专利名称：1,5－苯并二氮杂类衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及在医疗领域中十分重要的苯并二氮杂类衍生物。具体来说，本发明涉及新的1，5-苯并二氮杂类衍生物，其可对抗胃泌素受体和/或CCK-B(缩胆囊素-B)受体，并且涉及用于预防和/或治疗其中上述受体参与的疾病的药物。
这些CCK和胃泌素具有五个相同的C-末端氨基酸，并且都通过受体表现其作用。CCK受体分为外周CCK-As和中枢CCK-Bs，外周CCK-As分布在胰腺、胆囊、肠道等中，中枢CCK-Bs分布在脑中。胃泌素受体和CCK-Bs在受体结合实验中显示出类似的特性并具有高度同源性，因而可以将它们称作“CCK-Bs/胃泌素受体”。此类受体，如胃泌素受体或CCK-B受体的拮抗剂化合物可以用来治疗和/或预防胃溃疡、十二指肠溃疡、胃炎、回流性食管炎、胰腺炎、佐林格-埃利森(Zollinger-Ellison)综合征、窦性G细胞增生、基底粘膜增生、胆囊炎、胆石绞痛、蠕动疾病、过敏性肠综合征、某些类型的肿瘤、进食疾病(eating disorder)、住院病(hospitalitis)、恐慌症(panicdisorder)、抑郁症、精神分裂症、帕金森氏综合征、迟发性运动障碍、图雷特氏综合征、药物依赖和脱瘾。它们也被认为具有如镇静止痛诱导作用和增强阿片类药物诱导的镇静止痛的作用[《日本药理学协会通报》(Bulletin of japanese Pharmacological Society)，106，171-180(1995)；《未来药物学》(Drugs of the Future)，18，919-931(1993)；《美国生理学杂志》(American Journal ofPhysiology)，269，G628-G646(1995)；《美国生理学杂志》，259，G184-G190(1990)；《欧洲药理学杂志》，261，257-263(1994)；《药理学趋势》(Trends in Pharmaeological Science)，15，65-66(1994)]。
作为胃泌素受体拮抗剂，丙谷胺已被公认为一种胃溃疡和胃炎治疗药。然而，丙谷胺对胃泌素受体或CCK-B受体的亲和力低，并因此其治疗作用弱。此外，有报导称某些苯并二氮杂类衍生物如L-365718(Divazepide，JP 61-63666 A)和L-365260(JP 63-238069 A)表现出CCK-A受体拮抗作用和CCK-B受体拮抗作用。另外，具有强CCK-B拮抗作用的化合物被公开能够抑制五肽胃泌素刺激的酸分泌(WO 94/438，WO 95/18110)。然而，这些化合物在对生物体给药时不是完全令人满意。因此，迄今仍然未提供适合临床应用的胃泌素受体或CCK-B受体拮抗剂。
能够和胃泌素受体或CCK-B受体强有力结合的化合物可以在消化道和中枢神经系统中有效预防和/或治疗其中各受体分别参与的疾病。因此极其需要此类化合物。
所以，本发明提供下式(1)代表的1，5-苯并二氮杂类衍生物 其中R1代表低级烷基，R2和R3可以相同或不同并代表氢原子或低级烷基，R4代表环己基或苯基，和n代表1至3的整数；或其盐。
本发明还提供一种含有1，5-苯并二氮杂类衍生物(1)或其盐作为有效成分的药物。
本发明也提供一种药物组合物，其中含有1，5-苯并二氮杂类衍生物(1)或其盐以及可药用载体。
本发明还提供作为药物的1，5-苯并二氮杂类衍生物(1)或其盐。
本发明进一步提供一种治疗胃泌素受体和/或CCK-B受体参与其中的疾病的方法，它包括给药1，5-苯并二氮杂类衍生物(1)或其盐。
