带针尖的微量移液器保持装置和卵子细胞质内精子注射方法与流程

本发明涉及用于对在显微受精等中使用的微量移液器进行保持且在向生物体细胞刺入微量移液器的针尖的操作中使用的带针尖的微量移液器保持装置和卵子细胞质内精子注射方法。

背景技术：

在生物技术领域中，在显微镜观察下，进行向卵子注射(injection)精子和精细胞的操作、向细胞注射核、细胞质以及DNA的操作。作为在这样的操作中使用的显微操作系统，例如，提出有日本特开2005－258413(专利文献1)。在显微镜图像观察下，通过使用显微操作器来操作细针(带针尖的微量移液器)，从而对被检体进行基因重组操作、显微受精操作等操作。

对于显微受精中的ICSI(细胞质内精子注射法)，其是作为辅助生殖技术(ART)以严重的精液诊断不良例(日文：精液所見不良)等为对象而实施的。显微受精是在体外进行使精子沿雌性生殖道逆流而上并与卵子融合而使卵子受精的全过程的方法。采用该体外受精，即使是在射精精液中的精子量极少的病例、精液中的精子缺少自行进入卵子的能力(受精能力)的病例的情况下，也能够实现受精。

并且，在ICSI(细胞质内精子注射法)中，需要将精子直接注射到卵子的内部、即细胞质内，为此，需要使带针尖的微量移液器刺穿卵子的透明带、卵膜而到达细胞质内。比较容易使微量移液器的针尖刺穿卵子的透明带，但由于卵膜会因与微量移液器的针尖相抵接而发生变性和硬化，而该刺穿并不容易。

在日本特开2007－6775(专利文献2)中公开了一种振动型微量注射装置。专利文献2的振动型微量注射装置包括：振子28，其与微量移液器8串联连接并具有安装有压电驱动器29的壳体；以及信号调节装置21，其用于对向压电驱动器29施加的电信号进行调节，通过向压电驱动器29输入电信号，从而借助具有壳体的振子28沿微量移液器8的轴向对微量移液器8施加振动。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2005－258413

专利文献2：日本特开2007－6775

技术实现要素：

发明要解决的问题

采用专利文献2的振动型微量注射装置，在贯穿受精卵等的透明带、细胞膜、核膜这样性质不同的膜的情况下，能够在某种程度上良好地进行刺入，但更期望能够将微量移液器的针尖简便且更可靠地刺入卵子的细胞质内。

本发明的目的在于，提供能够使带针尖的微量移液器刺穿卵子的透明带、卵膜而容易且可靠地到达细胞质内的带针尖的微量移液器保持装置和卵子细胞质内精子注射方法。

用于解决问题的方案

实现上述目的的技术方案如下。

一种带针尖的微量移液器保持装置，其具有：筒状微量移液器移液杆，其能够在顶端部安装用于刺入生物体细胞的带针尖的微量移液器；以及移液杆保持件，其用于保持所述微量移液器移液杆，其中，所述移液杆保持件具有基座构件和能够转动地保持于所述基座构件且能够供所述微量移液器移液杆贯穿的筒状转动构件，而且，所述筒状转动构件具有移液杆位置调整机构，该移液杆位置调整机构包括：侧孔，其为多个并设于所述筒状转动构件的侧面且在所述筒状转动构件的周向上不同的位置；以及移液杆位置调整构件，其能够自所述侧孔进入所述筒状转动构件内且能够抵接于贯穿所述筒状转动构件的所述微量移液器移液杆的外表面。

另外，实现上述目的的技术方案如下。

一种卵子细胞质内精子注射方法，其中，在该卵子细胞质内精子注射方法中进行如下步骤：利用抽吸移液器来保持卵子的步骤；使在顶端具有针尖且在内部保有精子的微量移液器的顶端部抵接于被保持于所述抽吸移液器的所述卵子的步骤；使所述微量移液器前进而使所述针尖刺穿所述卵子的透明带的步骤；使所述针尖抵接于所述卵子的卵膜并利用所述针尖来按压所述卵膜的步骤；微量移液器旋转步骤，在该微量移液器旋转步骤中，通过使所述微量移液器旋转，从而使所述针尖的切面旋转而使所述针尖刺穿所述卵膜，由此使所述针尖进入细胞质内；以及精子放出步骤，在该精子放出步骤中，将所述微量移液器内的精子在所述细胞质内放出。

