一种槲皮素纳米粒及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及药物制剂领域，具体涉及一种TPGS为主要辅料的槲皮素纳米粒的制备方法及体外性质考察。
【背景技术】
[0002]槲皮素是一种存在于多种植物体内的黄酮类化合物，分子式为C12HwO7，分子量为302.23，具有广泛的药理活性，如抗肿瘤、抗氧化、肾脏保护、舒张血管与心脏保护等作用，药用价值很高，但是由于其水溶性较差，水中实测饱和溶解度只有(6.83±0.41) μ g.mL \口服难吸收、注射无法给药等使应用受到限制。近年来有学者尝试将槲皮素制备成不同剂型，如胶束、聚合物纳米粒、固体脂质纳米粒等，载药量均较低(< 20% )，因此寻找一种制备方法简单易行、载药量高且有效解决槲皮素难溶性问题的给药系统显得尤为重要。
[0003]纳米混悬剂是一种利用少量表面活性剂稳定的药物粒子，均匀分散在水中而形成的一种胶体分散体系，是纳米给药系统中极其重要的一类微粒给药系统，由于粒子分散度较大，比表面积较大，很大程度上提高药物溶出速度及程度，并有助于提高生物利用度。成为解决难溶性药物临床应用的有效方法之一。另外由于载体用量少可以避免载体摄入量过大引起的毒性问题；表面具有PEG链段的纳米粒入血后，由于亲水链段PEG的保护作用，可减缓纳米粒在体内的水解及酶解，从而达到缓释长效作用。若纳米粒粒径较小，还会因EPR效应而被动靶向到肿瘤组织，提高药效。具有很高载药量的槲皮素纳米晶，虽然也有研究报道，但其粒径较大(将近400nm)，对溶解度提高有限。
[0004]TPGS (维生素E聚乙二醇琥珀酸酯)是一种水溶性维生素E的衍生物，作为载体已经在药物传递系统应用，并且与其他药用载体相比具有抗氧化作用的优势，这也可以增加制剂中药物的稳定性。最近研究还表明TPGS还可以抑制肿瘤细胞P-糖蛋白对药物的外排，将其作为辅料可逆转肿瘤耐药性，增加抗癌药物对肿瘤细胞的杀伤作用。基于以上原因，本实验以TPGS为稳定剂的制备高载药槲皮素纳米混悬剂，静脉注射后用于肿瘤治疗时，不但可以由于EPR效应具有对肿瘤的被动靶向性，同时有望抑制肿瘤的多药耐药性，从而增加药效。
[0005]虽然申请号为201010529024.8的专利公开了一种槲皮素纳米胶束制剂及其制备方法，但该专利所使用的药物辅料是普朗尼克P123，或P123与TPGS的混合物。且混合物中，槲皮素20-40份，P123为200-300份，TPGS为20-30份。更重要的是其制备方法为薄膜分散法，即将药物与辅料溶解于有机溶剂，减压旋转蒸发除去有机溶剂形成含药薄膜，真空干燥后，加入水相水化，再用微孔滤膜过滤。而本发明提出的方法为溶剂沉淀法，或溶剂沉淀与高压均质联用；同时本发明中的辅料不含普朗尼克以及普郎尼克与TPGS的组合。
【发明内容】
[0006]本发明的目的之一在于提供一种制备方法简单易行、载药量高、稳定、小粒径，可实现槲皮素体外缓释，以期实现体内缓释长效效果的槲皮素纳米粒。
[0007]—种槲皮素纳米粒，由槲皮素药物与稳定剂辅料组成，药物与稳定剂的质量比为1: 20 ?10:1。
[0008]—种槲皮素纳米粒，选用的稳定剂为TPGS(维生素E聚乙二醇琥珀酸酯)。
[0009]本发明的目的之二在于提供一种槲皮素纳米粒的制备方法，本发明采用的是纳米沉淀或者是纳米沉淀联合高压均质的方法制备纳米粒，具体制备方法如下:
[0010](I)将槲皮素药物与稳定剂辅料共同溶解于能与水互溶的有机试剂中；
[0011](2)在超声或搅拌条件下将溶解槲皮素药物与稳定剂辅料的有机试剂注入到一定量水中；
[0012](3)通过透析法或者减压旋转蒸发法去除有机试剂，或者高速离心沉淀收集纳米粒重新加水分散；
[0013](4)若有需要可采用高压均质法进一步减小粒径。