所以，式(1)中R1、R2和R3表示的低级烷基实例可以包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、1-甲基丁基、2-甲基丁基、异戊基、叔戊基、1，2-二甲基丙基、新戊基、1-乙基丙基、己基、1-甲基戊基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、异己基、1-乙基丁基、2-乙基丁基、1，1-二甲基丁基、1，2-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、2，3-二甲基丁基、3，3-二甲基丁基、1-甲基-1-乙基丙基、1-乙基-2-甲基丙基、1，1，2-三甲基丙基、1，2，2-三甲基丙基、庚基、1-甲基己基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、1-乙基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、1-丙基丁基、1-甲基庚基、2-甲基庚基、3-甲基庚基、4-甲基庚基、5-甲基庚基、6-甲基庚基、1-乙基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、1-丙基戊基、2-丙基戊基、3，3，4-三甲基戊基、3，4，4-三甲基戊基、1，1，2，2-四甲基丁基、2，2，3，3-四甲基丁基、和1，1，3，3-四甲基丁基。其中，优选碳数为1至4的烷基，特别优选甲基。
特别优选其中R1和R2是甲基、n是1和R3是氢原子的式(1)化合物，也就是下式(1a)的化合物 其中R4具有上述相同的含义。
本发明化合物(1)的盐的实例是与无机酸形成的酸加成盐，例如盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐和氢碘酸盐；与有机酸形成的酸加成盐，例如甲磺酸盐和乙磺酸盐；无机盐，例如钠盐、钾盐、钙盐和镁盐；和有机盐，例如铵盐、吡啶盐、三乙胺盐、乙醇胺盐、反式-4-氨基环己醇盐和N，N’-二苄基乙二胺盐。其中，特别优选钠盐、反式-4-氨基环己醇盐和N，N-二苄基乙二胺盐。
在本发明中，包括本发明的化合物(1)和化合物(1)的各种溶剂化物，如其水合物，以及多晶型物。此外，还包括本发明化合物(1)的所有外消旋改性体、各种非对映异构体、非对映异构体混合物和光学活性物质。其中，特别优选光学活性物质。
本发明的化合物(1)可以鉴于其基本骨架和基团的特征、通过应用不同的合成方法而制备。一些代表性制备方法将在下文描述。制备方法A 其中Boc代表叔丁氧羰基，和R1、R2、R3、R4和n具有上述相同的含义。
具体而言，二碳酸二叔丁酯与2-氨基-3-苄氧羰基氨基丙酸反应得到2-叔-丁氧羰基氨基-3-苄氧羰基-氨基丙酸，随后其在催化剂炭载钯和氢的存在下去苄基化为3-氨基-2-叔-丁氧羰基氨基丙酸。在碱，如碳酸钾的存在下，2-氟硝基苯和3-氨基-2-叔-丁氧基-羰基氨基丙酸反应得到2-叔-丁氧基-羰基氨基-3-(2-硝基苯基)氨基丙酸。将这种产物在催化剂炭载钯的存在下催化还原，随后在甲苯中加热回流，由此得到2-氧代-3-叔-丁氧基羰基氨基-1，3，4，5-四氢-2H-1，5-苯并二氮杂。该化合物与3-溴环己烯反应得到2-氧代-3-叔-丁氧基羰基氨基-5-(2-环己烯-1-基)-1，3，4，5-四氢-2H-1，5-苯并二氮杂。在催化剂炭载钯或氧化铂的存在下氢化该化合物得到化合物(A)。另一方面，在硝基苯和催化剂炭载钯或氧化铂的存在下氢化2-氧代-3-叔-丁氧基羰基-氨基-5-(2-环己烯-1-基)-1，3，4，5-四氢-2H-1，5-苯并二氮杂得到化合物(B)。当溴甲基叔丁基酮与化合物(A)或(B)在碱，如碳酸钾存在下反应并且随后用盐酸或类似物质处理脱保护，可以得到1-叔-丁基羰基甲基-2-氧代-3-氨基-5-环己基(或苯基)-1，3，4，5-四氢-2H-1，5-苯并二氮杂。该化合物通过与三光气和3-氨基苯基支链脂肪酸在碱，如三乙胺的存在下反应，可以得到本发明的化合物(1)。制备方法B 其中Boc、R1、R2、R3、R4和n具有和上述相同的含义。
具体来说，化合物(A)或化合物(B)通过与盐酸或类似物质反应脱保护后，与三光气和3-氨基苯基支链脂肪酸在碱，如三乙胺的存在下反应，由此得到脲基衍生物。该脲基衍生物通过在碱，如碳酸钾存在下与溴甲基叔丁基酮反应，得到本发明的化合物(1)。
其中R3是低级烷基的化合物(1)，通过该领域已知的方法用酸或碱进行后继水解可以将本发明的化合物(1)转化为其中R3是氢原子的本发明化合物(1)。
