一种含有凝血酶的复合止血膜及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及止血材料领域，具体涉及一种含有凝血酶的复合止血膜及其制备方 法。
【背景技术】
[0002] 对于现在很多的凝血功能障碍和实质性脏器出血的患者，单单使用常规外科技术 止血不能起到很好的效果，因此医用可吸收止血材料的研究和应用得到了快速的发展。因 此，充分了解各种止血材料性能的基础上合理使用止血材料，并且通过加入止血因子，使得 止血材料达到事半功倍的效果。
[0003] 现有的止血物品有海绵，通过海绵的多孔性和海棉吸收血液的能力相关，常用的 明胶海绵附着在出血部位上并且吸收约为其自身重量45倍的血液，且由于常用的明胶海 绵的均匀多孔性，在俘获血小板并且凝血级联被激活，从而将可溶性血纤蛋白原转化成使 出血停止的不溶性血纤蛋白网状物。
[0004] 在CN200580026942. 6 (公开号为CN101001649A)公开了一种含透明质酸的止血组 合物，该止血组合物中除了透明质酸外，还含有生物材料，如明胶、胶原蛋白、甲壳质、脱乙 酰壳多糖、藻酸盐、纤维素、氧化纤维素、氧化再生纤维素、羧甲基纤维素（CMC)、羟乙基纤维 素（HEC)、聚乙醇酸、聚乙酸、其衍生物及其混合物。其止血效果优于现有的海绵。该专利提 出使用的生物材料较为复杂，在实际操作时较为繁琐。
[0005] 基于现有技术可知：
[0006] 凝血酶是机体凝血系统中的一种重要组成因子，在机体受到创伤时的止血机制中 发挥了重要作用。
[0007] 凝血酶是一种丝氨酸蛋白酶，也是血液凝血级联反应中的主要效应蛋白酶，显现 出促凝和抗凝的特性。凝血酶的止血作用：一、凝血酶作为凝血因子II a，可不需经过血液 凝固的第一、第二阶段而直接作用于纤维蛋白原，使之转变为纤维蛋白，使血液快速凝固、 填塞出血点而达到止血的目的。因其作用于止血的最后环节，故不需其他众多因子的参与； 二、激活凝血因子W，后者可使溶性纤维蛋白转变为难溶性纤维蛋白，形成凝血块；三、增强 凝血因子XIII和V的活性，后者在Ca2+和凝脂参与下促进凝血酶因子X a形成，使凝血酶原 转变为凝血酶；四、促进血小板发生不可逆的聚集和血小板释放效应，加速血液凝固；五、 促进上皮细胞生成，减少创面渗出，可使创面愈合时间缩短一半。
[0008] 壳聚糖是甲壳素脱乙酰基的产物，是一种天然的阳离子高分子多糖，它来源丰富， 无毒无害，无污染及可降解，已广泛应用于化工、食品、化妆品、环保及医药等诸多领域。但 壳聚糖仅溶于某些酸性介质，限制了其应用范围。对壳聚糖进行化学修饰即可得羧甲基壳 聚糖，根据羧甲基的取代位置不同可以获得〇-羧甲基壳聚糖、N-羧甲基壳聚糖和N，0-羧 甲基壳聚糖三种产物。与壳聚糖相比，羧甲基壳聚糖是一种高分子氨基多糖，同时具有羧基 和氨基，具有较好的酸碱缓冲作用，生物相容性好，无免疫原性，无毒副作用，同时具有促进 创伤愈合等作用，因此羧甲基壳聚糖在生物材料、医药、保健食品等方面都有广泛的应用。
[0009] 透明质酸钠 （Hyaluronic Acid Sodium Salt)，是一种多分子直链聚糖，是人体的 必须物质，广泛存在于人体组织和细胞外基质中，浆膜是其合成部位。具有填充细胞空间、 稳定细胞结构、覆盖和保护细胞的作用，可以：①抑制组织迀移；②减少血纤维蛋白原沉 积；③阻隔和润滑作用；④抗炎和促进组织修复作用。从而可抑制过量纤维组织形成，防止 粘连的发生，减少手术并发症，促进伤口愈合的作用。
[0010] 经过检索，有关透明质酸、凝血酶、羧甲基壳聚糖混用的报道如下：
[0011] CN201110021515. 6(公开号为CN102600495A)涉及一种可吸收的止血组合物其制 备方法，选用壳聚糖、胶原和透明质酸为主要止血基质，通过混合工艺得到所需的止血组合 物。
[0012] CN200810025839. 5 (公开号为CNlO 1485899A)涉及凝血酶-壳聚糖自组装纳米微 粒制备方法及用途。本发明将壳聚糖加入乙酸水溶液形成壳聚糖溶液；将凝血酶加入到缓 冲液形成凝血酶溶液；将凝血酶溶液与壳聚糖溶液混合均匀，加入交联剂搅拌后，将其倒入 液体石蜡中搅拌，再加入分散剂，乳化；再加入交联剂通过水浴进行交联反应后，过滤，用丙 酮洗涤后，再用乙醇洗涤脱水，最后真空干燥，获得凝血酶-壳聚糖自组装纳米微粒。该专 利中用乙酸作为溶剂且用丙酮作为洗涤剂，在操作上存在一定的危险性。
