II或Ap〇-AV、前-apo-ΑΙ或变体，如Ap〇-AIMilano。优选地，载脂蛋白是Ap〇-AI。还 考虑了载脂蛋白的生物活性片段。片段可以是天然产生的、化学合成的或重组的。只是举 例，Apo-AI的生物活性片段优选具有至少50%，60%，70%，80%，90 %或95-100 %乃至高 于100%的Apo-AI的卵磷脂-胆固醇酰基转移酶（LCAT)刺激活性。
[0049] 合适地，载脂蛋白的浓度为约20-5(^/1。这包括20,25,30,35,40,45和5(^/1以 及这些含量之间的任何范围。载脂蛋白优选浓度为约30g/L。
[0050] rHDL制剂包含其水平不会引起肝毒性的脂质。合适地，脂质的水平为引起肝毒性 或与肝毒性相关的约20-70%。在特定的实施方案中，脂质的水平优选为引起肝毒性或与肝 毒性相关的脂质水平约25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%或65%，以及这些量 之间的任何范围。优选地，这些水平以呈现肝毒性的脂质的最小或极限水平来表示。
[0051] 例如，形成本发明的工作中已经显示出引起、导致肝毒性或至少与肝毒性相关的 脂质水平为84g/L。因此，脂质的浓度优选为约30-60g/L。这包括30、35、40、45、50、55和 60g/L以及这些量之间的任何范围。特别有利的脂质浓度为约30-50g/L，或在某些实施方 案中，为约34或47g/L。
[0052] 脂质的"水平"可以是脂质的绝对量、脂质的浓度（例如，每单位体积rHDL制剂的 质量）和/或脂质的含量或浓度相对于rHDL制剂的成分的另一个量或浓度的比例。只是 举例，脂质的水平可以根据rHDL制剂中存在的载脂蛋白（例如，Apo-AI)的摩尔比来表示。
[0053] 在一个优选实施方案中，载脂蛋白：脂质的摩尔比在1:20至1:100的范围内。该 范围包括如1:30、1:40、1:50、1:60、1:70、1:80和1:90的莫尔比。更优选地，载脂蛋白： 脂质的摩尔比在1:40至1:75的范围内。特别有利的载脂蛋白：脂质的比例为约1:40或 1:55〇
[0054] 脂质可以是天然产生的HDL或重建高密度脂蛋白（rHDL)的功能性的、生物活性成 分的任何脂质。这样的脂质包括磷脂、胆固醇、胆固醇-酯、脂肪酸和/或甘油三酯。优选地， 脂质是磷脂。磷脂的非限制性实例包括磷脂酰胆碱（PC)(卵磷脂）、磷脂酸、磷脂酰乙醇胺 (PE)(脑磷脂）、磷脂酰甘油（PG)、磷脂酰丝氨酸（PS)、磷脂酰肌醇（PI)和鞘磷脂（SM)或其 天然或合成的衍生物。天然衍生物包括蛋PC、蛋PG、大豆PC、氢化大豆PC、大豆PG、脑PS、鞘 脂类、脑SM、半乳糖脑苷脂、神经节苷脂、脑苷脂、脑磷脂、心磷脂和联十六丸剂磷酸酯。合成 的衍生物包括二棕榈酰磷脂酰胆碱（DPPC)、二癸酰磷脂酰胆碱（DDPC)、二瓢儿菜基磷脂酰 胆碱（DEPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱（DMPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱（DSPC)、二月桂酰磷脂 酰胆碱（DLPC)、棕榈酰油酰磷脂酰胆碱（P0PC)、棕榈酰肉豆蔻酰磷脂酰胆碱（PMPC)、棕榈 酰硬脂酰磷脂酰胆碱（PSPC)、二油酰磷脂酰胆碱（D0PC)、二油酰磷脂酰乙醇胺（DOPE)、二 月桂酰磷脂酰甘油（DLPG)、二硬脂酰磷脂酰甘油（DSPG)、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油（DMPG)、 