附图说明

图1是本发明的带针尖的微量移液器保持装置的一实施例的主视图。

图2是图1所示的带针尖的微量移液器保持装置的移液杆保持件部分的放大主视图。

图3是图1所示的带针尖的微量移液器保持装置的移液杆保持件部分的放大俯视图。

图4是图1所示的带针尖的微量移液器保持装置的移液杆保持件部分的放大右视图。

图5是图2的A－A剖视图。

图6是图2的B－B剖视图。

图7是将带针尖的微量移液器安装于本发明的带针尖的微量移液器保持装置后的状态的局部省略主视图。

图8是在本发明的带针尖的微量移液器保持装置中使用的微量移液器移液杆的顶端部的放大剖视图。

图9是图7的带针尖的微量移液器和微量移液器移液杆的顶端部的放大剖视图。

图10是本发明的其他实施例的带针尖的微量移液器保持装置的移液杆保持件部分的放大剖视图。

图11是本发明的其他实施例的带针尖的微量移液器保持装置的移液杆保持件部分的放大剖视图。

图12是本发明的其他实施例的带针尖的微量移液器保持装置的移液杆保持件部分的放大剖视图。

图13是本发明的其他实施例的带针尖的微量移液器保持装置的移液杆保持件部分的放大主视图。

图14是图13所示的带针尖的微量移液器保持装置的移液杆保持件部分的放大俯视图。

图15是本发明的其他实施例的带针尖的微量移液器保持装置的移液杆保持件部分的放大主视图。

图16是本发明的其他实施例的带针尖的微量移液器保持装置的移液杆保持件部分的放大主视图。

图17是图16所示的带针尖的微量移液器保持装置的移液杆保持件部分的放大俯视图。

图18是从图17的带针尖的微量移液器保持装置中去除移液杆保持件后的状态的放大俯视图。

图19是本发明的其他实施例的带针尖的微量移液器保持装置的移液杆保持件部分的放大主视图。

图20是用于说明本发明的带针尖的微量移液器保持装置的其他实施例的说明图。

图21是用于说明本发明的卵子细胞质内精子注射方法的说明图。

图22是用于说明本发明的卵子细胞质内精子注射方法的说明图。

图23是用于说明本发明的卵子细胞质内精子注射方法的说明图。

具体实施方式

使用附图所示的实施例来说明本发明的带针尖的微量移液器保持装置。

本发明的带针尖的微量移液器保持装置1具有：筒状微量移液器移液杆5，其在顶端部能够安装用于刺入生物体细胞(例如卵子、要进行核移植的细胞)的带针尖的微量移液器15；以及移液杆保持件2，其用于保持微量移液器移液杆5。移液杆保持件2具有基座构件20和能够转动地保持于基座构件20且能够供筒状微量移液器移液杆5贯穿的筒状转动构件3，而且，筒状转动构件3具有移液杆位置调整机构6和移液杆位置调整机构7，该移液杆位置调整机构6包括：侧孔35，其为多个并设于筒状转动构件3的侧面且在筒状转动构件3的周向上不同的位置；以及移液杆位置调整构件62，其能够自侧孔35进入筒状转动构件3内且能够抵接于贯穿筒状转动构件3的微量移液器移液杆5的外表面；该移液杆位置调整机构7包括：侧孔35，其为多个并设于筒状转动构件3的侧面且在筒状转动构件3的周向上不同的位置；以及移液杆位置调整构件72，其能够自侧孔35进入筒状转动构件3内且能够抵接于贯穿筒状转动构件3的微量移液器移液杆5的外表面。

使用将本发明的微量移液器保持装置1应用于用于保持显微受精用的微量移液器的微量移液器保持装置的实施例来进行说明。

如图1～图6所示，本发明的带针尖的微量移液器保持装置1具有筒状微量移液器移液杆5和用于保持微量移液器移液杆5的移液杆保持件2。

如图1、图7～图9所示，筒状微量移液器移液杆5包括：筒状主体51；顶端侧环状构件52，其设于筒状主体51的顶端部；基端侧环状构件53，其设于筒状主体51的基端侧；以及筒状弹性体54，其收纳在顶端侧环状构件52内且被筒状主体51的顶端和顶端侧环状构件52按压。

