780/Taxol、A2780/CP等均购于美国ATCC 公司，MCF7/ADR细胞购自于凯基生物科技有限公司，由本实验室保存。以上细胞株用含 10%胎牛血清、1001]/11^青霉素、10(^8/1^链霉素的1?^1-1640完全培养基或01^1培养基 (MV4-11采用頂DM)在5%C02、37°C条件下培养。
[0039] 2实验方法
[0040] 利用MTT法检测了L07对多种肿瘤细胞的体外抑制活性实验，方法：采用含FBS和 抗生素的DMEM、RPMI-1640培养基对MV4-11、Lancap等多种肿瘤细胞进行培养，待肿瘤细胞 生长至对数生长期时，收集细胞将其按照3000-10000细胞/孔的量接种到96孔板内。24h 后，将梯度浓度的L07加入培养基中，并置于细胞培养箱中培养。72小时后，加入5mg/mL的 MTT无菌溶液，并在作用2-4小时后加入SDS三联液过夜。最后，利用酶标仪检测各加样孔 对570nm光束的吸光度值，并利用相应的计算公式计算抑制率并统计L07对各细胞的半数 抑制浓度，各数据重复三次，并计算平均值。
[0041] 3.实验结果
[0042] 结果如表1和表2所示。
[0043] 表1L07对各种细胞株的增殖抑制活性
[0044]
[0045] 表2L07对耐药细胞株的增殖抑制活性
[0046]
[0047] 表1的结果表明，式（I)化合物（L07)对白血病、前列腺癌、肝癌、肺癌、淋巴 瘤、骨髓瘤、乳腺癌、神经胶质瘤、黑色素瘤、胃癌、宫颈癌、胰腺癌或卵巢癌等具有广谱的 抗肿瘤活性，IC50均低于3.6yg/mL，效果显著。其中，对MV4-11细胞活性最好，IC50为 0. 72μg/mL，对急性髓性白血病效果极佳。
[0048] 同时，表2的结果表明，式（I)化合物还对紫杉醇、顺铂或阿霉素耐药的癌细胞 具有显著的抑制活性。
[0049] 实施例2体内抗肿瘤活性实验
[0050] 本实验使用N0D-SCID小鼠皮下急性髓性白血病细胞株MV4-11体内肿瘤模型和裸 鼠皮下结肠癌肿瘤模型，测试化合物L07的体内抗肿瘤活性。
[0051] 1实验材料
[0052] 頂DM和RPMI-1640培养基、胎牛血清、胰酶等购自GibcoBRL公司（Life technologiescorporation)，聚氧乙稀蓖麻油购自SIGMA公司，人急性髓性白血病细胞株 MV4-11、人结肠癌细胞株HCT116购于美国ATCC公司，N0D-SCID小鼠和BALB/C裸鼠购自中 国北京协和实验动物中心。
[0053] 2实验方法
[0054] 使用6~8周龄N0D-SCID小鼠，按照约8X106个/0. 1ml/只MV4-11细胞浓度接 种于小鼠皮下后肋部构建急性髓性白血病肿瘤模型，使用6~8周龄BALB/C裸鼠，按照约 5X106个/0.lml/只HCT116细胞浓度接种于小鼠皮下后肋部构建结肠癌模型。待肿瘤长 至IJ200-300mm3后（约15天），小鼠分组（η= 6)并开始腹腔给药。
[0055] 实验分组：药物溶剂对照组（12. 5%聚氧乙烯蓖麻油+12. 5%乙醇+75%水）；
[0056]化合物L〇7 组：8〇mg/kgq.d. ;(HCT116 模型）
[0057]化合物L〇7 组：5〇mg/kgq.d. ;(HCT116、MV4-11 模型）
[0058]化合物L〇7 组：25mg/kgq.d. ;(MV4-11 模型）
[0059]化合物L〇7 组：2·f5mg/kgq.d.;(MV4-11 模型）
[0060](各组药物溶解于12. 5%聚氧乙烯蓖麻油+12. 5%乙醇+75%水）
[0061] 观察指标：每3天测量一次小鼠体重及肿瘤长径、短径并计算肿瘤体积(lengthXwidth2X0. 5)，观察有无腹泻，抽搐，皮疹，体重明显降低等反应。
[0062] 3实验结果
[0063] 3. 1体内抗急性髓性白血病活性数据
[0064] 结果如图1所示。
[0065] 实验结果显示，受试化合物L07对人急性髓性白血病细胞株MV4-11具有明显的体 内生长抑制作用，在12. 5、25、50mg/kg/d剂量下，均可以明显抑制肿瘤生长，并呈剂量依赖 关系。给药过程中未发现动物出现体重降低、皮疹、腹泻等不良反应，表明在测试剂量下，受 试化合物L07在给药剂量范围内毒性低。
