酸浓度下，或在适合小鼠或大鼠模型中在约50mg/kg或更低，或 约25mg/kg或更低的剂量下（如本文所描述），降低miR-15a,miR-15b,miR-16,miR-195,m iR-424,和miR-497的活性。实质上互补的寡核苷酸相对于其革E序列miR-15a,miR-15b，mi R-16，miR-195，miR-424，andmiR-497可具有约1个至约5个错配（例如，1个或约2个，或 约3个，或约4个，或约5个错配）。
[0050]WO2009/062169 (其通过引用并入本文中）中记载了包含miR-15a，miR-15b，miR -16，miR-195，miR-424,和miR-497的miR-15家族成员的结构和加工，以及它们用于治疗 心脏肥大、心力衰竭或心肌梗塞（在其他症状中）的潜力。根据本发明可用于设计抑制性 miRNAs的人miR-15家族成员的miRNA前体序列（例如莖环序列）列于下文中：
【主权项】
1. 一种含有至少一个锁核巧酸的寡核巧酸， 其中所述寡核巧酸包含核巧酸序列5' -GTGCTGCT-3'，并与一个或多个miR-15家族成 员的核巧酸序列实质上互补，且 其中所述寡核巧酸在体外蛋光素酶测定法中在约50nM或更小的寡核巧酸浓度下，或 在晒齿动物模型中在约25mg/kg或更小的剂量下，降低或抑制一个或多个miR-15家族成员 的活性。
2. 权利要求1所述的寡核巧酸，其中所述一个或多个miR-15家族成员选自miR-15a、 miR-15b、miR-16、miR-195、miR-424 和 miR-497。
3. 权利要求1或2所述的寡核巧酸，其含有至少8个锁核巧酸。
4. 权利要求1-3任一项的寡核巧酸，其中所述寡核巧酸的长度为约8个至约18个核巧 酸。
5. 权利要求4所述的寡核巧酸，其中所述寡核巧酸的长度为约12个至约17个核巧酸。
6. 权利要求5所述的寡核巧酸，其中所述寡核巧酸的长度为约16个核巧酸。
7. 权利要求5或6所述的寡核巧酸，其包含选自W下的核巧酸序列： 5，-ACCATTATGTGCTGCT-3'（SEQ ID NO. l)、5，-ACCATGATGTGCTGCT-3,（SEQ ID NO. 2)、 5，-ATATTTACGTGCTGCT-3,（沈Q ID NO. 3)、和 5，-ATATTTCTGTGCTGCT-3,（沈Q ID NO. 4)。
8. 权利要求6或7的寡核巧酸，其含有9个锁核巧酸和/或7个非锁核巧酸。
9. 权利要求6-8任一项的寡核巧酸，其中至少位置1、5、8、10和16为锁核巧酸。
10. 权利要求4的寡核巧酸，其中所述寡核巧酸的长度为约12个核巧酸。
11. 权利要求4或10的寡核巧酸，其包含选自W下的核巧酸序列： 5，-TTATGTGCTGCT-3，（SEQ ID NO. 5)、5，-TTACGTGCTGCT-3，（SEQ ID NO.6)、 5，-TTCTGTGCTGCT-3，（SEQ ID NO. 7)、5，-TTCCGTGCTGCT-3，（SEQ ID NO.8)、 5'-TGATGTGCTGCT-3' (SEQ ID NO. 9)、5'-TGACGTGCTGCT-3' (SEQ ID NO. 10)、 5, -TGCTGTGCTGCT-3'（沈Q ID NO. 11)、和 5' -TGCCGTGCTGCT-3'（沈Q ID NO. 12)。
12. 权利要求10或11的寡核巧酸，其含有8个锁核巧酸和/或4个非锁核巧酸。
13. 权利要求10-12中任一项的寡核巧酸，其中至少位置1、4、9和12为锁核巧酸。
14. 权利要求4的寡核巧酸，其中所述寡核巧酸的长度为约8个核巧酸。
15. 权利要求14的寡核巧酸，其具有实质上所有锁核巧酸和核巧酸序列 5> -GTGCTGCT-3>。
16. 权利要求1-15任一项的寡核巧酸，其中与所述一个或多个miR-15家族成员的种子 区互补的区域包含至少4个锁核巧酸。
17. 权利要求1-16任一项的寡核巧酸，其中所述寡核巧酸不含具有超过3个连续非锁 核巧酸和/或超过3个连续锁核巧酸的核巧酸段。
18. 权利要求1-17任一项的寡核巧酸，其中至少一个非锁核巧酸选自2'脱氧基、 2' -0-甲基、2' -0-烧基、2' -面基、和2' -氣基核巧酸。
19. 权利要求18的寡核巧酸，其中至少一个非锁核巧酸为2'脱氧基。
20. 权利要求19的寡核巧酸，其中所有的非锁核巧酸为2'脱氧基。