筒状主体51是具有比微量移液器15的外径大的内径的筒状体，其具有自筒状主体51的顶端到筒状主体51的基端贯通的内腔56。另外，在筒状主体51的顶端部形成有能够与在顶端侧环状构件52的内表面形成的内螺纹部螺纹接合的外螺纹部。筒状主体51的顶端部构成微量移液器15的基端部保持部。并且，收纳在顶端侧环状构件52内的筒状弹性体54能够贯穿有微量移液器15的基端部且能够在筒状主体51的顶端和顶端侧环状构件52的内径小径部的基端之间被按压，并且，通过按压筒状弹性体54，从而筒状弹性体54内径发生缩径而贴紧于微量移液器15的基端部，由此能够保持微量移液器15的基端部。

另外，在筒状主体51的后端部设有：小径基端部，其位于最靠基端的位置，小径基端部的外径成为小径；以及外螺纹部，其自该小径基端部向顶端方向延伸。并且，基端侧环状构件53包括小径基端部的包覆部和形成于内表面且能够与上述外螺纹部螺纹接合的内螺纹部。如图21所示，小径基端部构成与使向微量移液器15内抽吸和喷出的气体或液体流动的管24连接的连接部。

安装于筒状微量移液器移液杆5的带针尖的微量移液器15是如下那样的中空针：具有能够与筒状主体51内相连通且自其顶端到其基端贯通的内部通路19，并且在顶端具有针尖18。尤其是，图9所图示的微量移液器15包括自针尖18向基端侧延伸预定长度的细径部17和自细径部17的基端延伸到后端的主体部16。针尖包括相对于中心轴线倾斜地进行切割而成的切面。作为带针尖的微量移液器15，通常使用玻璃制的透明针。

在该实施例的微量移液器保持装置1中，移液杆保持件2具有：基座构件20；以及筒状转动构件3，其能够转动地保持于基座构件20，且该筒状转动构件3能够供筒状微量移液器移液杆5贯穿。

如图2～图6所示，基座构件20具有底座部21、自底座部21立起的两个侧板部22、23、以及分别固定于侧板部22、23的球轴承8a、8b。底座部21是形成为矩形形状的板状部，侧板部22、23以相对的方式自底座部的各个侧端部立起。另外，侧板部22、23以成为大致平行且相同高度的方式形成。而且，两个侧板部22、23具有设于上部的凹部22a、23a。

如图1～图6所示，筒状转动构件3具有固定于筒状体31的一端的球轴承8a和固定于筒状体31的另一端的球轴承8b。如图5所示，球轴承8a、8b均具有外侧环状构件81、内侧环状构件82、以及配置于两个环状构件的多个球体83。并且，球轴承8a的内侧环状构件82固定于筒状体31的一端，球轴承8b的内侧环状构件82固定于筒状体31的另一端。并且，在两端设有球轴承8a、8b的筒状体31在球轴承部分处安装于基座构件20的侧板部22、23的凹部22a、23a。

具体而言，球轴承8a、8b的外侧环状构件81安装于基座构件20的侧板部22、23的凹部22a、23a。由此，筒状体31以能够旋转的方式保持于基座构件20的两个侧板部22、23之间。而且，球轴承8a、8b的外侧环状构件81包括凸缘部，该凸缘部具有比设于侧板部22、23的凹部的内径大的外径，该凸缘部以抵接于侧板部22、23的外侧侧面的方式设置。因此，阻止了安装有球轴承8a、8b的筒状体31的移动。

另外，筒状转动构件3具有移液杆位置调整机构6和移液杆位置调整机构7，该移液杆位置调整机构6包括：侧孔35，其为多个并设于筒状转动构件3的侧面且在筒状体31(筒状转动构件3)的周向上不同的位置；以及移液杆位置调整构件62，其能够自侧孔35进入筒状转动构件3内且能够抵接于贯穿筒状转动构件3的微量移液器移液杆5的外表面；该移液杆位置调整机构7包括：侧孔35，其为多个并设于筒状转动构件3的侧面且在筒状体31(筒状转动构件3)的周向上不同的位置；以及移液杆位置调整构件72，其能够自侧孔35进入筒状转动构件3内且能够抵接于贯穿筒状转动构件3的微量移液器移液杆5的外表面。