如上所述制备的化合物(1)可以以游离形式或以盐的形式分离，并且随后纯化。分离和纯化通过选择适当的常规方法如萃取、浓缩、蒸馏、结晶、过滤、重结晶、研磨和层析来进行。此外，以游离形式分离和纯化的本发明化合物(1)可以用酸或碱转化为盐，这可以通过将其与酸或碱混合并随后以所属领域已知的方式在加热下溶解或类似处理来进行。而且，本发明化合物(1)的手性异构体可利用适当的原料化合物制备。也可以通过常规外消旋拆分方法制备，例如通过用常规手性酸将本发明的化合物(1)转化为非对映异构体盐，如二苯甲酰基酒石酸盐且随后对非对映异构体盐进行光学拆分，或通过将其转化为非对映化合物，分离并随后进行埃德曼(Edman)降解。
本发明的化合物(1)或其盐可以经口服或非肠道给药。作为口服剂型，本发明的化合物可以通过适当地与可药用载体混合加工成固体药物制剂如片剂、散剂和胶囊，所述可药用载体例如是赋形剂，如乳糖、甘露糖醇、玉米淀粉和结晶纤维素；粘合剂如纤维素类衍生物、阿拉伯胶和明胶；崩解剂如羧甲基纤维素钙；和润滑剂，如滑石粉和硬脂酸镁。其也可以形成为液体药物制剂，如液体制剂、混悬液和乳液。
作为非肠道给药的剂型，其可以形成注射用液体制剂，如通过将其与水、乙醇、甘油等混合。
本发明化合物(1)或其盐的有效治疗或预防上述疾病的剂量根据药物剂型、给药途径、年龄和病症而改变。但通常，成人的日口服剂量是1至1000mg，优选5至500mg。作为给药方法，优选每天给药1次或每天分约2或3份给药。
由于本发明的化合物(1)或其盐具有下文所述的强的胃泌素受体和/或CCK-B受体拮抗作用和优良的酸分泌抑制作用，它适用于治疗、改善和/或预防胃泌素受体和/或CCK-B受体参与其中的疾病，例如胃溃疡、十二指肠溃疡、胃炎、回流性食管炎、胰腺炎、佐林格-埃利森综合征、空泡性G细胞增生(vaculating G cell hyperplasia)、基底粘膜增生、胆囊炎、胆石绞痛、蠕动疾病、过敏性肠综合征、某些类型的肿瘤、进食疾病、住院病、恐慌症、抑郁症、精神分裂症、帕金森氏综合征、迟发性运动障碍、图雷特氏综合征、药物依赖和脱瘾；并且还可用于诱导镇静止痛作用和增强阿片类药物诱导的镇静止痛作用。
将(±)-2-叔-丁氧基羰基氨基-3-(2-硝基苯基)-氨基丙酸(325mg)溶解在甲醇(50ml)中，然后加入10％炭载钯(50mg)。在室温和氢气氛下将所得混合物搅拌1小时。过滤该反应混合物且在减压下浓缩滤液，由此得到(±)-2-叔-丁氧基羰基氨基-3-(2-氨基苯基)-氨基丙酸。将其悬浮在甲苯(30ml)中。将该混悬液在回流下加热3小时，同时用Dean-Stark提取器除去水。减压下浓缩所得溶液。残余物通过在硅胶柱上层析(氯仿∶甲醇＝20∶1)纯化后，加入二异丙基醚结晶出纯化的残余物。此后通过过滤收集所得结晶，由此得到标题化合物(210mg)。收率76％。熔点185-187℃1H-NMR(CDCl3)δ1.44(9H，s)，3.39-3.47(1H，m)，3.80-3.98(2H，m)，4.4 4-4.55(1H，m)，5.73(1H，brs)，6.71-6.88(3H，m)，6.97-7.03(1H，m)，7.82(1H，brs).(步骤4)(±)-2-氧代-3-叔-丁氧基羰基氨基-5-(2-环己烯-1-基)-1，3，4，5-四氢-2H-1，5-苯并二氮杂的制备向(±)-2-氧代-3-叔-丁氧基羰基氨基-1，3，4，5-四氢-2H-1，5-苯并二氮杂(28.6g)在N，N-二甲基甲酰胺(50ml)中的溶液内加入碳酸氢钠(17.3g)和3-溴环己烯(33.2g)，随后在50℃下搅拌1小时。使冷却反应混合物。然后加入冰水，用二氯甲烷提取该反应混合物。有机层用盐水洗涤且随后用无水硫酸钠干燥。减压下蒸除溶剂。向残余物中加入二异丙基醚以便结晶。然后通过过滤收集所得结晶。结晶用乙醇洗涤，之后干燥，由此得到标题化合物(30.1g)。收率82％。