专利名称：含有莽草酸及其衍生物的药物制剂及其在制备抗血栓形成和镇痛作用药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及以莽草酸及其衍生物为活性成分的药物制剂。本发明还涉及莽草酸及其衍生物的药物新用途，具体讲是莽草酸以及莽草酸三乙酰衍生物(SA-2)在制备具有抗血栓形成和镇痛作用药物中的应用，属于药物领域。
莽草酸(Shikmic acid，SA-1)，为中草药木兰科八角属多种植物果实中含有的药效成分，其来源由八角科多蕊红茴香Illicium henrvivar.multistamineum的果实及八角属其它植物的成熟果实经甲醇等溶剂提取，精制而成。其分子式为C7H10O5，分子量为174.15。近年来，对血栓形成机制的研究及抗血栓药物的开发深受各国医药界的关注，并已有部分有效化合物处于临床和临床前研究阶段。抗血栓药物根据其作用机理分为三类抗凝药物、抗血小板药物和溶栓药物。抗凝药物中，除了天然和重组人类抗凝血酶-III外，还有凝血酶的直接抑制剂水蛭素、阿加曲班以及中药花椒、丹参、赤芍的粗提物；抗血小板药物目前取得不少新的进展，有抑制花生四烯酸代谢的药物钩藤碱、毛冬青甲素、芍药酚，抑制血小板激活因子的粉防已碱，银杏内脂B和海风藤酮，也发现有些中药或成分通过提高血小板内cAMP水平，降低血小板内Ca2+浓度从而抑制血小板聚集。随着血栓性疾病病理机制及体内纤溶机制的进一步阐明，抗栓和溶栓药物的研究越来越多，该类药物在急性心肌梗塞的溶栓治疗中占有重要的地位。已发现中药蒲黄的水溶液具有不依赖纤溶酶系的直接促纤溶作用。大蒜可明显降低血浆纤维蛋白原，并可直接激活纤溶酶，使分解纤维蛋白产生的片断显著增多，赤芍和蚯蚓水提物也均可在不同环节产生溶栓作用。总之，抗血栓药物的研究开发工作十分活跃，对药物作用机理的研究已深入到分子和受体水平。尽管目前的工作取得不少成绩，但存在问题也较多，主要问题是中药的研究制剂纯度不够，粗制剂中杂质多，对药效、作用机理及临床给药途径带来很大的局限性。因此，纯的单体药物是今后开发的主要方向。目前国内外对于莽草酸的研究仅局限于药理作用的研究，尚未见有关莽草酸药物制剂的报道。对莽草酸及其衍生物的药理研究多集中在细胞毒及抗生方面，未见有关对血液系统作用的研究。另外，也未见关于莽草酸在镇痛等其他药理作用方面的报道。
本发明目的是提供一个具有良好的抗血栓形成及溶栓作用，且具有镇痛作用的药物制剂，该药物以莽草酸(SA-1)及其衍生物三乙酰莽草酸(SA-2)为活性成分，该活性成分为资源丰富、容易提取、结构简单、易于人工合成的新型药物单体，且不良反应小。
本发明的另一个目的是提供莽草酸(SA-1)及其衍生物在制备抗血栓形成和镇痛作用药物中的应用。
本发明药物的药效成分莽草酸及其衍生物的来源之一是由下述方法提取取八角属植物的成熟果皮，粉碎，以甲醇为溶剂提取，浓缩，放置，过滤沉淀，石油醚处理，甲醇反复结晶即得莽草酸。
取莽草酸，加入醋酐，再滴加浓硫酸，放置，将反应物加到冰水中摇拌，放置，上层水层以氯仿萃取，以此氯仿再溶解处理下层反应物，水洗氯仿，减压回收氯仿，即得莽草酸三乙酰化物。
本发明药物含有有效量的莽草酸及其衍生物，所说的莽草酸衍生物优选三乙酰莽草酸。
本发明药物含有1％-99％重量份的莽草酸及其衍生物，所说的莽草酸衍生物优选三乙酰莽草酸。
本发明药物优选含有10％-80％重量份的莽草酸及其衍生物，所说的莽草酸衍生物优选三乙酰莽草酸。
本发明药物更优选含有20％-60％重量份的莽草酸及其衍生物，所说的莽草酸衍生物优选三乙酰莽草酸。
本发明药物最佳含有25％重量份的莽草酸及其衍生物，所说的莽草酸衍生物优选三乙酰莽草酸。
本发明药物除含有有效量的莽草酸及其衍生物之外，还含有药剂学领域中常用的药物赋形剂，例如，溶剂、填充剂、调味剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、润湿剂、色素、增溶剂、稀释剂、增稠剂等。
根据常规的制剂技术，本发明药物可以制备成任何一种适合于临床使用的药物制剂，例如，丸剂、片剂、散剂、注射剂、口服液、胶囊剂、混悬剂、膏剂、颗粒剂、粉针剂、咀嚼剂等。
本发明药物片剂的制备方法如下组分莽草酸25克糖粉 22克淀粉 43克10％淀粉浆适量硬脂酸镁0.5克制成1000片制法将莽草酸、糖粉分别粉碎、过筛、混合均匀，加淀粉浆搅匀、加入淀粉浆的量以达到适合于制粒的程度为宜，用16目尼龙筛制粒，60℃干燥，加硬脂酸镁混匀，压片，每片含莽草酸25毫克。
本发明药物注射剂的制备方法如下组分莽草酸25克氯化钠9克注射用水加至1000毫升制法取注射用水800毫升，加入氯化钠搅拌溶解，再加入莽草酸使之溶解，再加水至足量，搅拌，过滤，灌封，100℃流通蒸汽30分钟灭菌，即得。
本发明药物与现有抗血栓药进行比较，具有良好的抗血栓形成及溶栓作用，且具有镇痛、解热、抗炎等作用。并且其活性成分药物单体资源丰富、容易提取、结构简单、易于人工合或。莽草酸(SA-1)及其衍生物三乙酰莽草酸(SA-2)经药理实验证明具有良好抗血栓形成作用，其三乙酰基衍生物则可加强其作用，并又具有溶栓作用，是一种疗效好且不良反应小的治疗血栓性疾病的新型药物。
