0043] 加处方量飞蓬醋乙，加80°C干燥的淀粉和硬脂酸儀混合均匀后，分装成200粒胶 囊，每粒胶囊含有飞蓬醋乙25mg。
[0044] 试验例1:飞蓬醋乙对谷氨酸诱导的PC12细胞衰老的保护作用
[0045] (1)实验分组：
[0046] 实验药物：
[0047] ①3,4-二咖啡酷基奎宁酸:市购；
[004引②3,5-二咖啡酷基奎宁酸:市购；
[0049] ③4,5-二咖啡酷基奎宁酸:市购；
[0050] ④灯盏细辛提取物：灯盏细辛加75%乙醇浸溃=次，第一次48小时，第二、=次各 24小时，滤过、滤液减压回收乙醇、放冷、滤过、滤液用20%硫酸溶液调节至pH值至2、静置48 小时，滤取黄绿色沉淀物，用水洗涂pH值至5~6，85 °C W下烘干，粉碎过筛备用；
[0051] ⑤飞蓬醋乙：按实施例1方法制备。
[005^ 分组；
[0化3] ①对照组:不含Glu的完全培养基
[0化4]②模型组:完全培养基+Glu
[0055] ③药物组：
[0056] 。3，4-二咖啡酷基奎宁酸"组:完全培养基+ "3，4-二咖啡酷基奎宁酸"+Glu，3，4-二 咖啡酷基奎宁酸浓度为10化g/mL，用培养液稀释。
[0057] "3,5-二咖啡酷基奎宁酸"组:完全培养基+"3,5-二咖啡酷基奎宁酸"+Glu，3,5-二 咖啡酷基奎宁酸浓度为10化g/mL，用培养液稀释。
[005引 "4,5-二咖啡酷基奎宁酸"组:完全培养基+ "4,5-二咖啡酷基奎宁酸"+Glu，4,5-二 咖啡酷基奎宁酸浓度为10化g/mL，用培养液稀释。
[0059] 灯盏细辛提取物组:完全培养基+灯盏细辛提取物+Glu,灯盏细辛提取物浓度分别 为10化g/mL，用培养液稀释。
[0060] 飞蓬醋乙组:完全培养基+飞蓬醋乙+Glu,飞蓬醋乙浓度为10化g/mL，用培养液稀 释。
[0061 ] (2 )MTT法、LDH法测定细胞活力：
[0062] 取对数生长期PC12细胞，W2X10シ孔接种于96孔培养板，200山/L。在37°C、5%C02 条件下培养过夜后，将细胞分为对照组、模型组、药物组。实验药物处理组用各药物预处理 化后加 Glu解育2地每组设4个平行孔。培养2地后，每孔加5g/L MTT2化1，继续培养4h后终止 培养，小屯、吸取孔内上清液，做LDH实验。每孔加入DMSO 15化L，使结晶充分溶解，用酶联免 疫仪在波长570nm处读取吸光度(OD)。取4孔OD值的均数按公式计算细胞存活率结果见表1。 细胞存活率％ =实验组OD/对照组OD X 100%。数据表明，飞蓬醋乙保护Glu诱导PC12细胞的 损伤作用效果更好。
[0063] 收集培养液，按试剂盒说明书测定乳酸脱氨酶(LDH)的活性结果见表2"LDH的释放 抑制率按下式计算:〇)聞[]]制率（％ ) = (LD巧Mffi-LD哇绝姐)/(LMteffi-LDH正常a) X 100%。数据表 明，飞蓬醋乙能够更好的抑制Glu诱导PC12细胞LDH释放。
[0064] 表1MTT测定飞蓬醋乙对Glu诱导PC12细胞生存率的影响（id成n = 4)
[0067] 注:***为与对照组相比，P<0.001;胃为与模型组相比P<0.001，##为与模型组相比P <0.0 l，#为与模型组相比P<0.05
[006引表2 LDH现憶飞蓬醋乙对Glu诱导PC12细胞0)田巧制率的影响（是惊:，:n = 4)
[0070] 注:***为与对照组相比，P<0.0 Ol，**为与对照组相比，P<0.0 l，*为与对照组相比， P<0.05;###为与模型组相比P<0.0 Ol，##为与模型组相比P<0.0 l，#为与模型组相比P<0.05
[0071] (3)细胞内ROS水平、GSH-Px和SOD活力的测定：
[0072] 取对数生长期PC12细胞，消化、计数，W4X IO^mL的密度接种于24孔培养板中，在 37°C、5%C02条件下培养过夜后，按分组要求给W不同处理因素，每组设3个平行孔。继续培 养2地后吸去培养基，轻轻用PBS洗一次，加入无血清培养基稀释的DCFH-DA溶液，使其终浓 度为IOiiM，37 °C下负载探针30min，PBS洗两次，膜酶消化，收集细胞，混匀后加入黑板透明底 96孔培养板中，每孔100微升，每组设S个复孔，巧光酶标仪测定DCF巧光强度，最后对每组 细胞计数，根据巧光强度及细胞密度计算每组细胞的DCF巧光强度/IO4Ce I Is。结果见表3。 数据表明，飞蓬醋乙抑制Glu诱导PC12细胞ROS生成量的效果更好。