[0014]上述制备方法中，其特征在于:步骤(I)中所提及的有机试剂为甲醇、乙醇、DMF、DMS0、丙酮、乙腈中的一种或两者或多种的混合体系，所选有机试剂体系只要能与水互溶且能很好的溶解药物与稳定剂辅料即可，药物在有机溶剂中的浓度为0.001 %?50% (w/v)，稳定剂的浓度为0.001%?50% (w/v);步骤(2)中有机溶剂与水相的体积比为1: 5?1: 50 (v/v);步骤(3)中高速离心条件为2000?60000rpm离心I?60min，弃去上清，沉淀加水超声复溶；步骤(4)超声与搅拌温度为O?60°C，高压均质条件为温度O?60°C，压力500-4000bar，其中理想均质条件为10°C、2000?2500bar、5?15次循环。
[0015]本发明目的之三在于提供一种槲皮素纳米粒在制备注射剂中的应用，本发明的槲皮素纳米粒水相分散介质可用高浓度的葡萄糖水溶液调成5%葡萄糖生理等渗体系，适应临床应用。
[0016]本发明的纳米粒具有以下优点:(I)制备方法操作简单，只需药物和稳定剂辅料TPGS即可制备成功。(2)药载比为5: I时就可达到载药量80%，包封率超过95%，药物在纳米粒中以晶型结构存在，且粒径小于200nm，易实现肿瘤的被动靶向效果。(3)体外释放无突释现象，药载比为5: I时，体外缓释36h，若药载比降低，则缓释时间更长。(4)药载比可以根据需要在9%?90%之间调整，药载比较低时，以胶束形式存在。
[0017]本发明的纳米粒工艺简单，成分单纯，易于扩大生产，有广阔的产业化前景。
【附图说明】
[0018]图1为实施例1中槲皮素纳米粒高压均质后的平均粒径分布图。
[0019]图2为实施例2中槲皮素纳米粒高压均质后的平均粒径分布图。
[0020]图3为实施例1中槲皮素纳米粒在37°C条件下水中及5%葡萄糖溶液中粒径变化图(η = 3)。
[0021]图4为实施例1中槲皮素纳米粒在37°C条件下水中及5%葡萄糖溶液中电位变化图(η = 3)。
[0022]图5为实施例1中槲皮素纳米粒差示量热扫描量热分析图(从上到下依次为物理混合物(5: I)、槲皮素纳米粒、槲皮素原药、TPGS)。
[0023]图6为实施例1中槲皮素纳米粒与自制槲皮素溶液(50 % PEG400配制)体外释放图(η = 3)。
【具体实施方式】
[0024]下面将描述本发明的几个实施例，但本发明的内容完全不局限于此。
[0025]实施例1
[0026]精密称取槲皮素20mg、TPGS 4mg，溶于0.5mL DMF中，10°C和超声条件下缓慢滴加至1mL水中，13000r ?min 1离心20min，弃上清，沉淀加水5mL超声复溶，10°C和2000bar高压均质5次。结果如图1 (左)，制备后平均粒径为173.21nm，PDI为0.18，电位为-19.02mV，4°C条件下放置10天平均粒径为175.91nm，放置稳定性好。
[0027]实施例2
[0028]精密称取槲皮素20mg、TPGS 20mg，溶于0.5mL DMF中，10°C和超声条件下缓慢滴加至1mL水中，13000r.min 1离心20min，弃上清，沉淀加水5mL超声复溶，10 °C和2000bar高压均质5次。结果如图1 (右)，制备后平均粒径为159.13nm，PDI为0.16，电位为-13.73mV0
[0029]实施例3
[0030]精密称取槲皮素20mg、TPGS 20mg，溶于0.5mL DMF中，10°C和搅拌条件下缓慢滴加至1mL水中，13000r ?min 1离心20min，弃上清，沉淀加水5mL超声复溶，10°C和2000bar高压均质5次。制备后平均粒径为231.18nm，PDI为0.21，电位为-10.03mV。
[0031]实施例4
[0032]精密称取槲皮素20mg、TPGS 4mg，溶于0.5mL DMF中，25°C和超声条件下缓慢滴加至1mL水中，13000r.min 1离心20min，弃上清，沉淀加水5mL超声复溶，25。。和2000bar高压均质5次。制备后平均粒径为283.26nm，PDI为0.22，电位为-10.27mV。
[0033]实施例5
[0034]