1H-NMR(CDCl3)δ1.41(9H，s)，1.55-2.08(6H，m)，3.23-3.37(1H，m)，3.69-3.82(1H，m)，3.87-4.12(1H，m)，4.42-4.55(1H，m)，5.47-5.54(1H，m)，5.62-6.01(2H，m)，6.90-6.99(2H，m)，7.08-7.22(2H，m)，7.47(1H，brs).(步骤5)(±)-2-氧代-3-叔-丁氧基羰基氨基-5-环己基-1，3，4，5-四氢-2H-1，5-苯并二氮杂的制备向(±)-2-氧代-3-叔-丁氧基羰基氨基-5-(2-环己烯-1-基)-1，3，4，5-四氢-2H-1，5-苯并二氮杂草(4.5g)在乙醇(200ml)中的溶液内加入10％炭载钯(1g)，随后室温及氢气氛下搅拌2小时。过滤该反应混合物，减压下浓缩滤液。然后自乙醇中重结晶该残余物，由此得到标题化合物(3.35g)。收率74％熔点207-208℃1H-NMR(CDCl3)δ1.11-2.07(19H，m)，3.15-3.27(1H，m)，3.33(1H，dd)，3.68(1H，dd)，4.38-4.49(1H，m)，5.53(1H，d)，6.91-6.96(2H，m)，7.11-7.16(2H，m)，7.45(1H，brs).(步骤6)(±)-1-叔-丁基羰基甲基-2-氧代-3-叔-丁氧基羰基氨基-5-环己烯基-1，3，4，5-四氢-2H-1，5-苯并二氮杂的制备向(±)-2-氧代-3-叔-丁氧基羰基氨基-5-环己基-1，3，4，5-四氢-2H-1，5-苯并二氮杂(3.35g)在二甲亚砜(30ml)中的溶液内加入溴甲基叔丁基酮(2g)、碳酸钾(1.55g)、碘化钾(125mg)和溴化四(正丁基)铵(120mg)，随后室温下搅拌1小时。将反应混合物倾入冰水中，之后用乙酸乙酯提取。用盐水洗涤有机层，然后用无水硫酸钠干燥。减压蒸除溶剂，残余物通过硅胶色谱(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶3)纯化，由此得到标题化合物(2.3g)。熔点155-156℃1H-NMR(CDCl3)δ1.15-2.07(28H，m)，3.13-3.24(1H，m)，3.26(1H，dd)，3.61(1H，dd)，4.11(1H，d)，4.39-4.50(1H，m)，5.17(1H，d)，5.57(1H，d)，6.92-7.03(2H，m)，7.12-7.20(2H，m)。(步骤7)
(±)-1-叔-丁基羰基甲基-2-氧代-3-氨基-5-环己基-1，3，4，5-四氢-2H-1，5-苯并二氮杂的制备向(±)-1-叔-丁基羰基甲基-2-氧代-3-叔-丁氧基羰基氨基-5-环己基-1，3，4，5-四氢-2H-1，5-苯并二氮杂(2.2g)在乙醇(10ml)中的溶液内加入4N盐酸-二噁烷溶液(10ml)。在50℃下将所得混合物搅拌30分钟。减压下浓缩反应混合物，向残余物中加入饱和碳酸氢钠水溶液中和。用二氯甲烷提取所得混合物。有机层用盐水洗涤，之后用无水硫酸钠干燥。减压下蒸除溶剂，向残余物中加入二异丙基醚结晶。过滤收集所得结晶，由此得到标题化合物(1.1g)。熔点124-125℃1H-NMR(CDCl3)δ1.11-2.08(21H，m)，3.12-3.27(2H，m)，3.40(1H，dd)，3.53-3.62(1H，m)，4.01(1H，d)，5.29(1H，d)，6.92-7.04(2H，m)，7.15-7.19(2H，m).(步骤8)(±)-1-(1-叔-丁基羰基甲基-2-氧代-5-环己基-1，3，4，5-四氢-2H-1，5-苯并二氮杂-3-基)-3-[3-(1-甲基-1-甲氧羰基)乙基苯基]脲在冰冷却下，向2-(3-氨基苯基)-2-甲基-丙酸甲酯(142mg)在无水四氢呋喃(50ml)中的溶液内加入三光气(81.7mg)。随后，在15分钟内分5等份、每等份67μL加入三乙胺(335μL)。使所得混合物的温度升高至室温，在此温度将该混合物搅拌5分钟。在冰冷却下向该混合物中加入(±)-1-叔-丁基羰基甲基-2-氧代-3-氨基-5-环己基-1，3，4，5-四氢-2H-1，5-苯并二氮杂(250mg)。使由此得到的混合物的温度升至室温，随后搅拌1小时。向反应混合物中加入水，通过过滤收集沉淀的结晶。