实验例1莽草酸抗血栓形成作用实验研究1.莽草酸对大鼠动、静脉旁路血栓的影响实验材料(1)动物Wistar种雄性大鼠体重250g～350g中国医学科学院实验动物研究所繁育场提供，合格证编号为(京动字)第9201R018号。(2)受试药莽草酸纯品由本北京中医药大学药化研究室郭亚健教授提供，干燥器内保存。使用时用生理盐水新鲜配制，用1NNaOH溶液调pH＝7，供静脉注射用。(3)仪器LIBRORAEG-220型电子天平，日本SHMADEE公司产品。方法与结果取大鼠随机分为9组，即对照组、莽草酸400mg/kg组、100mg/kg组、50mg/kg组、25mg/kg组，肝素140μ/只，川芎嗪50mg/kg组、25mg/kg组。腹腔注射戊巴比妥钠50mg/kg麻醉，仰位固定，颈部手术分离右颈总动脉及左颈外静脉。取三段聚乙烯管(两段分别长10cm，内径1mm，中段长8cm，内径2mm)，在中段中放入一根长5cm的号丝线(预先称重)、再连接两段细管。从一端注入肝素生理盐水溶液(50μ/ml)，充满管腔，管的一端插入左颈外静脉，另一端插入右颈总动脉。手术完成后立即由股静脉注射药物(给药组)和生理盐水(对照组)，开放血流，15分钟后中断血流，迅速取出丝线称重，总重量减去线线重即为血栓重量，在60℃烤箱中烘1小时后称重，减去丝线重即为血栓干重。按下列公式计算抑制率。
对照组血栓干(湿)重-给药组血栓干(湿)重抑制率对照组血栓干(湿)重×100g表1莽草酸对大鼠动静脉旁路血栓的影响组别 剂量动物数 血栓湿重抑制率血栓干重抑制率(mg/kg)(n) (mg) (mg) (mg) (％)对照组-1125.9±12.2 6.7±3.7 -莽草酸 400 109.1±4.0**65 2.8±1.5 58.2莽草酸 200 105.9±27***77 1.6±1.2 76.1莽草酸 100 106.2±3.8***76 1.8±1.2 73.1莽草酸 501012.5±8.1**52 2.4±1.8 64.2莽草酸 25108.6±3.3**67 1.8±1.3 73.1川芎嗪 501110.9±4.9***58 2.4±1.8 64.2川芎嗪 25128.6±2.3***67 1.8±1.1 73.1肝素 140μ/只 102.2±1.0***92 0.3±0.3 95.5**和***与对照组比较P＜0.01和P＜0.001表1结果显示，静脉注射莽草酸400mg/kg～25mg/kg，具有对抗动-静脉环路血栓形成作用，作用强度与川芎嗪类似。但未见明显而规律的量效关系。2.莽草酸对大鼠颈总动脉血栓形成的影响实验材料(1)动物Wistar种雄性大鼠体重250g～350g，由中国医学院实验动物实验所繁育场提供，合格证编号为(京动字)第9209-R018号。(2)受试药莽草酸纯品由本校药化教研室郭亚健教授提供，干燥器保存。使用时间生理盐水新鲜配制，用1N NaOH溶液调pH＝7，供静注。(3)仪器BT87-3型实验性体内血栓形成测定仪，包头医学院研制。方法与结果大鼠随机分成5组，腹腔注射巴比妥钠50mg/kg麻醉。仰位固定于手术台上，切开颈部皮肤，分离右侧颈总动脉3cm，将BT877-3型实验性血栓形成测定仪的刺激电极安放在动脉近心端，温度传感电极安放在远心端，两电极间距2.5cm。将电极固定于手术台架上、手术完成后给药组分别于股静脉注射莽草酸溶液400mg/kg、200mg/kg、100mg/kg，肝素组给1％肝素溶液0.1ml/只，以照组给等容量生理盐水。给药后开动血栓形成仪开关，给予1.5mν直流电刺激7分钟，以损伤内皮细胞、10分钟后温度指示针调零、随着腔内血栓的形成，动脉远心端温度突降，仪器报警，显示动脉阻塞时间OT(occlusion time)，结果见表2表2莽草酸静脉给药对大鼠颈总动脉血栓形成的影响组别 剂量动物教 血栓形成时间(mg/kg) (只) OT(X±SD)对照组等容量 10 966.1±125.9莽草酸组400 101432.2±147.2***莽草酸组200 101260.6±190.3***莽草酸组100 101362.8±127.9***肝素组140U/只101598.8±271.2***注***与对照组比较P＜0.001
结果表明和对照组相比，莽草酸400mg/kg组、200mg/kg组、100mg/kg组都显著延长了血栓形成时间(P＜0.001，P＜0.001，P＜0.001)，作用和肝素组相似者，二者相比组间无显著差异。3.莽草酸对大鼠下腔静脉血栓的影响(1)动物Wistar种雄性大鼠，体重300～350g，由中国医学科学院实验动物研究所繁育场提供，合格证编号为(京动字)第9209-R018号。(2)受试药和其他药品莽草酸纯品由本校药化研究室郭亚健教授提供，使用时用生理盐水新鲜配制，用1N NaOH溶液调pH＝7，供静注用，用1％ CMC(羧甲基纤维素钠)混悬后供灌胃用；肝素每mg效价为140U，批号930412，中国医药公司北京采购供应站产品。(3)仪器DF206电热鼓风干燥箱，北京京通仪器厂产品。方法与结果①静脉注射给药对大鼠结扎下腔静脉血栓形成[1]作用。
