3,4-二氢喹唑啉衍生物的制作方法

专利名称：：3,4-二氢喹唑啉衍生物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及具有良好的T型钙离子通道阻断效应和抗癌活性的3,4-二氢全唑啉衍生物，本发明还涉及3，4-二氢会唑啉衍生物的制备方法，以及包含3,4-二氢喹唑啉衍生物的药物组合物。
背景技术：
：4丐作为一种细胞内信号起了关键作用，控制多种不同的细胞进程，钙在这些细胞进程中对细胞生长起了重要作用[Berridge，M.J.，etal"Nat,Rev,Mol.CellBiol.2003,4,517-529]。例如，据证明，在有丝分裂细胞周期G1/S期中需要钙信号。也有证明细胞内钙离子的损耗使细胞周期在G0/G1期和S间期受到阻滞[Clapham,D.E,Cell1995,80,259-268]。细胞内钙离子的调控是通过T-型钙离子通道进行的。最近报道T-型钙离子通道阻断剂(CCBs)抑制细胞增殖[McCalmont,W.F.,etal.,MedC/ze附.2004，"，3691-3695;McCalmont，W.R，etal.,MedC/zew.2005,",3821-3839].然而，与T-型4丐离子通道阻断剂(CCBs)不同的是，一些作为抗高血压剂的L-型钙离子通道阻断剂可能与老年人癌症的发病危险率相关，他们通过抑制细胞凋亡来促进人体内先存的癌细胞的生长[LaVecchia，C.etal.,Eur.J.Cancer2003,39,7-8]，这种观点还在讨论当中。因此，选择性的T-型钩离子通道阻断剂(CCBs)可能能成为治疗细胞周期变得异常的癌症的另一种方法。另一方面，有报道表明T-型钙离子通道的过量表达会导致癫痫症(Tsakiridou，E.etal.，J.Ne丽ci.1995,15,3110-3117)、高血压(Self,D.A.etal.,JVacs.Res.1994,31,359-366)、心室肥大(Nuss,H.B.etal.,CircRes.1995,73,777-7825)、疼痛(Shin,H.S.etal.，Science2003,302,117-119)和心绞痛(VanderVring,J.A.etal.，Am.J.Ther.1999,6，229-233)。因此，选择性的T-型钾离子通道阻断剂可能能用于预防或治疗癫痫症、高血压、心室肥大、疼痛和心绞痛
发明内容技术问题本发明的发明人深入研究、发明了一种通过阻断T-型钙离子通道来治疗生长过度的疾病，例如癌症的新化合物。他们发现具有式(I)结构的3，4-二氢喹唑啉^"生物具有良好的T-型钙离子通道阻断效应和抗癌活性。其中R,,R2和R3定义如下本发明的目的在于提供一种具有以上式(I)或其药学上可接受的盐的化合物。本发明的另一目的在于提供一种包含上述式(I)或其药学上可接受的盐的化合物，以及其药学上可接受的载体的药物组合物。技术方案含有下述式(I)或其药学上可接受的盐的化合物，其中，Ri为NR4(CH2)nNR5R6,R4为H或d-C5烷基，n为4，5或6，R5和Rg分别为H或d-Cs烷基或含有氮原子的4-6元的杂环；112为4-联苯基；113为节氨基、4-氨基千氨基；或4-氟苯砜氨基节氨基。式(I)中，R4优选为C,-Cs烷基，更优选地，R4为曱基或乙基，n最优选为5。优选地，Rs和Re为同为H或d-Cs烷基，更优选地，Rs和R6为曱基或乙基，或连接有氮原子的吡咯烷或哌啶，更优选为吡咯烷。本发明术语"C,-C5烷基"意指具有l-5个碳原子的直链烃或支链烃，包括曱基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基等，但没有限定进去。本发明最优选的化合物选自以下化合物4-(苄基乙酰胺)-3-(4-联苯基)-2-[AK5-吡咯烷-l-戊基)-,甲胺]-3,4-二氢喹唑啉；4-(苄基乙酰胺)-3-(4-联苯基)-2-[AK5-AT,iV'-二曱氨基戊基)-iV-曱胺]-3，4-二氢喹唑啉；和4-(千基乙酰胺)-3-(4-联苯基)-2-[AK5-氨基戊基HV-曱胺]-3,4-二氢唾唑啉。本发明化合物的制备方法通过以下1-5步反应式来描述。然而，下述反应式仅阐述了本发明的典型的反应步骤。操作顺序、反应物、反应条件等可以不受限制地改变。反应式1<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>如反应式l所示，1,5-二溴戊烷与邻苯二曱酰亚胺钾在适当的溶剂中反应，生成^-(5-溴戊基)邻苯二甲酰亚胺(2)。化合物(2)与吡咯烷在碳酸钾和碘化钠存在下反应，生成iV-(5-吡咯烷-1-戊基)邻苯二甲酰亚胺(3)。化合物(3)与肼反应生成5-(1-吡咯烷)戊胺(4)。化合物(4)与2-叔丁基碳酸氢钠反应生成叔丁基(5-吡咯烷-1-戊基)氨基曱酸盐(5)。然后，化合物(5)与氢化锂铝在适当的溶剂下反应生成iV-曱基-A45-(l-吡咯烷)戊基]胺(6)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>如反应式2所示，化合物(14)可以通过反应式(1)得到的iV-曱基-7V-[5-(l-吡咯烷)戊基]胺(6)制备而得。2-硝基苯肉桂酸(7)与甲醇在酸催化剂作用下反应得到曱基-2-硝基肉桂酸(8),曱基-2-竭基肉桂酸(8)优选通过SnClr2H20减少硝基，生成曱基-2-氨基肉桂酸(9)。化合物(9)与三苯基磷优选在有六氯乙烷和三乙胺的存在下反应，生成曱基3-[2-(三苯基磷亚氨基)苯基]丙烯酸酯(IO)。化合物(10)与4-联苯基异氰酸酯在适当溶剂条件下反应产生甲基-3-[2-(4-联苯基亚曱氨基)苯基]丙烯酸酯(11)。