一种功能化纳米基因导入材料及其制备方法和应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及基因导入材料【技术领域】，具体涉及一种功能化纳米基因导入材料及其制备方法和应用。一种功能化纳米基因导入材料的制备方法，包括：步骤一，二氧化钼颗粒的制备；步骤二，氨基硅烷修饰二氧化钼；步骤三，包裹聚乙二醇；步骤四，叶酸修饰，得到纳米MoO2-PEG-FA基因导入材料。本发明制得的纳米MoO2-PEG-FA基因导入材料为一种平均直径为100nm左右的纳米球形材料，该纳米MoO2-PEG-FA基因导入材料与绿色荧光蛋白质粒基因pGFP结合，用于转染，具有转染效率高、细胞相容性好、细胞生存率高的优点；在人乳腺癌细胞中，该纳米MoO2-PEG-FA和pEGFP-C1的联合体的转染效率达到40%左右。
【专利说明】
【技术领域】
[0001] 本发明涉及基因导入材料【技术领域】，具体涉及一种功能化纳米基因导入材料及其 制备方法和应用。 一种功能化纳米基因导入材料及其制备方法和应用
【背景技术】
[0002] 基因导入方法可以分为两类：第一类是病毒型基因导入方法，是以逆转录病毒、腺 病毒、腺相关病毒为载体；第二类是非病毒型基因导入方法，如显微注射、基因枪、磷酸钙共 沉淀、阳离子脂质体法、以及利用新兴的纳米基因导入材料进行基因转染。
[0003] 病毒型基因导入方法存在许多严重的不足，例如病毒转染时有可能激活原癌基 因。因此，非病毒型基因导入方法是目前的研究热点，但是，上述所述的非病毒型基因导入 方法均存在不足：显微注射一次只能处理一个细胞，其转染效率非常低；基因枪的穿透力 十分有限；磷酸钙共沉淀法的转染效率受温度、浓度、操作环境等众多因素影响，转染结果 很不稳定；阳离子脂质体法虽然表现出良好的转染效率，但是阳离子脂质体因毒性高，使得 阳离子脂质体法的应用受到了限制；现有技术中的纳米基因导入材料存在生产成本高、制 备用原料不易得、难以普及推广应用的缺点。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的之一在于针对现有技术的不足，提供一种功能化纳米基因导入材料 的制备方法。
[0005] 本发明的目的之二在于针对现有技术的不足，提供一种功能化纳米基因导入材 料。
[0006] 本发明的目的之三在于针对现有技术的不足，提供一种功能化纳米基因导入材料 的应用。
[0007] 为了实现上述目的之一，本发明采用如下技术方案： 一种功能化纳米基因导入材料的制备方法，它包括以下步骤： 步骤一，二氧化钥颗粒的制备：将钥、三氧化钥和氯化铵进行水热反应制得二氧化钥颗 粒； 步骤二，氨基硅烷修饰二氧化钥：将步骤一制得的二氧化钥颗粒与3-氨丙基三乙氧基 硅烷在乙醇中进行回流反应一定时间，并离心水洗后，得到硅烷修饰物； 步骤三，包裹聚乙二醇：将预先制得的聚乙二醇-0TS和步骤二制得的硅烷修饰物加入 到乙醇中，然后搅拌一定时间后，加入氢氧化铵，并进行离心水洗，得到固体物； 步骤四，叶酸修饰：将叶酸加入到磷酸缓冲液中，并加入1- (3-二甲基氨基丙基）-3-乙 基碳二亚胺和N-羟基丁二酰亚胺，然后加入步骤三中得到的固体物，然后搅拌一定时间 后，离心并用乙醇洗漆，然后再用水洗漆，得到纳米M〇0 2-PEG-FA基因导入材料。
[0008] 上述技术方案中，步骤一中，所述钥、所述三氧化钥和所述氯化铵的摩尔比为 0· 5?1 :1?3 :4?6。
[0009] 上述技术方案中，步骤一中，所述水热反应的温度为150°C ~170°C，所述水热反应 的时间为22小时~26小时；所述水热反应的压力为600KPa~700KPa。
[0010] 上述技术方案中，步骤二中，所述二氧化钥颗粒和所述3-氨丙基三乙氧基硅烷 的摩尔比为0. 5~2 :4~10 ;所述乙醇的用量为，使所述二氧化钥颗粒的质量-体积浓度为 0· 8g/L?1. 2g/L。
