一种用于红细胞再生的制剂制备方法及其制剂的制作方法_3

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过中心轴,流出容器。
[0051] (400)、发酵。
[0052] (410)将药物混合液装入发酵罐中,升温至121摄氏度进行高温灭菌,灭菌时间为 5-10分钟,冷却至25-28摄氏度; (420)在冷却后的药物混合液中按1:0. 05-0. 3的重量组份比例加入复合菌液,混合均 匀,得到混合药液; (430)在25-28摄氏度的条件下,发酵罐内保持正压,连续或间歇搅拌,连续地向发酵 罐内通入无菌空气的情况下,发酵5-10小时,得到发酵液。
[0053] (500)、破壁处理; 对过滤后的发酵液使用超声波细胞破碎仪进行破壁处理,每次超声l_3s,间隔l_3s, 共超声40-50次; 超声波细胞破碎仪的工作原理是将电能通过换能器转换为声能,这种能量通过液体介 质而变成一个个密集的小气泡,这些小气泡迅速炸裂,产生的象小炸弹一样的能量,从而起 到破碎细胞等物质的作用。超声波细胞破碎仪包括超声波发生器,信号发生器的作用是产 生一个特定频率的信号,这个特定频率就是换能器的频率,一般应用在超声波设备中的超 声波频率为20KHz、25KHz、28KHz、33KHz、40KHz、60KHz ;换能器组件,换能器组件主要由换 能器和变幅杆组成;隔音箱,作用是可以有效地的降低工作过程中的所发出的噪音; 除了超声波细胞破碎的方法,还可以使用渗透压冲击法,即将发酵液先置于高渗透压 的溶液当中,用于提高发酵液中细胞的体内渗透压,再离心分离菌体,重悬于水中,利用细 胞内外渗透压的压差,可释放细胞内的有效成分。
[0054] (600)过滤处理; 用过滤离心机对破壁处理后的发酵液高速离心,除去大部分杂质,采用反渗透膜过滤 法进行精滤,即得到用于治疗眼病的制剂; 反渗透是一种借助于选择透过性膜的功能以压力为推动力的膜分离技术,当系统中所 加的压力大于发酵液渗透压时,发酵液中的分子不断地透过膜,经过流道流入中心管,然后 在另一端流出发酵液中的杂质,如离子、病毒等,被截留在膜的进液侧,然后在出液端流出, 从而达到分离净化目的。反渗透膜过滤的设备包括精细过滤器、颗粒活性炭过滤器、压缩活 性炭过滤器等,发酵液依次经过上述设备,再通过栗加压,利用反渗透膜,使较高浓度的发 酵液变为低浓度发酵液,同时将杂质全部隔离,从而达到净化和过滤的效果。
[0055] 在第(600)步后,还包括以下步骤: (700)分装。将制剂按预定包装容量进行分装,制剂为口服剂的,按照注射剂工艺要 求,灌封于安瓿或易拉盖瓶中,通常是每瓶10毫升,灭菌后即可服用。
[0056] 其中,在步骤(420)中,所述复合菌液的制备方法步骤如下(如图2和图3): (1 )、培养液的制备,取重量份的麦芽粉20-30份,淀粉60-80份,按下述方法处理: (11) 、淀粉糊化,将淀粉与水按1 :2_3重量份的比例放入糊化锅,升温至90-100摄氏 度,在不断搅拌的情况下,直至淀粉成糊状,再用20-25摄氏度的水将糊化好的浆料的温度 调到68-73摄氏度; (12) 、将麦芽粉放入糖化锅内,将(11)步制好的浆料移到糖化锅内,在搅拌的情况下, 使麦芽粉与浆料充分混合,然后,静置,并保持温度在64-66摄氏度范围内,4-6小时,直到 淀粉完全被糖化;在糖化过程中可以用碘作检测,如果碘检测不出现碘与淀粉的反应,则说 明糖化过程结束,可以进行下一步动作; (13) 、将糖化好的糖化汁移入煮沸锅内,升温至100摄氏度,煮沸5-10分钟; (14) 、将煮沸锅内的糖化汁抽入旋涡分离器,在旋涡分离器内实现固液分离,被分离后 的糖化汁进入发酵罐内; (15) 、在发酵罐内将温度升至121摄氏度,维持1小时,达到消灭杂菌的效果,然后,用 无菌空气保持发酵罐内正压时,将被分离后的糖化汁冷却至25-28摄氏度; (2) 、接种; 按被分离后的糖化汁的总重量的3-10%接入混合菌种,其中,混合菌种由重量相等的 黑根霉、黑曲霉、红曲霉、白地霉和米酒酵母组成; (3) 、发酵; 在25-28摄氏度,保持发酵罐内正压,连续或间歇搅拌,且连续地向被分离后的糖化汁 通入无菌空气的情况下,发酵5-10小时,得到发酵液; 优选的,在所述第(3 )步之后,还可以包括如下步骤, (4) 、过滤; 用过滤器将发酵液中的固态物滤除,得到复合菌液。