在本发明的带针尖的微量移液器保持装置1中，由于具有该移液杆位置调整机构，因此，通过在将带针尖的微量移液器15安装于微量移液器移液杆5的状态下对移液杆位置调整机构6、7进行调整，能够将微量移液器15的顶端部的中心轴线调整为筒状转动构件3转动时的大致中心。因此，能够使微量移液器的针尖的切面良好地旋转。

在该实施例的微量移液器保持装置1中，筒状转动构件3具有第1移液杆位置调整机构6和设于与第1移液杆位置调整机构6分开预定长度的位置的第2移液杆位置调整机构7。优选的是如此设置两个移液杆位置调整机构6、7，但也可以为设置一个移液杆位置调整机构。

并且，移液杆位置调整机构6包括：侧孔35，其为多个(具体而言为4个)并设于筒状体31的轴向上的大致相同位置；外螺纹构件62，其为多个且构成移液杆位置调整构件；以及内螺纹部61，其设于侧孔35附近且能够与外螺纹构件62螺纹接合。在该实施例中，4个侧孔35以相对于筒状体31的中心轴线成为大致等角度间隔(具体而言为90度间隔)的方式形成。

并且，与移液杆位置调整机构6同样地，移液杆位置调整机构7也包括：侧孔35，其为多个(具体而言为4个)并设于筒状体31的轴向上的大致相同位置；外螺纹构件72，其为多个且构成移液杆位置调整构件；以及内螺纹部71，其设于侧孔35附近且能够与外螺纹构件72螺纹接合。在该实施例中，4个侧孔35以相对于筒状体31的中心轴线成为大致等角度间隔(具体而言为90度间隔)的方式形成。

作为内螺纹部61、71而使用螺母，螺母以内部的内螺纹部位于侧孔35之上方式配置于筒状体31的外表面并通过固定部(具体而言为焊接部)64、74固定于筒状体31。通过使外螺纹部62、72螺纹接合于在筒状体31上固定的内螺纹部(螺母)61、71，从而外螺纹部62、72的顶端部能够贯穿内螺纹部(螺母)61、71、侧孔35而到达筒状体31的内部。而且，如图6所示，作为到达筒状体31的内部的移液杆位置调整构件的各外螺纹部62、72能够与微量移液器移液杆5的外表面的贯穿于筒状体31内的部分的部分外表面相抵接。

并且，通过对各外螺纹部62、72在筒状体31内突出的突出长度进行调整，能够对贯穿了筒状体31内的微量移液器移液杆5在筒状体31内部的位置进行微调。例如，通过对在图6的上下方向上相对的两个外螺纹部62进行调整，能够对微量移液器移液杆5在筒状体31内部的上下位置进行调整，通过对在图6的左右方向上相对的两个外螺纹部62进行调整，能够对微量移液器移液杆5在筒状体31内部的左右位置进行调整。

并且，在该实施例的微量移液器保持装置1中，筒状转动构件3具有用于利用手动使筒状转动构件3转动的操作用突出部4。具体而言，筒状转动构件3具有设于筒状体31的侧面的转动操作用突出部4。转动操作用突出部4的顶端部4a插入于筒状体31的侧部贯通口并被固定。作为转动操作用突出部4，优选为圆棒、方柱等棒状体。而且，通过把持该转动操作用突出部4，能够容易使筒状转动构件3(筒状体31)旋转。另外，该转动操作用突出部4通过进行转动而抵接于基座构件20的底座部21。因此，在该实施例的微量移液器保持装置1中，筒状转动构件3不能360度旋转。因此，转动操作用突出部4能作为筒状转动构件3的旋转角度限制构件发挥功能。

并且，在该实施例的微量移液器保持装置1中，筒状转动构件3具有一个收纳于筒状体31的一端侧的内部的弹性筒状构件33和一个收纳于筒状体31的另一端侧的内部的弹性筒状构件34这两个弹性筒状构件。弹性筒状构件33、34能够贴紧于微量移液器移液杆5且能够供微量移液器移液杆5贯穿。利用该弹性构件33、34将微量移液器移液杆5无晃动地保持于筒状转动构件3(筒状体31)。另外，微量移液器移液杆5贯穿筒状体31且微量移液器移液杆5的两端部自筒状体31突出。由此，移液杆保持件2成为保持微量移液器移液杆5并安装于微量移液器移液杆5的中间部的状态。

