1.一种从液体混合物中纯化重组人睫状神经营养因子的方法,所述液体混合物至少包含重组人睫状神经营养因子、核酸以及内毒素,该方法包括以下步骤:
i)对所述液体混合物进行疏水层析,以获得疏水层析洗脱液,其中所述疏水层析所采用的介质为丁基-琼脂糖;和
ii)对所述疏水层析所得的洗脱液进行阴离子交换层析,以获得阴离子层析洗脱液,其中所述阴离子交换层析所采用的介质为QHP。
2.根据权利要求1所述的方法,其中所述阴离子交换层析在pH为7.4-7.7的条件下进行。
3.根据权利要求1所述的方法,还包括对所述阴离子交换层析所得的洗脱液进行超滤。
4.根据权利要求1所述的方法,其中所述液体混合物为能表达重组人睫状神经营养因子的细胞的裂解液的上清液。
5.根据权利要求4所述的方法,其中所述能表达重组人睫状神经营养因子的细胞为遗传工程化的原核宿主细胞。
6.根据权利要求5所述的方法,其中所述重组人睫状神经营养因子具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。
7.根据权利要求5所述的方法,其中所述遗传工程化的原核宿主细胞为大肠杆菌CNTFnew/CC22,所述上清液是对该宿主细胞的裂解液进行离心而获得的。
8.一种制备经化学修饰的重组人睫状神经营养因子的方法,该方法包括以下步骤:
a)利用化学修饰剂对重组人睫状神经营养因子进行修饰,从而获得包含修饰型重组人睫状神经营养因子的混合物,其中所述重组人睫状神经营养因子为根据权利要求1-7中任意一项所述方法纯化得到的。
9.根据权利要求8所述的方法,其中在步骤a)中,所述重组人睫状神经营养因子以浓度为1-4mg/ml,优选为2mg/ml的溶液使用,该重组人睫状神经营养因子与所述化学修饰剂的摩尔比为1:(1-4),优选为1:2。
10.根据权利要求9所述的方法,其中在所述步骤a)中,所进行的修饰不需要进行终止反应。
11.根据权利要求8所述的方法,其中所述化学修饰为聚乙二醇化修饰,所述修饰剂选自:聚乙二醇、甲氧基聚乙二醇、甲氧基聚乙二醇-琥珀酰亚胺琥珀酸酯、甲氧基聚乙二醇-琥珀酰亚胺碳酸酯、甲氧基聚乙二醇三氟乙基磺酸酯、甲氧基聚乙二醇-丙醛、甲氧基聚乙二醇-琥珀酰亚胺丙酸酯、甲氧基聚乙二醇-琥珀酰亚胺α甲基丁酸酯、甲氧基聚乙二醇-N-羟基琥珀酰亚胺、甲氧基聚乙二醇-马来酰亚胺或甲氧基聚乙二醇-乙醛;优选为甲氧基聚乙二醇-马来酰亚胺。
12.根据权利要求8所述的方法,其中所述方法还包括:
b)对所述包含修饰型重组人睫状神经营养因子的混合物进行阴离子交换层析,以获得阴离子层析洗脱液。
13.根据权利要求12所述的方法,其中所述阴离子交换层析所采用的介质为QHP。
14.根据权利要求12所述的方法,其中所述方法还包括:
c)对所得阴离子层析洗脱液进行超滤。