[0011] 上述技术方案中，步骤二中，所述回流反应的温度为70°C ~90°C，所述回流反应的 时间为2小时~4小时。
[0012] 上述技术方案中，步骤三中，所述聚乙二醇-0TS的制备方法为：将4-甲苯磺酰氯 分散于甲苯中，并加入三乙胺和聚乙二醇，然后在室温下搅拌22小时?24小时，然后利用去 氧水洗涤三乙胺后，进行减压蒸馏除去甲苯，得到蒸馏物，并利用己烷洗涤蒸馏物后，继续 蒸馏得到聚乙二醇-0TS。
[0013] 上述技术方案中，步骤三中，所述聚乙二醇-0TS、所述硅烷修饰物和所述氢氧化铵 的质量比为8?12 :0. 5?2 :6(Γ80 ;步骤三中乙醇的用量为，使所述硅烷修饰物的质量-体积 浓度为〇. 8g/L~l. 2g/L ;所述搅拌时间为10小时~14小时。
[0014] 上述技术方案中，步骤四中，所述叶酸、所述1-(3-二甲基氨基丙基）-3-乙基碳二 亚胺和所述N-羟基丁二酰亚胺的摩尔比为0. 1~0. 3 :0. 8~1. 5 :1~4 ;所述步骤四中的搅拌 时间为10小时~14小时。
[0015] 为了实现上述目的之二，本发明采用如下技术方案： 一种功能化纳米基因导入材料，运用上述所述的一种功能化纳米基因导入材料的制备 方法所制得的纳米MO02-PEG-FA基因导入材料，所述纳米MO02-PEG-FA基因导入材料为一 种平均直径为100nm左右的纳米球形材料。
[0016] 为了实现上述目的之三，本发明采用如下技术方案： 上述所述的一种功能化纳米基因导入材料的制备方法所制得的纳米基因导入材料用 于制作抗肿瘤药物的应用。
[0017] 本发明与现有技术相比较，有益效果在于： 本发明提供的一种功能化纳米基因导入材料的制备方法所制得的纳米MO02-PEG-FA 基因导入材料为一种平均直径为l〇〇nm左右的纳米球形材料，且该纳米球形材料的粒径 能够通过反应时间的控制进而控制纳米颗粒的粒径，从而扩大了粒径的选择范围。该纳 米M〇02-PEG-FA基因导入材料能和绿色荧光蛋白质粒基因 pGFP以非共价方式结合，形成 无机纳米基因导入系统，用于基因转染。该纳米M〇02-PEG-FA基因导入材料与绿色荧光 蛋白质粒基因 PGFP结合后再与DNA中的亚铁离子的正电性根发生作用，能够达到稳定的 转染效率，并且能够降低高浓度亚铁离子可能导致的活性，从而使得本发明所制得的纳米 M〇02-PEG-FA基因导入材料能够在人体内得到进一步应用。与现有技术相比，本发明所述制 得的纳米M〇02-PEG-FA基因导入材料具有以下优点 ： (1) 具有较高的转染效率，在人乳腺癌细胞中可以达到40%左右； (2) 低毒性，因 M〇02-PEG-FA基因导入材料具有良好的生物相容性，细胞生存率很高； (3) 该纳米M〇02-PEG-FA基因导入材料的分散性良好，符合对转染的要求； (4) 制备成本极低，因该纳米M〇02-PEG-FA基因导入材料提取的主要活性成分--多酚 类化合物的价格低廉；且反应用试剂都是常见易得的廉价试剂； (5) 材料制备反应简单，容易操作，可重复性好； (6) 应用前景良好，可以应用于制备抗肿瘤药物。
[0018] 本发明提供的一种功能化纳米基因导入材料的制备方法，还具有以下优点：步骤 一中制得的二氧化钥颗粒与商业的二氧化钥相比，水溶性大大增加，光热性能也加强。
【专利附图】
【附图说明】
[0019] 图1是本发明的一种功能化纳米基因导入材料的制备方法的实施例1所制得的纳 米M〇02-PEG-FA基因导入材料的扫描电镜图。
[0020] 图2是本发明的纳米M〇02-PEG-FA基因导入材料在转染实验中纳米M〇02-PEG-FA 和pEGFP-Cl的联合体在转染后的倒置荧光显微镜下的荧光图。
[0021] 图3是本发明的纳米M〇02-PEG-FA基因导入材料在转染实验中纳米M〇02-PEG-FA 和pEGFP-Cl的联合体在转染后的细胞存活率图。