然后，化合物(ll)与反应式1得到的iV-甲基-,[5-(1-吡咯烷)戊基]胺(6)(6)在适当的溶剂条件下反应得到化合物3-(4-联苯基)-2-[iV-曱基-吡咯烷-1-戊基)胺]-4-曱氧基羰基曱基-3,4-二氢喹唑啉(12)。化合物(12)优选利用LiOH/H20水解得到化合物(13),化合物(13)与节胺，优选在有1羟基苯并三唑(HOBT)和l-[3-(二甲胺)丙基]-3-碳化二亚胺盐酸(EDC)存在的条件下反应得到4-(7V-节基乙酰胺)-3-(4-联苯基)-2-[AK5-吡咯烷-l-戊基)-N-甲胺]-3,4-二氬壹唑啉(14)。反应式3H2NNH2('BOC)20OBnBrO义一Bn15LiAIH4H3C.18如反应式3所示，化合物(18)能通过以下步骤制备1,5-二氨基戊烷(15)与2-叔丁基碳酸氢钠在适当的溶剂中反应产生叔丁基(5-氨基戊基)氨基曱酸盐(16),化合物(16)与之前产生的节基溴反应，得到叔丁基(5-联节基氨基戊基)氨基曱酸盐(17)。得到的化合物(17)与氢化锂铝在适当的溶剂中反应生成iV,-联节基-iV'-曱基戊烷-l,5-二胺(18)。反应式4如反应式4所示，化合物(20)和化合物(23)可以利用反应式3得到的WiV-联千基-TV'-曱基戊烷-l,5-二胺(18)和反应式2得到的曱基-3-[2-(4-联苯基亚曱氨基)苯基]丙烯酸酯(11)来制备。化合物(11)与化合物(18)在适当的溶剂中反应生成3-(4-联苯基)-2-[iV-(5-联千基氨基戊基)-7V-曱胺]-4-甲氧基羰基曱基-3,4-二氢喹唑啉(19)。然后，化合物(19)在Pd(C)和福尔马林溶液存在条件下氢化生成2-[AK5W,iV'-二曱基氨基戊基)-W-曱胺]-3-(4-联苯基)-4-曱氧基羰基曱基-3，4-二氢喹唑啉(20)。另一方面，化合物(19)优选利用LiOH/H20水解产生化合物(21),化合物(21)与苄胺反应，优选在l羟基苯并三唑(HOBT)和l-[3-(二甲胺)丙基]-3-碳化二亚胺盐酸(EDC)存在下反应，生成^-千基-3-(4-联苯基)-2-[^-(5-W',iV'-联卡基氨基戊基)-iV-曱胺]-3,4-二氢喹唑啉-4-乙酰胺基(22)。然后，化合物(22)在Pd(C)和福尔马林溶液存在条件下氢化生成4-(iV-苄基乙酰胺)-3-(4-联苯基)-2-[AH5-iV',iV'-二甲基氨基戊基)-iV-甲胺]-3,4-二氢喹唑啉(23)。反应式5CH3BnCH32225如反应式5所示，化合物(24)与化合物(25)能利用反应式3得到的7V,iV-联苄基-iV'-曱基戊烷-l,5-二胺(18)和反应式2得到的甲基-3-[2-(4-联苯基亚甲氨基)苯基]丙烯酸酯(ll)来制备。具体步骤与反应式4相同，除了催化剂是用Pd(C)代替Pd(C)和福尔马林溶液。本发明的另一方面是关于一种由上式(I)所示的化合物或其药学上可以接受的盐和其药学上可以接受的载体组成的药物组合物。特别地，本发明的药物组合物能被用于治疗癌症，尤其是结肠癌，或用于预防或治疗癫痫症、高血压、心室月巴大、疼痛或心绞痛。本发明的药物组合物可以口服服用，如摄食或雾化吸入，或非口服服用，如注射、沉积、植入或栓剂。例如，注射剂可以为静脉注射、皮层注射、皮下注射、肌肉注射、或腹腔注射。根据服用方式，本发明药物组合物可以制成药剂形式如片剂、胶嚢剂、颗粒剂、细粒剂、粉末剂、舌下片剂、栓剂、软膏、注射液、乳剂、混悬剂、糖浆剂、喷雾剂等等。本发明药物组合物的各种药剂形式可以通过本领域熟知的药学上可以接受的用于不同药剂形式的栽体制备而得到。药学上可接受的载体包括赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、防腐剂、抗氧化剂、等渗剂、緩冲剂、包衣剂、甜味剂、溶剂、碱、分散剂、润湿剂、助悬剂、稳定剂、着色剂等等。本发明药物组合物包括0.01-100wt。/。上述式(I)所示的3,4-二氢喹唑啉书f生物或其药学上可接受的盐，药学上可接受的盐取决于不同的形式。本发明药物组合物的具体剂量根据哺乳动物包括人类的种类、体重、性别、疾病的严重度、医生的诊断等的不同而不同。优选地，每千克体重每天口服月良用0.01-50mg活性成分，非口服服用O.Ol-lOmg活性成分。根据疾病的严重度、医生的诊断等，服用剂量可以每日一次或每日多次服用。有益效果本发明3,4-二氬全唑啉衍生物具有良好的T-型钙离子通道阻断效应和抗癌活性。因此，本发明化合物能被用作一种通过阻断T-型钙离子通道来治疗过度增长的疾病(例如癌症)的新的化学疗法。本发明化合物也能被用作预防或治疗癫痫症、高血压、心室肥大、疼痛或心绞痛。具体实施例方式下面结合具体的实施例进一步阐明本发明。这些实施例仅用于说明本发明，而不能限制本发明的保护范围。实施例1:制备iV-(5-溴戊基)邻苯二甲酰亚胺(2)于室温下，往溶于100mlDMF中的1,5-二溴戊烷(9.00ml，65.22mmol)溶液中加入邻苯二曱酰亚胺钾(12.08g,65.22mmo1),反应混合物搅拌24h。反应完成后，加入蒸馏水，再将反应液搅拌10min,用乙酸乙酯萃取三次。然后，有机相用盐溶液洗涤，无水硫酸镁干燥后减压蒸馏。得到的残留物过硅胶柱层析(洗脱液乙酸乙酯正己烷=1:3)，得到目标化合物(10.6g,55%)。^-NMR(400MHz，CDCl3)57.85-7.70(m，4H,aromatic),3.71-3.67(t,2H，-CHrCH2-CH2-CH2-CH2-Br),3.4-3.38(t,2H,-CHrCH2-CH2-CH2-CiirBr)'1.94-1.87(m,2H,-Qi2-CHrCH2-CH2-CH2-Br),1.73-1.67(m,2H，-CJ^-CHrCHrCHrCHrBr),1.53-1.47(m,2H，-C^-CHrCHa-CHrCHrBr).