用于酶活性分析和酶抑制剂筛选的香豆素类化合物及合成方法

专利名称：用于酶活性分析和酶抑制剂筛选的香豆素类化合物及合成方法
技术领域：
本发明涉及一类用于酶活性分析和酶抑制剂筛选的香豆素类化合物及合成方法，具体包括作为酶底物的6-氯-8-氟-7-羟基香豆素和其衍生物的合成和 应用。
背景技术：
荧光染料特别适合应用于高灵敏度的生物检测。羟基取代的香豆素已被 广泛运用于制备荧光染料和蛋白质分子共价结合物和荧光标记的酶底物 (BrunM P; et al,M. M ， 2004, 43 (26) : 3432 3436; Grant S K; et al， J Sc^e"， 2002, 7 (6) : 531 540; Zhao Y R; et al, /爿附.CT e附., 2004, 126 (14) : 4653 4663)。 7-羟基-4-甲基香豆素(亦称4-甲基-7-羟基 香豆素)是制备含荧光基团的酶底物的母体化合物。7-位羟基的磷酸化生成了 一系列能广泛用于碱性磷酸酯酶和酸性磷酸酯酶检测的含荧光基团的底物磷 酸单酯(MUP)。另外，4-甲基-7-羟基香豆素对-胍基苯甲酸酯己被用来确定 丝蛋白酶、胰蛋白酶、凝血酶和凝血因子Xa。许多以7-羟基-4-甲基香豆素为 原料的含荧光基团的糖苷酶底物已被合成，如4-甲基-7-羟基香豆素的半乳糖 苷(MUG)、吡喃糖苷和葡萄糖苷。然而，7-羟基香豆素化合物只有在去质子化的情况下才具有最大限度的荧 光强度。也就是说普通7-羟基香豆素只有在pH^9的环境下才具有最强的荧 光强度(Meng Y; et al,爿"a/5/oc/ze附345, 227-36 ( 2005 ); Loster K; et al, Micro", 31,41-53 (2000).)。因此，在使用中主要存在如下问题①在生理pH值(中 性)的情况下，羟基不能去质子化，因而使用时荧光量子效率较低(HamidME; et al， Ze" ra/W Bahm'o/ 280， 476-487 ( 1994 ))。②因为许多酶只有在中性或pH 值< 7时才具有最佳的酶解速率，因此使用普通非卤代7-羟基香豆素检测酶 的灵敏度和准确度偏低(Obzansky DM, Rabin BR; et al, C7/" Ozem 37, 1513-1518(1991).)。③很多7-羟基香豆素的蛋白质共价结合物在取得最大荧光标记所需的基本条件方面是不稳定的。 目前在生理pH值情况下用于酶检 测的香豆素类荧光染料种类较少。本发明针对目前在香豆素类荧光底物研究中存在的问题，提供一种用于 酶活性分析和酶抑制剂筛选的香豆素类化合物及合成方法。采用Pechmann反 应或Knovenagel反应在苯环上即6-位和8-位引入卤原子，得到了二卤代的7-羟基香豆素类化合物。这些香豆素类染料在生理pH值范围内比现有的同类 化合物具有更高的光稳定性和更低的pH值敏感性。其吸收光谱和发射光谱与 现有的香豆素类荧光染料接近，但具有更高的荧光量子产率，适合用作酶活 性分析和酶抑制剂筛选的荧光底物。本发明的技术解决方案荧光的有无与强弱，与分子中取代基的种类和 取代位置有关，如7-羟基香豆素有强烈的蓝色荧光，而7，8- 二羟基香豆素 几无荧光。但7-羟基香豆素只有p论9的碱性环境下才具有最强的荧光强度， 而许多酶，如糖苷酶和酸性磷酸酯酶只有在中性或pH值<7时具有最佳的酶 解速率，因此，使用普通非卤代7-羟基香豆素作为酶底物，其检测糖苷酶和 酸性磷酸酯酶的灵敏度在生理pH值的情况下大大降低。