[0073]表3 DCFH探针法测定飞蓬醋乙对Glu诱导PC12细胞ROS生成的影响（立切，:n = 4)
[0076] 注:**为与对照组相比，P<0.01，*为与对照组相比，P<0.05;##为与模型组相比口< 0.01，#为与模型组相比P<〇. 05
[0077] 取对数生长期细胞，消化、计数，W4X IO^mL的密度接种于24孔培养板中，在37 °C、5%C02条件下培养过夜后，按分组要求给W不同处理因素，每组设3个平行孔。继续培养 24h后吸去培养基，用PBS漂洗2次，留少许PBS，用细胞刮轻轻刮下细胞，收集到离屯、管中， 1500巧m离屯、5min，500iil PBS悬浮细胞于eppendorf管中，细胞裂解液裂解细胞；12000rpm 离屯、6min，取上清液，依试剂盒说明书进行各步骤反应；用酶标仪分别测定各组细胞。结果 见表4。
[007引表4分光光度法测定飞蓬醋乙对Glu诱导PC12细胞GSH-Px和SOD活力（品s，n = 4)
[0080] 注:***为与对照组相比，P<0.0 Ol，**为与对照组相比，P<0.0 l，*为与对照组相比， P<0.05;胃为与模型组相比P<0.0 Ol，##为与模型组相比P<0.0 l，#为与模型组相比P<0.05
[0081] 应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可W对本发明作 各种改动或修改，运些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
【主权项】
1. 飞蓬酯乙在制备神经保护药物中的应用。2. -种具有神经保护作用的药物，其特征在于所述药物为以飞蓬酯乙为活性成分，加 入或不加人药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成的制剂。3. 根据权利要求2所述的药物，其特征在于所述的药物以飞蓬酯乙为单一活性成分，飞 蓬酯乙重量百分比为0.06-100%。4. 根据权利要求3所述的药物，其特征在于所述的药物以飞蓬酯乙为单一活性成分，飞 蓬酯乙重量百分比选自为0·06%、0·1%、0·4%、1%、10·0%、14%、16%、50%、70%、90%、 100%〇5. 根据权利要求4所述的药物，其特征在于所述的药物以飞蓬酯乙为单一活性成分，飞 蓬酯乙重量百分比选自0.06%、0·4%、14%、16%、100%。6. 根据权利要求5所述的药物，其特征在于所述的药物为口服制剂，所述口服制剂选自 片剂、膏剂、散剂、汤剂、丸剂、胶囊剂。7. 根据权利要求6所述的药物，其特征在于所述的药物优选胶囊剂或片剂，单位剂型总 重为约l〇mg至约lOOOmg。8. 根据权利要求7所述的药物，其特征在于所述的药物优选胶囊剂或片剂的形式，单位 剂型具有选自 10mg、50mg、72mg、100mg、15〇11^、20〇11^、25〇11^、30〇11^、35〇11^、40〇11^、45〇11^和/ 或620mg的总重。9. 根据权利要求8所述的药物，其特征在于所述的药物优选胶囊剂或片剂的形式，单位 剂型总重为约250mg。10. 根据权利要求4所述的药物，其特征在于所述药物为注射剂，优选冻干剂。
【专利摘要】本发明属于药物应用领域，涉及一种丹灯通脑活性成分飞蓬酯乙的神经保护用途及其药物。
【IPC分类】A61P25/00, A61K31/357
【公开号】CN105560227
【申请号】CN201511023232
【发明人】张志伟, 黄吉生, 张纲, 李志刚, 房艳艳, 张华健, 关秀伟
【申请人】神威药业集团有限公司, 云南神威施普瑞药业有限公司
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2015年12月30日