实施例2:制备,(5-p比咯烷-l-戊基)邻苯二曱酰亚胺(3)于室温下，在乙醇/丙酮(1:1)中加入碳酸钾(13.57g，98.20mmol),吡咯烷(4.47ml,54.01mmol)和橫化钠(7.359g,49.098mmol),然后搅拌lh。往反应液中緩慢加入7V-(5-溴戊基)邻苯二曱酰亚胺(2)(10.60g,49.10mmo1),然后将反应液于5CTC回流24h。反应完成后，将得到的白色固体过滤，将溶剂减压浓缩。然后，得到的残留物用1N饱和NaOH溶液和二氯曱烷萃取三次。然后，有机相用无7jc硫酸镁干燥后减压蒸馏。得到的残留物过硅胶柱层析(洗脱液二氯曱烷甲醇氨水=100:9:1),得到目标化合物(3.27g,45%)。!H-NMR(400MHz,CDCl3)57.81-7.66(m,4H,aromatic),3.66-3.63(t,2H,-CH2-(CH2)4-NC4H8):2.51-2.49(t,4H,-(CH2)5-NC2H4C2H4)，2.45-2.41(m,4H,-(CH2)5-NC2H4C2Ii4),1.77-1.74(m,2H,-(CH^-Q^-NCtHs),1.68-1.55(m，4H,-CHrCHrCHs-CHrCHrNQHs),1.36-1.32(m,2H,-CH2-CH2-CHrCH2隱CH2-NC4H8).实施例3:制备5-(1-吡咯烷)戊胺(4)于室温下，往溶于乙醇(100ml)中的iV-(5-吡咯烷-l-戊基)邻苯二曱酰亚胺(3)(3.27g,11.42mmol)中加入NH2NH2vH20(联氨一水化物)(5.54ml，114.19匪ol)'反应液回流24h。反应完成后，反应液减压过滤得到目标化合物(l.50g,84%)。'H陽NMR(400MHz，CDC13)S4.28(brs,2H,,陽)，2.69-2.66(t,2H,-CH^CH^-NQHs),2.51(s,4H,-(CH2)5-NC迅C2H4),2.46-2.42(t,2H,-(CH^-CHrNQHs),1.73(s,4H,-(CH2)5-NC2H4C2Hi),1.52-1.43(m,4H,-CHrQ^-CHrCHrCHrNCaHs),1.33-1.25(m,2H,-CH2-CH2-CHrCH2-CH2-NC4H8).13C-NMR(CDC13)S56.18，54.06,41.30,31.92,28.22,24.68,23.31.实施例4:制备叔丁基(5-吡咯烷-l-戊基)氨基曱酸盐(5)将5-(1-吡咯烷)戊胺(4)(1.50g，9.60mmol)加入50ml长颈瓶中，然后将长颈瓶抽真空，安装氮气球。然后，于0。C，加入二氯曱烷(30ml)溶解化合物(4),緩慢加入二-叔丁基碳酸氢钠(2.64ml,11.52mmol)。然后，再加入二氯曱烷(20ml),搅拌24h。反应完成后，反应液用1N饱和NaOH溶液碱化，调至pH10-11,用二氯曱烷萃取三次。然后有机相用无水硫酸镁干燥后减压蒸馏。得到的残留物过硅胶柱层析(洗脱液二氯曱烷曱醇氨水=40:7:1),得到目标化合物(1.5g,650/。)。工H-NMR(400MHz，CDC13)54.63(brs,1H,-NH-),3.07-3.06(t,2H,-CH2-(CH2)4-NC4H8),2.51(s,4H,-NC2Ii4C2H4),2.45-2.41(m,2H,-(CH^-Q^-NC^t^C^ILt),1.76(s,4H,-(CH2)5-NC2H4C2H4)，1.54-1.28(m,15H，-CHrCHs-CHa-CHrCHrNCsI^QH^-C(CH2)2_).实施例5:制备7V-曱基-iV-[5-(l-吡咯烷)戊基]胺(6)往溶于二氢呋喃(100ml)中的叔丁基(5-吡咯烷-l-戊基)氨基甲酸盐(5)(1.59g,6.20mmoI)中加入LiAlH4(氢化锂铝)(2.35g，62.00mmo1),反应液搅拌24h。然后，在反应液中加入酒石酸钾钠(17.5g，62.0mmol)淬灭，混合物经珪藻土过滤。溶剂减压浓缩得到目标化合物(0.7g,66%)。丄H-NMR(400MHz,CDC13)S2.63-2.47(m,8H,-Q^-CCH^-CHrNC^QILt),2.45(s,3H，-NH-CH2),1.80-1.79(m，4H,-(CH2)5-NC2H4C2H4)，1.56-1,53(m,4H,画CH2-CHrCH2-CHrCH2-NC4H8),1.41-1.33(m,2H,-(CH2)2-Q^-(CH2)2-NC4H8).13C-NMR(CDC13)556.43，54.05,51.79,36.14,29.48,28.70,25.27,23.19.实施例6:制备甲基-2-硝基肉桂酸(8)于室温下，将溶于曱醇(200ml)的2-硝基苯乙烯酸(7)(10.38g,53.76mmol)滴加到小量浓硫酸中，反应液70。C搅拌12h。反应完成后，反应液用饱和碳酸氢钠溶液调节至弱碱性，二氯曱烷萃取三次。然后，有机相利用无水硫酸镁干燥，减压蒸馏。得到的残留物过硅胶柱层析(洗脱液乙酸乙酯正己烷=1:5)，得到目标化合物(11.03g,99%)。丄H-NMR(400MHz,CDC13)S8.16-8.12(d，1H,-C-CH=CH-)，8.09-7.58(m,4H,aromatic),6.43-6.37(d,1H,-C-CH=CH_),3.86(s,3H,-OCH3).实施例7:制备曱基-2-氨基肉桂酸(9)于室温下，往溶于乙酸乙酯(200ml)的曱基-2-硝基肉桂酸(8)(11.03g,53.24mmol)中加ASnCl2.2H20(60.06g，266.19mmol)，反应液7CTC搅拌60min。