本发明通过向香豆素 的苯环引入两个吸电子的卣素原子，得到二卤代7-羟基香豆素，其吸收光谱 和发射光谱与非卤代的同类化合物接近，但这些卤代香豆素化合物表现出比 非卤代的同类化合物更高的荧光量子产率，而且在生理pH值范围内比非卤代 的同类化合物具有更高的光稳定性和更低的pH值敏感性。此特性对低pH偉 环境的酶系统特别有用，如酸性磷酸酯酶和j3-半乳糖苷酶，可以提高酶检测 的灵敏度。本发明所述的香豆素类化合物具有如下结构通式其中R1为H原子、或由脂肪族或芳香族羧酸的羧基替代OH的氢得到的 酯，或从甾醇类醇、单糖、多聚糖来替换OH的氢获得的醚；R2、 113和尺4可发明内容以是H、含l-18C原子的烃基、含l-18C原子的全氟代烃基、-CN、 -Ar、杂 芳基、或羰基和羧基酰胺。R'是来自于单糖或多糖。R'由单糖衍生而来，最适宜的单糖为yff-D-半乳 糖、^D-葡萄糖、,D-葡萄糖醛酸、W-乙酰氨基葡萄糖和iV-乙酰氨基半乳糖。本发明所述的香豆素类化合物的合成方法采用Pechmann反应或 Knovenagel反应在苯环上即6-位和8-位引入齒原子，得到二卤代的7-羟基香 豆素类化合物。具体合成方法一以4-氯-2-氟间苯二酚作起始原料与"-酮酯，像乙酰乙 酸乙酯，在强酸性介质中经Pechmarm縮合反应，合成了 6-氯-8-氟-7-羟基香豆素。具体合成方法二以5-氯-3-氟-2，4-二羟基苯甲醛为原料与活性亚甲基化 合物，经Knoevnagel縮合反应，可生成相应的6-氯-8-氟香豆素类化合物。而 5-氯-3氟-2,4-二羟基苯甲醛可容易地从4-氯-2-氟间苯二酚甲酰化得到，如用 六亚甲基四胺处理即可。具体合成方法三以6-氯-8-氟-7-羟基香豆素-3-羧酸为原料，与邻氨基苯 硫酚縮合生成3- (2，-苯基噻唑基)-7-羟基香豆素。具体合成方法四以由邻氨基苯酚或邻苯二胺与6-氯-8-氟-7-羟基香豆素 -3-羧酸縮合可制备其它3-杂芳基取代的6-氯-8-氟-7-羟基香豆素。具体合成方法五以5-氯-3-氟-2,4-二羟基苯甲醛为原料，与3-杂芳基乙 酸或3-杂酰基乙酸反应可制得3-杂芳基和3-杂环酰基6-氯-8-氟-7-羟基香豆 素。本发明具有的优点和效果1、由于卤原子的吸电子效应，使其比非卤代香豆素具有较低的pKa值， 这导致酚羟基在中性介质下有较高程度的去质子化作用，从而产生良好的可 溶性和更强的荧光强度。例如，在同样条件下，6-氯-8-氟-7-羟基香豆素比非 卤代的7-羟基香豆素具有更高的量子产率、较低的pKa值和较低的光致脱敏 作用。在酶底物的荧光标记分析中，pKa值的差异是非常重要的。例如，本 发明描述的6-氯-8-氟-7-羟基香豆素，在中性条件下(即生理pH范围内)，即 可完全电离。由于大部分的酶反应均在生理pH范围内进行，在测定酶活性之时使用本发明中的卤代香豆素化合物比其它香豆素将会更方便，极大地提高 了酶检测的灵敏度。经实验证明本发明所述的新型卤代香豆素类荧光底物可以提高在生理pH值的条件下对糖苷酶、酸性磷酸酯酶的荧光量子效率、检测 灵敏度准确度和检测速度。2、 本发明所述的的卤代香豆素化合物可以被方便地用于多种生物活性检 测。例如，将本发明的香豆素化合物与被测生物样品结合，则可通过检测样 品荧光强度的变化检测生物样品某种酶的活性。将本发明的卤代香豆素底物 也可用于细胞活性的检测。例如，亲酯性香豆素衍生物被动地透过或进入细 胞膜内，在细胞内被酶水解而发出更强的荧光。细胞的活性与卤代香豆素酶 底物产生的荧光强度成正比。相对于它们的非卤代香豆素类似物，6-氯-8-氟-7-羟基香豆素具有更高酶解速率，它们的酶解产物表现出更高的荧光强度。在 许多时候，因高的酶解速率而提高了生物检测的灵敏度和检测速度。6-氯-8-氟-7-羟基香豆素衍生物作为酶底物可广泛地用于酶的活性测定。