一种含有丹参酚酸b的药物组合物及其制药用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药领域，具体涉及一种含有丹参酚酸B的药物组合物及其应用。
【背景技术】
[0002] 丹参酚酸B又称紫草酸B，是三分子丹参素和一分子咖啡酸的缩合物，是一种缩酚 酸类多羟基化合物，淡黄色无定形粉末，分子式C36H30016。具有改善肾功能，防治心血管疾 病，抗缺血损伤，肝损伤，抗凝血和抗血栓，抗炎，改善肾功能等多种药理作用。
[0003] 羟基红花黄色素 A是单查尔酮苷类结构的化合物，是红花药理功效的最有效水溶 性成分，可抑制血小板激活因子诱发的血小板聚集与释放，可竞争性地抑制血小板激活因 子与血小板受体的结合，是红花黄色素的活血化瘀有效成分。
[0004] 中国专利CN101759672B公开了丹参酚酸B用于治疗心脑血管疾病、肝损伤、肝纤 维化、肺纤维化、肿瘤、衰老药物中的应用，但是未公开丹参酚酸B对肾脏疾病的治疗作用。 更没有公开丹参酚酸B与羟基红花黄色素 A组合治疗肾病及其他疾病的技术方案。目前， 也未见以丹参酚酸B和羟基红花黄色素 A以固定投药量组合用于治疗肾脏病及其他疾病的 报道。本发明公开了一种治疗肾脏疾病的组合药物，为临床治疗肾脏疾病提供了新的方法。
【发明内容】
[0005] 经过大量试验研究证实，本发明公开的药物组合物能有效治疗肾脏疾病、肾衰、肾 病综合征、肿瘤、心脑血管等疾病。
[0006] 本发明组合物含有丹参酚酸B和羟基红花黄色素 A。
[0007] 本发明组合物含有的丹参酚酸B，可以用丹参酚酸B的镁盐、钾盐、钙盐代替。
[0008] 本发明药物组合物，按重量份计，含有丹参酚酸B1-30份和羟基红花黄色素 A1-30 份。其中，丹参酚酸B可以用丹参酚酸B的镁盐代替。还可以用丹参酚酸B的钾盐代替。还 可以用丹参酚酸B的钙盐代替。
[0009] 本发明组合物成分中的丹参酚酸B和羟基红花黄色素 A可以分别是从丹参和红花 等中药中提取得到，也可以通过化学合成的方法得到。
[0010] 本发明药物组成优选：
[0011] 1.丹参酚酸Blmg和羟基红花黄色素 A30mg。
[0012] 2.丹参酚酸B30mg和羟基红花黄色素 Almg。
[0013] 3.丹参酚酸B20mg和羟基红花黄色素 A15mg。
[0014] 4.丹参酸酸B镁盐15mg和羟基红花黄色素 A15mg。
[0015] 5.丹参酚酸B钾盐15mg和羟基红花黄色素 A15mg。
[0016] 6.丹参酚酸B钙盐15mg和羟基红花黄色素 A15mg。
[0017] 本发明组合物可以制成药剂学上任何一种剂型，包括制成固体形式、液体形式、气 体形式或半固体形式的制剂，优选注射剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂或冲剂等。
[0018] 本发明对6组药物组合开展了试验研究，具体组合物如下：
[0019] 组合物一：丹参酚酸Blmg和羟基红花黄色素 A30mg。
[0020] 组合物二：丹参酚酸B30mg和羟基红花黄色素 Almg。
[0021] 组合物三：丹参酚酸B20mg和羟基红花黄色素 A15mg。
[0022] 组合物四：丹参酚酸B镁盐15mg和羟基红花黄色素 A15mg。
[0023] 组合物五：丹参酚酸B钾盐15mg和羟基红花黄色素 A15mg。
[0024] 组合物六：丹参酚酸B钙盐15mg和羟基红花黄色素 A15mg。
[0025] 实验一、本发明对慢性肾衰大鼠的治疗作用
[0026] 1.实验动物SD大鼠170只，雌雄各半，体重200g±20g，购自中国科学院上海实验 动物中心。