反应完成后，将反应液冷却到室温，用饱和碳酸氢钠溶液调节至弱碱性，经硅藻土过滤。水相用乙酸乙酯萃取三次，合并的有机相用无水硫酸镁干燥，减压蒸馏。得到的残留物过硅胶柱层析(洗脱液乙酸乙酯正己烷=1:5)，得到目标化合物(8.50g,90%)。^-NMR(400MHz,CDC13)S7.92-7.86(d,1H,-C-CH=CH-),7.44-6.76(m,4H,aromatic),6.42-6.36(d,1H,-C-CH=CH-)，3.83(s,3H,-OCH3).实施例8:制备甲基-3-[2-(三苯基磷亚氨基)苯基]丙烯酸酯(10)往溶于曱苯(200ml)的曱基-2-氨基肉桂酸(9)(8.93g,50.40mmol)中滴加三苯基磷(19.83g,75.59mmol)和六氯乙烷(17.90g,75.59mmol)。然后，于室温下，将反应液慢慢滴加到三乙胺(3.24ml，23.3mmol)中，然后将混合物回流3h。反应完成后，反应液冷却到室温，经硅藻土过滤。反应液用二氯曱烷萃取三次，合并的有机相用无水硫酸镁干燥，减压蒸馏。得到的残留物过,圭胶柱层析(洗脱液乙酸乙酯正己烷二氯曱烷-l:3:1),得到目标化合物(22.05g,定量地得到)。'H-NMR(400MHz,CDC13)S8.78-8.81(d,1H，-C-CH=CH-)，7.84-6.69(m,19H,aromatic),6.42-6.53(d，1H,-C-CH=CH_),3.84(s,3H,-OCH3).实施例9:制备曱基-3-[2-(4-联苯基亚曱氨基)苯基]丙烯酸酯(11)往溶于甲苯(300ml)的甲基-3-[2-(三苯基磷亚氨基)苯基]丙烯酸酯(10)(22.05g,50.40mmol)中加入4-联苯异氰酸酯(9.84g，50.40mmol)。反应液在室温下搅拌12h,减压蒸馏，用曱醇重结晶，生成白色固体的目标产物(6.95g,64%)。'H-NMR(400MHz,CDC13)58.17-8.13(d，1H,-C-Qi=CH-),7.61-7.25(m,13H,aromatic),6.54-6.50(d,1H，-C-CH=QJ-)，3.81(s,3H,-OCH3).实施例10:制备3-(4-联苯基)-2-[^曱基-^-(5-吡咯烷-1-戊基)胺]-4-曱氧基羰基曱基-3,4-二氢喹唑啉(12).于0'C条件下，往溶于甲苯(50ml)的3-[2-(4-联苯亚氨基亚曱基胺)苯基]丙烯酸酯(11)(0.83g,2.35mmol)中慢慢加入实施例5制备的iV-甲基-A45-(l-吡咯烷)戊基]胺(6)(0.80g,4.70mmol)中，反应液在室温下搅拌lh。反应完成后，反应液经1N饱和NaOH溶液和二氯曱烷萃取三次，然后，合并的有机相用无7jc硫酸镁干燥，减压蒸馏。得到的残留物过硅胶柱层析(洗脱液二氯曱烷曱醇氨水=100:9:1),得到目标化合物(0.63g,52%)。!H-NMR(400MHz,CDC13)S7.51-6.89(m,13H,aromatic),5丄(dd，《/=4.5and10Hz，1H，-NH-Qi-)，3.76(s,3H,-OCH3),2.85-2.48(m，11H,-N-CH3，-0^-(012)3隱0^->^211^2仏)，1.88(s，4H,-(CH2)5-NC2H4C2H4)，1.66(s,2H,-CH2-CH2-(CH2)3-NC2H4C2H4),1.53(s,2H,.(CH2)3-CH2-CH2-NC2H4C2H4)，1.26-1.22(m,2H,-CHrCHrCHrCHrCHrNCsI^C^fLO.13C-NMR(CDC13)S171.88,153.38，145.38,144.15,140.30,136.77,128.76,128.36，127.85,127.08,126.73,124.75,122.86，122.59,122.12,61.21，56.30,54.06,53.45,51.89,39.54，35.40，30.90，28.21，27.16,24.91，23.37.实施例11:制备4-(JV-千基乙酰胺)-3-(4-联苯基)-2-IW-(5-吡咯烷-l-戊基)-N-曱胺]-3,4-二氢喹唑啉(14)(KYS05080)往溶于二氢呋喃(20ml)和水(20ml)的3-(4-联苯基)-2-[7V-曱基-AK5-吡咯烷-l-戊基)胺]4-曱氧基羰基甲基-3,4-二氢查唑啉(12)中加入LiOH/H20(0.21g,5,05mmol)中，反应液在70°C搅拌2h。反应完成后，反应液冷却到室温，溶剂减压浓缩。然后，反应混合物用3NHC1酸化至pH3-4后，用二氯曱烷萃取三次。合并的有机相用无水錄u酸镁干燥，减压蒸馏得到白色固体化合物(13)。于0。C条件下，往溶于二氯曱烷/四氬呋喃(l:l，40ml)的化合物(13)和1羟基苯并三唑(HOBT)(0.881g,6.52mmol)中滴加千胺(0.71ml,6.52mmol),反应液0。C搅拌lh。然后，加入l-[3-(二甲胺)丙基]-3-碳化二亚胺盐酸(EDC)(LOg,i.20mmo1),室温下搅拌12h。反应完成后，反应液减压蒸馏，溶解于二氯甲烷。然后，反应液用0.5M盐酸溶液萃取两次，饱和碳酸氩钠萃取两次，水萃取一次，用盐溶液洗涤。有机相用无水硫酸镁干燥，减压蒸馏。