而且，该实施例的微量移液器保持装置1具有设于基座构件20的安装部9，该安装部9用于安装在操作装置上。

安装部9具有形成为棒状的安装主体部91、用于安装于基座构件20的安装部93、以及将安装主体部91和安装部93这两者之间连接起来的球接头部92。球接头部92具有靠安装主体部侧的球轴承92a、设于安装部93的端部的球接头93a、以及固定调整构件92b。通过拧松固定调整构件92b，能够改变安装主体部91相对于球接头93a(基座构件20的底座部21)的角度，通过在将安装主体部91变更为期望的角度之后拧紧固定调整构件92b，能够维持其状态。

此外，在上述实施例的微量移液器保持装置中，对于在筒状体31处固定内螺纹部(螺母)61的固定方式，也可以是，如图10所示的实施例的微量移液器保持装置1a那样利用设于筒状体31的外表面的粘接构件64a、74a来将内螺纹部61固定于筒状体31。在该实施例的微量移液器保持装置1a中，在筒状体31上，以包围侧孔且具有一定程度的厚度的方式设有粘接构件64a、74a，成为内螺纹部(螺母)61、71以一定程度埋设于粘接构件64a、74a的状态。此外，在该实施例中，内螺纹部(螺母)61、71不与筒状体31的外表面实质接触。因此，在该实施例微量移液器保持装置1a中，移液杆位置调整机构6、7包括侧孔35、内螺纹部(螺母)61、71、外螺纹部62、72以及粘接构件64a、74a。

另外，在上述实施例的微量移液器保持装置中，在筒状体31处形成内螺纹部的形成方式，也可以是，如图11所示的实施例的微量移液器保持装置1b那样不设置螺母，而是在筒状体31a的侧孔的内表面形成与外螺纹部62、72螺纹接合的内螺纹部36。在该实施例中，筒状体31a的至少中央部分成为具有预定厚度的厚壁部，在该厚壁部形成有侧孔。因此，侧孔具有预定长度。并且，在该侧孔的内表面形成有内螺纹部36。因此，在该实施例微量移液器保持装置1b中，移液杆位置调整机构6、7由在内表面具有内螺纹的侧孔35和外螺纹部62、72构成，而不包括螺母和固定部。

另外，在上述全部的实施例的微量移液器保持装置中，对于侧孔、内螺纹部(螺母)以及外螺纹部，也可以是，如图12所示的实施例的微量移液器保持装置1c那样，包括：侧孔35，其为多个(具体而言为3个)并设于筒状体31的轴向上的大致相同位置；外螺纹构件62，其为多个且构成移液杆位置调整构件；以及内螺纹部61，其设于侧孔35附近且能够与外螺纹构件62螺纹接合。在该实施例中，3个侧孔35以相对于筒状体31的中心轴线成为大致等角度间隔(具体而言为120度间隔)的方式形成。

另外，在上述全部的实施例的微量移液器保持装置中，侧孔、内螺纹部(螺母)以及外螺纹部也可以是图13和图14所示的实施例的微量移液器保持装置1d所具有的侧孔、内螺纹部(螺母)以及外螺纹部。在微量移液器保持装置1d中具有：第1移液杆位置调整机构6a，其包括设于筒状体31的轴向上的大致相同位置且相对的两个侧孔、构成两个移液杆位置调整构件的多个外螺纹构件62、以及设于侧孔附近且能够与外螺纹构件62螺纹接合的两个内螺纹部61；以及第2移液杆位置调整机构7a，其包括相对于筒状体31的中心轴线与第1移液杆位置调整机构6a的两个侧孔错开大致90度且设于分开预定长度的位置的相对的两个侧孔、构成两个移液杆位置调整构件的多个外螺纹构件72、以及设于侧孔附近且能够与外螺纹构件72螺纹接合的两个内螺纹部71。

