一种地西他滨长循环脂质体冻干制剂及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及生产冻干药物脂质体技术，尤其设及一种地西他滨长循环脂质体冻干 制剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 地西他滨（decit油ine)又称5-杂氮-2-脱氧胞巧，为目前已知最强的DNA甲基 化特异性抑制剂，阻断DNA甲基化可致基因激活与诱导细胞分化。分别于2006年4月和5 月由欧洲EMEA和美国食品药品管理局批准上市，是用于治疗原发性和继发性骨髓增生异 常综合征（MD巧的药物。它的作用机制主要是通过憐酸化，然后直接渗入DNA，从而拟制DNA 甲基化转移酶，那么，运就可WDNA低甲基化和细胞分化或调亡来发挥抗肿瘤作用。临床报 告显示它对血液性恶性癌变及实体瘤具有广谱抗肿瘤活性。
[0003] 在临床上，由于地西他滨半衰期短，药物性质不稳定，在高溫和溶液条件下极易降 解，使得药物疗效降低，并引发产生毒副作用的杂质。
[0004] 专利CN101361718A将地西他滨均匀分散于有机溶剂叔下醇、乙醇、甲醇或溶于 二甲基亚讽中的至少一种，再与注射用水或溶解了冻干保护剂的注射用水混溶，冻干。此制 备过程含有有机溶剂，增加了毒副作用。
[0005] 专利CN102319222B将地西他滨分散于有机溶剂中，再与抑调节剂、注射用水混 合冻干制备地西他滨冻干制剂，虽然本发明控制制剂中有机溶剂残留不超过0.8%，但是本 制剂的稳定性不够好。
[0006] 专利CN101584670B地西他滨冻干粉针剂，该专利使用叔下醇和注射用水组成的 混合溶剂，再过滤冻干制备地西他滨粉针，提高了地西他滨的药物稳定性，但是存在安全性 隐患，同时，地西他滨半衰期只有地，并且生物利用度低。
[0007] 专利CN101637458A公开了一种地西他滨粉针剂的制备方法，采用低溫灌装，最 大限度地降低地西他滨的水解，但是并未对抑调节剂的种类和用量进行优化和筛选，产品 的稳定性不够好。
[0008] 专利CN102949352B公开了一种地西他滨冻干粉针剂及其制备方法，该专利采用 卵憐脂或/和二硬脂酷憐脂酷胆碱制备地西他滨脂质体，W克服或最大限度的抑制地西他 滨的水解，但是此制剂不能达到长循环的效果。
[0009] 专利CN101966157B-种地西他滨缓释微球及其制备方法，该专利的微球粒径在 10ymW下，而血管一般安全的粒径范围在3ymW下，且该专利的冻干体积为最小10ml，对 生产来说冻干时间相对较长，生产成本相对较高。
[0010] 本发明制剂是将地西他滨冻干制剂。该制剂优点是：①脂质体具有天然被动祀向 性，因为脂质体进入体内即被巨隧细胞作为异物吞隧而形成天然倾向的富集作用；它还具 有细胞亲和性与组织相容性，且本发明制得脂质体粒径较小，90%小于0. 22ym，易于吸收， 安全性高，即可作为抗肿瘤药物的理想载体。②长循环脂质体在体内阻止血浆蛋白吸附于 脂质体表面，阻止其调理化作用，从而避免单核巨隧细胞系统快速吞隧脂质体，延长血循环 时间，有利于增加脂质体到达病变部位的相对聚集量，即延长其在血浆中的半衰期，提高药 物的生物利用度。③冻干粉，可大大提高药物稳定性，便于运输，同时还可W减少因药物降 解产生的杂质带来的毒副作用。该发明制备工艺简单可行，生产成本低，可产生可观经济和 社会效益。
[0011] 长循环脂质体，也称隐形脂质体。脂质体被神经节巧脂、憐脂酷肌醇、聚乙二醇等 在脂质体表面高度修饰，交错重接附着在脂质体表面，形成致密的构象云，也称为空间稳定 脂质体。他可阻止脂质体不被血液中的调理素识别，降低网状内皮系统的快速吞隧活摄取 作用，从而使脂质体清除速率减慢，在血液中驻留时间延长，使药物作用时间延长。
【发明内容】
[0012] 本发明的目的之一是延长地西他滨的半衰期，并进一步降低药物的毒副作用。本 发明提供的一种长循环脂质体冻干制剂，它可降低网状内皮系统的快速吞隧活摄取作用， 使药物在血液中驻留时间延长，即可延长地西他滨的半衰期，同时也大大提高了它的生物 利用度。
[0013] 本发明的另一目的是提供该长循环脂质体制剂的制备方法及其冻干方法。与现有 的制备方法相比，本发明所提供的制备方法具有长效、安全性高、工艺简单易行等优点，有 利于实现工业化生产。