将结晶悬浮在甲醇中，加热所得悬浮液。使该悬浮液冷却并通过过滤收集所得结晶，由此得到标题化合物(250mg)。收率62％1H-NMR(DMSO-d6)δ1.10-1.82(24H，m)，1.94-2.05(1H，m)，3.16-3.45(3H，m)，3.56(3H，s)，4.30-4.43(2H，m)，5.12(1H，d)，6.52(1H，d)，6.80-6.85(1H，m)，6.98-7.35(7H，m)，8.87(1H，s).(步骤9)(±)-2-[3-[3-(1-叔-丁基羰基甲基-2-氧代-5-环己基-1，3，4，5-四氢-2H-1，5-苯并二氮杂-3-基)脲基]苯基]-2-甲基丙酸的制备向(±)-1-(1-叔-丁基羰基甲基-2-氧代-5-环己基-1，3，4，5-四氢-2H-1，5-苯并二氮杂-3-基)-3-[3-(1-甲基-1-甲氧羰基)乙基苯基]脲(250mg)在水-四氢呋喃(1∶1，10ml)的溶液中加入一水合氢氧化锂(91mg)，随后在加热回流6小时。使反应混合物冷却。加入1N盐酸酸化该反应混合物，用乙酸乙酯提取反应混合物。有机层用盐水洗涤并用无水硫酸钠干燥。减压下蒸除溶剂，通过硅胶柱层析纯化残余物(氯仿∶甲醇＝10∶1)。由此纯化的残余物用异丙醇重结晶，由此得到标题化合物(128mg)。熔点215-216℃(分解)1H-NMR(DMSO-d6)δ1.10-1.82(24H，m)，1.94-2.05(1H，m)，3.16-3.45(3H，m)，4.30-4.43(2H，m)，5.12(1H，d)，6.52(1H，d)，6.84-6.88(1H，m)，6.98-7.39(7H，m)，8.85(1H，s)，12.20(1H，brs).MS(FAB)m/z563(MH+).
(3R)-(-)-2-氧代-3-叔-丁氧基羰基氨基-5-(2-环己烯-1-基)-1，3，4，5-四氢-2H-1，5-苯并二氮杂的制备向(R)-(+)-2-氧代-3-叔-丁氧基羰基氨基-1，3，4，5-四氢-2H-1，5-苯并二氮杂(6.08g)在无水N，N-二甲基甲酰胺(50ml)中的溶液内加入碳酸氢钠(3.68g)和3-溴环己烯(7.06g)，随后在50℃下搅拌1小时。冷却反应混合物。然后加入冰水，用乙酸乙酯提取。有机层用盐水洗涤且随后用无水硫酸钠干燥。减压下蒸除溶剂。通过硅胶柱层析(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶3)纯化，由此得到标题化合物(7.84g)。[α]D25(C＝1.00，CHCl3)-179°(步骤4)(R)-(-)-2-氧代-3-叔-丁氧基羰基氨基-5-环己基-1，3，4，5-四氢-2H-1，5-苯并二氮杂的制备向(3R)-(-)-2-氧代-3-叔-丁氧基羰基氨基-5-(2-环己烯-1-基)-1，3，4，5-四氢-2H-1，5-苯并二氮杂在四氢呋喃(200ml)中的溶液内加入预还原的氧化铂(200mg)。室温和氢气氛下将所得混合物搅拌2小时。经硅藻土过滤反应混合物，减压下浓缩滤液。在硅胶柱上通过层析(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶3)纯化残余物。向该残余物中加入二异丙基醚以便结晶。过滤收集所得结晶，由此得到标题化合物(5.16g)。收率67％。[α]D23(C＝1.00，CHCl3)-184°(步骤5)(R)-(-)-2-氧代-3-氨基-5-环己基-1，3，4，5-四氢-2H-1，5-苯并二氮杂的制备向(R)-(-)-2-氧代-3-叔-丁氧基羰基氨基-5-环己基-1，3，4，5-四氢-2H-1，5-苯并二氮杂(5.11g)在乙醇(15ml)中的溶液内加入4N盐酸-二噁烷溶液(10ml)。在50℃下将所得混合物搅拌1小时。使反应混合物冷却然后减压下浓缩。向残余物中加入饱和碳酸氢钠水溶液中和。用氯仿提取所得混合物。有机层用盐水洗涤并用无水硫酸钠干燥。减压下蒸除溶剂，用二异丙基醚洗涤残余结晶，随后过滤收集所得结晶。该结晶用乙醇和二异丙醚的混合溶剂重结晶，由此得到标题化合物(2.1g)。