例如，检测 或定量分析酸性磷酸酶及碱性磷酸酶，或检测在酸性细胞器中发现的酶，像 溶酶体糖苷酶。使用本发明所述的卤代香豆素衍生物测定细胞活性时，它们 可选择性地与一种或更多其它不同颜色的荧光试剂结合使用。本发明中的典 型香豆素具有明亮的蓝色到蓝-绿色荧光，与那些给出绿色、黄色、橙色和红 色荧光形成了鲜明的对比。因此，这些卤代香豆素衍生物与其它现有的不同 颜色的荧光试剂结合，可以同时分析细胞的多种生物功能。3、 本发明在生物技术研究中作为荧光探针进行标记分析，具有操作简便、 高稳定性、高灵敏度、高选择性等特点。例如，将本发明的香豆素化合物与 被测生物样品结合，则可通过检测样品荧光强度的变化检测生物样品某种酶 的活性；或可用于细胞活性的检测，细胞的活性与卤代香豆素酶底物产生的 荧光强度成正比。


图1为不同pH值下卣代和非卤代香豆素的荧光强度示意图，图2为磷酸酯酶的荧光强度示意图，图3为不同底物浓度的荧光强度示意图。
具体实施方式
本发明实施例l: 6-氯-8-氟-7-羟基-4-甲基香豆素(化合物2)的合成①5-氯-3-氟-间苯二酚(化合物l)的合成。在2000毫升三径瓶中加入100g (0.565 mole)2， 3， 4-三氟硝基苯和1000 毫升无水甲醇，用冰盐浴冷至0 ~ -5 °C以下，电磁搅拌，在此温度2 - 2.5 h 内滴加20%甲醇钠的甲醇溶液335.6 g( 1.243 mole )。室温搅拌10h。用TLC 检测反应进程，反应结束后用1 mole/L柠檬酸中和pH = 7。将上述反应体 系分散于2000毫升水中，所析出浅黄色固体经过滤、水洗、干燥。经无水 乙醇重结晶，得2-氟-4-硝基-l， 3-苯二酚二甲醚浅黄色晶体。向1000毫升圆底烧瓶中，加入20g2-氟-4-硝基-l，3-苯二酚二甲醚(0.099 mole)， 250毫升无水乙醇/乙酸乙酯(1/2体积比)。电磁搅拌使固体溶解 完全后，加入4glO。/。Pd/C，搅拌下催化加氢约12h。用TLC检测反应进 程，反应完全后真空浓縮，加入30毫升浓HC1和30毫升水的混合物。将 混合物冷至0-5。C，电动搅拌，30min内滴加预先冷却的7.35gNaNO2和20 毫升水的溶液，加完后在此温度继续搅拌40 min。在500毫升三径瓶中使11.9 g氯化亚铜溶于50毫升冷的浓HC1中，电动搅袢，用冰盐浴冷至0 5。C， 将上述制备的预先冷却的重氮盐溶液在30min内缓慢加入。滴加完毕后，搅 拌30min，撤去冰浴，水浴加热至50 55。C搅拌至无气体溢出。将反应体系 用2mole/LNaOH调pH-4 5， 35 °C以下用乙醚萃取(200毫升x2)，有 机相一次用水洗、饱和盐水洗，无水Na2S04干燥。真空浓缩，柱层析分离 (100 200目硅胶，乙酸乙酉旨/石油醚=25 : 1)，得2-氟-4-氯-l， 3-苯二酚 二甲醚无色油装液体。在IOOO毫升圆底烧瓶中加入20g2-氟-4-氯-l，3-苯二酚二甲醚，71.4毫 升冰乙酸，71.4毫升氢溴酸，回流24h，反应完全后真空浓縮得棕色固体， 氯仿重结晶得2-氟-4-氯-l， 3-苯二酚白色晶体。②6-氯-8-氟-7-羟基-4-甲基香豆素(化合物2)的合成<formula>formula see original document page 9</formula>