取大鼠随机分成5组，腹腔注射戊巴比妥钠溶液50mg/kg麻醉。仰位固定，开腹分离下腔静脉。由股静脉注射给药，莽草酸组分别给莽草酸溶液400mg/kg、200mg/kg、100mg/kg，肝素组给0.1％肝素0.1ml/只，对照组给等容量生理盐水。给药后在下腔静脉右肾静脉分支处下方结扎下腔静脉、用一根5号丝线将腔静脉扎紧。缝合腹壁，6小时后重新开腹，在扎线处下方2cm处夹闭血管，剖开管腔，取出血栓，称湿重，然后在60℃烤箱中烤1小时后称干重，结果见表3。
表3莽草酸静注对大鼠结扎下腔静脉血栓形成的影响组别 剂量 动物数 血栓湿重(X±SD)血栓干重(X±SD)(mg/kg) (只)(mg)(mg)对照组 等容量 8 3.02±8.0 10.0±3.9莽草酸组 400 8 33.9±22.0 11.1±7.0莽草酸组 200 8 10.6±6.6***2.6±1.7***莽草酸组 100 8 19.4±9.7*5.6±2.8*肝素组 140U/只 8 1.8±1.2*0±0.5*注***P＜0.001*P＜0.05
结果表明与对照组相比，莽草酸200mg/kg组显著的降低了血栓干湿重(P＜0.001)，莽草酸100mg/kg组作用明显(P＜0.05)。莽草酸400mg/kg组作用不明显。②口服连续给药对大鼠结扎下腔静脉血栓形成的影响取大鼠随机分为4组，莽草酸组每天灌胃一次莽草酸1％CMC溶液400mg/kg、200mg/kg；阿斯匹林组灌胃阿斯匹林1％cmc溶液30mg/kg。对照组给等容量1％CMC。连续给药3天，末次给药60分钟手术。观察结扎下腔静脉血栓形成的影响、方法见本模型静脉给药部分，结果见表4。表4 口服莽草酸对大鼠结扎下腔静脉血栓形成的影响(连续给药)组别 剂量动物数 血栓湿重 血栓干重(mg/kg)(只) (mg) (mg)对照组 100520.4±20.57.4±7.8阿斯匹林组30645.7±40.015.1±12.7莽草酸组 40049.5±6.2**2.8±1.7**莽草酸组 200532.0±22.818.0±19.8注**P＜0.05结果表明莽草酸连续口服400mg/kg组有抑制结扎下腔静脉血栓形成作用(P＜0.05)，莽草酸口服200mg/kg组及阿斯匹林组作用不明显。4.莽草酸对小鼠肺栓塞模型的影响实验材料(1)动物昆明种雄性小鼠体重25～30g，由北京医科大学实验动物供应部提供，合格证编号(京动字)第8806M038。(2)药品受试药莽草酸纯品由本校药化研究室郭亚健教授提供，使用时用生理盐水新鲜配制，用1N NaOH溶液pH＝7，供静永主射用。ADP凝血酶为Sigma公司产品；盐酸肾上腺素为市售。方法与结果取雄性小鼠50只，体重25～30g随机分成5组。新鲜配凝血混合液、将凝血酶5mg溶入5ml生理盐水中；将ADP1.74mg溶入2.5ml生理盐水中；再取0.1％肾上腺素0.125ml。将三种溶液混合。取小鼠分别于尾静脉注射给药，莽草酸组给莽草酸溶液200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg。对照组给等容量生理盐水。给上述药物1分钟后在每只小鼠尾静脉再注射凝血酶混合液0.1ml/10g。记录小鼠死亡时间，死亡数，计算死亡率，结果见表5。
表5莽草酸静脉给药对凝血酶诱发小鼠急性肺栓塞的影响组别 剂量 动物数 死亡数 死亡率 死亡时间(X±SD)(mg/kg) (只)(只)(％) (S)对照组 等容量10 10 100 299.8±116.42莽草酸组 10 10 9 90 313.0±238.08莽草酸组 50 10 5 50 623.1±361.93 △莽草酸组 100 10 8 80 377.1±319.31莽草酸组 200 10 4 40 663.9±313.32△△注经卡方检验有意义△，△△和对照组相比P＜0.01结果显示对照组小鼠引起肺栓塞，死亡率为100％，静注莽草酸200mg/kg组和50mg/kg组显著降低了死亡率。二者死亡率分别为40％、50％并且明显的延长死亡时间(P＜0.01，P＜0.05)。莽草酸100mg/lg，10mg/kg组作用不明显。5.莽草酸对凝血时间的影响实验材料(1)动物昆明种雄性小鼠，体重25～30g，由北京医科大学实验动物供应部提供，合格证编号(京动字)第8806M038。(2)药品受试药莽草酸纯品由本校药化研究室郭亚健教授提供、使用时用0.2N NaOH调pH后加适量生理盐水新鲜配制。方法与结果1.莽草酸肌注对小鼠凝血时间的影响(玻片法)取雄性小鼠48只，随机分成4组，给药组分别注射肌肉注射莽草酸溶液200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg、对照组给等容量生理盐水。30分钟后，用于术在距小鼠尾尖1cm处迅速剪断，挤一滴血在干净的载玻片上，血滴直径约5mm，并立即用秒表计时。2分钟后每隔30秒用清洁大头针自血滴边缘向里轻轻拨动一次，观察有无血丝生成，有血丝挑起时即为凝血时间。结果见表6，