得到的残留物过硅胶柱层析(洗脱液二氯曱烷曱醇氨水=100:9:1),得到黄色液体的目标化合物(0.33g，64%)。!H-NMR(400MHz,CDC13)S7.55-6.97(m，18H,aromatic),5.33-5.29(dd,5.3and9.4Hz,1H,-NH-CH-),4.52-4.50(m,2H,(36115-0^-),3.41-3.16(d,2H,-CHrCH-),2.70-2.62(m,4H,-(CH2)5-NC2H4C2H4),2.46-2.37(m,7H，-Q^-CHrCHrCHrCg-NQHs,-NCHa),1.96-1.95(m,4H,-(CH2)5-NC2H4C2Hi),1.74-1.25(m,6H,-CHHCH^-CH^NC4H8).13C-NMR(CDC13)5170.26,154.01,145.47,143.89,140.41,138.53，136.75,128.77,128.58，128.05,127.78,127.40,127.07,126.77,126.35,125.08,122.97,122.33,122.21,61.17,56.55,55.44,54.23,49.81,43.72,41.63,35.46，28.66,27.06，25.02，23.38.实施例12:制备叔丁基(5-氨基戊基)氨基甲酸盐(16)于0。C条件下，往溶于二氯曱烷(100ml)的1,5-二氨基戊烷(15)(1.14ml,9.79mmol)中加入二-叔丁基碳酸氬钠(1.12ml,4.90mmol),反应液室温搅拌12h。反应完成后，加入H20去除固体得到的残留物。反应混合物用IN饱和NaOH溶液碱化至pH10-11,用二氯曱烷萃取三次。然后，合并的有机相用无水硫酸镁干燥，减压蒸馏。得到的残留物过硅胶柱层析(洗脱液二氯曱烷曱醇氨水=100:9:1),得到黄色液体的目标化合物(l.OOg,51%)。^-NMR(400MHz，CDC13)S4.57(br,1H,-NH-),3.11-3.09((!，/=6.2Hz,2H,-NH-CHr),2.71-2.67(t,/=6.9Hz,-)2)，1.78(br,2H,-NH2),1.51-1.44(m,4H,-NH-CHrQir,-Q^-CH2-N-(Bn)2),1.42(s，9H,-0(CH3)3),1.37-1.31(m，2H,-CH2-CH^-CH2-).实施例13:制备叔丁基(5-联节基氨基戊基)氨基曱酸盐(17)于室温下，往溶于二氯曱烷(100ml)的叔丁基(5-氨基戊基)氨基曱酸盐(16)(1.00g,4.94mmol)中緩慢加入节基溴(1.99ml,16.81mmol)和碳酸钠(2.24g，26,69mmol)。反应液40。C搅拌12h,用二氯甲烷萃取三次，然后，合并的有机相用无水硫酸镁干燥，减压蒸馏。得到的残留物过硅胶柱层析(洗脱液乙酸乙酯正己烷二氯曱烷=1:10:1),得到黄色液体的目标化合物(0.92g，49%)。丄HNMR(400MHz,CDC13)57.40-7.23(m,10H,aromatic),3.57(s,4H,-(Bn)2),3.09-3.07(m,2H,HN-CH2-)，2.44(t,/=7.05Hz,2H,-CH^-N-),1.58-1.51(m，2H,HN-CH2-CH2-)，1.48(s,9H,(CHa)3C-0)，1.41-1.27(m,4H,HN-CH2-CH2-CHrCHb-CH2-).实施例14:制备W-联节基W-曱基戊烷-l,5-二胺(18)于室温下，往溶于二氢呋喃(100ml)的叔丁基(5-联节基氨基戊基)氨基曱酸盐(17)(0.92g,2.41mmol)中加入氲化锂铝(0.91g,24.1mmol),反应液70。C搅拌12h。反应完成后，反应液冷却到室温，加入罗谢尔盐(酒石酸钾晶体)(6.79g,24.1mmol)。然后，反应液搅拌8h,经硅藻土过滤。滤液经二氯曱烷萃取三次，用无水硫酸镁干燥，减压蒸馏得到黄色液体的目标化合物(0.42g,60%)。^NMR(400MHz,CDC13)57.42-7.22(m,10H,aromatic),3.58(s,4H,-(Bn)2),2.52-2.44(m,5H,HN-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-),2.38(s，3H,-NH隱CHa),1.57-1.53(m,2H,HN-CH2-CHrCH2-)，1.42-1.31(m,4H，HN-CH2-CH2-CH2-CHrCH2-).13CNMR(400MHz,CDC13)S139.9,128.8,128.1，126.7,58.4，53.2,51.7,35.9,29.1,26.9,24.8.实施例15:制备3-(4-联苯基)-2-[AK5-联千基氨基戊基)-」V-曱胺]-4-曱氧基羰基曱基-3,4-二氢喹唑啉(19)往溶于曱苯(100ml)的曱基-3-[2-(4-联苯基亚曱氨基)苯基]丙烯酸酯(11)(1.12g，3.15mmol)中加入W7V-联节基-iV'-曱基戊烷-l,5-二胺(18)(1.87g，6.30mmol)。然后，反应液搅拌2h,二氯曱烷萃取三次。合并的有机相用无水硫酸镁干燥，减压蒸馏。得到的残留物过硅胶柱层析(洗脱液乙酸乙酯正己烷二氯曱烷=1:2:1)，得到黄色液体的目标化合物(2.56g，定量地得到)。iH-NMR(400MHz,CDC13)S7.51-7.01(m,23H,aromatic),5.14-5.10(dd,4.7and10.3Hz,1H,-CH2-CH-N-)，3.75-3.71(m,5H,-OQ^,"HCN-Qir),3.57-3.58(m,4H,-(Bn)2),3.27-2.52(m,7H,-CO-Qir,-NCHa,-CHrN(Bn)2)，2.41(m,2H,-CH2-CH2-(CH2)3-N(Bn)2),1.51-1.45(m,4H,-(CH2)3-CH2-Q^-N(Bn)2).实施例16:制备2-[iV-(5-,，,-二曱基氨基戊基)-iV-甲胺]-3-(4-联苯基)-4-曱氧基羰基甲基-3，4-二氢喹唑啉(20)(KYS05089)往溶于曱醇(20ml)的3-(4-联苯基)-2-[AK5-联苄基氨基戊基HV-曱胺]-4-曱氧基羰基曱基陽3，4-二氢喹唑啉(19)(430mg,0.33mmol)和福尔马林溶液(37。