在250毫升圆底烧瓶中加入70毫升70 %硫酸，用冰盐浴冷却后加入 2.0 g 2-氟-4-氯-l， 3-苯二酚，搅拌溶解完全，滴加1.6毫升乙酰乙酸乙酯， 升至室温搅拌2h。将反应混合物倒缓慢入冰水中，过滤、水洗、干燥、无水 乙醇重结晶得6-氯-8-氟-7-羟基-4-甲基香豆素白色晶体。本发明实施例2: 6-氯-8氟-7-羟基-3-羧基香豆素(化合物4)的合成①5-氯-3-氟-2,4-二羟基苯甲醛(化合物3)的合成<formula>formula see original document page 9</formula>向250毫升三口瓶中依次加入10g2-氟-4-氯-l， 3-苯二酚、117.2g六次 甲基四胺、L80毫升三氟乙酸。电磁搅拌至完全溶解，升温至90。C反应24 h。反应完全后冷至室温，加入IOO毫升20%H2SO4 ，搅拌lh后将反应混 合物倒如水中，用乙酸乙酯萃取(500毫升x2)。有机相经饱和盐水洗、无水 MgS04干燥、浓縮、乙酸乙酯/正己垸冲结晶得3-氟-5-氯-2， 4-二羟基苯甲 醛白色晶体。②6-氯-8-氟-7-羟基-3-羧基香豆素(化合物4)的合成取20毫升甲磺酸，在100毫升圆底烧瓶中与2g3-氟-5-氯-2， 4-二羟 基苯甲醛，搅拌溶解后加入6.4毫升丙二酸二乙酯。室温反应6 h。反应完 全后，'将其倒入300毫升冰水中，用乙酸乙酯萃取(200毫升x2)。有机相 经饱和盐水洗涤，无水Na2S04干燥，真空浓縮，柱层析分离(1%， 2%， 3%CH3OH/CHCl3)得6-氯-8-氟-7-羟基-3-乙氧基酰基香豆素白色晶体。在250毫升圆底烧瓶中加入1.0g6-氯-8氟-7-羟基-3-乙氧基酰基香豆素 70毫升THF: CH3OH: H20 = 5: 5: 1 (体积比)和1.0gKOH，电磁搅拌。升温至60 °C反应5 5.5 h。反应完全后将其分散与500毫升CHC13中，乙 酸乙酯萃取(200毫升x2)，饱和盐水洗，无水Na2S04干燥，真空浓縮至干， 乙酸乙酯/正己烷冲结晶得6-氯-8氟-7-羟基-3-羧基香豆素白色晶体。本发明实施例3:磷酸酯酶作用物一6-氯-8-氟-7-羟基-4-甲基香豆素磷酸 酯(化合物5)的合成在0。C， N2保护下，将溶有化合物2的嘧啶溶液加到溶有POCl3 (2摩 尔)的嘧啶溶液中，用TLC跟踪反应。反应结束后，将溶液倒入盛有碎冰的 烧杯中，用氨水调节溶液pH-5。然后，用氯仿萃取嘧啶，将水相部分冻干， 即为粗品。通过葡聚糖凝胶色谱法纯化产品，采用SEPHADEXLH20凝胶柱，以水 做洗脱剂。收集纯品，冷冻得无色晶体。将此固体溶于水中，搅拌下加入 DOWEX 50. 4-200强酸性阳离子交换树脂，然后过滤除去树脂，并用水洗涤 树脂，合并滤液，冷冻得化合物5，为无色晶体，没有荧光。本发明实施例4:脱垸基化酶底物6-氯-8-氟-7-乙氧基-4-甲基香豆素(化 合物6)的合成将化合物2(100mg)和碘乙烷(150pL)加入到DMF(IO毫升)中，再加入 碳酸钾(250mg)，回流搅拌反应72h。在反应进行到24h和48h时，分别添加 200 uL的碘乙垸。反应结束后，冷却，然后过滤。将滤液浓缩得无色晶体， 用硅胶柱精制纯化产品，经乙酸乙酯/环己烷梯度洗脱，得到80 mg化合物 6，为无色晶体，没有荧光。本发明实施例5: 6-氯-8-氟-7-羟基-4-甲基香豆素-Z -D-吡喃型半乳糖苷四 乙酸酯(化合物7)的合成将6-氯-8-氟-7-羟基-4-甲基香豆素(100 mg， 0.47 mmol)、 2,3,4，6-四-0-乙酰 基-a-D-吡喃半乳糖溴化物(300 mg)和四丁基溴化铵(250 mg)溶于7毫升 CH;jCl2中，再加入NaOH(30mg，0.75mmo1，溶于3毫升蒸馏水中)溶液，充分 搅拌反应16h，然后将反应液倒入50毫升水中。