在该实施例的微量移液器保持装置1d中，能够利用第1移液杆位置调整机构6a对图13中的贯穿了筒状体31内的微量移液器移液杆5在筒状体31内部的上下方向位置进行调整，能够利用第2移液杆位置调整机构7a对图13中的贯穿了筒状体31内的微量移液器移液杆5在筒状体31内部的前后方向位置进行调整。

另外，在上述全部的实施例的微量移液器保持装置中，对于侧孔、内螺纹部(螺母)以及外螺纹部，也可以是如图15所示的实施例的微量移液器保持装置1e那样移液杆位置调整机构6c所具备的侧孔、内螺纹部(螺母)以及外螺纹部，该移液杆位置调整机构6c包括：侧孔，其为4个并设于筒状体31的轴向上的不同位置；外螺纹构件62，其为多个且构成4个移液杆位置调整构件；以及内螺纹部61，其为4个并设于侧孔附近且能够与外螺纹构件62螺纹接合。

在该实施例的微量移液器保持装置1e中，4个侧孔朝向轴向的基端侧以相对于筒状体31的中心轴线逐个错开90度的方式设于筒状体31。换言之，4个侧孔成为螺旋配置的状态。因此，4个侧孔未位于筒状体31的轴向上的相同位置，另外，多个侧孔未沿轴向在直线上排列。并且，在该实施例的移液杆位置调整机构6c中，能够利用自图15的左侧起位于奇数位的移液杆位置调整机构(外螺纹构件62)对图15中的贯穿了筒状体31内的微量移液器移液杆5在筒状体31内部的前后方向位置进行调整，能够利用自图15的左侧起位于偶数位的移液杆位置调整机构(外螺纹构件62)对图15中的贯穿了筒状体31内的微量移液器移液杆5在筒状体31内部的上下方向位置进行调整。

上述全部的实施例的微量移液器保持装置均利用操作用突出部4来把持筒状转动构件3，利用手动使筒状转动构件3旋转，但并不限定这样的结构。

作为微量移液器保持装置，也可以如图16～图18所示的带针尖的微量移液器保持装置1f那样具有用于以非手动的方式使筒状转动构件3转动的转动部件40。

在该实施例的微量移液器保持装置1f中，如图18所示，使用具备具有较大表面的底座部21a的基座构件2a，在底座部21a的上表面安装有马达41。

在该实施例的带针尖的微量移液器保持装置1f中，转动部件40具有旋转力传递部，该旋转力传递部用于将马达41的旋转轴42的旋转传递至筒状转动构件3而使筒状转动构件3旋转。并且，在该实施例中，旋转力传递部包括设于马达41的旋转轴42的蜗轮43和设于筒状体31且与蜗轮43啮合的正齿轮37。能够利用蜗轮43和正齿轮37的组合使马达41的旋转轴的旋转改变90度，从而使筒状转动构件3以其中心轴线为中心良好地旋转。另外，通过蜗轮43和正齿轮37的组合，马达41的旋转轴42的旋转速度大幅度减速，因此，筒状转动构件3缓慢地旋转。

另外，作为旋转力传递部，也可以是图19所示的带针尖的微量移液器保持装置1g的转动部件40a所具有的旋转力传递部。在该微量移液器保持装置1g的转动部件40a中，旋转力传递部使用带轮和带。具体而言，转动部件40a的旋转力传递部包括设于马达41的旋转轴42的第1带轮45、设于筒状体31的第2带轮39、以及挂绕于第1带轮45和第2带轮39各自的环状凹部之间的环状带46(环形带)。在该实施例的装置1g中，马达41与筒状转动构件3平行地配置，马达41的旋转轴也与筒状转动构件3平行。

并且，设于马达41的旋转轴42的第1带轮45和设于筒状体31的第2带轮39也以平行且相邻的方式配置。而且，第1带轮45的环状凹部和第2带轮39的环状凹部相邻且呈直线状配置。并且，环状带46不松弛地挂绕于这些凹部，从而两个带轮39、45通过带46连结起来。而且，通过使马达41的旋转轴42旋转，从而使带轮45旋转，带轮45的旋转力经由带39传递至带轮39，从而使转动构件3以其中心轴线为中心良好地旋转。此外，也可以在马达41上安装用于使旋转轴的旋转速度减速的减速齿轮。