[0022] 图4是本发明的纳米M〇02-PEG-FA基因导入材料在转染实验中纳米M〇02-PEG-FA 和pEGFP-Cl的联合体的转染效率图。
[0023] 其中，在图3至图4中，cell viability (%)代表细胞存活率，transfection efficiency(%)代表转染效率。
【具体实施方式】
[0024] 下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
[0025] 实施例1。
[0026] 一种功能化纳米基因导入材料的制备方法，它包括以下步骤： 步骤一，二氧化钥颗粒的制备：将lmmol钥、2mmol三氧化钥和250mg氯化铵进行水热 反应制得二氧化钥颗粒；其中，水热反应是以双蒸水作为溶剂，本实施例中，采用50mL的反 应釜作为反应容器，并加入40mL的双蒸水作为溶剂。
[0027] 其中，水热反应的温度为160°C，水热反应的时间为24小时；水热反应的压力为 618KPa。
[0028] 步骤二，氨基硅烷修饰二氧化钥：将步骤一制得的50mg二氧化钥颗粒与5mL3_氨 丙基三乙氧基硅烷在乙醇中进行回流反应3小时，并离心水洗后，得到硅烷修饰物。
[0029] 其中，回流反应的温度为80°C ;步骤二中乙醇的用量为，使二氧化钥颗粒的质 量-体积浓度为lg/L。
[0030] 步骤三，包裹聚乙二醇：将预先制得的0. 5g聚乙二醇-0TS和步骤二制得的硅烷修 饰物加入到乙醇中，然后搅拌12小时后，加入4mL氢氧化铵，并进行离心水洗，得到固体物。
[0031] 其中，聚乙二醇-0TS的制备方法为：将4-甲苯磺酰氯分散于甲苯中，并加入三乙 胺和聚乙二醇，然后在室温下搅拌24小时，然后利用去氧水洗涤三乙胺后，进行减压蒸馏 除去甲苯，得到蒸馏物，并利用己烷洗涤蒸馏物后，继续蒸馏得到聚乙二醇-0TS。
[0032] 其中，聚乙二醇-0TS、硅烷修饰物和氢氧化铵的质量比为10 :1 :70。
[0033] 其中，步骤三中乙醇的用量为，使硅烷修饰物的质量-体积浓度为1. Og/L。
[0034] 步骤四，叶酸修饰：将90mg叶酸加入到60mL磷酸缓冲液中，并加入12mL0. lmol/L 的1- (3-二甲基氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺和24mL0. lmol/L的N-羟基丁二酰亚胺，然后 加入步骤三中得到的固体物，然后搅拌12小时后，离心并用乙醇洗涤，然后再用水洗涤，得 到纳米M〇02-PEG-FA基因导入材料。
[0035] 实施例2。
[0036] -种功能化纳米基因导入材料的制备方法，它包括以下步骤： 步骤一，二氧化钥颗粒的制备：将钥、三氧化钥和氯化铵进行水热反应制得二氧化钥颗 粒； 其中，水热反应的温度为150°C，水热反应的时间为26小时；水热反应的压力为 600KPa ;本实施例中，钥、三氧化钥和氯化铵的摩尔比为0. 5 :1 :4。
[0037] 步骤二，氨基硅烷修饰二氧化钥：将步骤一制得的二氧化钥颗粒与3-氨丙基三乙 氧基硅烷在乙醇中进行回流反应4小时，并离心水洗后，得到硅烷修饰物； 其中，回流反应的温度为70°C ;本实施例中，二氧化钥颗粒和3-氨丙基三乙氧基硅烷 的摩尔比为0. 5 :4 ;步骤二中乙醇的用量为，使二氧化钥颗粒的质量-体积浓度为0. 8g/L。
[0038] 步骤三，包裹聚乙二醇：将预先制得的聚乙二醇-0TS和步骤二制得的硅烷修饰物 加入到乙醇中，然后搅拌10小时后，加入氢氧化铵，并进行离心水洗，得到固体物； 其中，聚乙二醇-0TS的制备方法为：将4-甲苯磺酰氯分散于甲苯中，并加入三乙胺和 聚乙二醇，然后在室温下搅拌22小时，然后利用去氧水洗涤三乙胺后，进行减压蒸馏除去 甲苯，得到蒸馏物，并利用己烷洗涤蒸馏物后，继续蒸馏得到聚乙二醇-0TS。
