使用含有完整人类mdrl基团的CDNA表达载体PFRCMVmdr1.6，在一个跟随有HBV多聚腺苷信号肽的CMV启动子的早期加速因子控制下进行转导。用米托蒽醌(mitoxantron)选择出来的已转染的DNA片段保持在200nM米托蒽醌浓度下。这样产生出一稳定的、具抗药性的LT12细胞系，称之为LT12/mdr。
终点流式细胞光度法使用流式细胞光度法，依据水平方向的(体积参数)和垂直方向的(结构参考)光散射，可以鉴定细胞。对每个细胞发出一个0.6W的488nm的激光束水平光散射，垂直光散射(过一488-nm谱带的滤光片)和道诺红菌素荧光(过-550nm的谱带滤光片)，这个结果就可测定出来。结合散射值和荧光值，细胞群中的道诺霉素浓度就可测算出。在t＝0时道诺红菌素(最终浓度为2μm)和被试验的化合物(最终浓度为1.0μm，3.0μm或10μm)加到细胞悬浮液中(2·105细胞/ml，无苯酚红的RPMI-1640介质)，在37℃下温育90分钟。
细胞内的道诺红菌素浓度通过流式细胞光度法测得，即在488nm的激光放射刺激下，测定细胞的荧光。无酚红的RPMI-1640介质可作为阴性对照。每个实验用环胞菌素A(0.3，1和2μm)作为有效物质。死细胞用非活性染料Hoechst33258(用0.2W通过405nm谱带滤光片的紫外激光束刺激)作颜色对比来鉴别。这些死细胞和碎片总是排除于分析以外的。
在线流式细胞光度法在线流式细胞光度法是一般流式细胞光度法的改良，它可在几个小时期间对样品不停地进行测量。在预定的时间，微机可以储存2000个细胞的各种数据，并以列式文本排列。由于储存了每个细胞的相关参考(例如体积、结构、物质累积等)，因此进行数据缩合分析和更新实验都是可能的。
细胞悬浮液维持在带有恒温水浴套的37℃反应器内，反应器与流式细胞光度计的流动池相接。细胞内所含的介质采用空气压力通过流动池进行压榨。反应器上另外的入口可加入物质，同时观察细胞。因此，在线流式细胞光度法对快速测定细胞内物质浓度的动力学改变非常适合。
在这类实验中，起始的测量，细胞悬浮液中没有道诺红菌素(2·105细胞/ml于无酚红介质RPMI-1640中)。在t＝0时，细胞中加入道诺红菌素(最终浓度2μM)，然后在60分钟内测量细胞对道诺红菌素的净摄入量，直到测量到物质累积达到稳定水平。此时，加入被测试的化合物到细胞悬浮液中，再测量60分钟物质的累积。环胞菌素A加入细胞悬浮液中作为阳性对照物。
结果证实，本发明的化合物适于这种目的。未处理的LT12/mdr细胞显示23%的道诺红菌素荧光值，非抗药性细胞显示100%的道诺红菌素荧光值。对照物环胞菌素A在0.3μMol浓度时，显示120%道诺红菌素荧光值，1.0μMol时为110%，3μMol时为130%。
氟利
斯汀在1μMol浓度时，产生60%的道诺红菌素荧光，0.3μMol为110%，0.5μMol为130%，1.0μMol也是130%，3.0μMol时为140%。
氮
斯汀在0.1μMol下，显示50%的道诺红菌素荧光，0.3μMol为70%，0.5μMol为90%，1.0μMol为110%，3.0μMol为140%。
权利要求
1.一种组合球列检具，其特征在于它由四组球列L1、L2、L3、L4相互连接而成，四组球列处于同一平面内，球列L1上布有等间距排列的n个球体、球与球之间的距离是S，L1的长度是(n-1)S，球列L2和球列L3布有等间距排列的1/2(n+1)个球体，球与球之间的距离是S，L2和L2的长度是1/2(n-1)S，球列L4上布有等间距排列的n个球体、球与球之间的距离是
S，L4的长度是
(n-1)S，所有球体的直径相同。
2.按照权利要求1所述的这种组合球列检具，其特征在于球列L2和L3分别连接于L1的两端并与L1垂直，L1与L2相接处球体为L1的第1个球体、同时为L2的第1个球体，L1与L3相接处的球体为L1的第n个球体同时为L3的第1个球体，L4分别连接在L1的始端与L3的终端，球列L1与L4相接处球体为L1的第1个球体同时也为L4的第1个球体，L3与L4相接处球体为L3的第1／2(n＋1)个球体同时也为L4的第n个球体，辅助杆L5的两端分别固定连接在球列L2的钢球B5上和和球列L3的钢球C5上。
16.氟利
斯汀的右旋光体在制备药物制剂中的应用。
17.氟利
斯汀的右旋光体在制备药物制剂中的应用。
18.药物制剂的制备方法，其特片在于它含有氟利
斯汀的右旋光体及一常规辅料和载体。
19.药物制剂的制备方法，其特征在于它含有氟利
斯汀的左旋光体及一常规辅料和载体。
全文摘要
2，3-二氮杂萘酮类衍生物及其旋光异构体用作抗心律失常、止痛及突破多药抗性的药物。
文档编号A61P29/00GK1088435SQ9311817
公开日1994年6月29日 申请日期1993年9月29日 优先权日1992年10月2日
发明者J·恩格尔, B·库谢尔, I·福莱西豪尔, S·瑟勒尼, P·莫策瑙尔, U·沃尔 申请人:Asta药物股份公司