，不禁水。
[0071] 4. 3测定血液中血肌酐和尿素氮的含量。实验结束时心脏取血，用济南汉方医疗器 械有限公司生产的全自动生化分析仪测定血肌酐和尿素氮。
[0072] 5实验结果
[0073] 5. 1组合物对自发性高血压肾病大鼠血压的影响，见表4。
[0074] 表4本发明组合物对实验前后自发性高血压肾病大鼠血压的影响〔Γ 士S)
[0076] 注：与对照组比较*P < 0· 05**P < 0· 01
[0077] 实验结果表明：实验结束时，各给药组大鼠血压与对照组相比明显降低，且有显著 性差异（p〈0. 01)。表明本发明药物组合物对原发性高血压肾病大鼠的血压有一定降低作 用。
[0078] 5. 2本发明对原发性高血压肾病大鼠尿液中尿微量白蛋白、尿02微球蛋白含量的 影响，见表5。
[0079] 表5对高血压肾病大鼠尿液尿微量白蛋白、尿β 2微球蛋白含量的影响J 土S)
[0082] 注：与对照组比较*P < 0· 05#P < 0· 01
[0083] 实验结果表明：本发明药物组合物可明显减低高血压肾病大鼠尿微量白蛋白和尿 β 2微球蛋白的含量，与空白组比较有显著性差异（p〈0. 01)。表明本发明药物组合物对原 发性高血压肾病大鼠的肾脏有一定保护作用。
[0084] 5. 3本发明对原发性高血压肾病大鼠血液中血肌酐和尿素氮的影响，见表6。
[0085] 表6本发明对原发性高血压肾病大鼠血肌酐和尿素氮的影响(Γ 土S)
[0087] 注：与模型组比较 *P < 0· 05**P < 0· 01
[0088] 结果表明：本发明药物组合物可明显减低高血压肾病大鼠血肌酐和尿素氮的含 量，与空白组比较有显著性差异（P〈〇. 01)。表明本发明药物组合物对原发性高血压肾病大 鼠的肾脏有一定保护作用。
[0089] 实验四、考察本发明药物的抗肿瘤作用
[0090] 1.实验动物BALB/C小白鼠130只，雌雄各半，体重18-22g，购自中国科学院上海 实验动物中心。
[0091] 2.实验药物本发明6组组合物药物成分，均有由大连美仑生物技术有限公司提 供，实验前均用蒸馏水配成5mg/ml溶液（丹参酚酸B、羟基红花黄色素 A的浓度与组合三相 同）。鼠肝癌细胞株H22由陕西中医学院药理学研究室惠赠。
[0092] 3.实验方法
[0093] 建立肿瘤模型自种鼠腹腔内小心抽出接种Η22细胞株的腹水，转移接种到另一只 小鼠腹腔，传代三次。取接种Η22细胞株并传代三次的小鼠，无菌条件下用5ml注射器抽吸 出l-2ml牛奶状、较粘稠的腹水，先用0. 4%苔盼蓝染色，细胞计数板，计活细胞率>90%，然 后以灭菌D-Hanks液稀释调整肿瘤细胞浓度为I. 0 X IO7个/ml。在其余小鼠右前肢腋窝和 皮下接种调好浓度的肿瘤细胞，〇. 15ml/只。
[0094] 给药方法建立模型72小时后，将实体瘤小鼠随机分为10组，即对照组、组合物一 至六组，每组10只。各给药组灌胃给予相应药物0. 5ml/10g，对照组给予等体积的蒸馏水， 每天一次，连续给药2周。每天记录小鼠死亡数，并称量不同给药组小鼠体重。
[0095] 抗肿瘤活性评价给药期间每天称量动物体重，末次给药48h后处死动物，剥离肿 瘤，称重，置于10 %福尔马林溶液固定后，进行病理切片。
[0096] 按以下公式计算药物对肿瘤生长的抑制率。肿瘤生长抑制率=(对照组平均瘤 重一给药组平均瘤重）/对照组平均瘤重X 100%。
[0097] 4.实验结果
[0098] 本发明药物体内抗肿瘤活性结果如下表。
[0099] 表7体内抗肿瘤活性实验结果
[0101] 注：各组与对照组比较*Ρ〈〇· 05广P〈0. 01