表6莽草酸肌肉注射对小鼠凝血时间的影响(玻片法)组别 剂量动物数 凝血时间(mg/kg)(只) (X±SD)对照组等容量12 255±60.7莽草酸组200 12 257±71.0莽草酸组100 12 385±62.4***莽草酸组50 12 360±15.3***注***P＜0.001结果显示和对照组相比，莽草酸肌注100mg/kg组、50mg/kg组显著延长凝血时间(P＜0.001，P＜0.001)。200mg/kg组作用不明显。2.莽草酸肌注对小鼠凝血时间的影响(毛细管法)取雄性小鼠80只，体重25～30g、随机分为4组，给药组分别肌注莽草酸溶液100mg/kg、50mg/kg，川芎嗪组肌注川芎溶液100mg/kg。对照组给等量生理盐水。30分钟后取一根毛细玻管(长10cm，内径1mm)，插入小鼠内眦球后静脉丛，深4～5mm自血液注满管腔后开始计时，取出毛血玻管，水平放置、2分钟后每隔30秒折断毛细管两端0.5cm，并缓慢拉开，观察是否有凝血丝出现，有凝血丝出现时即为凝血时间。结果见表7。
表7莽草酸肌肉注射对小鼠凝血时间的影响(毛细玻管法)组别 剂量动物数凝血时间(mg/kg) (只) (X±SD)对照组等容量 20199.5±38.04莽草酸组 1000 20244.5±46.98**莽草酸组 50 20240.0±38.93**川芎嗪组100 20247.5±51.39**注**P＜0.01结果表明和对照组相比，莽草酸100mg/kg组延长凝血时间作用显著(P＜0.01，p＜0.001)，作用和川芎嗪相似，二者相比组间无显著差异。3.莽草酸对凝血时间的影响量效关系观察实验材料(1)动物昆明种小鼠，体重18～22g，由北京医科大学实验动物供应部提供，合格证编号(京动字)第8806M038。(2)受试药莽草酸纯品由本校药化教研室郭亚健教授提供，每日注射前现配现用，溶液用0.5N NaOH调pH至6.5～7.0。方法与结果小鼠80只，按体重随机分为4组莽草酸8mg/kg、40mg/kg、200mg/kg(剂量比为1∶5∶25)和正常对照组，给药组每日腹腔注射给药一次，对照组给予等容量的生理盐水，连续18天，分别于给药第4天、第8天、第11天、第15天和第18天时，用毛细管从小鼠眼球静脉丛取血，每隔15秒折断毛细管一次，检查有无血液凝固出现，记录取血至凝血时间，并进行组间统计。结果见表8。
表8莽草酸对小鼠凝血时间量效关系观察组别 剂量 凝血时间(S，X±SD)(mg/kg)给药4天 8天 11天 15天 18天对照组 - 98.8±15.1 101.2±40.5 92.6±37.4 103.1±85 103.1±19.9莽草酸 8 113.5±26.4 90.2±31.4 75.1±27.4 79.2±25.5 80.0±27.0莽草酸40 158.3±19.3 121.5±34.1 144.9±46.2 161.6±21.1279.5±84.0莽草酸 200 177.0±76.1 126.8±32.8 104.9±27.2 139.4±33.4216.3±42.0表8结果表明，莽草酸8mg/kg，对凝血时间无明显影响。40mg/kg从给药4天至第18天，均使小鼠凝血时间延长，作用相对稳定，未发现随用药天数增加而作用增强的明显趋势，200mg/kg剂量组作用并不强于40mg/kg，因而未见明显量效关系，该结果有待进一步重复论证。小结莽草酸有抗血栓形成作用，在剂量25mg/kg～400mg/kg的剂量范围内静脉注射，可减轻大鼠动、静脉环路血栓的湿重、干重、抑制率在52％～77％之间，也抑制静脉血栓形成，减轻结扎下腔静脉所形成的血栓的干重和湿重。莽草酸50mg/kg～200mg/kg静注可对抗凝血酶、ADP和肾上腺素混合液所致的急性小鼠肺栓塞、降低死亡率、延长死亡时间。莽草酸50mg/kg、100mg/kg和200mg/kg肌注可使小鼠凝血时间延长，但未见明显量效关系。实验例2 莽草酸镇痛作用实验研究1.莽草酸镇痛作用观察(1)小鼠热板法实验材料I.动物昆明种小鼠雌性体重18～22g，由中国医学科学院实验动物研究所繁育场提供，合格证号(京动字)M139290号。II.受试药莽草酸由本校药化教研室郭亚健教授提供，使用用生理盐水配制，并用0.5N NaOH调pH至7.0，供肌注用；延胡索乙素注射液，广西饮州地区制药厂生产，批号9401001。III.仪器热板法测痛阈装置(小型三用水箱，北京西城区医疗器械厂；铅盒、秒表、温度计)。方法和结果A.将小鼠置于55°I0.5°恒温水浴热板上，记录添后足的潜伏期为痛阈反应时间，大于30″的弃去不用、取痛阈合格小鼠60只，称重后随机分为5组，生理盐水对照组，莽草酸50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg组，阳性对照药延胡索乙素15mg/kg组，给药途径采用肌肉注射，容量为0.1ml/20g，并于给药前、给药后60’、120’、180’、240’、360’痛阈时间，与对照组进行组间t检验，与给药前比较有否显著性差异，结果见表9。