/。，0.3ml)中加入10%Pd(C)(110mg),反应液在氢气氛围中搅拌24h。反应完成后，反应液经硅藻土过滤，二氯曱烷萃取三次，用盐溶液洗涤。合并的有机相用无7K碌u酸镁干燥，减压蒸馏。得到的残留物过硅胶柱层析(洗脱液二氯曱烷甲醇氨水=100:9:1)，得到黄色液体的目标化合物(274mg，60%)。^-NMR(400MHz,CDC13)57.52-6.88(13H,m,Ph),5.11(1H,dd,/=10.4and4.5Hz,COCH2CH),3.75(3H,s,OCH3),3.50(1H,m,CH3N-Qi),3.15(1H,m,CH3N-CH)，2.88-2.82(4H,m,CH;-NandCOCH),2.51(1H，dd,J=15.5and4.6Hz,COCH),2.25-2.23(2H,m,-NCHa),2.20(6H,s，2xN-Qi;),1.52-1.45(4H,m,2xC^),1.24-1.23(2H,m,CH2).13CNMR(400MHz，CDC13)S171.9，153.4,145.4,144.2，140.3,136.8,128.8，128.4,127.9,127.1,126.8,125.4,124.8,122.9,122.6,122.1,61.2,59.7,49.5,45.2,43.8,41.8,35.3,27.1,27.0,24.7.HRMS(FAB+)calcdforC31H39N402:[M+H]+=499.3073,found=499.3060.实施例17:制备7^千基-3-(4-联苯基)-2-[^-(5-^',^'-联千基氨基戊基)-^曱胺]-3,4-二氢喹唑啉-4-乙酰胺基(22)往溶于二氢呋喃(50ml)和水(50ml)的3-(4-联苯基)-2-[,(5-联千基氨基戊基)-,曱胺]-4-甲氧基羰基曱基-3,4-二氢喹唑啉(19)(2.56g,3.93mmol)中加入LiOH/H20(0.825g,19.7mmol),反应液70°C搅拌2h。反应完成后，反应液冷却到室温，溶剂減压浓缩。然后，反应液用3NHC1酸化至pH3-4后用二氯曱烷萃取三次。合并的有机相用无水硫酸镁干燥，减压蒸馏，得到白色固体的化合物(21)。于0'C下，往溶于二氯曱烷/四氢呋喃(l:l，40ml)的化合物(21)和1羟基苯并三唑(HOBT)(l.OOg,7.41mmol)中滴加千胺(0.804ml，7.41mmol),反应液0。C搅拌lh。然后，加入l-[3-(二曱胺)丙基]-3-碳化二亚胺盐酸(EDC)(1.21g,6.30mmo1),室温搅拌12h。反应完成后，反应液减压蒸馏，溶于二氯曱烷。然后，反应液用0.5M盐酸溶液萃取两次，饱和碳酸氢钠溶液萃取两次，水萃取一次，用盐溶液洗涤。有机相用无水碌u酸镁干燥，减压蒸馏。得到的残留物过硅胶柱层析(洗脱液二氯曱烷甲醇=15:1),得到黄色液体的目标化合物(2.13g,79%)。iH-NMR(400MHz,CDC13)S7.63-7.05(m,28H,aromatic),5.42-5.38(dd,5.6and9.0Hz,1H,-CH2-CH-N-)，4.68-4,64(m，2H,加-丽-),3.62(s,4H,-N-fBn)，),2.95(br,1H,-CH^-CH-N-),2.74-2.69(m,4H,-3HCN-Ci^-，.C逸-N(Bn)2),2,46-2.41(m，3H,-NQij),1.57-U9(m，7H,-CHrCH-N-,-CH7-fCH2)rCH").实施例18:制备4-(N-千基乙酰胺基)-3-(4-联苯)-2-[N-(5-N，,N，-二曱基氨基戊基)-N-曱胺]-3,4-二氢会唑啉(23)(KYS05090)将溶于曱醇(IOml)的N-苄基-3-(4-联苯)-2-[N-(5-N，，N，-联苯基氨基戊基)-N-曱胺]-3,4-二氢喹唑啉-4-乙酰胺基(22)(530mg,0.73mmol)和福尔马林溶液(37%,0.27ml),加入至10%Pd(C)(120mg),反应液在氢气氛围中搅拌24h。反应完成后，反应液经石圭藻土过滤，二氯曱烷萃取三次，用盐溶液清洗。合并的有机相用无水硫酸镁干燥，减压蒸馏。得到的残留物通过硅胶柱层析(洗脱液二氯甲烷甲醇氨水=100:9:1)，得到黄色液体的目标化合物(260mg,62%)。iH-NMR(400MHz，CDC13)S7.72-6.98(18H,m,Ph),5.32(1H,dd，J"=9.1and4.6Hz,COCH2CH),4.50(2H,<!，/=5.8Hz,PhQ^-),3.50-3.20(2H,m,CH3N-CH2),2.71-2.33(4H,Qi5-NandCOCH),2.44(1H,dd,/=14.5and5.2Hz,COCg),2.30-2.29(2H,m,-NCHi),2.21(6H,s,2xN-CHj)，1.65-1.35(4H，m,2xCH2),1.25-1.10(2H,m,Qi).13CNMR(400MHz,CDC13)S170.1,153.9,145.3,143.8，140.4,138.4,136.7,128.8,128.6,128.1,128.0,127.8,127.4，127.1,127.0,126.2,125.1,122.8,122.4,122.2,61.2,59.7,49.5,45,2:43.8,41.8,35.3,27.1,27.0,24.7.MS(FAB+),m/z(relativeintensity,%)596.7([M+Na]+,100),574.7([M+H]+,30);MS(FAB-)，m/z(relativeintensity,%)572.7([M-H]+,100);H脂S(FAB+)calcdforC37H44N50:[M+H]+=574.3546，found=574.3516.