专利名称：一种古伦宾的提取方法
技术领域：
本发明属于中药有效成分提取分离技术，涉及一种古伦宾的提取方法。
背景技术：
金果榄为防己科植物青牛胆Tinospara sagittata(Oliv. )Gagncp.或金果榄 Tinosporacapillipes Gagnep.的干燥块根。青牛胆分布于陕西、长江流域各省至两广、西南各省区。金果榄分布于湖南、湖北、广西、广东、四川、贵州、云南等省区。块根含二萜类苦味素古伦宾(青牛胆苦素)、掌叶防己碱，又含呋喃二萜苷——金果榄苷(异非洲防己苦素 4-β -D-葡萄糖苷)。05版《药典》是以盐酸巴马汀为质量指标，而盐酸巴马汀在金果榄中的含量较少，且不是金果榄的特征性成分，因此2010年版药典将含量较高的古伦宾作为金果榄的指标性成分。古伦宾(Columbin)，又名青牛胆苦素、咖伦宾、黄藤内酯，是从金果榄中分离得到的二萜类成分。分子式C2tlH22O6，分子量358. 38，极苦的针状结晶(甲醇)，mp. 195°C。几乎不溶于水，Ig溶于30ml丙酮、50ml乙酸乙酯、75ml甲醇,溶于氯仿和二氯甲烧。药理研究表明古伦宾具有显著的抗炎活性，并且呈现量效关系能显著的通过抑制结肠囊泡中的细胞再生来抑制氧化偶氮甲烷诱导的大鼠结肠癌；能够抑制眼镜蛇毒酸性磷脂酶A2催化的血红细胞壳的水解作用；能够抑制布氏锥虫血流中胆固醇的摄入；能够影响肝药代谢酶来调节由环己巴比妥钠或乌拉坦和α-氯醛糖混合物诱导的大鼠睡眠时间。口服古伦宾能够剂量依赖的降低肝_7-alkoxycoumarin-0_dealkylas (ACD) ,ACD反映了 P450的活性。任平等还通过实验发现咖伦宾具有酶促动力学代谢特性。目前，古伦宾的提取技术主要是乙醚索氏提取，该方法所得产品纯度低，溶剂毒性较大。李泓波采用甲醇回流提取、溶剂萃取， 反复常压、加压、正相及反相硅胶柱层析分离；史琪荣采用95%乙醇回流提取、氯仿和正丁醇萃取、反复娃胶柱层析(干法)、0DS-C18柱层析、半制备液相、PharmadexLH-20等色谱技术、重结晶等纯化方法得到古伦宾。上述两种工艺存在提取率低，工艺复杂、有机溶剂用量大、环境污染严重、生产周期短等不足。
发明内容
本发明的目的在于提供一种古伦宾的提取方法，采用超临界CO2提取、大孔树脂柱层析、重结晶等步骤，从金果榄中提取分离纯化得到较高纯度的古伦宾，该方法提取的古伦宾纯度高、环境污染少、得率高、成本低，可扩大规模化生产。本发明是通过以下技术方案实现的一种古伦宾的提取方法，其特征在于将金果榄块根粉碎成粗粉，投入到超临界CO2 萃取釜中，再加入适量有机溶剂作为夹带剂，通入CO2作为提取介质，在萃取压力15-30MPa， 温度30-45°C条件下进行萃取，经1-4小时萃取后解析，解析压力5-10MPa，温度50-60°C， 收集萃取物，将萃取物加入到大孔吸附树脂柱中，流速I. 0-2. OBV/h，先用2-5倍柱体积的水洗,弃去水洗液,再用3-6倍柱体积的20-30%乙醇洗脱，最后用40-100%乙醇洗脱，收集40-100%乙醇洗脱液，浓缩至小体积，结晶，乙醇重结晶。所述超临界0)2萃取步骤中夹带剂可选体积百分比为70-100%的丙酮、甲醇溶液， 加入量为药材量的5-20%。所述超临界CO2萃取步骤中CO2流速为15_30L/h。所述大孔吸附树脂可选ADS-7、ADS-8、D101、AB-8、HPD100中的一种。本发明与现有技术比较，提取效率高、产品纯度高、对环境污染较少，制备量大，可扩大规模化生产。
具体实施例方式下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明，下列实施例旨在举例描述本发明，而不是以任何方式限制本发明。实施例I :将金果榄块根药材粉碎成20目粗粉，取2kg投入超临界萃取罐内，加入体积百分比为80%的丙酮溶液作为夹带剂，加入量为O. 12kg(原料重量的6% );在萃取压力18. 5MPa、萃取温度32°C、CO2流量18L/h的条件下萃取I小时；控制解析罐的压力为
5.4MPa，温度56°C，分离得萃取物；用I倍量60°C热水溶解萃取物，上ADS-7大孔吸附树脂柱,吸附流速I. 0-2. OBV/h,先用2倍柱体积的水洗，弃去水洗液；再用4倍柱体积50%乙醇洗脱，最后用90%乙醇洗脱，收集90%乙醇洗脱液，将上述洗脱液减压浓缩至小体积，结晶，再用乙醇重结晶2次，冷冻干燥得产品20. 8g。经HPLC分析，古伦宾纯度为98. 6%。实施例2 将金果榄块根药材粉碎成20目粗粉，取5kg投入超临界萃取罐内，加入体积百分比为90%的甲醇溶液作为夹带剂，加入量为O. 12kg(原料重量的10% );在萃取压力22. 3MPa、萃取温度45°C、CO2流量15L/h的条件下萃取3小时控制解析罐的压力为
