高度氧化的二萜化合物在制备心肌保护的药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体设及从泽漆的干燥全草中分离得到的一种高度氧 化的二祗化合物在屯、肌保护作用药物领域的医药用途。
【背景技术】
[0002] 泽漆是大戟属化uphorbia L.)植物泽漆Eu地orbia helioscopia L.的干燥全草， 别名猫儿眼睛草、五凤灵芝等，分布于除新疆、西藏W外的全国各地。长期W来泽漆一直作 为民间草药，味苦，性微寒，有毒，归肺、小肠、大肠经。据《本草纲目》记载，泽漆有利水消肿、 消疲退热、散结杀虫等功效。临床用于治疗腹水、水肿、肺结核、颈淋己结核、疲多喘咳、癖 疮。
[0003] 泽漆主要含二祗醋类、黄酬类化合物，是其主要的生物活性物质，另外还含有= 祗、酱醇、多酪类、氨基酸、天然油脂类化合物等多种成分。二祗醋类化合物是泽漆的主要有 效成分，主要分布于泽漆的乳汁中，根部也有分布。二祗醋类化合物对皮肤有刺激性，有辅 助抗癌的作用。
[0004] 现代药理研究表明泽漆具有抗肿瘤、抑菌、平喘止咳，抑制磨茹酪氨酸酶活性等生 理活性。民间还用于治疗宫颈癌、食道癌等，并具有一定疗效，因此泽漆是一味很有研究开 发价值的药材。
【发明内容】
[000引本发明的目的是提供一种从泽漆的干燥全草中分离得到的一种二祗化合物在开 发屯、肌保护作用药物中的应用。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得W实现的：
[0007] -种高度氧化的二祗化合物(I)在制备屯、肌保护的药物中的应用，
[0009] 作为优选，所述高度氧化的二祗化合物（I)在从泽漆的干燥全草中分离获得，其分 离包含W下操作步骤：
[0010] a、将泽漆的干燥全草粉碎，用80~90 %乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇 味，依次用石油酸、乙酸乙醋和水饱和的正下醇萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃 取物和正下醇萃取物；
[0011] b、步骤a中乙酸乙醋萃取物用大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱6个柱体积，再用 80 %乙醇洗脱8个柱体积，收集80 %乙醇洗脱液，减压浓缩得80 %乙醇洗脱物浸膏；
[0012] 〇、步骤6中80%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1、50:1、35:1、 15:1和1:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得至化个组分；
[0013] d、步骤C中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为25:1、15:1和5:1的二氯 甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；
[0014] e、步骤d中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为75%的 甲醇水溶液等度洗脱，收集8~10个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I)。
[0015] 作为优选，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0016] 作为优选，所述用乙醇热回流提取采用的乙醇浓度为85%。
[0017] 本发明化合物用作药物时，可W直接使用，或者W药物组合物的形式使用。实验表 明：化合物（I)各给药组均能使屯、肌细胞存活率明显增加;在屯、肌细胞过氧化氨损伤培养液 中LDH的活性试验中，化合物（I)低、中、高剂量组、阳性药物组的LDH活性明显降低，表明化 合物(I)可W进一步研究开发成屯、肌细胞保护的药物。
【附图说明】
[0018] 图1为化合物（I)结构式；
[0019] 图2为化合物（I)理论ECD值与实验ECD值比较。
【具体实施方式】
[0020] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不W此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可W对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0021] 实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0022] 试剂来源：乙醇、石油酸、乙酸乙醋、正下醇、二氯甲烧为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0023] 制备方法：（a)将泽漆的干燥全草(8kg)粉碎，用85%乙醇热回流提取(2化X3次）， 合并提取液，浓缩至无醇味(3L)，依次用石油酸(化X3次）、乙酸乙醋(化X3次)和水饱和的 正下醇（化X3次)萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物（359g)和正下醇萃取物； (b)步骤(a)中乙酸乙醋萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱6个柱体积，再用 