[0066] 因此，式（I)化合物（L07)能在50mg/kg剂量下产生显著的抗肿瘤活性，且未表 现出明显的毒性反应，安全有效。
[0067] 3. 2体内抗结肠癌活性数据
[0068] 结果如图2所示。
[0069] 实验结果显示，受试化合物L07对人结肠癌细胞株HCT116具有明显的体内生长抑 制作用，在50、80mg/kg/d剂量下，均可以明显抑制肿瘤生长，并呈剂量依赖关系。给药过程 中未发现动物出现皮疹、腹泻等不良反应，表明在测试剂量下，受试化合物L07在给药剂量 范围内毒性低。
[0070]结果表明，式（I)化合物（L07)能在80mg/kg和50mg/kg等较安全剂量下产生 明显的抗肿瘤活性，安全有效。
[0071] 综上所述，本发明提供的1，3-茚满二酮螺环化合物，具有广谱的抗肿瘤活性， IC50均低于3. 6μg/mL，还能对紫杉醇、顺铂或阿霉素耐药性癌细胞具有良好的抑制活性。 同时，体内和体外试验证明，本发明的化合物能在80mg/kg和50mg/kg等剂量下显示出显著 的抗肿瘤活性，安全有效。
【主权项】
1. 通式（A)所示的1，3-茚满二酮螺环化合物、或其光学异构体、或其与光学异构体的 混合物、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的用途，其中，&选自H、烷基、环烷基、芳香环基、取代的芳香环基或芳香杂环基； R2选自Η或C1~C4的烷基； R3选自Η或C1~C4的烷基； X选自H、F、Cl、Br或I。2. 根据权利要求1所述的用途，所述化合物如式（I)所示：3. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述抗肿瘤药物是治疗白血病、前列腺 癌、肝癌、肺癌、淋巴瘤、骨髓瘤、乳腺癌、神经胶质瘤、黑色素瘤、胃癌、宫颈癌、胰腺癌或卵 巢癌的药物。4. 根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所述白血病是急性髓性白血病或急性T 细胞白血病；所述肺癌是肺腺癌。5. 根据权利要求1-4任一项所述的用途，其特征在于：所述肿瘤是耐药性肿瘤。6. 根据权利要求5所述的用途，其特征在于：所述耐药性肿瘤是耐紫杉醇、顺铂或阿霉 素一种或多种的肿瘤。7. 根据权利要求6所述的用途，其特征在于：所述耐药性肿瘤是紫杉醇耐药卵巢癌、顺 铂耐药卵巢癌或阿霉素耐药乳腺癌。8. 根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述式（I)所示化合物与其光学异构 体的混合物，该混合物的ee值为97%，dr值为91:9。9. 一种药物组合物，其特征在于：它是以权利要求1-8任一项所述的化合物、或其光 学异构体、或其与光学异构体的混合物、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐或为活性成 分，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。10. 权利要求9所述的药物组合物在制备抗肿瘤药物中的用途。11. 根据权利要10所述的用途，其特征在于：所述抗肿瘤药物是治疗白血病、前列腺 癌、肝癌、肺癌、淋巴瘤、骨髓瘤、乳腺癌、神经胶质瘤、黑色素瘤、胃癌、宫颈癌、胰腺癌或卵 巢癌的药物。
【专利摘要】本发明公开了式(A)所示的1,3-茚满二酮螺环化合物、或其光学异构体、或其与光学异构体的混合物、或其溶剂合物、或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的用途。经试验证明，该结构的化合物具有广谱的抗肿瘤活性，还能对紫杉醇、顺铂或阿霉素耐药性癌细胞具有良好的抑制活性。同时，体内和体外试验证明，该结构的化合物能在80mg/kg和50mg/kg等剂量下显示出显著的抗肿瘤活性，安全有效。
【IPC分类】A61P35/02, A61P35/00, A61K31/35
【公开号】CN105250260
【申请号】CN201510813066
【发明人】彭成, 曹治兴, 韩波, 谢欣, 李想, 杨磊, 冷海军, 王彪
【申请人】成都中医药大学
【公开日】2016年1月20日
【申请日】2015年11月19日