表9莽草酸对小鼠热板法致痛的影响组别 剂量动物数 给药前 痛阈时间(X±SD)(mg/kg) (只) 给药后60’ 120’ 180’240’ 360’生理盐水 200 12 16.60±2.12 15.79±4.78 20.10±6.00 21.61±8.2220.27±5.57 20.25±5.47莽草酸 200 12 17.27±5.14 33.98±18.26**39.47±20.04**31.72±13.98*43.8±32.52*29.82±12.70*莽草酸 100 12 20.18±4.39 21.65±8.34*35.33±23.29*20.12±5.0540.96±28.68*26.80±11.09莽草酸 50 12 16.25±3.85 23.25±5.64**27.32±9.11△△△ 28.50±16.54△ 24.73±6.13△△△ 21.02±10.12延胡索乙素 15 12 18.46±3.88 31.38±11.30***36.97±14.13 34.48±21.15 34.10±19.14 30.12±16.12***，**和*与对照组比较P＜0.001，P＜0.01和P＜0.05△△△，△△和△与给药前比较P＜0.001，P＜0.01和P＜0.05B.取葡萄阈合格小鼠60只，分组及给药方法同A，于给药后15’、30’、60’、120’和180’测小鼠痛阈时间，统计给药组与对照组之间，给药后与给药前有否显著差异。结果见表10。
表10莽草酸对小鼠热板法致痛的影响组别 剂量 动物数 给药前 痛阈时间(X±SD)(mg/kg)(只) 给药后15’ 30’60’120’ 180’生理盐水 200 12 16.58±4.2713.70±3.63 15.56±5.49 15.66±5.9217.00±7.18 16.88±7.37莽草酸 200 11 14.47±2.8317.07±6.33 13.87±3.53 20.13±740△ 19.82±4.21△△△*29.73±17.61*莽草酸 100 12 16.577±3.99 17.31±752 17.25±5.90 21.81±5.20△*26.27±10.5219.37±5.84莽草酸 50 12 15.40±2.8318.89±7.13 18.10±6.25 25.68±9.17△△**29.51±14.52△△**29.68±12.64△△△**延胡索乙素 60 12 19.14±3.8040.55±16.56***43.82±15.88***46.3±16.99***34.81±19.51*32.70±18.74*备注***，**和*与生埋盐水比较P＜0.001，P＜0.01和P＜0.05△△△，△△和△与给药前比较P＜0.001，P＜0.01和P＜0.05热板法实验证明，莽草酸50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg均有镇痛作用，作用明显时间为1h，司持续4～6h。作用起效时间慢于延胡索乙素，但持续时间明显长于延胡索乙素。C.口服给药莽草酸对小鼠热板法的作用取小鼠70只，随机分为7组(见表11)灌胃给予不同剂量的莽草酸式阿斯匹林给药后1h、2h、3h、4h时测痛阈，结果见表11。
表11莽草酸对小鼠热板法致痛的影响(X±SD)药物 动物 给药前小鼠 给药后不同时间小鼠痛(S)及剂量 数痛阈(S)1h2h 3h 4h对照组 10 12.3±2.113.9±7.6 14.8±7.3 20.5±7.9 15.5±9.5莽草酸0.6g/kg组 10 15.0±2.841.4±17.1△△**23.9±7.7△△*20.6±9.1△△ 17.1±5.0莽草酸0.4g/kg组 10 14.6±3.319.4±7.3 18.7±7.4 31.6±9.5**22.3±9.5△莽草酸0.2g/kg组 10 12.6±3.915.2±4.2 20.2±8.4△△ 24.7±11.9△△ 27.8±9.3△△莽草酸0.1g/kg组 10 16.1±2.916.3±4.4 14.7±4.1 18.6±5.2 21.8±8.3阿司匹林0.4g/kg组 10 11.0±2.814.0±4.4 20.1±10.9△14.5±5.2 20.0±10.1△阿司匹林0.2g/kg组 10 16.1±3.720.5±4.8△*18.9±3.0**26.0±11.1 28.7±7.7△△**注与对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01与给药前相比△P＜0.05△△P＜0.01结果表明莽草酸口服0.6g/kg、0.4g/kg、0.2g/kg有一定镇痛作用，从剂量看作用所需剂量比肌注要大。(2)小鼠醋酸扭体法实验材料I.动物昆明种小鼠雌雄各半，体重18～22g，由中国医学科学院实验动物研究所繁育场提供，合格证号(京动字)N139290号。II.药品莽草酸纯品由本校药化教研室郭亚健教授提供，现用现配，溶于生理盐水中，用0.5N NaOH调pH＝7，作为肌注用；冰醋酸为分析纯，北京化工厂产品；延胡索乙素注射液，广西柳州地区制药厂生产，批号9401001。实验结果a.取小鼠100只、雌雄各半，称重后随机分为5组；生理盐水组、莽草酸200g/kg、100g/kg、80g/kg组，延胡乙素15mg/kg。各组按剂量肌注给药，1h后腹腔注射0.6％醋酸溶液0.1mg/10g，记录0’～10’、10’-20’时间内小鼠扭体次数，并进行组间显著性比较，结果见表12。
