本发明一方面是关于一种利用本紫菀萃取物来治疗疼痛的方法。另外， 本发明是有关于本紫菀萃取物在制备一种疼痛治疗药物的用途。
[0038] 依据本发明的实施方式，该方法包含对一个体投予一止痛有效量的紫菀萃取物。
[0039] 在某些实施方式中，紫菀萃取物是以口服方式投予至个体。然而，本发明并不局限 于此。
[0040] 依据本揭示内容的实施方式，依照下述步骤来制备一种适用于治疗疼痛的紫菀萃 取物。首先，在萃取步骤中，利用萃取剂来萃取取自紫菀植株的植物部分，以得到一萃取混 合物。之后，在分离步骤中，对萃取混合物进行管柱层析或析出处理。
[0041] 根据本发明多个实施方式，适用于萃取的植物部分可以是取自紫菀植株的根茎部 及/或根部的新鲜或干燥材料。
[0042] 在某些实施方式中，所用的萃取剂为水；在其它实施方式中，所用的萃取剂是由乙 醇和水所形成的乙醇溶液，如10-95% (v/v)乙醇。举例来说，该乙醇溶液可含有10、15、20、 25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90或95%&八）的乙醇。
[0043] 在一非必要的实施方式中，于进行分离步骤前，先过滤、浓缩及/或干燥该萃取混 合物。
[0044] 在一实施方式中，对萃取混合物进行减压浓缩，以得到浓缩物，之后以水冲洗该浓 缩物以得到一析出物，此析出物可用以制备此处所述的药物。非必要地，可干燥所述析出物 以得到萃取物粉末，此萃取物粉末亦可用以制备此处所述的药物。
[0045] 在替代性的实施方式中，可对萃取混合物进行管柱层析，其是依序以水以及至少 一洗提液来洗提管柱以得到至少一洗出物。非必要地，可浓缩该洗出物以减少洗出物的体 积，并将洗提液自经浓缩的洗出物中移除。同样非必要地，可干燥经浓缩的洗出物以得到萃 取物粉末。根据本发明的原理与精神，所述的洗出物、经浓缩的洗出物以及萃取物粉末皆可 分别用以制备所述的药物。
[0046] 适用于管柱层析的洗提液的例示包括但不限于：40-95% (v/v)乙醇、丙酮、以及 含有 0.1-1% (v/v)甲酸的 40-95% (v/v)乙醇。
[0047] 本发明的另一方面是有关于在一有需要的个体中，增强一鸦片类药物的止痛效果 的方法。另外，本发明是有关于紫菀萃取物的用途，其是用以制备一能增强鸦片类药物的止 痛作用的药物（或佐剂）。
[0048] 依据本揭示内容的实施方式，该方法包含给予个体（1) 一止痛有效量的鸦片类药 物，以及（2) -有效量的紫菀萃取物，其是能于该个体中增强鸦片类药物的止痛效果。具体 来说，适用于本所述方法的紫菀萃取物乃根据本发明各种实施方式所述的方法所制备。
[0049] 在某些实施方式中，紫菀萃取物是以口服方式投予至个体。然而，本揭示内容并不 局限于此。
[0050] 在本揭示内容的任选实施方式中，在施予鸦片类药物前先施予紫菀萃取物。
[0051] 下文举出多种实施例来阐明本发明的部分方式，以使本领域技术人员能借以实践 本发明。因此不应将这些实施例视为对本发明范围的限制。本领域技术人员基于此处提的 说明，当可在不需过度推衍的情形下运用本发明。此处提及的所有文献，皆视为已完全引用 而成为本说明书的一部分。
[0052]实施例
[0053] 实施例1
[0054] 紫菀萃取物的制备
[0055] I. 1水萃取
[0056] 将干燥且切片的紫菀部分（根部及根茎部）（购自金汉行有限公司，高雄，台湾） 加入10倍量（W/W)的逆渗透（reverse osmotic，RO)水，以加热包加热沸腾后回流1小时 而得到一粗萃物。使用350筛目滤网过滤该粗萃物，取滤液再以孔径5 ym的过滤器过滤， 得溶液状的水萃取混合物。利用冷冻干燥将萃取混合物浓缩干燥后，得水萃取粉末。
[0057] I.Ll管柱层析A
