1)将一定质量的人血清白蛋白溶于水中，制备成0.5mg/mL的溶液。
[0051](2)取氯化钴制备钴离子溶液，钴元素的总浓度为0.5mmol/L ;
[0052](3)在磁力搅拌条件下，将10mL的钴盐溶液加入到10mL蛋白质水溶液中，充分反应1小时，得到蛋白-钴的中间分散产物；
[0053](4)向步骤(3)得到的蛋白-钴的中间分散产物中加入0.2mL浓度为lmol/L的氢氧化钠水溶液，在37°C水浴中，搅拌反应5小时后停止反应。
[0054](5)将步骤(4)得到的产物进行透析纯化处理72小时，使用的透析袋为截留分子量为12000，每12小时更换一次水。
[0055](6)将透析后的产物经过离心浓缩处理，得到最终的蛋白质包覆的氧化钴纳米颗粒粉末样品。
[0056]制备例3
[0057](1)将一定质量的鼠血清白蛋白溶于水中，制备成100mg/mL的溶液。
[0058](2)取硝酸锰制备锰离子溶液，锰元素的总浓度为50mmol/L ;
[0059](3)在磁力搅拌条件下，将4mL的锰盐溶液加入到5mL蛋白质水溶液中，充分反应
1.5小时，得到蛋白-锰的中间分散产物；
[0060](4)向步骤(3)得到的蛋白-锰的中间分散产物中加入0.3mL浓度为lmol/L的氢氧化钾水溶液，室温搅拌反应16小时后停止反应。
[0061](5)将步骤(4)得到的产物进行透析纯化处理72小时，使用的透析袋为截留分子量为1000，每12小时更换一次水。
[0062](6)将透析后的产物经过离心浓缩处理，得到最终的蛋白质包覆的氧化锰纳米颗粒粉末样品。
[0063]制备例4
[0064](1)将一定质量的胶原蛋白溶于水中，制备成50mg/mL的溶液。
[0065](2)取硫酸镍制备镍离子溶液，镍元素的总浓度为20mmol/L ;
[0066](3)在磁力搅拌条件下，将5mL的镍盐溶液加入到2mL蛋白质水溶液中，充分反应3小时，得到蛋白-镍的中间分散产物；
[0067](4)向步骤(3)得到的蛋白-镍的中间分散产物中加入0.5mL浓度为lmol/L的氢氧化钠水溶液，在45°C水浴中，搅拌反应18小时后停止反应。
[0068](5)将步骤(4)得到的产物进行透析纯化处理72小时，使用的透析袋为截留分子量为13000，每12小时更换一次水。
[0069](6)将透析后的产物经过离心浓缩处理，得到最终的蛋白质包覆的氧化镍纳米颗粒粉末样品。
[0070]制备例5
[0071](1)将一定质量的转铁蛋白溶于水中，制备成20mg/mL的溶液。
[0072](2)取二价铁和三价铁的乙酸盐制备铁离子混合溶液，三价铁及二价铁的混合摩尔比为10:1，铁元素的总浓度为10mmol/L ；
[0073](3)在磁力搅拌条件下，将10mL的铁盐混合溶液加入到2mL蛋白质水溶液中，充分反应30分钟，得到蛋白-铁的中间分散产物；
[0074](4)向步骤(3)得到的蛋白-铁的中间分散产物中加入0.2mL浓度为lmol/L的氨水，在30 °C水浴中，搅拌反应4小时后停止反应。
[0075](5)将步骤(4)得到的产物进行透析纯化处理72小时，使用的透析袋为截留分子量为3500，每12小时更换一次水。
[0076](6)将透析后的产物经过离心浓缩处理，得到最终的蛋白质包覆的氧化铁纳米颗粒粉末样品。
[0077]制备例6
[0078](1)将一定质量的磷脂蛋白溶于水中，制备成20mg/mL的溶液。
[0079](2)取氯化铬制备成溶液，铬元素的总浓度为lOOmmol/L ;
[0080](3)在磁力搅拌条件下，将0.8毫升的铬盐溶液加入到10mL蛋白质水溶液中，充分反应30min，得到蛋白-铬的中间分散产物；
[0081](4)向步骤(3)得到的蛋白-铬的中间分散产物中加入lmL浓度为lmol/L的氢氧化钠水溶液，在60°C水浴中，搅拌反应24小时后停止反应。
[0082](5)将步骤(4)得到的产物进行透析纯化处理72小时，使用的透析袋为截留分子量为3500，每12小时更换一次水。
[0083](6)将透析后的产物经过离心浓缩处理，得到最终的蛋白质包覆的氧化铬纳米颗粒粉末样品。
[0084]制备例7
[0085](1)将一定质量的牛血清白蛋白溶于水中，制备成20mg/mL的溶液。
[0086](2)取氯化亚铁制备铁离子混合溶液，铁元素的总浓度为lOOmmol/L ;
[0087](3)在磁力搅拌条件下，将0.8mL的铁盐混合溶液加入到10mL蛋白质水溶液中，充分反应2小时，得到蛋白-铁的中间分散产物；
[0088](4)向步骤(3)得到的蛋白-铁的中间分散产物中加入lmL浓度为lmol/L的氢氧化钠水溶液，在37°C水浴中，搅拌反应12小时后停止反应。
[0089](5)将步骤(4)得到的产物进行透析纯化处理72小时，使用的透析袋为截留分子量为3500，每12小时更换一次水。
[0090](6)将透析后的产物经过低温冻干处理，得到最终的蛋白质包覆的氧化铁纳米颗粒粉末样品。
[0091]制备例8
[0092](1)将一定质量的牛血清白蛋白溶于水中，制备成20mg/mL的溶液。
[0093](2)取氯化铁制备铁离子混合溶液，铁元素的总浓度为lOOmmol/L ;