8.7MPa，温度50°C，分离得萃取物；用I倍量60°C热水溶解萃取物，上DlOl大孔吸附树脂柱,吸附流速I. 0-2. OBV/h,先用3倍柱体积的水洗，弃去水洗液；再用6倍柱体积50%乙醇洗脱，最后用90%乙醇洗脱，收集90 %乙醇洗脱液，将上述洗脱液减压浓缩至小体积，结晶，再用乙醇重结晶2次，冷冻干燥得产品51. 2g。经HPLC分析，古伦宾纯度为98. 0%。实施例3:将金果榄块根药材粉碎成20目粗粉，取5kg投入超临界萃取罐内，加入体积百分比100%的丙酮溶液作为夹带剂，加入量为O. 12kg (原料重量的12%);在萃取压力27MPa、 萃取温度35°C、CO2流量23L/h的条件下萃取2小时；控制解析罐的压力为6. 3MPa，温度 52°C，分离得萃取物用I倍量60°C热水溶解萃取物，上AB-8大孔吸附树脂柱，吸附流速
I.0-2. OBV/h,先用5倍柱体积的水洗，弃去水洗液；再用3倍柱体积50%乙醇洗脱，最后用 90%乙醇洗脱，收集90%乙醇洗脱液，将上述洗脱液减压浓缩至小体积，结晶，再用乙醇重结晶2次，冷冻干燥得产品48. 6g。经HPLC分析，古伦宾纯度为98. 4%。实施例4:将金果榄块根药材粉碎成20目粗粉，取20kg投入超临界萃取罐内，加入体积百分比70%的丙酮溶液作为夹带剂，加入量为O. 12kg(原料重量的18% );在萃取压力15MPa、 萃取温度43°C、CO2流量27L/h的条件下萃取4小时控制解析罐的压力为5. OMPa，温度60°C，分离得萃取物；用I倍量60°C热水溶解萃取物，上ADS-8大孔吸附树脂柱，吸附流速
I.0-2. OBV/h,先用6倍柱体积的水洗，弃去水洗液；再用5倍柱体积50%乙醇洗脱，最后用 90 %乙醇洗脱，收集90%乙醇洗脱液，将上述洗脱液减压浓缩至小体积，结晶，再用乙醇重结晶2次，冷冻干燥得产品205g。经HPLC分析，古伦宾纯度为99. I %。实施例5 将金果榄块根药材粉碎成20目粗粉，取20kg投入超临界萃取罐内，加入体积百分比80%的甲醇溶液作为夹带剂，加入量为O. 12kg(原料重量的20% );在萃取压力 30. 5MPa、萃取温度381、0)2流量20L/h的条件下萃取3小时；控制解析罐的压力为lOMPa， 温度54°C，分离得萃取物用I倍量60°C热水溶解萃取物，上DlOl大孔吸附树脂柱，吸附流速I. 0-2. OBV/h,先用3倍柱体积的水洗，弃去水洗液；再用4倍柱体积50%乙醇洗脱，最后用90 %乙醇洗脱，收集90%乙醇洗脱液，将上述洗脱液减压浓缩至小体积，结晶，再用乙醇重结晶2次，冷冻干燥得产品198. 5g。经HPLC分析，古伦宾纯度为98. 8%。
权利要求
1.一种古伦宾的提取方法，其特征在于将金果榄块根粉碎成粗粉，投入到超临界CO2萃取釜中，再加入适量有机溶剂作为夹带剂，通入CO2作为提取介质，在萃取压力15-30MPa， 温度30-45°C条件下进行萃取，经1-4小时萃取后解析，解析压力5-10MPa，温度50-60°C， 收集萃取物，将萃取物加入到大孔吸附树脂柱中，流速I. 0-2. OBV/h，先用2-5倍柱体积的水洗,弃去水洗液,再用3-6倍柱体积的20-30%乙醇洗脱，最后用40-100%乙醇洗脱，收集 40-100%乙醇洗脱液，浓缩至小体积，结晶，乙醇重结晶。
2.根据权利要求I所述古伦宾的提取方法，其特征在于，所述超临界CO2萃取步骤中夹带剂可选体积百分比为70-100%的丙酮、甲醇、乙醇溶液，加入量为药材量的5-20%。
3.根据权利要求I所述古伦宾的提取方法，其特征在于，所述超临界CO2萃取步骤中 CO2 流速为 15-30L/h。
4.根据权利要求I所述古伦宾的提取方法，其特征在于，所述大孔吸附树脂可选 ADS-7、ADS-8、D101、AB-8、HPD100 中的一种。
全文摘要
本发明公开一种古伦宾的提取方法。本发明包括应用超临界二氧化碳萃取和大孔树脂分离纯化联合技术，以丙酮、乙醇或甲醇为夹带剂，CO2为介质从金果榄中提取有效成分古伦宾；所得萃取物再通过大孔树脂柱层析及重结晶等步骤获得高纯度提取物。与现有的有机溶剂提取方法相比，具有工艺简单、时间短、纯度高、对环境污染相对较轻等优点。
文档编号C07D493/18GK102603764SQ201110026209
公开日2012年7月25日 申请日期2011年1月25日 优先权日2011年1月25日
发明者刘东锋, 李法庆 申请人:苏州宝泽堂医药科技有限公司