二棕榈酰磷脂酰甘油（DPPG)、二硬脂酰磷脂酰甘油（DSPG)、二油酰磷脂酰甘油（D0PG)、棕 榈酰油酰磷脂酰甘油（P0PG)、二肉豆蔻酰磷脂酸（DMPA)、二棕榈酰磷脂酸（DPPA)、二硬脂 酰磷脂酸（DSPA)、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺（DMPE)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺（DPPE)、二油 酰磷脂酰丝氨酸（DMPS)、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸（DPPS)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺（DSPE)、 二油酰磷脂酰乙醇胺（DOPE)、二油酰磷脂酰丝氨酸（DOPS)、二棕榈酰鞘磷脂（DPSM)和二硬 脂酰鞘磷脂（DSSM)。磷脂还可以是以上任一种磷脂的衍生物或类似物。
[0055] 优选地，磷脂是或包含磷脂酰胆碱，单独地或结合一种或多种其他磷脂。另一种磷 脂的实例是鞘磷脂。
[0056] 合适地，rHDL制剂进一步包含稳定剂。特别地，稳定剂可维持rHDL制剂在冷冻 干燥过程中的稳定性。合适地，稳定剂是碳水化合物，如糖或糖醇。合适的糖醇的实例是 甘露糖醇和山梨糖醇。优选地，稳定剂是双糖，如蔗糖。优选的蔗糖浓度为rHDL制剂的约 65-85g/L(等于约6. 5-8. 5%w/v)。优选地，蔗糖浓度为约75g/L(等于约7. 5%w/w)。就 绝对项而言和相对于脂蛋白浓度，与CSL111相比，这是降低的蔗糖浓度。提出了这种相对 降低的蔗糖可以使得本发明的rHDL制剂有更快速的灌输速度。尽管对其没有限制，但是其 他稳定剂可以是或包括氨基酸（例如，甘氨酸、脯氨酸）、抗氧化剂、乳化剂、表面活性剂、螯 合剂、明胶、合成油、多元醇、海藻酸盐或任何药物学上可接受的载体和/或赋形剂。在这点 上，例如参考"PharmaceuticalFormulationDevelopmentofPeptidesandProteins(肽 和蛋白质的药物制剂研发）"，Frokjaer等，Taylor&;Francis(2000)，"Handbookof PharmaceuticalExcipients(药物赋形剂手册）"，第 3 版，Kibbe等，Pharmaceutical Press(2000)和国际公开TO2009/025754。
[0057] 在特别优选的实施方案中，rHDL制剂包含：
[0058] (i)约 30g/LApo-AI;
[0059] (ii)约 0· 03g胆酸钠/gApo-AI;
[0060] (iii)约34或47g/L磷脂酰胆碱；和
[0061] (iv)约 75g/L鹿糖；
[0062] 其中Apo-AI:磷脂酰胆碱的摩尔比为约1:40或1:55。
[0063] 在另一个方面中，本发明提供了一种生产包含载脂蛋白；脂质；和去污剂的rHDL 制剂的方法，所述方法包括提供所述去污剂的步骤，所述去污剂的水平为给予人时呈现出 肝毒性的rHDL制剂中存在的去污剂水平的约5-50%。
[0064] 优选地，所述方法包括提供所述去污剂的步骤，所述去污剂的水平为给予人时呈 现肝毒性的去污剂水平的约5-10%。
[0065] 在该方法的优选实施方案中，将去污剂的初始或起始水平降低或去除至将rHDL 制剂给予人时没有呈现肝毒性的水平。
[0066] 可以通过本领域已知的任何方式，例如包括过滤、疏水性吸附或亲水性相互作用 色谱、渗析、离子交换吸附和离子交换色谱，来进行去污剂的降低或去除。
