一种疫苗制剂及其制备方法和用图
【技术领域】
[0001]本发明属于疫苗制剂领域，具体涉及一种疫苗制剂及其制备方法和用途。
【背景技术】
[0002]在疫苗的发展历史当中，最初出现的疫苗利用减毒或者灭活的病原生物如细菌、病毒、立克次氏体等制成。通过这种方式获得的疫苗制剂在临床应用中存在着潜在的生物安全性问题，如引起严重的炎症反应和致病性病毒感染等。现代疫苗制剂则通常用提纯或重组的亚单位抗原来取代完整的病原生物，由于杜绝了病原体致病性复发的可能，大大提高了疫苗使用的生物安全性。然而相比于完整的病原微生物，蛋白或者多肽形式的亚单位抗原易遭受降解，同时难以被抗原提呈细胞(Antigen presentating cel I, APC)摄取。更为重要的是由于缺乏病原相关分子模式(Pathogen-associated molecular pattern，PAMP)，其接种后缺少“危险信号”，因此不能有效地激活APC。这些问题使得单独使用亚单位抗原时难以获得较强的免疫原性，最终导致了免疫应答效果的不尽理想。
[0003]对于获得性免疫机理的研宄表明，虽然机体依靠对病原体上抗原部分的特异性识别和记忆获得免疫，但病原体中除抗体以外的其它特征成分在免疫形成中也起到了很大作用。在与病原体的相互作用过程中，病原体独特的形貌、表面生物学性质和向外分泌的各种生物学信号等，能够促使免疫相关细胞趋近、识别和吞噬包括抗原成分在内的病原体组分；同时病原体成分中的PAMP在与免疫相关细胞接触或摄取后，能够有效地激活这些机体细胞，诱导高水平的免疫应答的发生。正是由于病原体具有这样一系列的重要特征，机体免疫系统才能够有效地对其进行识别和应答。
[0004]受此启示，一些研宄人员开始尝试开发具有仿病原体特征的疫苗制剂并获得了一些初步的成功。以目前最为成功的病毒小体(Virosome)为例，其因对病毒关键生理结构和形态的模仿而得名。Virosome是通过将病毒表面的功能性蛋白嵌入脂质体的双分子层而制得的一类特殊脂质体。包括流感病毒、水疱性口炎病毒和新城疫病毒等病毒的包膜蛋白都已经被成功用于Virosome的制备。利用其脂质层中嵌入的功能性病毒蛋白，Virosome具有如病毒一样的膜融合能力，因此能够模拟病毒感染动物机体的过程。更为重要的是，由于只使用少量低毒性病毒蛋白而不涉及其遗传性物质，Virosome在获得同病毒相似的细胞入侵能力的同时避免了在活体疫苗使用过程中的生物安全性问题。迄今，已有两种基于Virosome的人用疫苗在29个国家上市销售。目前Virosome应用的主要限制在于抗原装载上有较大的局限性，对抗原的分子尺寸、亲疏水性都有比较严格的要求，装载效率也有待提尚O
[0005]尽管以Virosome为代表的仿生疫苗制剂现在仍处于发展初期，还存在着各种各样的不足，但是其已经取得的成功显示出了通过模仿病原体所构建的疫苗制剂的潜在优势和巨大发展空间。
[0006]因此，如果能够开发出一种在APC摄取、抗原提呈和免疫激活等各个环节都具有与病原体相似能力的疫苗制剂，将有望为许多重大疾病的预防和治疗提供有效的解决方案。
【发明内容】
[0007]针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种疫苗制剂及其制备方法和用途。
[0008]为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案:
[0009]一方面，本发明提供了一种疫苗制剂，所述疫苗制剂包含疫苗载体和抗原组分，其中所述疫苗载体为由微生物经水热转化获得的疫苗载体。
[0010]本发明应用简单且易于工业放大的水热合成法，通过在密闭空间中对水溶液进行加热，使反应环境达到亚临界或超临界状态，在此情况下，反应处于分子水平，反应效率极高，从而将微生物模板原料转化为疫苗载体。通过水热反应控制所得疫苗载体材料的孔性、亲疏水性和表面免疫相关配体密度等性质，由此可以对后续抗原成分的装载进行有效调控。相比于同样使用病原体微生物为原料的减毒和灭活疫苗，本发明不仅能够完全保证疫苗使用的安全性，同时通过水热过程对微生物表面生物学性质进行调控，还能够进一步提升相关的免疫激活能力。
[0011]优选地，所述微生物为病原性或非病原性微生物。