[0057] 优选的,所述混合菌种是按如下方法制备的: (21) 、将黑根霉按麦芽汁重量的3-5%接入装有麦芽汁的三角瓶内,放在摇床上,在 25-28摄氏度,培养5-7小时,即得黑根霉种液; (22) 、将黑曲霉按麦芽汁重量的3-5%接入装有麦芽汁的三角瓶内,放在摇床上,在 25-28摄氏度,培养5-7小时,即得黑曲霉种液; (23) 、将红曲霉按麦芽汁重量的3-5%接入装有麦芽汁的三角瓶内,放在摇床上,在 25-28摄氏度,培养5-7小时,即得红曲霉种液; (24) 、将白地霉按麦芽汁重量的3-5%接入装有麦芽汁的三角瓶内,放在摇床上,在 25-28摄氏度,培养5-7小时,即得白地霉种液; (25) 、将米酒酵母按麦芽汁重量的3-5%接入装有麦芽汁的三角瓶内,放在摇床上,在 25-28摄氏度,培养5-7小时,即得米酒酵母种液; (26) 、将上述制备的黑根霉种液、黑曲霉种液、红曲霉种液、白地霉种液和米酒酵母种 液,按等重量混合,即得混合菌种; 制备菌种的麦芽汁是直接用麦芽,按麦芽与水的比例,重量份1 :3-5调匀后,在64-66 摄氏度范围内,糖化4-6小时得到,高压灭菌(1个大气压,121摄氏度,60分钟)后,冷却得 到; 上述黑根霉菌种、黑曲霉菌种、红曲霉菌种和白地霉菌种,均从中国微生物菌种保藏管 理委员会武汉大学保藏中心获得;米酒酵母菌种从市面上购得。
[0058] 优选的,所述淀粉可以大米粉,尤其是应用米厂扎米时剩下的碎米,磨成粉为最 佳;小麦粉可以包含麦麸在内;红薯粉可以用红薯制作,马铃薯粉是用马铃薯制作的。本发 明中,也可以采用大米粉、小麦粉、红薯粉和马铃薯粉中的任意两种以上的组合物。本明中 的大米粉、小麦粉、红薯粉和马铃薯粉最好是磨成100目以上的细粉。
[0059] 制备培养液的【具体实施方式】如下: 实施例一 培养液的制备包括以下重量份数的原料: 麦芽粉20份,淀粉60份,按下述方法处理, (201)、淀粉糊化,将淀粉与水按1 :2-3重量份的比例放入糊化锅,升温至90-100摄氏 度,在不断搅拌的情况下,直至淀粉成糊状,再用20-25摄氏度的水将糊化好的浆料的温度 调到68-73摄氏度。
[0060] (202)、将麦芽粉放入糖化锅内,将(11)步制好的浆料移到糖化锅内,在搅拌的情 况下,使麦芽粉与浆料充分混合,然后,静置,并保持温度在64-66摄氏度范围内,4-6小时, 直到淀粉完全被糖化;在糖化过程中可以用碘作检测,如果碘检测不出现碘与淀粉的反应, 则说明糖化过程结束,可以进行下一步动作。
[0061] (203)、将糖化好的糖化汁移入煮沸锅内,升温至100摄氏度,煮沸5-10分钟。
[0062] (204)、将煮沸锅内的糖化汁抽入旋涡分离器,在旋涡分离器内实现固液分离,被 分离后的糖化汁进入发酵罐内。
[0063] (205)、在发酵罐内将温度升至121摄氏度,维持1小时,达到消灭杂菌的效果,然 后,用无菌空气保持发酵罐内正压时,将被分离后的糖化汁冷却至25-28摄氏度,得到培养 液。
[0064] 实施例二 培养液的制备包括以下重量份数的原料: 麦芽粉25份,淀粉65份,按下述方法处理。
[0065] (201 )、淀粉糊化,将淀粉与水按1 :2_3重量份的比例放入糊化锅,升温至90-100 摄氏度,在不断搅拌的情况下,直至淀粉成糊状,再用20-25摄氏度的水将糊化好的浆料的 温度调到68-73摄氏度。
[0066] (202)、将麦芽粉放入糖化锅内,将(11)步制好的浆料移到糖化锅内,在搅拌的情 况下,使麦芽粉与浆料充分混合,然后,静置,并保持温度在64-66摄氏度范围内,4-6小时, 直到淀粉完全被糖化;在糖化过程中可以用碘作检测,如果碘检测不出现碘与淀粉的反应, 则说明糖化过程结束,可以进行下一步动作。
[0067] (203)、将糖化好的糖化汁移入煮沸锅内,升温至100摄氏度,煮沸5-10分钟。
[0068] (204)、将煮沸锅内的糖化汁抽入旋涡分离器,在旋涡分离器内实现固液分离,被 分离后的糖化汁进入发酵罐内。
[0069] (205)、在发酵罐内将温度升至121摄氏度,维持1小时,达到消灭杂菌的效果,然 后,用无菌空气保持发酵罐内正压时,将被分离后的糖化汁冷却至25-28摄氏度,得到培养 液。
[0070] 实施例三 培养液的制备
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