一种二炔基化合物及其合成方法与流程

本发明属于医药化学领域，具体涉及化合物3,3’-(1,3-丁二炔-1,4-基)-N,N’-二((4-(4-甲基哌啶甲基))-3-三氟甲基苯基)二(4-甲基苯甲酰胺)，其合成方法以及其作为参考标记的用途。

背景技术：

WO2014082578报道了下式A的化合物对多种癌细胞具有良好的抑制活性，可用于治疗和/或预防肿瘤，其化学名称为3-((1H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-5-基)乙炔基)-4-甲基-N-[4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-3-三氟甲基苯基]苯甲酰胺，

本发明的发明人在制备式A化合物的过程中发现，制备得到的式A化合物中会产生一种副产物，性质与式A化合物相似，难以分离，对式A化合物的质量造成很大影响，对式A化合物成药性、安全性和有效性带来严重隐患。因此，研究该副产物的性质，对其进行检测控制具有重大的意义。

技术实现要素：

本发明的第一个目的是提供式C所示的化合物或其盐，化学名称为3,3’-(1,3-丁二炔-1,4-基)-N,N’-二((4-(4-甲基哌啶甲基))-3-三氟甲基苯基)二(4-甲基苯甲酰胺)，

本发明的发明人研究式A化合物的副产物时发现，大部分副产物可以通过重结晶分离纯化手段有效的除去，使其含量在0.1％以下，但有一个特定副产物C，难以通过重结晶分离纯化手段有效的去除，对副产物C进行鉴定、合成，确定其去除控制方法，对控制式A化合物的质量意义重大。

式C化合物的盐可以是本发明的式C化合物与酸形成的任何盐，尤其是那些药学上可接受的盐，所述的酸包括但不限于盐酸、磷酸、硫酸、甲磺酸、氢溴酸、柠檬酸、马来酸、丙二酸、扁桃酸、琥珀酸、富马酸、醋酸、乳酸、硝酸等等。

本发明的第二个目的是提供作为副产物的式C的化合物或其盐的制备方法。所述方法包括如下路线和步骤：

路线I

a)式1的化合物在有机溶剂中，在催化剂催化下经偶联反应制得式B的化合物；和

b)式B的化合物在碱性溶剂中水解后，与式4的化合物缩合，得到式C的副产物。

在一些具体的实施方案中，根据本发明的式C化合物或其盐的制备方法，其中步骤a)中所述的有机溶剂选自N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、二氯甲烷、氯仿、二甲基亚砜、环丁砜、1,4-二氧六环、甲苯和二甲苯中的一种或几种。在一些优选的实施方案中，根据本发明的式C化合物或其盐的制备方法，其中步骤a)中所述的有机溶剂选自N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、二氯甲烷和氯仿中的一种或几种。

在一些具体的实施方案中，根据本发明的式C化合物或其盐的制备方法，其中步骤a)中所述的催化剂选自氯化亚铜、碘化亚铜、溴化亚铜、氰化亚铜、氯化铜、氧化铜、硫酸铜、元素铜、Pd(Ph₃P)₂Cl₂、Pd、PdCl₂、TiCl₄、Ni-CuI、Pd(Ph₃P)₂Cl₂-CuI、Pd-CuI、PdCl₂-CuI、CuI-CuCl和Cu(OAc)₂-CuCl₂。在一些优选的实施方案中，根据本发明的式C化合物或其盐的制备方法，其中步骤a)中所述的催化剂选自氯化亚铜和碘化亚铜。在一些更优选的实施方案中，根据本发明的式C化合物或其盐的制备方法，其中步骤a)中所述的催化剂为碘化亚铜。

在一些具体的实施方案中，根据本发明的式C化合物或其盐的制备方法，其中步骤b)中所述的碱选自氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂、碳酸钠、碳酸钾和碳酸锂。在一些优选的实施方案中，根据本发明的式C化合物或其盐的制备方法，其中步骤b)中所述的碱选自氢氧化钠、氢氧化钾和氢氧化锂。

在一些具体的实施方案中，根据本发明的式C化合物或其盐的制备方法，其中步骤b)中所述的缩合剂选自二环己基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺和1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亚胺。在另一些具体的实施方案中，根据本发明的式C化合物或其盐的制备方法，其中在步骤b)中加入吡啶活化反应。

在一些具体的实施方案中，本发明的式C化合物或其盐的制备方法包括以下步骤：

a)式1的化合物在选自N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、二氯甲烷和氯仿中的一种或几种有机溶剂中，在氯化亚铜或碘化亚铜催化剂催化下经偶联反应制得式B的化合物；和

b)式B的化合物在选自氢氧化钠、氢氧化钾和氢氧化锂的碱性溶剂中水解后，在选自二环己基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺和1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亚胺的缩合剂下并在吡啶活化下，与式4的化合物缩合，得到式C的副产物。

本发明的第三个目的是提供一种定位、定量式A化合物或其盐中作为副产物的式C化合物或其盐的HPLC方法。作为副产物的式C化合物或其盐可以作为对照杂质，应用于HPLC法分析式A化合物或其盐中杂质的归属和定位，可以用于式A化合物或其盐中作为副产物的式C化合物或其盐的定量分析以及用于式A化合物或其盐的质量分析。本发明的所述利用式C化合物或其盐分析式A化合物或其盐的HPLC方法包括以下步骤：

1)制备含有式C化合物或其盐和式A化合物或其盐的系统适应性溶液；

2)制备含有式A化合物或其盐的供试品溶液；和

3)使用步骤1)制得的系统适应性溶液和步骤2)制得的供试品溶液通过高效液相色谱法分离式A化合物或其盐和式C或其盐化合物，并确定式A化合物或其盐和式C化合物或其盐的位置和含量。