[0067] 在一些实施方案中，非极性聚苯乙烯树脂适用于降低去污剂水平。这样的树脂优 选是交联共聚物的形式（例如，交联的苯乙烯和二乙烯基苯共聚物）。非限制性实例包括AmberliteXAD-2 和BioBeadsSM。
[0068] 如本领域公知的，过滤包括凝胶过滤、凝胶渗透、渗滤和超滤，尽管不限于此。凝胶 渗透的非限制性实例可以利用多孔的、交联葡聚糖，如Sephadex树脂。
[0069] 在特别适用于大规模制造的特别优选的实施方案中，通过渗滤来降低去污剂水 平。
[0070] 合适地，该方法包括在有机溶剂不存在的情况下将脂质和载脂蛋白混合的步骤。
[0071] 因此，在一个优选的实施方案中，本发明提供了一种生产rHDL制剂的方法，包括 步骤：
[0072] (I)将不含有机溶剂的磷脂酰胆碱和胆酸盐去污剂加入Apo-AI溶液中；
[0073] (II)将步骤（I)产生的溶液中的胆酸盐去污剂水平降至约0· 03g/gApo-AI;
[0074] (III)将稳定剂，优选蔗糖，加入步骤（II)的溶液中。
[0075] 优选地，在步骤（I)中，加入磷脂酰胆碱，使得Apo-AI:磷脂酰胆碱比例为约1:40 或 1:55。
[0076] 优选地，步骤（III)中蔗糖的终浓度为约75g/L。
[0077] 合适地，该方法进一步包括将步骤（III)产生的rHDL制剂冷冻干燥的步骤（IV)。
[0078] 将认识到在特定的实施方案中，生产rHDL制剂的方法适用于质量和安全性适用 于给予人的rHDL制剂的大规模、商业制造。图9中概述了大规模、商业制造方法的非限制 性实例。
[0079] 在另一个方面中，本发明提供了治疗人疾病、障碍或病症的方法，包括将之前所述 的rHDL或根据之前所述的方法产生的rHDL给予人的步骤，以由此治疗所述的人疾病、障碍 或病症。
[0080] 本发明还提供了如之前所述的或根据之前所述的方法生产的rHDL制剂，用于治 疗人的疾病、障碍或病症。
[0081] 合适地，所述疾病、障碍或病症响应所述rHDL制剂的预防性或治疗性给药。这些 疾病、障碍或病症的非限制性实例包括心血管疾病（例如，急性冠脉综合征（ACS，动脉粥样 硬化和心肌梗死））或以下的疾病、障碍或病症，如糖尿病、中风或倾向于ACS的心肌梗死、 高胆留醇血症（例如，升高的血清胆固醇或升高的LDL胆固醇）以及由降低水平的高密度 脂蛋白（HDL)引起的低胆留醇血症，如为Tangier病的症状。
[0082] 可以通过本领域已知的任一种给药途径来给予rHDL制剂。通常，将rHDL制剂通 过非肠道，如通过静脉内灌输或注射来给药。
[0083] rHDL制剂的给药剂量可以在l_120mg/kg体重的范围内。优选地，该剂量在 5-8〇11^/1^的范围内，包括1〇11^/1^、2〇11^/1^、3〇11^/1^、4〇11^/1^、5〇11^/1^、6〇11^/1^和7〇11^/ kg剂量。
[0084] 所以参照以下非限制性实施例可以完全理解本发明的优选实施方案并付诸实践。 实施例
[0085] 下文中提供的实施例描述了确定rHDL制剂（如CSL111)的哪些因素引起肝毒性 的最初研究（实施例1&2)以及本发明rHDL制剂的实施方案的开发和毒性测试（实施例3 至8)。
[0086] 实施例1
[0087] 比较不同Apo-AI:PC比例的肝毒性研究和控制胆酸盐水平的作用
[0088] 对含有不同ApoAI:PC比例（1:150、1:100&1:50)的HDL制剂，在大鼠模型中（参 见以下实施例2中的模型详情）测定了通过ALT活性测量的肝毒性水平。每种HDL制剂含 有不同的胆酸盐浓度，其水平范围从1:150制剂的6g/