[0102] 实验结果表明：不同给药组与对照组相比明显抑制肿瘤活性，均有显著性差异 (Ρ〈0. 05)，可以看出各组药物对肿瘤的抑制程度以组方三最佳。
[0103] 5.结论本发明药物对肿瘤有抑制作用，可用于肿瘤疾病的治疗。
[0104] 实验五、本发明药物对血管内皮细胞的保护作用
[0105] 1.实验材料人脐静脉血管内皮细胞株（内皮细胞ECV-304)购自上海拜力生物科 技有限公司；DMEM高糖培养基、胎牛血清均购自Gibco公司。MDA、SOD试剂盒购自南京建 成生物有限公司；H 2O2购于天津科密欧化学试剂有限公司；胰酶、四氮唑兰（MTT)购自美国 SIGMA公司。
[0106] 2.实验药物本发明6组组合物药物成分，均有由大连美仑生物技术有限公司提 供，实验前均用蒸馏水配成5mg/ml溶液（丹参酚酸B、羟基红花黄色素 A的浓度与组合三相 同）。
[0107] 3.实验方法
[0108] 细胞培养将人脐静脉血管内皮细胞置于混有2mmol/L L -谷氨酰胺、100μ g/ml 肝素、100U/ml青霉素、30 μ g/ml内皮细胞生长因子和10 %胎牛血清的1640培养液中，于 37°C、5% CO2饱和湿度的细胞培养箱中培养。当细胞生长融合至80%时，倒出旧的培养基， 用PBS液轻洗细胞2~3次，再加入1ml左右0. 125 %胰酶，至37°C、5 % CO2培养箱孵育 2min，镜下见细胞皱缩变圆、细胞间隙增大时，吸弃胰酶，加入含10%胎牛血清的完全培养 液以终止胰酶的作用，用吸管反复轻轻吹打细胞，使之从瓶壁脱落成细胞悬液。细胞计数， 调整细胞密度为IX IO5个/ml，接种于96孔板每孔100 μ 1，置于37°C、5 % CO2条件下培养。 约24h后，用于实验。
[0109] 建立H2O2诱导人脐静脉血管内皮细胞损伤模型血管内皮细胞以IO 4个/孔接种 于96孔培养板。用无血清培养基将H2O2配成0、75、150、300、600 μ mol/L剂量组，分别加 入96孔板中，每孔100μ 1，分别作用12、24、48h后，将上清液弃掉，每孔加入100μ 1培养基 和20 μ IMTT (5g/L)作用4h，将上清弃掉，每孔加150 μ 1蒸馏水，微孔振荡器上振荡15min， 570nm酶标仪下测定细胞吸光度值（A)。细胞抑制率％=(空白组吸光度值一各组吸光度 值）（A) /空白组吸光度值（A) X 100 %。
[0110] 给药方法将细胞以2X IO5个/孔接种于6孔板，实验分为9组，正常对照组：每 孔给予2ml无血清培养基；模型组：每孔给予2ml终浓度为300 μ mol/LH202，作用24h ;本 发明组方一至六组：给予2ml终浓度为50mg/ml相应药物，孵育4h后，给予2ml终浓度为 300 μ mol/L H2O2作用24h。检测细胞中SOD、MDA的含量：消化收集各组细胞，每组加 Iml PBS，采取反复冻融的方法（一 80°冰箱15min，室温20min，如此重复5次），至细胞破碎， 内容物流出，3000r/min离心15min，吸取上清，进行BCA蛋白定量，然后按试剂盒说明书进 行MDA、SOD的含量测定。
[0111] 4.实验结果
[0112] 本发明药物对人静脉血管损伤的保护作用，见表8
[0113] 表8本发明药物对人静脉血管SOD、MDA的影响（)
[0114]
[0115] 注：各组与模型组比较*Ρ〈0· 05, **Ρ〈(λ 01
[0116] 实验结果表明：各给药组较模型组SOD活性升高，MDA含量下降，且有统计学意义 (Ρ〈0· 05 或 Ρ〈0· 01)。
[0117] 5.结论实验证明本发明组方可以改善受损的静脉血管内皮细胞，提示可以用于治 疗心脑心脑血管疾病。 具体实施例