表12结果表明，肌注莽草酸200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg均能减少小鼠扭体次数，其中200mg/kg和50mg/kg剂量作用非常显著，延胡索乙素15mg/kg也有类似作用。b.取小鼠86只，雌雄各半，按表12分组，并灌胃给药，其余方法同实验a.结果见表13表13结果表明，小鼠口服给予莽草酸0.6mg/kg、0.4mg/kg、0.2mg/kg和0.1mg/kg对醋酸所致小鼠扭体反应有明显对抗作用，说明镇痛作用较强，与阿斯匹林0.2mg/kg，氯唑沙宗片0.2g/kg的作用相似。
表12莽草酸对小鼠醋酸致痛的影响组别剂量动物数 相体次数(X±SD)mg/kg(只) 0’～10’ 10’～20’生理盐水 200 1928.57±13.8632.78±10.80莽草酸 200 2016.10±8.35**21.25±10.72**莽草酸 100 2124.00±11.9027.19±12.37莽草酸50 1918.52±7.13**21.94±10.54**延胡索乙素15 1915.21±12.0015.21±11.67***备注，和与生理盐水比较P＜0.001，P＜0.01和P＜0.605
表13莽草酸对醋酸致小鼠扭体的影响(X±SD)药物 动物 扭体反应给醋酸后不同时间小鼠扭体次数及剂量 数 潜伏期 0～10min 10～20min对照组 18 298.3±143.7 19.9±13.5 28.7±9.6莽草酸0.6/kg组10 586.0±310.2 7.2±8.19.0±7.1莽草酸0.4g/kg组 10 394.3±92.8*5.9±3.6**9.7±3.9**莽草酸0.2g/kg组 10 584.9±385.9*6.9±9.0*9.0±9.1**莽草酸0.1g/kg组 10 671.2±391.4**3.9±8.7*7.5±7.4**阿司匹林片0.1g/kg组 10 338.6±98.1 5.6±2.8**10.3±.3**氯唑沙宗片0.2g/kg组 18 369.7±172.9 7.4±6.0**12.1±2.3**注与对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01(3)大鼠光辐射热甩尾法实验材料I.动物Wistar种，雄性，体重150～220g，由中国医学科学院实验动物研究所繁育场提供，合格证编号为(京动字)第9209-R018号。II.受试药莽草酸由本校药化教研室郭亚健教授提供，用生理盐水配制，并用0.5N NaOH调pH至70，供肌注，延胡索乙素注射液，广西饮州地区制药厂生产，批号9401001。III.仪器热辐射测定痛阈装置，由本校仪器维修室自制，本教研室监制。实验方法a.取雄性大鼠50只，随机分为5组，每只大鼠在其尾部外1/3处先以75％酒精擦去皮脂，抹上炭索墨水，以18V稳压电流下的卤灯通过聚焦后照射在大鼠尾部涂黑处，记录甩尾潜伏期，小于30＂为合格，测其基础阈值后，各组小鼠分别肌肉注射生理盐水、莽草酸200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg延胡索乙素15mg/kg。分别于给药后30’、60’、120’和180’测定大鼠甩尾潜伏期，并进行组间比较。结果见表14。b.取雄性大鼠60只，随机分为6组(见表15)口服给药各剂量外，给药后1h、2h、3h、5h时测定痛阈反应，方法同实验a结果见表15。
表14莽草酸对大鼠光辐射致痛的影响组别 剂量 动物数 给药前 痛阈时间(X±SD)(mg/kg) (只) 给药后30’60’ 120’180’生理盐水 200 10 6.81±2.44 3.40±0.983.88±1.5 23.63±1.972.57±0.58莽草酸 200 10 7.49±3.08 8.99±5.02**10.49±4.2 39.26±6.44*8.28±4.70**莽草酸 100 10 6.82±1.89 4.89±2.037.9±4.10 6.27±4.00 4.50±1.62**莽草酸 50 10 6.69±2.19 8.11±3.00***7.28±3.09**8.69±4.89**5.92±4.32*延胡索乙素 15 10 6.67±3.21 6.69±8.60***15.29±6.20***5.51±2.25 3.70±2.65备注***，**和*与生理盐水比较P＜0.001，P＜0.01和P＜0.05表14结果表明生理盐水对照组大鼠多次辐射致痛后，对痛反应敏感，甩尾时间在2.57秒～3.88秒之间，肌注莽草酸200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg，均有镇痛作用，与同时间生理盐水组比较有显著性差异(P＜0.05、P＜0.01和P＜0.001)。作用强度弱于延胡索乙素，但持续时间长。