熔点180-182℃1H-NMR(CDCl3)δ1.06-2.07(12H，m)，3.17-3.32(2H，m)，3.49-3.62(2H，m)，6.90-6.99(2H，m)，7.09-7.18(2H，m)，7.45(1H，s).[α]D25(C＝1.04，CHCl3)-163°.光学纯度99％ee或更高(通过液相色谱测定)(步骤6)(R)-(-)-1-(2-氧代-5-环己基-1，3，4，5-四氢-2H-1，5-苯并二氮杂-3-基)-3-[3-(1-甲基-1-叔-丁氧基羰基)乙基苯基]脲的制备在冰冷却下，向2-(3-氨基苯基)-2-甲基丙酸叔丁酯(1.88g)在无水四氢呋喃(100ml)中的溶液内加入三光气(890mg)。然后，在15分钟内分5等份、每等份690μL加入三乙胺(3.45mL)。使所得混合物的温度升高至室温，在此温度将该混合物搅拌5分钟。在冰冷却下向该液体混合物中加入(R)-(-)-2-氧代-3-氨基-5-环己基-1，3，4，5-四氢-2H-1，5-苯并二氮杂(2.0g)。使由此得到的混合物的温度升至室温，随后搅拌1小时。减压下浓缩该反应混合物。向残余物中加入水，用二氯甲烷提取。有机层用盐水洗涤并用无水硫酸钠干燥。随后减压下蒸除溶剂。用乙腈重结晶残余物，由此得到标题化合物(2.64g)。收率64％熔点185-187℃[α]D21(C＝1.03，CHCl3)-159°(步骤7)(R)-(-)-1-(1-叔-丁基羰基甲基-2-氧代-5-环己基-1，3，4，5-四氢-2H-1，5-苯并二氮杂-3-基)-3-[3-(1-甲基-1-叔丁氧基羰基)乙基苯基]脲的制备向(R)-(-)-1-(2-氧代-5-环己基-1，3，4，5-四氢-2H-1，5-苯并二氮杂-3-基)-3-[3-(1-甲基-1-叔-丁氧基羰基)乙基苯基]脲(2.6g)在二甲亚砜(50ml)的溶液内加入溴甲基叔丁基酮(1.34g)、碳酸钾(1.04g)、碘化钾(62mg)和溴化四正丁基铵(73mg)，所得混合物在室温下搅拌2小时。向反应混合物中加入冰水，随后用乙酸乙酯提取。有机层用盐水洗涤后用无水硫酸钠干燥。减压下蒸除溶剂，通过硅胶柱层析纯化残余物(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶2)，由此得到标题化合物(2.8mg)。产率90％熔点159-161℃[α]D21(C＝1.2，CHCl3)-69°(步骤8)(R)-(-)-2-[3-[3-(1-叔-丁基羰基甲基-2-氧代-5-环己基-1，3，4，5-四氢-2H-1，5-苯并二氮杂-3-基)脲基]苯基]-2-甲基丙酸的制备向(R)-(-)-1-(1-叔-丁基羰基甲基-2-氧代-5-环己基-1，3，4，5-四氢-2H-1，5-苯并二氮杂-3-基)-3-[3-(1-甲基-1-叔丁氧基羰基)乙基苯基]脲(2.6g)在二氯甲烷(10ml)中的溶液内加入三氟乙酸(10ml)，随后在室温下搅拌1小时。减压下浓缩反应混合物，向残余物中加入二异丙醚以便结晶。通过过滤收集所得结晶，由此得到标题化合物(960mg)。熔点139-144℃[α]D23(C＝1.03，CHCl3)-111°
向2-(3-硝基苯基)-2-甲基丙酸叔丁酯(3.6g)于乙醇(100ml)中的溶液内加入10％炭载钯(400mg)，随后在室温和氢气氛下搅拌2小时。过滤反应混合物，减压下浓缩所得滤液。在硅胶柱上通过层析(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶5)纯化所得残余物，由此得到2-(3-氨基苯基)-2-甲基丙酸叔丁酯(2.87g)。1H-NMR(CDCl3)δ1.38(9H，s)，1.48(6H，s)，3.62(2H，brs)，6.52-6.57(1H，m)，6.65-6.68(1H，m)，6.71-6.76(1H，m)，7.09(1H，t).实验1<CCK-B受体结合实验>