[0039] 其中，聚乙二醇-0TS、硅烷修饰物和氢氧化铵的质量比为8 :0. 5 :60。
[0040] 其中，步骤三中乙醇的用量为，使硅烷修饰物的质量-体积浓度为0. 8g/L。
[0041] 步骤四，叶酸修饰：将叶酸加入到磷酸缓冲液中，并加入1-(3-二甲基氨基丙 基）-3-乙基碳二亚胺和N-羟基丁二酰亚胺，然后加入步骤三中得到的固体物，然后搅拌10 小时后，离心并用乙醇洗涤，然后再用水洗涤，得到纳米M〇0 2-PEG-FA基因导入材料； 本实施例中，叶酸、1-(3-二甲基氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺和N-羟基丁二酰亚胺的 摩尔比为0. 1 :〇. 8 :1。
[0042] 实施例3。
[0043] 一种功能化纳米基因导入材料的制备方法，它包括以下步骤： 步骤一，二氧化钥颗粒的制备：将钥、三氧化钥和氯化铵进行水热反应制得二氧化钥颗 粒； 其中，水热反应的温度为170°C，水热反应的时间为22小时；水热反应的压力为 700KPa ;本实施例中，钥、三氧化钥和氯化铵的摩尔比为1 :3 :6。
[0044] 步骤二，氨基硅烷修饰二氧化钥：将步骤一制得的二氧化钥颗粒与3-氨丙基三乙 氧基硅烷在乙醇中进行回流反应2小时，并离心水洗后，得到硅烷修饰物； 其中，回流反应的温度为90°C ;本实施例中，二氧化钥颗粒和3-氨丙基三乙氧基硅烷 的摩尔比为2 :4 ;步骤二中乙醇的用量为，使二氧化钥颗粒的质量-体积浓度为1. 2g/L。
[0045] 步骤三，包裹聚乙二醇：将预先制得的聚乙二醇-0TS和步骤二制得的硅烷修饰物 加入到乙醇中，然后搅拌14小时后，加入氢氧化铵，并进行离心水洗，得到固体物； 其中，聚乙二醇-0TS的制备方法为：将4-甲苯磺酰氯分散于甲苯中，并加入三乙胺和 聚乙二醇，然后在室温下搅拌23小时，然后利用去氧水洗涤三乙胺后，进行减压蒸馏除去 甲苯，得到蒸馏物，并利用己烷洗涤蒸馏物后，继续蒸馏得到聚乙二醇-0TS。
[0046] 其中，聚乙二醇-0TS、硅烷修饰物和氢氧化铵的质量比为12 :2 :80。
[0047] 其中，步骤三中乙醇的用量为，使硅烷修饰物的质量-体积浓度为1. 2g/L。
[0048] 步骤四，叶酸修饰：将叶酸加入到磷酸缓冲液中，并加入1-(3-二甲基氨基丙 基）-3_乙基碳二亚胺和N-羟基丁二酰亚胺，然后加入步骤三中得到的固体物，然后搅拌14 小时后，离心并用乙醇洗涤，然后再用水洗涤，得到纳米m〇o 2-peg-fa基因导入材料； 本实施例中，叶酸、1-(3-二甲基氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺和N-羟基丁二酰亚胺的 摩尔比为0. 3 :1. 5 :4。
[0049] 将上述实施例1制得的纳米M〇02-PEG-FA基因导入材料用于以下实验。
[0050] 结合性能的测定 1、主要材料 实施例1制得的纳米m〇o2-peg-fa基因导入材料(见图1);绿色荧光蛋白质粒 (pEGFP-Cl) ;HEPES平衡盐溶液（自配）；电泳缓冲液（0. 5XTBE，自配）；DNA上样缓冲液；溴 化乙啶（EB)。
[0051] 2、主要方法 1 μ L M〇02-PEG-FA 溶液（5mgMo02-PEG-FA 溶解在 500 μ L 双蒸水中）与 1 μ LpEGFP-Cl 水溶液（〇. 1 mg /mL)以及8 ml双蒸水（pH=7. 4)在1. 5mL离心管中混合，置于室温下30分 钟让其充分结合。M〇02-PEG-FA和pEGFP-Cl的质量比分别为100:1，50:1，30:1，10:1，5:1 ，1:1。在5000rpm的速度下离心5min，得到沉淀物。将沉淀物加载到1%的琼脂糖（ΕΒ0. 1 mg/mL)中，并在TAE的缓冲下，在100V电压下跑40min，然后在320nm处观察条带。