[0013] CN201410444308. 5(公开号为CN 104189941A)公开了一种壳聚糖凝胶止血材料 及其制备方法，通过壳聚糖、交联剂和凝血酶三者复合得到的凝胶止血材料。实现了体内快 速止血、促进创面愈合、并缓释凝血酶达到术后运动造成的二次出血等作用，同时具有抗菌 抑菌的特征、可有效防止创面感染。所述的壳聚糖的脱乙酰度在85% -99. 9%之间，平均分 子量在20000-100000之间，具有可溶性。所述的交联剂包括DF-PEG (二4-醛基苯甲酸聚 乙二醇酯）、氧化β-环糊精、DF-PVA(二4-醛基苯甲酸聚乙烯醇酯）的单分或混合物。该 专利中DF-PEG、氧化β -环糊精、DF-PVA使用了一种、两种或者三种混合交联剂，存在安全 隐患，若交联剂处理不完全，与人体接触后，进入人体，会伤害或恶化人的免疫系统。
[0014] 鉴于此，提出本发明。
【发明内容】
[0015] 本发明的目的是在防粘连的止血膜基础上添加止血因子，使得止血膜在防粘连、 抗菌、止血的基础上更加有效、快速的止血。
[0016] 本发明提供的止血膜，其原料包括：凝血酶和选自透明质酸钠、羧甲基壳聚糖中的 一种或两种，但不包括透明质酸和凝血酶。
[0017] 具体的，所述止血膜原料包括以下重量份的成分：凝血酶0. 05-8份和选自透明质 酸钠0-20份（优选0. 5-20份）、羧甲基壳聚糖0. 1-8份中的一种或两种，但不包括透明质 酸钠和凝血酶。
[0018] 优选地，所述止血膜原料包括以下成分：凝血酶0. 1-6.0份和选自透明质酸钠 1. 5-12份、羧甲基壳聚糖0. 25-6. 0份中的一种或两种，但不包括透明质酸钠和凝血酶。
[0019] 进一步优选，所述止血膜原料包括以下成分：凝血酶1.0-6. 0份和选自透明质酸 钠1. 5-7. 5份、羧甲基壳聚糖2. 0-6. 0份中的一种或两种，但不包括透明质酸钠和凝血酶。
[0020] 更进一步优选，所述止血膜原料包括以下成分：凝血酶2. 5-6. 0份和选自透明质 酸钠1. 5-3. 0份、羧甲基壳聚糖5. 0-6. 0份中的一种或两种，但不包括透明质酸钠和凝血 酶。
[0021] 更进一步优选，所述止血膜原料包括以下成分：凝血酶6. 0份、透明质酸钠 I. 5份 和羧甲基壳聚糖6.0份。
[0022] 更进一步优选，所述止血膜原料包括以下成分：羧甲基壳聚糖6. 0份和凝血酶6. 0 份。
[0023] 上述止血膜中：
[0024] 所述重量份可以是μ g、mg、g、kg等医药领域公知的重量单位，也可以是其倍数， 如 1/10、1/100、10 倍、100 倍等。
[0025] 凝血酶为白色或类白色的冻干块状物或粉末，每Img效价不得少于10U，在使用 时，可根据需要选用不同规格的凝血酶。
[0026] 所述透明质酸钠的分子量为50~300万道尔顿。
[0027] 所述羧甲基壳聚糖的分子量为1~100万道尔顿。
[0028] 本发明还提供了上述止血膜的制备方法，该方法包括以下步骤：
[0029] 1)将透明质酸钠（HA)直接溶解于纯化水中，得到透明质酸钠溶液；
[0030] 2)将羧甲基壳聚糖直接溶解于纯化水中，得到羧甲基壳聚糖溶液；
[0031] 3)将步骤1)得到透明质酸钠和步骤2)得到的羧甲基壳聚糖溶液混合，然后按照 配比将凝血酶加入其中，搅拌或者以铺洒的方式均匀的铺撒到装入模具中的混合溶液中； 或，
[0032] 将凝血酶加入到步骤2)得到的羧甲基壳聚糖溶液，再将步骤1)得到的溶液加入 到其中，混合均匀；
[0033] 4)将三种原材料的混合溶液，冷冻干燥。
[0034] 优选地，该方法包括以下步骤：
[0035] 1)将透明质酸钠（HA)直接溶解于纯化水中，得到浓度为0. 5-10%的透明质酸钠 溶液；
[0036] 2)将羧甲基壳聚糖直接溶解于纯化水中，得到浓度为0. 1-10%的羧甲基壳聚糖 溶液；
[0037] 3)按照配比，将步骤1)得到透明质酸钠和步骤2)得到的羧甲基壳聚糖溶液混合， 然后按照配比将凝血酶加入其中，搅拌均匀；或，
[0038] 将凝血酶加入到步骤2)得到的羧甲基壳聚糖溶液，再将步骤1)得到的溶液加入 到其中，混合均匀；
[0039] 4)将三种原材料的混合溶液装入模具中