实施例19:制备2-[AK5-氨基戊基)W-曱胺]-3-(4-联苯基)-4-曱氧基羰基曱基-3,4-二氢喹唑啉(24)(KYS05096)往溶于甲苯(20ml)的3-(4-联苯基)-2-[^-(5-联千基氨基戊基>^-甲胺]-4-曱氧基羰基甲基-3，4-二氢喹唑啉(19)(362mg,0.556mmol)中加入10%Pd(C)(883mg),反应液在氢气氛围中搅拌24h。反应完成后，反应液经硅藻土过滤，二氯甲烷萃耳又三次，用盐溶液洗涤。合并的有机相用无水硫酸镁干燥，减压蒸馏。得到的残留物通过硅胶柱层析(洗脱液二氯曱烷曱醇氨水=100:9:1),得到黄色液体的目标化合物(110mg，42%)。^-NMR(400MHz,CDC13)S7.52-6.88(m，13H，aromatic),5.13-5.09(dd,/=4.5and10.4Hz,IH,-CH2-Qi-N-),3.75(s,3H,-OC配，3,15(br,1H,-CHrCH-N-),2.88-2.82(m,4H,-3HCN-CH2-,-CH2-NH2),2.54-2.49(dd,/=3,1and15.5Hz，IH,-CHrCH-N陽)，2,25-2.23(m,3H，-NCH2),1.52-1.46(m，4H,-CH2-CHrCH2-Q^-CH2-NH2),1.26-1,23(m，2H,-(CH^-CHrCz-,).13C画R(400MHz,CDC13)S171.9,153.4，145.4,144.2,140.4,136.8,128.8,128.4,127.9,127.1,126.8，125.4,124.8，122.9，122.6,122.1，61.2,59.6,51.9,49.9,45.3，39.6,35.5，27.3,24.8.实施例20:制备4-(iV-千基乙酰胺)-3-(4-联苯基)-2-[iV-(5-氨基戊基)-iV-曱胺]-3,4-二氢喹唑啉(25)(KYS05097)往溶于曱苯(20ml)的iV-苄基-3-(4-联苯基)-2-[AH5-iV',jV'-联苄基氨基戊基)-,曱胺]-3,4-二氢喹唑啉-4-乙酰胺基(22)(1.01mmol)中加入10%Pd(C)(183mg),反应液在氢气氛围中搅拌24h。反应完成后，反应液经硅藻土过滤，二氯曱烷萃取三次，用盐溶液洗涤。合并的有机相用无水硫酸镁干燥，减压蒸馏。得到的残留物过硅胶柱层析(洗脱液二氯曱烷曱醇氨水=100:9:1),得到黄色液体的目标化合物(304mg,55%)。!H-NMR(400MHz,CDC13)57.72-6.98(m,18H,aromatic),5.34-5.30(dd，J=4.6and9.1Hz,1H，-CH2-CH-N-)，4.51-4.49(d,/=5.8Hz,2H，ln-NH陽)，2.72-2.66(m，4H，-3HCN-CHr,-CH2-NH2),2.47-2.42((!(!,/=5.1and14.5Hz,IH,-Q^-CH-N-),2.30-2.28(m,3H，-NCHj),1.47-1.24(m,7H,-Q^-CH-N-,-CH7-(CH2VCH").13CNMR(400MHz,CDC13)S170.1，153.9,145.3，143.8，140.4,138.4,136.7，128.8,128.6,128.1,128.0,127.8,127.4,127.1，127.0,126.2，125.1,122.8,122.4,122.2，61.2,60.0,49.5,45.2，43.8,41.8,35.3,27.1,24.7.上述实施例制备的本发明代表化合物的化学结构和生化特性总结见表1。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>生物活性测试本发明化合物的T-型钙离子通道阻断效应是通过电生理学全细胞膜片钳方法来测定的，该方法利用哺乳动物HEK293细胞系，该细胞系选择性表达T-型钩离子通道编码基因中的a1G,其中a1G主要在神经元(来源于人类肾脏癌细胞)中表达，这在韩国专利No.0610731和Monteil,A"etal.,JOze附.2000,275,6090-6100中都有说明。本发明化合物的细胞毒性通过MTT[3-(4,5-二曱基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐]试验法进行测定。本发明化合物对癌细胞系的生长抑制效应通过SRB试验法(磺酰罗丹明B)进行测定，这种方法在Skehan,P.etal.,丄扁C羅er/"W.1990,82,1107-1112中有说明。试验例l:培养HEK293细胞，利用电生理学方法测定T-型钙离子通道活性的方法将HEK293细胞置于添加了10。/。胎牛血清(FBS)和1。/。青霉素/链霉素(v/v)的DMEM培养基中，36.5°〇湿度培养箱培养(95%空气-5%<:02)。每3-4天更换一次新鲜培养液，培养的细胞每周进行一次次代培养。此时，培养液用G-418(0.5mg/mL)溶液处理，这样只有表达aujT-型钙离子通道的HEK293细胞能够生长。每次次代培养时，用于T-型钙离子通道活性测试的细胞在聚L-赖氨酸(0.5mg/mL)涂抹的覆盖薄片上培养，培养2-7天后记录钙离子通道活性。单个细胞水平的T-型钙离子通道的电流根据电生理学全细胞膜片钳方法来进行测定，该方法利用EPC-9放大器(HEKA,Germany)。