用CHCl3萃取产品，饱和盐 水洗涤有机相，然后用无水MgS04干燥，真空浓縮，经硅胶柱分离精制(CHCl3 /MeOH98:2)得210 mg( 82 % )的化合物7。本发明实施例6: 6-氯-8-氟-7-羟基-4-甲基香豆素-Z -D-吡喃半乳糖苷(化 合物8)的合成将新制备的NaOMe/无水甲醇溶液(15^L, 1N)加入到溶有化合物7 (100 mg)的无水甲醇(5毫升)溶液中，室温下搅拌反应16h，得到白色沉淀。 过滤，并用甲醇洗涤沉淀物，得一部分化合物8。合并洗涤液到滤液中，用 HRC树脂处理，然后过滤，将滤液真空浓縮，经SEPRADEXLH-20凝胶柱 分离，用水洗脱得第二部分化合物8。本发明实施例7:用6-氯-8-氟-7-羟基-4-甲基香豆素磷酸酯(化合物5)检 测酸性磷酸酯酶的活性作为酸性和碱性磷酸酯酶的底物，可将化合物5与非卤代的类似物，4-甲基香豆素磷酸酯(MUP)做比较。具体的比较是，使两个底物的浓度(初 始浓度约为10mM)相同，在319nm(pH10)处测每一个底物溶液的吸光率 为0.52 (经测定它们的消光系数近似相等)，然后将l: 10稀释后的底物样品加 入到过量的酶缓冲液(10imits/毫升)里，记录不同时间的荧光信号(激发波 长360nm，发射波长450nm)。化合物5与酸性磷酸酯酶(pH4.8，柠檬酸盐 缓冲液)作用，其lh之后的荧光量子产率要远高于MUP (见图2)。即使将反应液的pH值提高到10 (此为甲基香豆素的最大荧光辐射)，化合物5 与酸性磷酸酯酶作用产生的荧光信号也比MUP强的多。化合物5与碱性磷酸 酯酶(pH10.4,含lmMMgCb的氨基乙酸作缓冲液)作用，其荧光量子 产率比MUP高出约25% (见图2 )。如果每一个底物大大过量(50mMto0.01酶单位/毫升)，在pH-4.8(柠 檬酸盐缓冲液)、酸性磷酸酯酶存在下，化合物5水解反应的初始速率比 MUP高的多(见图2)。如同上文，底物样品的浓度相当，即在316 nm处 的标准吸光率为0.525，然后1:10稀释。本发明实施例8:用6-氯-8-氟-7-羟基-4-甲基香豆素半乳糖苷(化合物8) 测定/ -半乳糖苷酶的活性作为A半乳糖苷酶的底物，可将化合物8与非卤代类似物，4-甲基香豆 素々-半乳糖苷(MUG)作对比。具体的比较是，将两个底物的浓度(初始浓 度约为10mM)调整到相等，在316nm(pH8.3，20mM的碳酸氢钠)处测 每一个底物溶液的标准吸光率为0.5 (经测定它们的消光系数近似相等)，然后 将l: 10稀释后的底物样品加入到^半乳糖苷酶缓冲液里，pH=7.0， 2酶单位/ 毫升。记录游离染料的发射光谱(发射波长460 nm，激发波长360 nm)，结 果见图3。在反应的pH下测量荧光，用化合物8做该酶的底物，比用MUG 产生更高的信号增强。由于香豆素的pKa值为7.8 (可从未糖苷化的MUG 得到)，在反应液中加NaOH使溶液的pH值提高到10，能够获得最佳的荧 光信号。然而即使对MUG单方面优化以后，使用化合物8 (在pH 7.0)产 生的信号仍强于MUG (在pH 10)。本发明实施例9:测定卤化香豆素的pH效应。首先将我们对照香豆素 和卤化香豆素溶解在一系列缓冲溶液中，该缓冲溶液己用pH计校正过。在 pH4-6，可选用醋酸盐作缓冲剂，在pH6-8范围， 一般用磷酸盐缓冲液。在 溶液浓度大约10 mM下测定吸光值，而进行荧光测定时，溶液的浓度约为1 pM。以吸收或发射数据对pH作图，可以确定pKa值。例如图l所示，6-氯 -8-氟-7-羟基-4-甲基香豆素和7-羟基-4-甲基香豆素的荧光发射数据对溶液的 pH值作图。数据显示出，荧光团的卤化作用明显降低了7-羟基香豆素的pKa 值。