另外，在该实施例的微量移液器保持装置1g中，转动部件40a具有固定于基座构件2b的底座部21的马达固定构件47。利用该固定构件47将马达41以能够旋转的方式安装于基座构件2b。

接下来，说明图20所示的本发明的带针尖的微量移液器保持装置的其他实施例。在该实施例的带针尖的微量移液器保持装置1h中包括利用手动使筒状转动构件3转动的转动机构40b。

如图20所示，该实施例的带针尖的微量移液器保持装置1h组装于精子注射用操作器10。而且，精子注射用操作器10安装于用于使精子注射用操作器10沿XYZ方向移动的移动装置80。因此，通过驱动移动装置80，能够使精子注射用操作器10沿前后方向、左右方向以及上下方向移动。另外，在使用时，如图20所示，在显微镜装置50的下方配置培养皿30。

如图20所示，该实施例的筒状转动构件转动机构40b包括引线护套57和能够滑动地贯穿该引线护套57内的操作用引线。并且，在操作用引线55的顶端设有用于向操作用突出部4安装的安装部55a。在引线55的基端部设有把持部(操作部)55b。在该实施例中，安装部55a由供操作用突出部4能够贯穿的环状构件形成。另外，在引线护套57的基端固定有筒状保持部58，在筒状保持部58内，引线55的基端部自护套57突出。固定于引线的基端部的把持部55b自设于筒状保持部58的上表面的、沿轴向延伸的狭缝突出。因此，固定于引线55的后端部的操作部55b能够在筒状保持部58的狭缝内沿轴向移动。并且，通过使操作部55b沿轴向移动，从而使引线55的顶端和安装部55a沿前后方向做动作。引线的顶端和安装部55a在前后方向上的动作被传递至安装有安装部55a的操作用突出部4，由此筒状转动构件3转动。

具体而言，在图20所示的状态下，当使操作部55b向左方向移动时，自护套57的顶端突出的引线55的突出长度变长，操作用突出部4被引线55向下方按压，从而筒状转动构件3向下方旋转。相反地，当使操作部55b向右方向移动时，自护套57的顶端突出的引线55的突出长度变短，操作用突出部4被引线55向上方拉拽，从而筒状转动构件3向上方旋转。

另外，如图20所示，该实施例的筒状转动构件转动机构40b包括基座部59，筒状保持部58通过安装部59a固定于基座部59。而且，在该实施例中，护套57通过固定构件88固定于移动装置80。而且，在该实施例中，利用固定构件88将引线和护套保持为弯曲。由此，引线和护套这两者的顶端部所朝着的方向与筒状转动构件3的转动轴大致正交。因此，通过操作部55b的滑动操作，筒状转动构件3良好地转动。

接下来，使用图21～图23来说明本发明的卵子细胞质内精子注射方法。

在本发明的卵子细胞质内精子注射方法中进行如下步骤：利用抽吸移液器12来保持卵子100的步骤；使在顶端具有针尖18且在内部保有精子的微量移液器15的顶端部抵接于被保持于抽吸移液器12的卵子的步骤；使微量移液器15前进而使针尖18刺穿卵子的透明带101的步骤；使针尖18抵接于卵子100的卵膜102并利用针尖18来按压卵膜102的步骤；微量移液器旋转步骤，在该微量移液器旋转步骤中，通过使微量移液器15以微量移液器的轴线为大致中心进行旋转，从而使针尖18的切面旋转而使针尖18刺穿卵膜102，由此使针尖18进入细胞质103内；以及精子放出步骤，在该精子放出步骤中，将微量移液器15内的精子放出到细胞质103内。

说明本发明的卵子细胞质内精子注射方法中的各步骤。

如图21所示，进行准备而将卵子100连同培养液一起收纳在培养皿30内。然后，在显微镜装置50的下方配置上述培养皿30，在培养皿30的一侧配置精子注射用操作器10，在该精子注射用操作器10上组装有保持着收纳了精子的带针尖的微量移液器15的本发明的微量移液器保持装置1，在培养皿30的另一侧配置卵子保持用操作器20，在该卵子保持用操作器20上组装有保持着抽吸移液器12的微量移液器保持装置。