此时，加入胞外溶液[NaCl140mM,CaCl22mM,HEPES(4-幾乙基哌嗪乙磺酸)10mM(pH7.4)]和胞内溶液[KCl130mM,HEPESlOmM,EGTA(乙二醇二乙醚二胺四乙酸)11mM，andMgATP5mM(pH7.4)〗。由T-型钩离子通道激活(通过刺入具有3-4MQ电阻，并充满着进入单一细胞的胞内溶液，且固定膜电位为-100mV,每10s在-30mV(为期50ms)去极化的玻璃微电极，以使细胞转化为全细胞记录模式，而引起T型钙离子通道激活)而引起的内部电流根据在低电流激活的T-型钙离子通道协议进行测定。试验例2:利用MTT试验分析T-型钙离子通道阻断剂的细胞毒性为了分析本发明化合物在HEK293细胞内的细胞毒性，依据以下步骤进行MTT[3-(4，5-二曱基遙唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐]试验。分别用浓度为10-100pM的各种化合物处理培养的HEK293细胞后，用0.1。/。DMSO溶液作为负调控，用诱导细胞毒性的H202(125^M)作为正调控来处理HEK293细胞。药物处理6h后，用溶解于PBS(磷酸盐緩沖液)的50|xLMTT(lmg/mL)处理细胞4h。然后，离心除去悬浮液，得到的有色甲晶体溶解于100(xLDMSO中。采用自动分光光度酶标仪在560nrn条件下测定溶液的吸光率。结果表明，本发明化合物在100nM浓度下没有任何的毒性。试验例3:利用SRB试验法分析对癌细胞系的生长抑制利用SRB(磺酰罗丹明B)试验法对本发明化合物对五种癌细胞系的生长抑制做了评估，包括人类肺癌细胞(A-549)、人类前列腺癌(DU145)、人类结肠癌(HT-29)、人类恶性黑素瘤(SK-MEL-2)和人类卵巢癌(SK-OV-3)。所有的细胞系置于添加有10。/。(v/v)热失活胎牛血清(FBS)的RPMI1640(GibcoBRL)培养基中，于37°C,5%C02湿度培养。将细胞接种于96孔平板上。将不同浓度的化合物加入各孔至三分之一孔处，然后在37°C,5。/。C02培养72h,以使加入药物的时候细胞处于指数生长期。培养结束后，往各孔中温和加入100pL福尔马林溶液。将微板置于室温30min,用自来水清洗5次。往各孔中加入100pL0.4%SRB溶液，室温下放置30min。去除SRB,在^反风干前用1%醋酸清洗5次。去除的SRB用100pL10mM的不含緩沖液的Tris-base溶液(Sigma)溶解，将板置于平板震荡器上至少振荡10min。利用酶标仪(Versamax,MolecularDevices)在520nm波长处检测光密度，生长抑制浓度用Gl50来表示。通过以上试验例分析了T-型4丐离子通道阻断效应和对癌细胞系的生长抑制效应，总结结果见表2。<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>权利要求1.具有式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于式(I)为其中R1为NR4(CH2)nNR5R6，其中R4为H或C1-C5烷基，n为4，5或6，R5和R6分别选自H或C1-C5烷基，或含有氮原子的4-6元杂环；R2为4-联苯基；R3为苄氨基，4-氨基苄氨基或4-氟苯砜氨基苄氨基。2.根据权利要求1所述的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于FU为C广C5烷基；n为5;R5、同为H或d-Cs烷基，或含有氮原子的吡略烷或喊咬。3.根据权利要求1所述的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于R4为C广Cs烷基；n为5;R5、同为C广C5烷基。4.根据权利要求1所述的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于R4为CrCs烷基；n为5;R5、&为含有氮原子的吡咯烷。5.根据权利要求1所述的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述化合物为4-(A/"-千基乙酰胺)-3-(4-联苯基)-2-[^-(5-吡咯烷-1-戊基)-TV-甲胺]-3，4-二氢喹唑啉。6.根据权利要求1所述的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述化合物为4-(7^千基乙酰胺)-3-(4-联苯基)-2-[^-(5-AT，A^-二甲氨基戊基)_,曱胺]_3,4-二氬p奎唑啉。7.根据权利要求1所述的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述化合物为4-(iV-节基乙酰胺)-3-(4-联苯基)-2-[AK5-氨基戊基)-iV-曱胺]-3,4-二氬p奎唑啉。8.—种药物组合物，由权利要求1-7任一项所述的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体组成。9.用于治疗癌症的如权利要求8所述的药物组合物。10.用于治疗结肠癌的如4又利要求8所述的药物组合物。11.用于预防或治疗癫痫症、高血压、心室肥大、疼痛或心绞痛的如权利要求8所述的药物组合物。全文摘要本发明公开了3，4-二氢喹唑啉衍生物，制备3，4-二氢喹唑啉衍生物的方法以及包括3，4-二氢喹唑啉衍生物的药物组合物。本发明的3，4-二氢喹唑啉衍生物具有良好的T-型钙离子通道阻断效应和抗癌活性。文档编号C07D239/00GK101679312SQ200880015169公开日2010年3月24日申请日期2008年5月6日优先权日2007年5月8日发明者吴泉林,朱东骏,李在烈,金永德申请人:同祐Syntech株式会社