[0027] 2.实验药物本发明6组组合物药物成分，均有由大连美仑生物技术有限公司提 供，实验前均用蒸馏水配成5mg/ml溶液（丹参酚酸B、羟基红花黄色素 A的浓度与组合物三 相同）。
[0028] 3.实验方法取SD大鼠随即取出15只作为空白对照组，其余大鼠适应性喂养3天。 除空白对照组外，其余大鼠用2. 5 %腺嘌呤混悬液按250mg/kg/天灌胃，连续灌胃给予3周， 待出现血清尿素氮、肌酐升高等肾功能衰竭现象时，将符合要求的大鼠随即分为模型组、组 合物一至六组。组合物一至六组分别灌胃给予相应药物l〇ml/kg，空白对照组和模型组灌胃 给予等体积的蒸馏水，每日给药一次，连续给药4周。末次给药24h后，腹主动脉取血，测定 血清尿素氮、肌酐、血清白蛋白的含量和血液流变学各指标，解剖肾脏进行病理切片，显微 镜下观察病理变化。
[0029] 4.检测指标
[0030] (1)测定血清尿素氮、肌酐和血清白蛋白的含量
[0031] (2)血液流变学检查
[0032] (3)病理学检查
[0033] 5.实验结果
[0034] (1)本发明对慢性肾衰模型大鼠血清尿素氮、肌酐和血清白蛋白的影响。见表1。
[0035] 表1本发明对慢性肾衰大鼠血清尿素氮、肌酐和血清白蛋白的影响)
[0036]
[0037]
[0038] 注：各组与模型组比较*P〈0. 05，**P〈0. 01
[0039] 结果表明：空白对照组与模型组比较尿素氮和肌酐明显较低，血清白蛋白明显较 高，且有显著性差异，表明造模后，已对大鼠造成严重损伤，经过4周的治疗各给药组大鼠 尿素氮和肌酐明显降低，血清白蛋白明显升高，且有显著性差异（P〈〇. 05或p〈0. 01)。
[0040] (2)本发明对慢性肾衰大鼠血液流变学的影响。见表2。
[0041] 表2本发明对慢性肾衰大鼠血液流变学的影响G ±Λ< )
[0043] 注：各组与模型组比较*Ρ〈0· 05, **Ρ〈0· 01
[0044] 结果表明：空白对照组与模型组比较全血粘度，血浆粘度和红细胞压积均明显较 低，且有显著性差异，表明造模后，已对大鼠造成严重损伤，经过4周的治疗各给药组大鼠 全血粘度，血浆粘度和红细胞压积均明显降低，且有显著性差异（P〈〇. 05或p〈0. 01)。
[0045] (3) HE染色显微镜下观察结果
[0046] 空白对照组：肾小球和肾小管清晰，结构正常，未见病理改变；模型组：肾小球萎 缩，肾小管明显扩张，近曲小管和远曲小管上皮细胞均有明显浊肿和变性发生，肾间质纤维 组织增生，并有慢性炎细胞浸润；各给药组：肾小球轻微充血，结构未见异常，肾小管有轻 微扩张，无明显炎细胞浸润。
[0047] 6.结论结果证实，各给药组对慢性肾衰均有较好地治疗作用，具体表现在改善血 肌酐、尿素氮、血清白蛋白、血液流变学各指标和病理学特征方面。
[0048] 实验二、本发明组合物对肾小球肾炎的治疗作用
[0049] 1.实验动物SD大鼠120只，雌雄各半，体重180_220g，购自中国科学院上海实验 动物中心。新西兰白兔8只，购自西安市迪乐普生物资源开发有限公司。
[0050] 2.实验药物本发明6组组合物药物成分，均有由大连美仑生物技术有限公司提 供，实验前均用蒸馏水配成5mg/ml溶液（丹参酚酸B、羟基红花黄色素 A的浓度与组合三相 同）。
[0051] 3.实验方法