表15莽草酸对大鼠辐射刺激甩尾反应的影响(X±SD)药物 动物 给药前小鼠 给药后不同时间小鼠痛(S)及剂量数 痛阈(S) 1h2h 3h 4h对照组10 7.6±24 62±3.7 5.6±26 7.8±4.4 9.1±6.8莽草酸0.4g/kg组 10 8.5±3.015.4±5.0△△**15.6±5.1△△**10.0±4.6 7.7±5.1莽草酸0.2g/kg组 10 7.5±2.913 5±5.0△△**8.2±5.8 10.7±6.2 8.8±6.8莽草酸0.1g/kg组 10 7.2±3.68.5±4.1 7.7±4.6 8.7±4. 6 5.9±4.9阿司匹林0.4g/kg组 10 7.5±2.812.6±5.6△△**13.4±5.2△△**12.9±5.3△ 5.5±2.1阿司四林02g/kg组 18 6.4±3.419.0±3.3△**15.3±5.1△△**12.3±6.3△*8.3±6.6注与对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01与给药前相比△P＜0.05△△P＜0.01表15结果证明莽草酸口服给药0.4mg/kg、0.2mg/kg、0.1mg/kg均可使痛阈反应时间延长，其中0.4mg/kg和0.2mg/kg剂量组与对照组比较，具有显著性差异。作用与阿斯匹林，氯唑沙宗片相似，组间无显著性差异。小结小鼠热板法、小鼠醋酸扭体法、大鼠辐射热致痛法证明，莽草酸50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg肌肉注射和口服给药具有明显镇痛作用，作用时间可维持6小时以上，作用强度与阿斯匹林、氯唑沙宗片相似，注射给药作用弱于胡索乙素，但作用时间长于延胡索乙素。2.莽草酸镇痛特点研究实验材料I.动物Wistar种雄性大鼠，体重180～220g，由中国医学科学院实验动物研究所繁育场提供，合格证编号为(京动字)第9209-R018号；昆明种雄性小鼠，体重18～22g，由中国医学科学院研究所繁育场提供，合格证号(京动字)M139290号。II.药品受试药莽草酸由本校药化教研室郭亚健教授提供，用生理盐水配制，0.5N NaOH调pH至7.0供肌注用；戊巴比妥钠，中国医药公司北京采购站进口分装；醋酸泼尼松片天津力生制药厂产品，批号940806；啤酒酵母北京啤酒厂生产；安痛定大同市惠达制药厂产品，批号921229。III.仪器MK-ANIMEX小鼠自主活动仪，日本产。方法与结果(1)莽草酸与戊巴比妥钠的协同试验；取雄性小鼠40只，随机分成4组(见表16)，各组按剂量肌肉注射，5’后腹腔注射戊巴比妥钠30mg/kg，以翻正反射消失与重现之间的时间为睡眠时间，观察组间有否差异性。见表16。
表16莽草酸对戊巴比妥钠催眠的影响组别剂量 动物数 翻正反射消失数睡眠时间(X+S)mg/kg (只) (只) (分)生理盐水+戊 20010 733.43+18.04莽草酸+戊20010 841.75±28.27莽草酸+戊10010 826.63±11.07莽草酸+戊50 10 745.43±3.68
上述结果表明，莽草酸对戊巴比妥钠的催眼作用无明显的协同或拮抗作用。(2)莽草酸对小鼠自主活动的影响取小鼠110只，雌雄各半、随机分为5组、分别肌注生理盐水，莽草酸200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg延胡索乙素15mg/kg，于给药后60’、180’、360’小鼠自主活动仪中观察6’内小鼠自主活动情况，结果见表17表17莽草酸对小鼠自主活动的影响组别剂量 动物数 自主活动次数(6’)(X+S)(mg/kg) (只) 1h 3h 6h生理盐水 200 22741.50±144.60559.36±167.09592.00±119.07莽草酸 200 22743.36±126 89551.00±173.47529.32±160.87莽草酸 100 22786.41±58.75 594.23±130.47586.91±78.40莽草酸50 22733.73±54.66 581.86±145.26524.95±169.85延胡索乙素15 22618.00±151.52528.23±117.83586.91±103.84上述结果表明，肌注莽草酸200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg与生理盐水组比较，小鼠自主活动次数无明显差异，而给延胡索乙素组在60’时能明显地减少小鼠活动，且数值与生理盐水组比较存在显著性差异，180’时恢复正常，说明肌注莽草酸对中枢无抑制或兴奋作用。(3)莽草酸解热作用观察——对啤酵母法致发热大鼠的影响取雄性大小50只，按体重，随机分5组，测过正常测温后背部皮下注射10％啤酒酵母的生理盐水混悬液，5h后测肛温，升高1℃左右，肌注生理盐水，莽草酸200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg及腹腔注射阳性对照药安痛定0.15mg/100g，于给药后1h、2h、3h、5h测肛温，统计组间显著性差异，结果见表18。