在一些具体的实施方案中，根据本发明的利用式C化合物或其盐分析式A化合物或其盐的HPLC方法，其中步骤1)的所述的系统适应性溶液的制备方法包括：

I)精密称定式C化合物或其盐和式A化合物或其盐，分别用二甲基亚砜溶解，获得两份溶液；和

II)精密称定式A化合物或其盐，用醇溶解溶解，再加入步骤I)制得的两份溶液，之后再用醇溶液稀释，得到系统适应性溶液，优选地，所述醇溶液选自甲醇、乙醇、丙醇和异丙醇溶液，更优选地，所述醇溶液为甲醇溶液。

在一些具体的实施方案中，根据本发明的利用式C化合物或其盐分析式A化合物或其盐的HPLC方法，其中步骤2)的供试品溶液通过将式A化合物或其盐加入醇溶液中溶解而制得，优选地，所述醇溶液选自甲醇、乙醇、丙醇和异丙醇溶液，更优选地，所述醇溶液为甲醇溶液。

在一些具体的实施方案中，所述的利用式C化合物或其盐分析式A化合物或其盐的HPLC方法包括以下步骤：

M1)精密称定式C化合物或其盐和式A化合物或其盐各10mg置20ml量瓶中，加DMSO溶解并稀释至刻度；

M2)精密称定式A化合物或其盐50mg置于50ml容量瓶中，先加少量甲醇溶解，再加入步骤M1)制得的两份溶液各1mL，甲醇稀释至刻度得到系统适应性溶液；

M3)称取20mg式A化合物或其盐的待测样品置20ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度得到供试品溶液；

M4)将步骤M2)制得的系统适应性溶液和步骤M3)制得的供试品溶液分别注入4.6×150mm，3.5μm的十八烷基硅烷键合硅胶柱，以0.020mol/L醋酸铵缓冲液(用氨水调pH值7.0)为流动相A；以甲醇为流动相B，依据表1梯度洗 脱样品；

表1

M5)使用紫外检测器在235nm波长处确定位置和含量。

本发明的第四个目的是提供本发明的式C化合物或其盐在式A化合物或其盐在质量分析中的用途。式A化合物的盐可以是式A化合物与酸形成的任何盐，尤其是那些药学上可接受的盐，所述的酸包括但不限于盐酸、磷酸、硫酸、甲磺酸、氢溴酸、柠檬酸、马来酸、丙二酸、扁桃酸、琥珀酸、富马酸、醋酸、乳酸、硝酸等等。

附图说明

图1是式A化合物与副产物式C化合物及其它杂质混合进样的HPLC图谱，其中26.482min为式A化合物，47.301min为副产物式C化合物。

具体实施方式

实施例13,3’-(1,3-丁二炔-1,4-基)-二(4-甲基苯甲酰胺)

称取3-乙炔基-4-甲基苯甲酸甲酯5.22g于反应瓶中，加入30mL二氯甲烷溶解，分别加入CuI 0.76，哌啶1.28g，室温下反应72h后停止反应，将反应液降温至零度，过滤，滤饼用乙酸乙酯溶解后快速柱层析得标题化合物。

实施例23,3’-(1,3-丁二炔-1,4-基)-N,N’-二((4-(4-甲基哌啶甲基))-3-三氟甲基苯基)二(4-甲基苯甲酰胺)

称取实施例1所得物1.73g于反应瓶中，加入20mL甲醇溶解，加入NaOH1.6g和水10mL，回流反应2h，停止反应，加入20ml水，将反应液降温至0℃，稀盐酸调节pH值至1-2，过滤，烘干得3,3’-(1,3-丁二炔-1,4-基)-二(4-甲基苯甲酸)。

称取制得的3,3’-(1,3-丁二炔-1,4-基)-二(4-甲基苯甲酸)1.27g于反应瓶中，加入10mL吡啶溶解，分别加入3-三氟甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基甲基)苯胺2.18g，EDCI 1.69g，室温反应12h，停止反应，蒸除吡啶后向残留物中加入DMF6mL溶解，滴加至20ml饱和碳酸钾水溶液中，过滤，烘干，得标题化合物。

¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δppm:10.53(s,2H),8.25(d,2H),8.20(d,2H),8.05(d,2H),7.98(d,2H),7.70(d,2H),7.52(d,2H),3.56(s,4H),2.53(s,6H),2.20-2.45(m,16H),2.16(s,6H)。

LC-MS m/z:[M/2+H]⁺＝415.2。

实施例33,3’-(1,3-丁二炔-1,4-基)-N,N’-二((4-(4-甲基哌啶甲基))-3-三氟甲基苯基)二(4-甲基苯甲酰胺)的定位定量分析

精密称定副产物C和式A化合物各10mg置20ml量瓶中，加DMSO溶解并稀释至刻度。精密称定式A化合物50mg置于50ml容量瓶中，先加少量甲醇溶解，并加入上述两份溶液各1mL，甲醇稀释至刻度得到系统适应性溶液；

称取20mg式A化合物的待测样品置20ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度得到供试品溶液；

将系统适应性溶液和供试品溶液分别注入4.6×150mm，3.5μm的十八烷基硅烷键合硅胶柱，以0.020mol/L醋酸铵缓冲液(用氨水调pH值7.0)为流动相A；以甲醇为流动相B，依据表1梯度洗脱样品；

表1

使用紫外检测器在235nm波长处确定位置和含量。