。，重组溶葡萄球菌酶含量为0. 01%，温敏材料为硬脂酸，重量含量为1% ;
[0046] 配制：
[0047] ( 1)将硬脂酸加热熔融，加入人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和重组溶葡萄球 菌酶，混匀，搅拌下降温至凝固；
[0048] (2)将步骤（1)所得固体冷冻粉碎，过筛，所得粉末为包覆后的药物；
[0049] (3)将海藻酸钠加5倍的水溶胀得A ;
[0050] (4)将聚乙烯醇加50倍的水溶胀得B ;
[0051] (5)于A中加入甘氨酸铝和步骤（2)已包覆的药物，混匀获得AA ;于B中加入乙二 胺四乙酸，醋酸-醋酸钠缓冲对，获得BB ;
[0052] (6)将AA和BB混匀，注入模具或涂于背衬上；待水凝胶基本凝固后，置于_20°C下 放置15日进行交联反应；取出水凝胶，放置至室温，即得成品。
[0053] 实施例3
[0054] 组成和配比：
[0055] 用于负载温敏性微粒蛋白类药物的双网络水凝胶：由如下重量百分比的组分组 成：海藻酸钠5%，聚乙烯醇（PVA-117) 10%，碳酸钙1%，马来酸-马来酸钠缓冲对1%，乙二胺 四乙酸四钠1%,余量为纯化水。
[0056] 负载了温敏性微粒蛋白类药物的双网络水凝胶，由上述的用于负载温敏性微粒蛋 白类药物的双网络水凝胶和以温敏材料包覆的溶菌酶和重组溶葡萄球菌酶组成，溶菌酶重 量含量为〇. 04%，重组溶葡萄球菌酶含量为0. 04% ;温敏材料为半合成脂肪酸甘油酯（L34)， 重量含量为2% ;
[0057] 配制：
[0058] (1)将半合成脂肪酸甘油酯（L34)加热熔融，加入溶菌酶和重组溶葡萄球菌酶，混 匀，搅拌下降温至凝固；
[0059] (2)将步骤（1)所得固体冷冻粉碎，过筛，所得粉末为包覆后的药物；
[0060] (3)将海藻酸钠加10倍的水溶胀得A ;
[0061] (4)将聚乙烯醇加5倍的水溶胀得B ;
[0062] (5)于A中加入碳酸钙和步骤（2)已包覆的药物，混匀获得AA ;于B中加入乙二胺 四乙酸四钠，缓冲对，获得BB ;
[0063] (6)将AA和BB混匀，注入模具或涂于背衬上；待水凝胶基本凝固后，置于_40°C下 放置10日进行交联反应；取出水凝胶，放置至室温，即得成品。
[0064] 实施例4
[0065] 组成和配比：
[0066] 用于负载温敏性微粒蛋白类药物的双网络水凝胶：海藻酸钠5%，聚乙烯醇 (PVA-124)10%，磷酸氢钙1%，柠檬酸-柠檬酸钠缓冲对1%，乙二胺四乙酸二钠1%，余量为纯 化水；
[0067] 负载了温敏性微粒蛋白类药物的双网络水凝胶，由上述的用于负载温敏性微粒蛋 白类药物的双网络水凝胶和以温敏材料包覆的(重组溶葡萄球菌酶和GM-CSF)组成，溶菌酶 重量含量为〇. 02%，GM-CSF为0. 02%，温敏材料为半合成脂肪酸甘油酯（L36)，含量为2% ; [0068] 2、配制
[0069] a)将半合成脂肪酸甘油酯2g加热熔解，加入0. 02g重组溶葡萄球菌酶和 0. 02gGM-CSF，混匀，搅拌下降温至凝固；
[0070] b)将a步骤所得固体冷冻粉碎，过筛，所得粉末为包覆后的药物。
[0071] C)称取海藻酸钠5g，加水39. 98g溶胀得A ;
[0072] d)称取聚乙烯醇10g，加水39. 98g溶胀得B ;
[0073] e)于A中加入磷酸氢钙Ig和已包覆的药物，混匀；B中加入乙二胺四乙酸二钠 lg， 柠檬酸-柠檬酸钠缓冲对Ig调节pH值至4~6之间；
[0074] f)将A、B混匀，注入模具或涂于背衬上；
[0075] g)待水凝胶基本凝固后，置于_40°C下放置10日进行交联反应；
[0076] h)取出水凝胶，放置至室温，即得成品。
[0077] 实施例5
[0078] 稳定性实验
[0079] 1、实验器材
[0080] 重组溶葡萄球菌酶标准品（90U/mL);色源底物KNR - PG，用0· 2mol/LGly-Na0H缓 冲液（ρΗ10· 0) 1:5 (m/v)悬浊液备用；0· 2mol/LGly-Na0H 缓冲液备用（ρΗ10· 0) ;0· 05mol/ LTris-HCL 稀释液（ρΗ7· 5);
[0081] 2、实验方法
[0082] 取实施例1、2、3的载重组溶葡萄球菌酶双网络水凝胶，真空干燥，粉碎后于37°C 水浴释放。取水溶液以水稀释成适当浓度，滤过后待以表2顺序加入试剂及样品。