[0052] (1)制备兔抗大鼠胸腺细胞血清取无菌的SD大鼠6只，处死，小心摘取大鼠胸腺 和肝脏。将肝脏用PBS缓冲液冲洗干净后制成肝粉待用；另将胸腺置于PBS缓冲液中，冲洗 2-3次，小心分离、去除其表面的淋巴结和血管，置200目不锈钢网筛上，用解剖针轻轻划破 胸腺游离出胸腺细胞，用PBS缓冲液冲洗，收集胸腺细胞悬液，离心10min，用PBS缓冲液重 制2 X IOVml的胸腺细胞悬液，按体积比1 :2混合胸腺细胞悬液和弗氏完全佐剂，充分混 匀，以混合后的悬液作为大鼠胸腺细胞免疫抗原液。将大鼠胸腺细胞免疫抗原液多点注射 于8只新西兰白兔背部皮下，每只兔子注射3ml。常规饲养2周后，兔耳缘静脉注射2 X IO7/ ml的胸腺细胞悬液，每只注射I. 5ml。7d后心脏抽取兔子血液，收集兔血清。用免疫扩散法 测抗兔抗大鼠胸腺细胞血清效价为I :160-1 :320。兔抗大鼠胸腺细胞血清于56°C、30min 灭活后，分别用同个体大鼠肝粉吸附以去除非特异性抗体，室温离心30min，弃去肝粉，收集 兔抗大鼠胸腺细胞血清，-20°C保存备用。
[0053] ⑵慢性肾小球肾炎大鼠模型的制备取健康SD大鼠110只，适应性喂养3天后，收 集尿液，检测尿蛋白，结果均为阴性。随即分为正常对照组、模型组、组合物一至六组，每组 10只。除正常对照组大鼠尾静脉注射2ml生理盐水外，其余组大鼠一次性尾静脉注射兔抗 大鼠胸腺细胞血清2ml。
[0054] (3)给药方法及测定指标注射兔抗大鼠胸腺细胞血清6天后，组合物一至六组分 别灌胃给予相应药物l〇ml/kg，空白对照组和模型组灌胃给予等体积的蒸馏水，每日给药一 次，连续给药4周。末次给药24小时后，腹主动脉取血，分别测定IL-6、IL-8和TNF- α水 平，解剖肾脏，进行病理学考察。
[0055] 4.结果
[0056] (1)本发明对慢性肾小球肾炎大鼠血清IL-6、IL-8和TNF- α的影响
[0057] 表3本发明对慢性肾小球肾炎大鼠血清IL-6、IL-8和TNF- α的影响（
[0058]
[0059] 注：各组与模型组比较*Ρ〈0· 05广Ρ〈0· 01
[0060] 结果表明：模型组大鼠血清IL-6、IL-8和TNF-α水平较正常对照组显著升高 (Ρ〈0. 01)，表明造模成功。本发明药物组大鼠血清IL-6、IL-8和TNF-α水平低于模型组 (P〈0. 05或P〈0. 01)，本发明药物组可降低IL-6含量水平，表明各给药组在一定程度上均可 以改善血清细胞因子水平。
[0061] (2)病理学检查正常对照组大鼠肾小球轮廓、结构清晰，形态正常；模型组大鼠肾 小管明显肿胀，有充血，管腔变窄，部分可见蛋白管形，肾小球体积增大，可见炎细胞浸润； 各给药组大鼠肾小球结构未见明显异常，肾小球毛细管有轻微肿胀，基底膜稍有增厚，炎细 胞浸润不明显。
[0062] 5.结论实验结果证实，各给药组对慢性肾小球肾炎大鼠均有较好地治疗作用，具 体表现在降低血清炎症因子水平和改善病理学特征方面。
[0063] 实验三、考察本发明药物对高血压肾病的治疗作用
[0064] 1.实验动物自发性高血压大鼠110只，雌雄各半，体重180_220g，购自中国科学院 上海实验动物中心。
[0065] 2.实验药物本发明6组组合物药物成分，均有由大连美仑生物技术有限公司提 供，实验前均用蒸馏水配成5mg/ml溶液（丹参酚酸B、羟基红花黄色素 A的浓度与组合三相 同）。
[0066] 3.实验方法
[0067] 待测得自发性高血压大鼠尿微量白蛋白为20_200mg/L时为自发性高血压肾病模 型复制成功，剔除不合格大鼠，随机分为组合物一至六组，丹参酚酸B组和羟基红花黄色素 A组，另取10只做为对照组。各给药组灌胃给予相应药物0. 5ml/10g，对照组给予等体积的 蒸馈水，每天给药一次，连续给药4周。
[0068] 4.检测指标
[0069] 4. 1测定血压。给药前，测定大鼠清醒状态下的尾静脉收缩压，实验结束时，再次测 定大鼠尾静脉的收缩压，且每次测三次求平均值。
[0070] 4. 2测定各组大鼠尿液中尿微量白蛋白、尿02微球蛋白。实验结束前收集12h尿 液，收集尿液期间禁食