21. 权利要求1至20中任一项的寡核巧酸，其中该锁核巧酸具有包含己締基或亚甲基 的2'至4'桥。
22. 权利要求21的寡核巧酸，其中所述锁核巧酸具有2'至4'亚甲基桥。
23. 权利要求1-22中任一项的寡核巧酸，其具有5'和/或3'帽结构。
24. 权利要求1-23中任一项的寡核巧酸，其含有一个或多个硫代磯酸醋连接。
25. 权利要求24的寡核巧酸，其中所述寡核巧酸为完全硫代磯酸醋连接的。
26. 权利要求24的寡核巧酸，其具有1个至3个磯酸醋连接。
27. 权利要求1的寡核巧酸，其具有W下化合物的结构加-10113，1-10134，1-10564，1-10566, M-10567, M-10670, M-11206, M-11207, M-11208, M-11209, M-11210, M-11211, M-11212 ，M-11213, M-11214, M-11215, M-11216, M-11217, M-11218, M-11219, M-11220, M-11221, M-11 222，M-11223,或 M-11224。
28. 权利要求1-27任一项的寡核巧酸，其进一步包含侧接的亲脂性基团。
29. -种药物组合物，其包含有效量的权利要求1-28任一项的寡核巧酸，或其药学上 可接受的盐，及药学上可接受的载体或稀释剂。
30. 权利要求29的药物组合物，其中所述药学上可接受的载体包含胶体分散系统、大 分子复合物、纳米胶囊、微球体、珠粒、水包油乳剂、胶束、混合胶束或脂质体。
31. 权利要求29的药物组合物，其中所述药学上可接受的载体或稀释剂基本上由盐水 构成。
32. -种降低或抑制细胞中一个或多个miR-15家族成员的活性的方法，包含使所述细 胞与权利要求1-28中任一项的寡核巧酸或权利要求29-31中任一项的组合物接触。
33. 权利要求32的方法，其中所述细胞为哺乳动物细胞。
34. 权利要求33的方法，其中所述细胞为屯、脏细胞。
35. 权利要求32的方法，其中所述细胞在体内或离体。
36. -种预防或治疗受试者中的与一个或多个miR-15家族成员相关或由一个或多个 miR-15家族成员介导的状况的方法，包含W足W使Piml的祀物去抑制的剂量对该受试者 施用至少一种miR-15A家族抑制剂。
37. 权利要求36的方法，其中所述miR15家族抑制剂为权利要求1-28任一项所述的寡 核巧酸。
38. 权利要求36的方法，包含向该个体施用权利要29-31任一项所述的药物组合物。
39. 权利要求38的方法，其中通过肠胃外施用或通过直接注射到屯、脏组织中施用所述 药物组合物。
40. 权利要求39的方法，其中所述肠胃外施用为静脉内、皮下、腹膜内或肌肉内。
41. 权利要求38-40中任一项的方法，其中通过口服、经皮、持续释放、控制释放、延迟 释放、栓剂、导管或舌下给药施用所述组合物。
42. 权利要求36-41任一项所述的方法，其中所述状况是屯、脏状况。
43. 权利要求42的方法，其中所述屯、脏状况为病理性屯、脏肥大、屯、肌梗塞、屯、力衰竭、 缺血、或缺血性再灌注损伤。
44. 权利要求42的方法，其中所述屯、脏状况与屯、脏移植相关。
45. 权利要求36-44任一项的方法，其中所述受试者为人类。
【专利摘要】本发明提供能够抑制包括miR-15a、miR-15b、miR-16、miR-195、miR-424和miR-497的miR-15家族miRNA的表达(例如丰度)的化学修饰寡核苷酸。在一些实施方案中，本发明提供能够以特异性方式抑制miR-15a、miR-15b、miR-16、miR-195、miR-424和miR-497中每一个表达或丰度的寡核苷酸。本发明进一步提供包含该寡核苷酸的药物组合物，以及治疗患有与miR-15家族miRNA有关的或涉及miR-15家族miRNA的状况或病症，诸如心血管状况的患者的方法。在各个实施方案中，寡核苷酸在效力、递送效率、靶特异性、毒性和/或稳定性中的一个或多个方面提供益处。
【IPC分类】A61K48-00, C12N15-11, C07H21-04
【公开号】CN104540527
【申请号】CN201380039961
【发明人】E.范隆基, C.多尔比, A.塞托
【申请人】米拉根医疗股份有限公司
【公开日】2015年4月22日
【申请日】2013年6月21日
【公告号】CA2876105A1, EP2863956A1, US20130345288, WO2013192486A1