[0118] 实施例1
[0119] 取丹参酚酸B6g，羟基红花黄色素 Al. 2g，再加注射用水稀释至500ml，滤过，补充 注射用水至800ml，调节pH值至6. 5-7. 0,加注射用水稀释至1000ml，用0. 22 μ m微孔滤膜 滤过，分装，灭菌，得注射剂。
[0120] 实施例2
[0121] 取丹参酚酸B600g，羟基红花黄色素 A120g、葡甲氨和精氨酸适量，加入注射用水 稀释至5L，搅拌直至溶解，滤过，滤液调pH值至5. 0-7. 0,用0. 22 μ m微孔滤膜进行精滤；取 甘露醇适量加注射用水配制成溶液，与上述滤液混匀，用〇. 22 μ m微孔滤膜滤过，加注射用 水稀释至10L，按单位制剂IOml的剂量分装，冷冻干燥，得冻干粉。
[0122] 实施例3
[0123] 取丹参酚酸B200g，羟基红花黄色素 A40g，预交化淀粉，微粉硅胶，硬脂酸镁，滑石 粉适量，分别过80目筛后，与药粉混合均匀，加适量的黏合剂制成软材，制粒，颗粒于60°C 干燥。加微粉硅胶、硬脂酸镁和滑石粉后混合均匀，压制成1000片。
[0124] 实施例4
[0125] 取丹参酚酸B200g，羟基红花黄色素 A40g，预交化淀粉，微粉硅胶，硬脂酸镁，滑石 粉适量，分别过80目筛后，均匀混合，加适量的黏合剂制成软材，制粒；颗粒在60°C干燥。 加入羧甲淀粉钠、微粉硅胶、硬脂酸镁和滑石粉混合均匀，装胶囊，制成1 〇〇〇粒。
[0126] 实施例5
[0127] 取丹参酚酸B1200g，羟基红花黄色素 A240g，预交化淀粉，微粉硅胶，硬脂酸镁，滑 石粉适量，再加阿斯巴甜适量，制成软材，制粒，在60°C干燥后，检测合格后，分装于药用聚 乙烯塑料袋中，每袋5g，共制1000袋。
【主权项】
1. 一种治疗肾脏疾病的药物组合物，其特征在于：按重量份计，含有丹参酚酸B1-30份 和羟基红花黄色素A1-30份。2. 根据权利要求1所述治疗肾脏疾病的药物组合物，其特征在于：丹参酚酸B可以用 丹参酚酸B的镁盐代替。3. 根据权利要求1所述治疗肾脏疾病的药物组合物，其特征在于：丹参酚酸B可以用 丹参酚酸B的钾盐代替。4. 根据权利要求1所述治疗肾脏疾病的药物组合物，其特征在于：丹参酚酸B可以用 丹参酚酸B的钙盐代替。5. 权利要求1-4任一所述药物组合物在制备用于治疗肾脏疾病的药物中的应用。6. 根据权利要求5所述的应用，其特征在于：肾脏疾病为肾衰、肾病综合征、高血压肾 病。7. 权利要求1-4任一所述药物组合物在制备用于治疗肿瘤的药物中的应用。8. 权利要求1-4任一所述药物组合物在制备用于治疗心血管疾病的药物中的应用。9. 根据权利要求1-4任一所述治疗肾脏疾病的药物组合物，其特征在于：该组合物为 固体形式、液体形式、气体形式或半固体形式的制剂。
【专利摘要】本发明涉及一种含有丹参酚酸B的药物组合物及其应用，该组合物含有丹参酚酸B和羟基红花黄色素A，以固定投药量配比的用于治疗肾脏及其他疾病，其中丹参酚酸B可以用丹参酚酸B的镁盐、钾盐、钙盐代替，该组合物可以制成固体形式、液体形式、气体形式或半固体形式的制剂，经大量实验证实，它可用于治疗肾脏病、肾病综合征、心脑血管疾病和肿瘤疾病等。
【IPC分类】A61K31/343, A61P13/12, A61P35/00, A61P9/12, A61P9/00, A61K31/351
【公开号】CN104997767
【申请号】CN201410171383
【发明人】吴芳, 吕延英, 王光建, 赵兴, 詹芳, 王俊平, 贾诚, 曾艳龙
【申请人】西安世纪盛康药业有限公司
【公开日】2015年10月28日
【申请日】2014年4月25日