[0014] 本发明设及的技术包括两个步骤：一、地西他滨长循环脂质体的制备技术，即制备 的脂质体制剂粒径小、药物包封率高、稳定性好；二、脂质体的冻干技术，即冻干后制剂外 观良好、复溶后粒径、药物包封率高和稳定性与冻干之前几乎无差异，且水分较小保证了脂 质体的完整性。
[0015] 综上所述，本发明通过W下技术方案实现：
[0016] 本发明提供一种地西他滨长循环脂质体冻干制剂，该制剂采用特殊脂质体技术将 地西他滨、憐脂、长循环膜材、胆固醇，缓冲盐溶液按一定处方混合，做成脂质体。再将所得 脂质体与冻干保护剂和复助溶剂混合，用滤膜过滤除菌，再用特殊冻干工艺冻干而成，加复 溶液后再经过稀释溶液稀释便可供静脉注射。其冻干前后粒径范围可W是30-500nm、较好 是 50-300nm、最好是 8〇-210nm。
[0017] 所述的地西他滨长循环脂质体冻干制剂，其特征在于，所述的特殊脂质体制备技 术是薄膜分散发法和高压挤压法相结合的脂质体制备技术。
[001引本发明所述的长循环脂质体冻干制剂，优选的配方如下 [0019]
[0020] 更优选的配方如下
[0021]
[0022]
[0023] 其中所述憐脂选自：憐脂酷乙醇胺、憐脂酷甘油、憐脂酷丝氨酸、憐脂酷肌醇、憐 脂酷胆碱、二油酷憐脂酷胆碱、二硬脂酷憐脂酷胆碱、二栋桐酷憐脂酷胆碱、二豆違酷憐脂 酷胆碱、二月桂酷憐脂酷胆碱值LPC)、二油酷憐脂酷甘油、二硬脂酷憐脂酷甘油、二栋桐酷 憐脂酷甘油、二肉豆違酷憐脂酷甘油、二月桂酷憐脂酷甘油、二油酷憐脂酷乙醇胺值0P巧、 二硬脂酷憐脂酷乙醇胺值SP巧、二肉豆違酷憐脂酷乙醇胺值M阳）、二栋桐酷憐脂酷乙醇 胺值PP巧和聚乙二醇衍生化憐脂（如：二硬脂酷憐脂酷乙醇胺-聚乙二醇2000 ;二软脂 酷胆憐脂-聚乙二醇2000等）二栋桐酷憐脂酷乙醇胺、銷憐脂、憐脂酷酷丝氨酸或憐脂酷 甘油中的一种或几种。优选的为：憐脂酷甘油（PG)、憐脂酷丝氨酸（P巧、氨化大豆卵憐脂 化SPC)，
[0024] 其中所述长循环膜材选自：神经节巧脂（GMI)、憐脂酷肌醇（PI)、聚乙二醇（PEG)、 聚乙二醇化的二硬脂酷憐脂酷乙醇胺（PEG-DSP巧。
[00巧]所述的冻干赋型剂是：甘露醇、山梨酸、乳糖、薦糖、海藻糖、右旋糖酢、明胶、单糖 (如：葡萄糖、果糖等）或者多糖（如：淀粉、纤维素等）、氨基酸类（如甘氨酸、丙氨酸、组氨 酸、精氨酸等）或者寡肤中的一种或多种。
[0026] 所述的助复溶剂，其特征在于，所述的复溶助剂是可W为聚乙二醇-400、聚乙二 醇-600、聚乙二醇-1000、聚乙二醇-1500或聚乙二醇-4000的一种或多种。
[0027] 本发明最优选的配方如下：
[0028]
[0030] 本发明进一步提供本发明的长循环脂质体冻干制剂的制备方法，操作步骤如下：
[0031] (1)将地西他滨2-20g、憐脂10-150g、长循环膜材l-20g、胆固醇l-75g溶解于有 机溶剂中，
[0032] (2)减压旋转下除去有机溶剂，使脂质体在器壁上形成薄膜，
[0033] (3)加入憐酸盐缓冲液，进行振摇或剪切，其粒径范围l-5um，
[0034] (4)再将其用高压均质机挤压，使形成粒径均匀且小于200nm的脂质体，
[0035] (5)脂质体和冻干保护剂，复溶助剂混合，过滤，冻干制备成冻干制剂。
[0036] 其中所述溶剂选自甲醇和氯仿的体积比为（1~9):巧~1)的混合溶剂，优选为 1-4:1-4,更优选的为1-2:1-2,最优选的为1:1 ;溶剂的用量范围为地西他滨，憐脂，长循环 膜材，胆固醇重量之和的0. 5-2倍重量；旋转溫度不超过30°C，所述的憐脂的相变溫度（Tc) 高于37°C，所述的憐酸盐缓冲液，其PH值范围为6-8,冻干工艺为，-25°C~-45°C冷冻2~ 8个小时，在-35°C~-20°C真空一次升华干燥10~30个小时，0°C~40°C解析干燥5~10 个小时，所述过滤的滤膜为0. 22ym的微孔滤膜。
[0037] 本发明所述的地西他滨长循环脂质体冻干制剂，其中所述的胆固醇是生物膜中的 重要成分之一，它与憐脂相结合，阻止憐脂凝集成晶体结构。它像"缓冲剂"起着调节膜"流 动性"的作用。当胆固醇浓度在憐脂双分子层膜所占的摩尔比约为50%时胆固醇可W改变 膜流动性。
【附图说明】
[0038] 图1-各制剂中的地西他滨在t时间渗漏百分率（release% )
[0039] 图2-各制剂中的地西他滨在t时间血循环中的残留量（％injecteddose)
[0040] 图3-地西他滨长循环脂质体的粒度特征。
[0041] 图4-地西他滨长循脂质体在冰冻、冷冻干燥和复溶重构之后立即的粒度特征。
[0042] 图5-