专利名称：一种分离纯化紫杉醇和紫杉烷的方法
技术领域：
本发明涉及一种分离纯化紫杉醇和紫杉烷的方法，适用于制药厂进行紫杉醇和紫杉完的工业化生产。
自一九九二年美国EDA批准抗癌新药一紫杉醇用于转移性卵巢癌、乳腺癌的治疗至今，紫杉醇生产的主要技术问题是紫杉醇的分离纯化。因化学结构相近和层析特性相近的Cephalomannine的存在，使得紫杉醇的纯度难以达到98％以上，若要达到此标准，需要经过复杂的分离过程，而使成本难以降低。目前生产采用于柱层析、常压层析和低压层析等正相载体，以昂贵的有机溶剂如已烷、氯仿等进行洗脱。国内大多数厂家采用了如下过程分离紫杉醇，植物提取物经脱脂、萃取，然后经过3-4步的系列层析，还很难将紫杉醇和Cephalomannine分离，生产量难以提高。有的采用高效液相层析或高速逆流色谱分离纯化紫杉醇但分离量小，成本较高。国外有人采用了萃取——硅胶层析——高速逆流层析等步骤纯化紫杉醇也存在同样问题，即分离下完全。Murray CK等在美国专利5364747、1994-11-15中报道以各种方法(OsO4、O3、Br2等)选择性地氧化Cephalomannine及其它类似物，控制反应条件，使紫杉醇下被氧化，然后经过沉淀或萃取或通过硅胶层析，所得到的紫杉醇纯度可达97.5％，美国Hauser公司采用了动态液固萃取及液液聚流等技术使紫杉醇的年生产量达数百公斤以上，但成本仍然较高，Nair在美国专利5279949，1994-01-18中报道，曾用了活性炭进行脱色、去杂，然后再进行常规层析，该项工作没有将活性炭进一步作为分离载体对紫杉烷类物质进行分离，因而没有解决紫杉醇生产中的关键。在以上这些方法中，存在如下问题1、采用正相载体分离紫杉醇，柱效不高，而且溶剂系统复杂昂贵；2、采用反相载体分离，可选择的载体种类很多，但成本较贵。作梯度洗脱时耐溶剂稳定性较差，分离量小；3、通过化学反应后再分离纯化紫杉醇，小试效果好，但增加了生产工序，在大规模生产时，反应条件并不容易控制，而且其它紫杉烷的回收又需要加一道工序。
本发明的目的是提供了一种分离纯化紫杉醇和紫杉烷的方法，采用活性炭对紫杉醇和紫杉烷进行分离，工艺简单，成本低，分离效率高。
为解决上述问题，本发明采用反相载体性质的活性炭进行紫杉醇和Cephalomannine的分离，在完成了载体特性、粒度、溶剂配比、梯度方式、溶剂流速、柱效、柱压及负载量等条件的试验研究的基础上，采用如下技术方案含紫杉烷类化合物的浸膏，以1∶3的比例拌入硅藻土或氧化铝，通风干燥成粉末状，装柱，以3倍体积的石油醚或氯仿(9∶1)洗脱， 再以石油醚(30-60℃)氯仿(1∶1.2)洗脱至流出液无色为止，其特征是将浓缩物拌入活性炭，通风干燥，然后将80-160目的活性炭以丙酮浸润后装柱，再用蒸馏水洗出丙酮，将已载样的活性炭置于柱的上层。以丙酮和水作梯度洗脱，可有效地将Cephalomannine和紫杉醇及其它紫、杉烷类化合物分离，用此方法可使紫杉醇纯度达98％以上，最大分离量为1g/cm2(柱截面积)。
实施例采用红豆杉植物浸膏50-100kg，加入50-100L丙酮溶解成可流动浸膏，再用150kg硅藻土或氧化铝吸附，然后通风或减压干燥成粉末状，装入不锈钢柱，用石油醚和氯仿(9∶1)350-450L洗脱，再用石油醚和氯仿(1∶1.2)洗脱至流出液无色为止(500-750L)，浓缩、回收溶剂。再将浓缩物以80-160目活性炭20kg吸附，通风干燥，然后用50kg80-160目之活性炭以丙酮为溶剂装柱，再用蒸馏水洗出丙酮。将已载样的活性炭置于枉的上层。以丙酮和水20-100％梯度洗脱(100ml/min/2kg)，然后监测，收集紫杉醇部分。并浓缩结晶，再以氯仿，丙酮交替洗柱子，再次备用。
本发明与现有技术相比，具有以下优点和效果1、采用活性炭作为紫杉醇和紫杉烷的分离载体，不仅分离量大，而且纯度高；2、建立的分离柱可反复使用，具有良好的重复性；3、成本低，成本低于40％以上；4、工艺简便，操作方便，整个纯化过程仅需2-3步，使生产工序减少2-4步；5、提高了紫杉醇和Cephalomannine的分离效果；6、用同样规模的设施采用本法可使紫杉醇分离量比用其它方法高80-100倍之多。并具有广泛的社会和经济效益。
权利要求
1.一种分离纯化紫杉醇和紫杉烷的方法，采用红豆杉植物浸膏加入丙酮溶解成可流动浸膏，硅藻土或氧化铝吸附，通风干燥成粉末状，装入不锈钢柱，以石油醚和氯仿洗脱，浓缩、回收溶剂，其特征是将浓缩物拌入活性炭，通风干燥，然后将80-160目之活性炭以丙酮为溶剂装柱，再用蒸馏水洗出丙酮，将已载样的活性炭量于柱的上层，用丙酮和水洗脱。
2.根据权利要求1所述的一种分离纯化紫杉醇和紫杉烷的方法，其特征是丙酮和水为20-100％作梯度洗脱。
全文摘要
本发明公开了一种分离纯化紫杉醇和紫杉烷的方法,采用红豆杉植物浸膏加入丙酮溶解成可流动浸膏,硅藻土或氧化铝吸附,通风干燥成粉末状,装入不锈钢柱,以石油醚和氯仿洗脱,浓缩回收溶剂,其特征是将浓缩物拌入活性炭,通风干燥,将80—160目之活性炭以丙酮为溶剂装柱,再用蒸馏水洗出丙酮,将已载样的活性炭置于柱的上层,用丙酮和水洗脱。本发明工艺简便,操作方便,分离量大,纯度高,具有广泛的社会和经济效果。
文档编号C07D305/14GK1207389SQ9710919
公开日1999年2月10日 申请日期1997年8月1日 优先权日1997年8月1日
发明者卢大炎, 叶晚成, 王爱芬, 侯云甫 申请人:中国科学院武汉植物研究所