80%乙醇洗脱8个柱体积，收集80%乙醇洗脱液，减压浓缩得80%乙醇洗脱物浸膏（138g); (C)步骤(b)中80%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1(8个柱体积）、50:1 (8个柱体积）、35:1(6个柱体积）、15:1(8个柱体积)和1:1(5个柱体积）的二氯甲烧-甲醇梯 度洗脱得到5个组分；（d)步骤(C)中组分4(32g)用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为 25:1(8个柱体积）、15:1(10个柱体积)和5:1(6个柱体积）的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3 个组分；（e)步骤(d)中组分2(17g)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度 为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8-10个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合 物（I)(29mg)。
[0024] 结构确证:HR-ESIMS显示[M+Na]+为m/z 369.1708，结合核磁特征可得分子式为 C2〇H26〇日，不饱和度为8。核磁共振氨谱数据Sh(邮m，DMSO-ds，600MHz): H-2 (3.57，m)，H-2 (3.42，m)，H-5(1.99，dd，J = 3.1，14.6)，H-6(2.51，dd，J = 3.1，14.6)，H-6(2.39，m)，H-ll (2.32，m)，H-ll(2.67，m)，H-12(1.57，m)，H-12(1.49，m)，H-14(4.24，s)，H-15(4.18，t，J= 7.8)，H-16(4.10，t，J = 7.8)，H-16(3.56，t，J = 7.8)，H-17(0.93，s)，H-18(0.97，s)，H-19 (1.01，s)，H-20( 1.21，s);核磁共振碳谱数据5c(ppm，DMS0-d6,150MHz) :206.4(C，1-C) ,52.2 (C 此，2-C)，201.1(C，3-C)，44.7(C，4-C)，42.6(CH，5-C)，34.0(afe，6-C)，198.8(C，7-C)， 128.9(C，8-C)，168.3(C，9-C)，44.5(C，10-C)，20.7(afe，ll-C)，21.9(CH2，12-C)，40.6(C， 13-C)，76.5(CH，14-C)，79.4(CH，15-C)，70.0(CH2，16-C)，17.9(Ol3，17-C)，27.3(CH3，18-C) ,20.4(C曲，19-C) ,21.8(C出，20-C);碳原子标记参见图I。红外光谱显示该化合物含有径 基（3215cm-i)和幾基（1687cm-i)基团。Ih NMR谱显示含有四个甲基信号姐0.93(s，H3-17)， 0.97(3，出-18)，1.01(3，出-19)^及1.21(3，出-20)。1化醒財普表明该化合物含有四个甲基， 五个亚甲基(一个含氧亚甲基SC70.0)，=个次甲基(两个含氧次甲基SC76.5,79.4)，八个季 碳[包括=个幾基碳(SC206.4,201.1,198.8)，两个締控碳(SC128.9,168.3)]。上述数据表 明该化合物为高度氧化的二祗类化合物。HMBC谱中曲-20与C-I (SC206.4)，曲-18和出-19与 C-3(SC201.1)的相关性表明C-巧PC-3为酬幾基。另夕hH-5和H-14与C-7(SC198.8)的相关性 表明C-7亦为酬幾基。通过HMBC谱中出-6与C-8，H-14与C-8,出-20与C-9的相关性C-8(5 C128.9)和C-9(SC168.3)之间为双键。C-14位低场核磁碳信号（SC76.5)，再结合不饱和度推 测在C-14和C-16(SC7〇.〇)之间存在酸键。HMBC谱中H-14与C-16;H-14与C-15; W及此-16与 C-13的相关性验证了上述推测。NOESY谱中H-14与出-17;H-15与H-12a;H-15与出-17的相关 性表明H-14，H-15和出-17为0-构型。综合氨谱、碳谱、HMBC谱和NOESY谱，W及文献关于相关 类型核磁数据，可基本确定该化合物如图1所示，立体构型进一步通过EC的式验确定，理论值 与实验值基本一致(图2)。
[0025] 实施例2:化合物（I)药理作用试验
[0026] -、材料和仪器
[0027]新生1~3天SD大鼠乳鼠（SPF级），雌雄不拘，由广西医科大学实验动物中屯、提供 (试验动物生产许可证:SCXK桂2009-0002)。化合物（I)(纯度^ 98% )为自制。胎牛血清购于 Hy Clone公司，DMEM培养基购于GIBCO公司，二甲基亚讽(DMSO)、0.25 %膜酶(含抓TA)购于 Solarbio公司，5-漠脱氧尿巧（5-Brdu)、四甲基偶氮挫盐(MTT)购于美国Sigma公司，LDH测 试盒购于南京建成生物工程研究所，NOS试剂盒(分型）南京建成生物工程研究所，ATP酶试 剂盒(南京建成生物工程研究所），cTnI酶联免疫吸附测试试剂盒、CK-MB酶联免疫