权利要求
1.一种用于酶活性分析和酶抑制剂筛选的香豆素类化合物，其具有如下结构通式id="icf0001" file="S2008100179389C00011.gif" wi="40" he="26" top= "52" left = "37" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="no"/>其中R1为H原子、或由脂肪族或芳香族羧酸的羧基替代OH的氢得到的酯，或从甾醇类醇、单糖、多聚糖来替换OH的氢获得的醚；R2、R3和R4可以是H、含1-18C原子的烃基、含1-18C原子的全氟代烃基、-CN、-Ar、杂芳基、或羰基和羧基酰胺。
2、 根据权利要求1所述的用于酶活性分析和酶抑制剂筛选的香豆素类化 合物，其特征是RJ来自于单糖或多糖。
3、 根据权利要求1或2所述的用于酶活性分析和酶抑制剂筛选的香豆素 类化合物，其特征是R'由单糖衍生而来，最适宜的单糖为P-D-半乳糖、 葡萄糖、々-D-葡萄糖醛酸、JV-乙酰氨基葡萄糖和W-乙酰氨基半乳糖。
4、 一种如权利要求1所述的用于酶活性分析和酶抑制剂筛选的香豆素类 化合物的合成方法，其特征是采用Pechmann反应或Knovenagel反应在苯 环上即6-位和8-位引入卤原子，得到二卤代7-轻基香豆素类化合物。
5、 根据权利要求4所述的用于酶活性分析和酶抑制剂筛选的香豆素类化 合物的合成方法，其特征是以4-氯-2-氟间苯二酚作起始原料与"-酮酯，像 乙酰乙酸乙酯，在强酸性介质中经Pechmann縮合反应，合成6-氯-8-氟-7-羟 基香豆素。
6、 根据权利要求4所述的用于酶活性分析和酶抑制剂筛选的香豆素类化 合物的合成方法，其特征是以5-氯-3-氟-2，4-二羟基苯甲醛为原料与活性亚 甲基化合物，经Knoevnagel縮合反应，可生成相应的6-氯-8-氟香豆素类化合 物。
7、 根据权利要求4所述的用于酶活性分析和酶抑制剂筛选的香豆素类化合物的合成方法，其特征是以6-氯-8-氟-7-羟基香豆素-3-羧酸为原料，与邻 氨基苯硫酚縮合生成3- (2，-苯基噻唑基)-7-羟基香豆素。
8、 根据权利要求4所述的用于酶活性分析和酶抑制剂筛选的香豆素类化 合物的合成方法，其特征是以邻氨基苯酚或邻苯二胺与6-氯-8-氟-7-羟基香 豆素-3-羧酸縮合可制备其它3-杂芳基取代的6-氯-8-氟-7-羟基香豆素。
9、 根据权利要求4所述的用于酶活性分析和酶抑制剂筛选的香豆素类化 合物的合成方法，其特征是以5-氯-3-氟-2，4-二羟基苯甲醛为原料，与3-杂 芳基乙酸或3-杂酰基乙酸反应可制得3-杂芳基和3-杂环酰基6-氯-8-氟-7-羟基 香豆素。
全文摘要
一种用于酶活性分析和酶抑制剂筛选的香豆素类化合物，其具有如右结构通式，其中R¹为H原子、或由脂肪族或芳香族羧酸的羧基替代OH的氢得到的酯，或从甾醇类醇、单糖、多聚糖来替换OH的氢获得的醚；R²、R³和R⁴可以是H、含1-18C原子的烃基、含1-18C原子的全氟代烃基、-CN、-Ar、杂芳基、或羰基和羧基酰胺。本发明采用Pechmann反应或Knovenagel反应在苯环上即6-位和8-位引入卤原子，得到二卤代的7-羟基香豆素类化合物。本发明在生物技术研究中作为荧光探针进行标记分析，具有操作简便、高稳定性、高灵敏度、高选择性等特点。主要用于酶活性分析和酶抑制剂筛选，也可用于细胞活性的检测。
文档编号C07H17/00GK101270105SQ200810017938
公开日2008年9月24日 申请日期2008年4月8日 优先权日2008年4月8日
发明者李宗孝, 杨得锁 申请人:杨得锁