[0058] 将实施例1. 1制得的水萃取粉末重新溶于水中，而后以Diaion HP20管柱 (Diaion, Mitsubishi Chemistry Inc.)进行分离，水萃取粉末与管柱胶体干重比约1 :30。 之后，依序以3倍柱床体积（bed volume，BV)的RO水以及3倍柱床体积的95% (v/v)乙醇 洗提管柱，并收集95% (v/v)乙醇洗提管柱所得的洗出物。将95% (v/v)乙醇洗提管柱的 洗出物进行减压浓缩以浓缩至适当体积并实质上去除乙醇，而后冷冻干燥该浓缩物，以得 到洗提粉末（下文称为粉末A)。
[0059] LL2管柱层析B
[0060] 取实施例1. 1制得的水萃取粉末重新溶于水中，而后以Diaion HP20管柱 (Diaion, Mitsubishi Chemistry Inc.)进行分离，水萃取粉末与管柱胶体干重比约1 :20。 之后，依序以3倍柱床体积的RO水、3倍柱床体积的40% (v/v)乙醇以及3倍柱床体积的 95% (v/v)乙醇洗提管柱，并收集95% (v/v)乙醇洗提管柱所得的。将95% (v/v)乙醇洗 提管柱的洗出物进行减压浓缩以浓缩至适当体积并实质上去除乙醇，而后冷冻干燥该浓缩 物，以得到洗提粉末（下文称为粉末B)。
[0061] 1. 250% (v/v)乙醇萃取
[0062] 本实施例的萃取过程与上文实施例1. 1中所述的水萃取过程相似，不同之处仅在 使用了 50% (v/v)乙醇来取代水作为萃取剂，以得到溶液状的50%乙醇萃取混合物。而后， 利用冷冻干燥将萃取混合物浓缩干燥后，得50 %乙醇萃取粉末。
[0063] L2. 1管柱层析C
[0064] 将实施例1.2制得的50%乙醇萃取粉末重新溶于50%乙醇中，而后以Diaion HP20管柱（Diaion, Mitsubishi Chemistry Inc.)进行分离，50%乙醇萃取粉末与管柱胶 体干重比约1 :20。之后，依序以3倍柱床体积的RO水、3倍柱床体积的95% (v/v)乙醇、 2倍柱床体积的丙酮、2倍柱床体积的含0.1 % (v/v)甲酸的95% (v/v)乙醇以及1倍柱床 体积的含0.1% (v/v)甲酸的50% (v/v)乙醇洗提管柱，以分别得到洗出物。将丙酮、含 0.1% (v/v)甲酸的95% (v/v)乙醇以及含0.1% (v/v)甲酸的50% (v/v)乙醇洗提管柱 的洗出物合并进行减压浓缩以浓缩至适当体积并实质上去除乙醇与丙酮，而后冷冻干燥该 浓缩物，以得到洗提粉末（下文称为粉末C)。
[0065] 实施例2
[0066] 竞争性结合测量
[0067]在y (mu)、5 (delta)及K (kappa)三种主要鸦片受体中，y受体已被证实为鸦 片止痛剂的主要标的。在本实验中，竞争性结合是利用具有放射性标识的拮抗剂-[ 3H]二 丙诺啡（[3H]diprenorphine，3H-DPN)来研宄本紫毙萃取物是否可以专一地结合至y鸦片 受体（mu opioid receptor, M0R)。
[0068] 2. 1材料及方法
[0069] 由表现重组人类 MOR 的中国仓鼠卵巢-Kl (Chinese hamster ovary-Kl, CH0-K1) 细胞所制得的膜是购自PerkinElmer Life及Analytical Sciences(产品编号：ES-542-M ; Kd: 0? 41nM ;Bmax:每毫克蛋白 3. 8pmol)。3H-DPN 亦购自 PerkinElmer Life 及 Analytical Sciences。纳洛酮及TrisHCl是购自Sigma。将冷冻的膜分装，并保存于-80°C以供后续使 用。
[0070] 将膜蛋白、0. 6nM 3H-DPN及100yg/mL或30yg/mL紫菀萃取物于反应缓冲剂 (50mM Tris-HCl，pH 7.4)中，25°C作用60分钟。再将该反应混合物通过GF/B过滤器进行 快速真空过滤，该过滤器先以〇. 3%聚乙亚胺（polyethylenei