由Hartley雄性豚鼠分离出大脑皮质。将大脑皮质与50mMtris-HCl缓冲液(pH 7.4)以50倍该大脑皮质重量的量匀浆后，在50,000g下将该匀浆离心10分钟。向所得沉积物加入等量同样的缓冲液并反复离心2次。将最终获得的沉积物用10mM HEPES缓冲液(pH6.5，此后称作“溶剂”)均化，该HEPES缓冲液中含有氯化镁(5mM)、EGTA(1mM)、杆菌肽(0.25mg/ml)和氯化钠(130mM)，并且该匀浆作为受体样品提供。
作为结合实验，将终浓度为1.0nM(50μL)的[3H]CCK-B溶液和受体样品(蛋白含量800μg/管)(900μL)加入到溶剂、终浓度为1.0μM的CCK-B溶液或试验化合物溶液(50μL)中，随后在25℃下反应2小时。反应完全后，通过Wattman GF/B滤器抽滤该反应混合物，该滤器事先用0.1％BSA处理，并且立刻用3ml份的冰冷50mM tris-HCl缓冲液(pH 7.4)洗涤该滤器4次。向该滤器中加入ACS-II闪烁剂，在将该滤器放置约24小时后，通过液体闪烁计数器测量滤器上的放射性浓度。把CCK-B(1μM)存在下的结合记作非特异性结合，同时由完全结合减去非特异性结合所得的数值记作特异性结合，其中所述完全结合是用所述溶剂代替CCK-B来获得。由[3H]CCK-B的特异性结合，计算化合物的结合抑制常数(Ki值)。结果是，实施例2的化合物的Ki值测定为0.74nM。试验2<在大鼠中对五肽胃泌素刺激的酸分泌的抑制实验>
采用雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠。用乙醚麻醉，对各大鼠进行手术结扎幽门窦并安放十二指肠内插管和胃瘘管(gastric fistrlatube)。手术完毕后，将大鼠置于Barmann笼内。经尾静脉连续注射15μg/kg/hr五肽胃泌素。用0.5％羧甲基纤维素钠溶液(以下称作“溶剂”)将试验化合物配成悬浮液。在开始注射五肽胃泌素1小时后，经十二指肠内插管给药溶剂或试验化合物。用自动滴定仪测量取样胃液的酸度，将产物的酸度和胃液的量记作酸排出量。基于自试验化合物给药后的第1小时至第4小时的3小时内的酸排出量，用以下公式确定酸排出抑制率。结果是当以0.3mg/kg给药时，实施例2的化合物表现的酸分泌抑制率是72.7％，实施例5的化合物以0.1mg/kg和0.3mg/kg给药时，表现出的酸分泌抑制率分别是48.8％和79.3％。 试验3<CCK-A受体结合实验>
由Hartley雄性豚鼠分离出胰腺。将胰腺与胰腺重量的40倍量的10mM PIPES缓冲液(pH 6.5，以下称作“溶剂”)一起匀浆。该溶剂含有EGTA(1mM)、氯化镁(30mM)、杆菌肽(0.02％)、大豆胰蛋白酶(tripsin)抑制剂(0.02％)和蔗糖(0.3M)。经纱布过滤后，在50,000g下将该匀浆离心10分钟。向所得沉积物中加入和沉积物相同量的所述溶剂，随后离心。向由此获得的沉积物中加入40倍该沉积物量的所述溶剂，且将沉积物均化。该匀浆作为受体样品提供。
作为结合实验，将终浓度为0.2nM的[3H]L-364718(Divazepide)溶液(50μL)和受体样本(蛋白含量50μg/管)(900μL)加入到所述溶剂、终浓度为1μM的L-364718溶液或试验化合物溶液(50μL)中，随后在25℃下反应2小时。反应完全后，通过Wattman GF/B滤器抽滤该反应混合物，该滤器事先用0.1％BSA(牛血清蛋白)处理，并且立刻用3ml份的冰冷10mM PIPES缓冲液(pH 6.5)洗涤该滤器3次。向该滤器上加入ACS-II闪烁剂，在将该滤器放置约24小时后，通过液体闪烁计数器测量滤器上的放射性浓度。把L-364718(1μM)存在下的结合记作非特异性结合，同时由完全结合减去非特异性结合所得到的数值记作特异性结合，其中所述完全结合是用溶剂代替L-364718获得。由[3H]L-364718的特异性结合，计算化合物的结合抑制常数(Ki值)。结果是，实施例2化合物测定的Ki值为438nM。试验4<在具有海登海因氏小胃的长耳短腿小猎犬中对五肽胃泌素刺激的酸分泌的抑制试验>