[0083] 表1重组溶葡萄球菌酶活性测定方法
[0084]
【主权项】
1. 用于负载温敏性微粒蛋白类药物的双网络水凝胶，其特征在于，包括如下重量百分 含量的组分： 海藻酸钠0. 4~10% 聚乙烯醇1~20% 交联剂〇? 1~1. 〇% pH调节剂0? 05~L0% 交联调节剂〇. 05~1. 0% 水 余量。
2. 根据权利要求1所述的用于负载温敏性微粒蛋白类药物的双网络水凝胶，其特征 在于，所述的海藻酸钠分子量在32000~250000之间，所述的聚乙烯醇型号为PVA-105、 PVA-117、PVA-124中的一种或几种。
3. 根据权利要求1所述的用于负载温敏性微粒蛋白类药物的双网络水凝胶，其特征在 于，所述交联剂为甘氨酸铝、氢氧化铝、碳酸钙、磷酸氢钙或氯化钙中的一种或几种； 所述PH调节剂为柠檬酸、柠檬酸钠、冰醋酸、醋酸钠、马来酸、马来酸钠或盐酸中的一 种或几种； 所述交联调节剂为乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸四钠、柠檬酸或柠 檬酸钠中的一种或几种。
4. 负载了温敏性微粒蛋白类药物的双网络水凝胶，其特征在于，由权利要求1~3任一 项所述的用于负载温敏性微粒蛋白类药物的双网络水凝胶和以温敏材料包覆的大分子蛋 白类药物组成。
5. 根据权利要求4所述的负载了温敏性微粒蛋白类药物的双网络水凝胶，其特征在 于，所述包覆材料选自半合成脂肪酸甘油酯、蜂蜡、硬脂酸、十六醇或十八醇。
6. 根据权利要求4或5所述的负载了温敏性微粒蛋白类药物的双网络水凝胶，其特征 在于，以所述水凝胶制剂的总重量计，所述的蛋白类药物包覆材料〇. 001~2%，大分子蛋白 类药物的含量为〇. 0001%~2% ; 所述的大分子蛋白类药物包括生长因子类药物：如表皮生长因子（EGF)、血管内皮生 长因子（vascular endothelial growth factor，VGEF)成纤维细胞生长因子（bFGF)、转化 生长因子-a (TGF-a)、转化生长因子(TGF-P)、人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 (GM-CSF)胰岛素样生长因子（IGF)或血小板衍生生长因子（PDGF)中的一种以上。
7. 根据权利要求4~6任一项所述的负载了温敏性微粒蛋白类药物的双网络水凝胶的 制备方法，包括如下步骤： (1) 将蛋白类药物包覆材料加热熔融，加入所述大分子蛋白类药物，搅拌混合，降温至 凝固，冷冻，粉碎，过筛，获得载含蛋白类药物温敏性微粒； (2) 将海藻酸钠加水溶胀得溶胶A，水的重量为海藻酸钠的10~100倍；将聚乙烯醇加 水溶胀得溶胶B，水的重量为聚乙烯醇的3~30倍； (3) 于溶胶A中加入交联剂和步骤（1)的产物，混匀，获得溶胶AA;溶胶B中加入交联 调节剂，以pH调节剂调节pH值至4~6之间，获得溶胶BB; 然后将溶胶AA和溶胶BB混合，注入模具或涂于背衬上； 待水凝胶凝固后，置于-KTC~_40°C下放置3~15天进行交联反应，即得所述的负载 了温敏性微粒蛋白类药物的双网络水凝胶。
【专利摘要】本发明公开了一种负载了温敏性微粒蛋白类药物的双网络水凝胶及制备方法，负载了温敏性微粒蛋白类药物的双网络水凝胶，由用于负载温敏性微粒蛋白类药物的双网络水凝胶和以温敏材料包覆的大分子蛋白类药物组成，用于负载温敏性微粒蛋白类药物的双网络水凝胶，包括如下重量百分含量的组分：海藻酸钠0.4～10%，聚乙烯醇1～20%，联剂0.1～1.0%，pH调节剂0.05～1.0%，交联调节剂0.05～1.0%，水余量。本发明解决了目前水凝胶敷料高强度、工艺简单、无有毒残留三者不可兼得的问题，并使其中载入的大分子蛋白类药物保持良好的稳定性。从而提供一种无毒无刺激性、制备工艺简单、强度较高、所载蛋白类药物稳定性好的水凝胶敷料。
【IPC分类】A61L15-28, A61L15-42, A61L15-44, A61L15-24
【公开号】CN104758976
【申请号】CN201410007732
【发明人】李国栋, 汪益涵, 黄青山, 陆婉英
【申请人】上海高科生物工程有限公司, 上海高科联合生物技术研发有限公司
【公开日】2015年7月8日
【申请日】2014年1月8日