表18莽草酸对啤酒酵母致大鼠体温升高的影响组别 剂量 动物数 基础 给药后体温(X+S)(mg/kg) (只) 体温 给药前1h 2h 3h 5h生理盐水 200 1037.10±0.61 38.32±0.61 39.28±0.24 38.31±0.5238.07±0.48 37.34±0.62莽草酸 200 1037.23±0.59 38.40±0.67 38.26±1.02**37.56±0.67*37.47±0.41 37.1±0.71莽草酸 100 1037.02±0.63 38.44±0.52 37.22±1.01***37.83±0.6237.40±0.43 36.88±0.69莽草酸 50 1037.16±0.73 38.17±0.63 37.95±0.96***37.58±0.78*37.92±0.54 37.16±0.59安痛定 105 1037.10±0.61 38.72±0.63 36.45±0.85***36.71±0.83***37.02±0.61 37.10±0.69备注***，**和*与生理盐水组比较P＜0.001，P＜0.001和P＜0.05
上述结果表明，肌注莽草酸的三个剂量组在1h、2h、3h均能明显地降低啤酒酵母所致的大鼠体温升高，其中阳性对照安定给药1h作用明显，2h、3h时体温持续回升，而给药组的体温则继续下降，说明肌注莽草酸对啤酒酵母所致的大鼠发热有解热作用。(4)莽草酸抗炎作用观察——对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响取雄性大鼠50只，体重180～2200g，随机分为5组，肌注生理盐水，莽草酸200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg，口服给阳性对照药强的松的CMC-Na混悬液40mg/kg，1h后左后足部皮下注射1％角叉菜胶0.01mg/kg，测定给角叉菜胶后60’、180’、300’、360’大鼠足趾部周长，计算肿胀度，统计结果表19。
表19莽草酸对角菜胶大鼠足肿胀的影响组别 剂量给药动物数 足肿胀度(X±S)mg/Kg方式 (只) 1h 3h 5h6h生理盐水 200 肌注 10 0.355±0.1160.671±0.1600.0945±0.239 0.855±0.202莽草酸200 肌注 10 0.180±0.063**0.565±0.1180.770±0.230.855±0.176莽草酸100 肌注 10 0.280±0.1490.778±0.2390.785±0.207 0.85±0.211莽草酸50 肌注 10 0.165±0.136**0.565±0.164*0.705±0.248*0.85±0.169强的松40 口服 10 0.165±0.120**0.300±0.150***0.595±0286**0.575±0.278**备注***，**和*与生理盐水组比较P＜0.001、P＜0.01、P＜0.05表18结果表明，肌注莽草酸200mg/kg、100mg/kg、50mg/kg对角叉菜胶所致大鼠急性炎性足肿胀有对一定抗作用，在给药1h时200mg/kg、50mg/kg作用较显著。小结莽草酸镇痛作用特点研究结果说明，在镇痛的剂量范围内，无中枢抑制作用，有一定解热作用和抗炎作用。
实施例1莽草酸25克糖粉 22克淀粉 43克10％淀粉浆适量硬脂酸镁0.5克制成1000片将莽草酸、糖粉分别粉碎、过筛、混合均匀，加淀粉浆搅匀，加入淀粉浆的量以达到适合于制粒的程度为宜，用16目尼龙筛制粒，60℃干燥，加硬脂酸镁混匀，压片，每片含莽草酸25毫克。
实施例2莽草酸25克氯化钠9克注射用水加至1000毫升取注射用水800毫升，加入氯化钠搅拌溶解，再加入莽草酸使之溶解，再加水至足量，搅拌，过滤，灌封，100℃流通蒸汽30分钟灭菌，即得。
权利要求
1.一种抗血栓和镇痛药物，其特征在于该药物含有1％-99％重量份的莽草酸及其衍生物。
2.根据权利要求1所说的抗血栓和镇痛药物，其特征在于该药物含有10％-80％重量份的莽草酸及其衍生物。
3.根据权利要求2所说的抗血栓和镇痛药物，其特征在于该药物含有20％-60％重量份的莽草酸及其衍生物。
4.根据权利要求3所说的抗血栓和镇痛药物，其特征在于该药物含有25％重量份的莽草酸及其衍生物。
5.根据权利要求1-5中的任一权利要求所说的抗血栓和镇痛药物，其特征在于所述的莽草酸衍生物是三乙酰莽草酸。
6.莽草酸及其衍生物在制备具有抗血栓形成作用的药物中的应用。
7.莽草酸及其衍生物在制备具有镇痛作用的药物中的应用。
8.根据根据权利要求6或7所说的莽草酸及其衍生物的应用，其特征在于所述的莽草酸衍生物是三乙酰莽草酸。
9.三乙酰莽草酸在制备对抗血栓形成和镇痛作用具有加强作用的药物中的应用。
10.三乙酰莽草酸在制备具有溶解血栓作用的药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及以莽草酸及其衍生物为活性成分的药物制剂。本发明还涉及莽草酸及其衍生物的药物新用途，具体讲是莽草酸以及莽草酸三乙酰衍生物(SA-2)在制备具有抗血栓形成和镇痛作用药物中的应用。
文档编号A61P7/02GK1163104SQ9710044
公开日1997年10月29日 申请日期1997年2月3日 优先权日1997年2月3日
发明者牛建昭, 孙建宁, 郭亚健, 徐秋萍, 杨春澍 申请人:北京中医药大学