[0052] 3、结果 结果观察，有多种条带出现，这是因为pEGFP-Cl有多种构型所致。在质量比30:1， 10:1，5:1，1:1处条带清晰明显，说明在这些质量比之下，DNA和纳米M〇02-PEG-FA颗粒结 合不是很好，到了 1〇〇:1，50:1条带消失，说明DNA和纳米M〇02-PEG-FA颗粒结合完全了。
[0053] 上述结果表明：带正电荷的pEGFP-Cl和纳米M〇02-PEG-FA基因导入材料存在一个 最佳的结合比，当纳米M〇0 2-PEG-FA基因导入材料和pEGFP-Cl的质量比大于50:1，继续添 加纳米m〇o2-peg-fa基因导入材料，绿色荧光蛋白质粒也不会再与多余的纳米m〇o 2-peg-fa 基因导入材料结合，因此，本实验结果得出，以纳米M〇02-PEG-FA基因导入材料和pEGFP-Cl 的质量比为50:1的结合比进行转染。
[0054] 转染实验 1、主要材料 人乳腺癌细胞；M〇02-PEG-FA和pEGFP-Cl联合体(上述制备）；DMEM培养基；胎牛血清 FBS ;6孔培养板。
[0055] 2、主要方法 (1)细胞的培养：将人乳腺癌细胞用胰蛋白酶-EDTA消化下来，计数后加入到6孔板中 (5 X 106/孔)，用含FBS10%的DMEM溶液并加转染优化试剂培养至细胞密度为60%?70%的 融合度。
[0056] (2)细胞转染实验：将培养好的细胞上清除去，并换上新的培养液，然后分成三份， 分别为第一样品、第二样品和第三样品，第一样品中不添加任何其它物质，往第二样品中 加入质量比为50:1的纳米M〇0 2-PEG-FA和pEGFP-Cl的联合体，往第三样品中加入脂质体 2000和pEGFP-Cl的联合体，然后对第一样品、第二样品和第三样品分别培养48小时，然后 对第二样品进行荧光测定(见图2)，并对第一样品、第二样品和第三样品分别进行细胞存活 率测定(见图3)、转染效率测定(见图4)。其中，细胞存活率测定时，是用碘化吡啶进行标 识，并使用流式细胞仪进行检测。转染效率测定是使用流式细胞仪进行检测。
[0057] 3、结果分析 从图2中的荧光图可以看出有明显的绿色荧光，并且绿色荧光的覆盖面较大，说明纳 米M〇02-PEG-FA和pEGFP-Cl的联合体在人乳腺癌细胞中转染成功。
[0058] 图3的细胞存活率图片中，由左到右分别代表第一样品（control)、第二样品 (nano)和第三样品（lipofectamine 2000)的存活率，其中，第一样品的存活率为98%，第二 样品的存活率约为90%，第三样品的存活率为75%。因此，从图3中可以看到，质量比为50:1 的纳米M〇0 2-PEG-FA和pEGFP-Cl的联合体对人乳腺癌细胞的存活率的影响是很小的，相比 之下，脂质体2000和pEGFP-Cl的联合体对人乳腺癌细胞的存活率的影响较大。
[0059] 图4的转染效率图片中，由左到右分别代表第一样品（control)、第二样品（nano) 和第三样品（lipofectamine 2000)的转染效率。由图4中可以看到，纳米M〇02-PEG_FA和 pEGFP-Cl的联合体可以达到约40%的转染效率，这是在保证了人乳腺癌细胞存活率约为 90%的前提下达到的转染效率。虽然纳米M〇0 2-PEG-FA和pEGFP-Cl的联合体的转染效率不 及脂质体2000的转染效率高，但是，纳米M〇02-PEG-FA和pEGFP-Cl的联合体的高细胞相容 性是脂质体2000所无法比拟的。
[0060] 终上所述，由上述实验结果和分析可知，纳米M〇02-PEG-FA基因导入材料作为转染 试剂具有巨大的潜力。
[0061] 最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保 护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细地说明，本领域的普通技术人员应 当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实 质和范围。