[0094](3)在磁力搅拌条件下，将0.8mL的铁盐混合溶液加入到10mL蛋白质水溶液中，充分反应30min，得到蛋白-铁的中间分散产物；
[0095](4)向步骤(3)得到的蛋白-铁的中间分散产物中加入lmL浓度为lmol/L的氢氧化钠水溶液，在37°C水浴中，搅拌反应10小时后停止反应。
[0096](5)将步骤(4)得到的产物进行透析纯化处理72小时，使用的透析袋为截留分子量为3500，每12小时更换一次水。
[0097](6)将透析后的产物经过低温冻干处理，得到最终的蛋白质包覆的氧化铁纳米颗粒粉末样品。
[0098]应用例
[0099](1)将实施例1得到的样品配制成20mg/mL的溶液。
[0100](2)取步骤(1)中的溶液10毫升，加入1.2mL的浓度为10mmol/L的1-(3- 二甲氨基丙基)-3_乙基碳二亚胺盐酸盐水溶液以及1.lmL的浓度为lOmmol/L的N-羟基琥珀酰亚胺水溶液，反应1小时后，加入1.0mL的浓度为lOmmol/L的叶酸水溶液，继续搅拌反应12小时；
[0101](3)将步骤⑵得到的产物进行透析纯化处理72小时，使用的透析袋为截留分子量为3500，每12小时更换一次水。
[0102](4)将透析后的产物经过低温冻干处理，得到最终的修饰有靶向基团的氧化铁纳米颗粒粉末样品。
[0103]对上述样品进行核磁共振医学信号活体成像应用研究发现，修饰有叶酸的氧化铁纳米颗粒可以特异性的靶向活体的皮下肿瘤组织，具体参见图8A、8B，图8A为未使用应用例的样品的核磁共振医学信号活体成像图，图8B为使用了应用例的样品的核磁共振医学信号活体成像图。
[0104]本发明的优势主要在于制备方法，简易，其能够一步实现超小尺寸纳米颗粒的制备，传统的小尺寸氧化铁颗粒表现的是!\模式的成像能力，而本发明是T2模式的，弛豫率和饱和磁化率都比较高，例如饱和磁化强度可以达到84.32emu每克，核磁共振成像弛豫率可以为r2= 444.56 ±8.82mM 1.s \适合作为核磁造影剂。
[0105]除非特别限定，本发明所用术语均为本领域技术人员通常理解的含义。
[0106]本发明所描述的实施方式仅出于示例性目的，并非用以限制本发明的保护范围，本领域技术人员可在本发明的范围内作出各种其他替换、改变和改进，因而，本发明不限于上述实施方式，而仅由权利要求限定。
【主权项】
1.一种水溶性蛋白包覆的磁性纳米颗粒的制备方法，包括: 将蛋白与磁性金属盐混合，所述磁性金属盐的金属离子复合于所述蛋白，制得蛋白-磁性金属的中间分散产物； 向所述蛋白-磁性金属的中间分散产物中加入碱，反应后制得所述水溶性蛋白包覆的磁性纳米颗粒。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述蛋白选自牛血清白蛋白、人血清白蛋白、鼠血清白蛋白、转铁蛋白、胶原蛋白，以及磷脂蛋白中的一种或多种。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述蛋白的质量与所述磁性金属的摩尔比为(1?100g): (0.5 ?lOOOmmol)。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述磁性金属盐选自铁、钴、镍、铬或锰的盐。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述磁性金属盐选自二价铁、三价铁的盐酸盐、硫酸盐、乙酸盐中的一种或多种。6.根据权利要求1所述的方法，包括将所述蛋白的水溶液与所述磁性金属盐的水溶液于20?80°C混合10?60分钟，制得所述蛋白-磁性金属的中间分散产物。7.根据权利要求1所述的方法，其中向所述蛋白-磁性金属的中间分散产物中加入所述碱，于20?90°C反应1?24小时，制得所述水溶性蛋白包覆的磁性纳米颗粒。8.根据权利要求1所述的方法，其中所述碱选自氢氧化钠、氢氧化钾或氨水。9.根据权利要求1所述的方法，其中还包括将所述蛋白-磁性金属的中间产物与碱反应后的产物依次进行透析纯化处理、离心浓缩处理或者低温冻干处理，得到所述水溶性蛋白包覆的磁性纳米颗粒。10.一种水溶性蛋白包覆的磁性纳米颗粒，由权利要求1至9中任一项所述的方法制得。
【专利摘要】本发明提供了一种水溶性蛋白包覆的磁性纳米颗粒及其制备方法。该制备方法包括：将蛋白与磁性金属盐混合，所述磁性金属盐的金属离子复合于所述蛋白，制得蛋白-磁性金属的中间分散产物；向所述蛋白-磁性金属的中间分散产物中加入碱，反应后制得所述水溶性蛋白包覆的磁性纳米颗粒。本发明的水溶性蛋白包覆的磁性纳米颗粒的制备方法，所使用的原料廉价易得、天然无毒、环境友好、具有生物适用性；得到的产物外包覆蛋白质、水溶性好、生物活性高、易于进一步修饰靶向分子、尺寸超小、易于进入组织细胞内部，适用于活体成像、癌症特异性靶向、以及体内信号实时追踪等生物医学应用。
【IPC分类】A61K49/14, A61K47/42, A61K49/04, A61K49/18, A61K9/14
【公开号】CN105288666
【申请号】CN201510736587
【发明人】高学云, 王亚玲
【申请人】中国科学院高能物理研究所
【公开日】2016年2月3日
【申请日】2015年11月3日