[0012]优选地，所述微生物为细菌、真菌或病毒中的任意一种。
[0013]优选地，所述微生物在种属上为但不限于干酪乳杆菌、双歧杆菌、分枝杆菌、葡萄球菌、乳酸球菌、副溶血性弧菌、酵母菌或腺病毒中的任意一种。
[0014]在本发明所述疫苗制剂中，所述疫苗载体保留微生物模板的外形特征，能够促进抗原提呈细胞对于疫苗载体及所负载抗原等的快速识别和摄取。
[0015]优选地，所述疫苗载体表面保留微生物模板的免疫相关的表面配体。
[0016]优选地，所述表面配体包括但不限于膜多糖、甘露糖、N-乙酰葡萄糖胺、海藻糖或脂蛋白中的任意一种或至少两种。
[0017]疫苗载体的这种表面特征能够促进免疫细胞活化和调控抗原在细胞内的转运和提呈途径，由此高效增强疫苗应用后的免疫应答水平。
[0018]在本发明所述疫苗制剂中，所述抗原组分为抗原蛋白、表位肽、抗原编码质粒DNA或mRNA中的任意一种或至少两种的组合。
[0019]例如，应用所述疫苗制剂对特定恶性肿瘤进行免疫预防或者治疗时，该疫苗制剂中所包含的抗原组分可以是该肿瘤的一种或多种相关或者特异性抗原，也可以是携带这些抗原编码信息的质粒DNA或mRNA ;应用所述疫苗制剂对感染类疾病进行免疫预防或者治疗时，该疫苗制剂中所包含的抗原可以是相应病原微生物的一种或多种特异性抗原蛋白，同样也可以是携带这些抗原编码信息的质粒DNA或mRNA。
[0020]另一方面，本发明提供了所述疫苗制剂的制备方法，所述方法是将微生物经水热转化获得的疫苗载体与抗原组分复配，获得所述疫苗制剂。
[0021]本发明所述疫苗制剂的制备方法包括以下步骤:
[0022](a)微生物悬浮液经水热反应，洗涤，干燥得到疫苗载体；
[0023](b)将步骤(a)得到的疫苗载体与抗原组分复配，获得所述疫苗制剂。
[0024]在本发明的疫苗制剂的制备方法中，步骤(a)所述水热反应所使用的溶媒为盐酸、硫酸、硝酸、醋酸、氯化钠、氯化钾、醋酸钾、乙醇、乙醛或戊二醛中任意一种或至少两种的水溶液。
[0025]优选地，所述水溶液的浓度为0.001?1.000mol/L,例如0.001mol/L、0.002mol/L、0.004mol/L、0.008mol/L、0.010mol/L、0.015mol/L、0.018mol/L、0.020mol/L、0.024mol/L、mol/L、0.028mol/L、0.030mol/L、0.040mol/L、0.060mol/L、0.080mol/L、0.100mol/L、0.150mol/L、0.200mol/L、0.250mol/L、0.300mol/L、0.350mol/L、0.40mol/L、0.450mol/L、
0.500mol/L、0.550mol/L、0.600mol/L、0.700mol/L、0.800mol/L、0.900mol/L 或 1.0OOmol/L0
[0026]优选地，步骤(a)所述微生物悬浮液为将微生物投入所述溶媒中制成的悬浮液。
[0027]在本发明的疫苗制剂的制备方法中，步骤(a)所述水热反应的步骤是将步骤(a)得到的悬浮液转移到水热反应釜中，并将水热反应釜置于恒温箱，恒温加热。
[0028]优选地，步骤(a)所述水热反应温度为100?400°C，例如100°C、110°C、120°C、140 °C> 160 °C> 180 °C> 200 °C、220 °C、240 °C、260 °C、280 °C> 300 °C、320 °C、340 °C、360 °C、380°0、390°0或400°0，优选为 120 ?240 °C。
[0029]优选地，步骤(a)所述水热反应压力为I?3MPa，例如IMPaU.1MPaU.2MPa、
1.3MPa、l.4MPa、l.5MPa、l.6MPa、l.7MPa、l.8MPa、l.9MPa、2MPa、2.lMPa、2.2MPa、2.3MPa、
2.4MPa、2.5MPa、2.6MPa、2.7MPa、2.8MPa、2.9MPa 或 3MPa。
[0030]优选地，步骤(a)所述水热反应时间为0.5?72小时，例如0.5小时、I小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、11小时、12小时、14小时、16小时、1