【权利要求】
1. 一种功能化纳米基因导入材料的制备方法，其特征在于：它包括以下步骤： 步骤一，二氧化钥颗粒的制备：将钥、三氧化钥和氯化铵进行水热反应制得二氧化钥颗 粒； 步骤二，氨基硅烷修饰二氧化钥：将步骤一制得的二氧化钥颗粒与3-氨丙基三乙氧基 硅烷在乙醇中进行回流反应一定时间，并离心水洗后，得到硅烷修饰物； 步骤三，包裹聚乙二醇：将预先制得的聚乙二醇-OTS和步骤二制得的硅烷修饰物加入 到乙醇中，然后搅拌一定时间后，加入氢氧化铵，并进行离心水洗，得到固体物； 步骤四，叶酸修饰：将叶酸加入到磷酸缓冲液中，并加入1-(3-二甲基氨基丙基）-3-乙 基碳二亚胺和N-羟基丁二酰亚胺，然后加入步骤三中得到的固体物，然后搅拌一定时间 后，离心并用乙醇洗涤，然后再用水洗涤，得到纳米M〇0 2-PEG-FA基因导入材料。
2. 根据权利要求1所述的一种功能化纳米基因导入材料的制备方法，其特征在于：步 骤一中，所述钥、所述三氧化钥和所述氯化铵的摩尔比为〇. 5?1 :广3 :4飞。
3. 根据权利要求1所述的一种功能化纳米基因导入材料的制备方法，其特征在于：步 骤一中，所述水热反应的温度为150°C ~170°C，所述水热反应的时间为22小时~26小时；所 述水热反应的压力为600KPa?700KPa。
4. 根据权利要求1所述的一种功能化纳米基因导入材料的制备方法，其特征在于：步 骤二中，所述二氧化钥颗粒和所述3-氨丙基三乙氧基硅烷的摩尔比为0. 5?2 :〇0;所述乙 醇的用量为，使所述二氧化钥颗粒的质量-体积浓度为〇. 8g/L~l. 2g/L。
5. 根据权利要求1所述的一种功能化纳米基因导入材料的制备方法，其特征在于：步 骤二中，所述回流反应的温度为70°C ~90°C，所述回流反应的时间为2小时~4小时。
6. 根据权利要求1所述的一种功能化纳米基因导入材料的制备方法，其特征在于：步 骤三中，所述聚乙二醇-OTS的制备方法为：将4-甲苯磺酰氯分散于甲苯中，并加入三乙胺 和聚乙二醇，然后在室温下搅拌22小时?24小时，然后利用去氧水洗涤三乙胺后，进行减压 蒸馏除去甲苯，得到蒸馏物，并利用己烷洗涤蒸馏物后，继续蒸馏得到聚乙二醇-OTS。
7. 根据权利要求1所述的一种功能化纳米基因导入材料的制备方法，其特征在于： 步骤三中，所述聚乙二醇-OTS、所述硅烷修饰物和所述氢氧化铵的质量比为8?12 :0. 5?2 : 6(Γ80 ;步骤三中乙醇的用量为，使所述硅烷修饰物的质量-体积浓度为0. 8g/L?l. 2g/L ;所 述搅拌时间为10小时~14小时。
8. 根据权利要求1所述的一种功能化纳米基因导入材料的制备方法，其特征在于：步 骤四中，所述叶酸、所述1- (3-二甲基氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺和所述N-羟基丁二酰亚 胺的摩尔比为〇. l~〇. 3 :0. 8~1. 5 :1~4 ;所述步骤四中的搅拌时间为10小时?14小时。
9. 一种功能化纳米基因导入材料，其特征在于：运用权力要求1至8任意一项所述的 一种功能化纳米基因导入材料的制备方法所制得的纳米M〇02-PEG-FA基因导入材料，所述 纳米M〇02-PEG-FA基因导入材料为一种平均直径为100nm左右的纳米球形材料。
10. 权利要求1至8任意一项所述的一种功能化纳米基因导入材料的制备方法所制得 的纳米基因导入材料用于制作抗肿瘤药物的应用。
【文档编号】C08G65/00GK104109690SQ201410274601
【公开日】2014年10月22日 申请日期:2014年6月19日 优先权日:2014年6月19日
【发明者】王深明, 林颖, 张德元, 常光其, 周鸿雁, 李梓伦, 邵楠 申请人:中山大学附属第一医院