采用预先形成海登海因氏小胃的长耳短腿小猎犬。连续地静脉内以4μg/kg/hr的量注射五肽胃泌素。在开始连续注射五肽胃泌素3小时后，将各试验化合物填充到明胶胶囊中且经口给药。用自动滴定仪测量取样胃液的酸度，将产物的酸度和胃液的量记作酸排出量。假定给药前1小时内的酸排出量是100％，将试验化合物给药后第1小时至第4小时的3小时内的酸排出量转化为百分比(酸排出百分比)。基于这种酸排出百分比，用以下公式确定各个小猎犬的酸排出抑制率。酸排出抑制率的平均值记作该化合物的酸抑制率。结果当以1mg/kg的剂量给药时实施例2的化合物表现出的酸分泌抑制率是77.9％。 药物制剂实施例1实施例5的化合物20g乳糖 315g
玉米淀粉 125g结晶纤维素 25g将上述组分混合成均匀的混合物。随后加入7.5％羟丙基纤维素(200ml)。利用装有筛子的挤出制粒机(所述筛子的开孔直径为0.5mm)将所得块状物制成颗粒碎片。通过Marumerizer立刻将该颗粒碎片制成球形且随后干燥成颗粒剂。药物制剂实施例2实施例2的化合物 20g乳糖 100g玉米淀粉 36g结晶纤维素 30g羧甲基纤维素钙 10g硬脂酸镁 4g将上述组分混合成均匀混合物。在单冲头(single-punch)压片机上，通过直径7.5mm的冲头将混合物压成200mg/片的片剂。药物制剂实施例3实施例6的化合物 100mg乙酸钠 2mg乙酸(调至pH 5.8) 适量(q.s.)蒸馏水 适量(q.s.)总量 10ml/瓶按照上述配方，以所属领域已知的方法制备注射液。
工业实用性本发明的化合物具有强的胃泌素受体和/或CCK-B受体拮抗作用和强的酸分泌抑制作用，同时高度安全。所以，它们可以广泛应用于医疗领域，用于治疗、改善和/或预防胃泌素受体和/或CCK-B受体参与其中的疾病，例如胃溃疡、十二指肠溃疡、胃炎、回流性食管炎、胰腺炎、佐林格-埃利森综合征、空泡性G细胞增生、基底粘膜增生、胆囊炎、胆石绞痛、肠蠕动疾病、过敏性肠综合征、某些类型的肿瘤、进食疾病、住院病、恐慌症、抑郁症、精神分裂症、帕金森氏综合征、迟发性运动障碍、图雷特氏综合症、药物依赖和脱瘾；并且可用于诱导镇静止痛作用和增强阿片类药物诱导的镇静止痛作用。
权利要求
1.式(1)所示的1，5-苯并二氮杂类衍生物或其盐 其中R1代表低级烷基，R2和R3可以相同或不同并代表氢原子或低级烷基，R4代表环己基或苯基，以及n代表1至3的整数。
2.权利要求1中所述的1，5-苯并二氮杂衍生物或其盐，其中R1和R2是甲基，R3是氢原子，和n是1。
3.含有权利要求1或2中所述的1，5-苯并二氮杂衍生物或其盐作为有效成分的药物。
4.一种胃泌素受体和/或CCK-B受体拮抗剂，含有权利要求1或2中所述的1，5-苯并二氮杂衍生物或其盐作为有效成份。
5.根据权利要求3的药物，它是一种酸分泌抑制剂。
6.根据权利要求3的药物，它是适用于进食疾病、住院病、恐慌症、抑郁症、精神分裂症、帕金森氏综合征、迟发性运动障碍、图雷特氏综合症、药物依赖、胃溃疡、十二指肠溃疡、胃炎、回流性食管炎或佐林格-埃利森综合征的预防剂或治疗剂。
7.含有权利要求1或2中所述的1，5-苯并二氮杂类衍生物或其盐和可药用载体的药物组合物。
8.权利要求1或2中所述的1，5-苯并二氮杂衍生物或其盐作为药物的应用。
9.权利要求8中所述的应用，其中所述药物用于进食疾病、住院病、恐慌症、抑郁症、精神分裂症、帕金森氏综合征、迟发性运动障碍、图雷特氏综合征、药物依赖、胃溃疡、十二指肠溃疡、胃炎、回流性食管炎或佐林格-埃利森综合征。
10.一种治疗胃泌素受体和/或CCK-B受体参与其中的疾病的方法，该方法包括施用权利要求1或2中所述的1，5-苯并二氮杂衍生物或其盐。
11.权利要求10中所述的治疗方法，其中所述疾病选自进食疾病、住院病、恐慌症、抑郁症、精神分裂症、帕金森氏综合征、迟发性运动障碍、图雷特氏综合征、药物依赖、胃溃疡、十二指肠溃疡、胃炎、回流性食管炎或佐林格-埃利森综合征。
全文摘要
本发明涉及式(1)所示的1,5－苯并二氮杂类衍生物或其盐:其中R
文档编号A61P25/20GK1307567SQ99807986
公开日2001年8月8日 申请日期1999年5月28日 优先权日1998年6月5日
发明者篠崎胜雄, 米田智幸, 村田正和, 三浦直良, 前田清人 申请人:泽里新药工业株式会社