此外，在图21所示的系统中，精子注射用操作器10安装于用于使精子注射用操作器10沿XYZ方向移动的移动装置80。因此，通过驱动移动装置80，能够使精子注射用操作器10沿前后方向、左右方向以及上下方向移动。

同样地，卵子保持用操作器20安装于用于使卵子保持用操作器20沿XYZ方向移动的移动装置90。因此，通过驱动移动装置90，卵子保持用操作器25能够沿前后方向、左右方向以及上下方向移动。另外，卵子保持用操作器25具有抽吸移液器移液杆26和移液杆保持构件29，移液杆保持构件29安装于移动装置90。抽吸移液器移液杆26具有与所述微量移液器移液杆5相同的结构。具体而言，在抽吸移液器移液杆26的顶端具有用于保持抽吸移液器12的顶端构件27，在抽吸移液器移液杆26的基端具有用于保持管60的基端构件28。

在本发明的卵子细胞质内精子注射方法中，首先，如图21和图22的(A)所示，进行利用抽吸移液器12抽吸并保持卵子100的步骤。在该步骤中，使移动装置90工作而将保持于卵子保持用操作器20的抽吸移液器12插入到收纳有培养液和卵子100的培养皿30内。接着，通过使与卵子保持用操作器20相连接的抽吸部件(未图示)工作，从而抽吸卵子100而将其保持于抽吸移液器12的顶端。

接下来，进行使在顶端具有针尖18且在内部保有精子的微量移液器15的顶端部抵接于被保持于抽吸移液器12的卵子的步骤。在该步骤中，使移动装置80工作而将收纳有被保持在精子注射用操作器10的精子的带针尖的微量移液器15插入培养皿30内，如图22的(A)所示，针尖18成为接近卵子100的状态。接着，使移动装置80工作而使带针尖的微量移液器15稍微向卵子所在方向前进，并如图22的(B)所示那样使微量移液器15的针尖18抵接于卵子。卵子因该针尖18的抵接而以略微凹陷的方式变形。

接着，进行使微量移液器15前进而使针尖18刺穿卵子的透明带101的步骤。在该步骤中，通过使移动装置80工作，从而如图22的(C)所示那样使带针尖的微量移液器15的针尖18刺入卵子100内并刺穿透明带101。

然后，进行使针尖18抵接于卵子100的卵膜102并利用针尖18来按压卵膜102的步骤。在该步骤中，使移动装置80工作而使带针尖的微量移液器15略微向卵子所在方向前进。此外，存在以下情况，即，在完成上述针尖18刺穿卵子的透明带101的步骤后，卵膜102成为被针尖18自然按压的状态。另外，即使在成为卵膜102被针尖18自然按压的状态的情况下，也可以进一步使移动装置80工作而使带针尖的微量移液器15略微向卵子所在方向前进，从而成为更强力地按压卵膜102的状态。通过该步骤，如图22的(C)所示，成为微量移液器15的针尖18刺穿透明带101且卵膜102被针尖48按压而变形的状态。

接着，如图23的(D)所示，进行微量移液器旋转步骤，在该微量移液器旋转步骤中，通过使微量移液器15以微量移液器的轴线为大致中心进行旋转，从而使针尖18的切面旋转而使针尖18刺穿卵膜102，由此使针尖18进入细胞质103内。

对于该旋转步骤，可通过微量移液器15的位置未改变而使本发明的微量移液器保持装置1的筒状转动构件3的操作用突出部4向上方或下方移动来进行该旋转步骤。通过该步骤，针尖18的切面进行旋转，因此针尖18刺穿卵膜102。由此，如图23的(E)所示，针尖18进入细胞质103内。此外，该微量移液器旋转步骤也可以是一边使带针尖的微量移液器15略微向卵子所在方向前进一边进行。

另外，该步骤中的微量移液器的旋转，优选使微量移液器以微量移液器的顶端部的中心轴线为大致中心进行旋转。换言之，作为本发明的微量移液器保持装置1，优选使用将收纳有精子的带针尖的微量移液器15保持为能以微量移液器15的顶端部的中心轴线为大致中心进行旋转的状态的微量移液器保持装置。

然后，如图23的(E)所示，进行将微量移液器15内的精子在细胞质103内放出的精子放出步骤。在该步骤中，通过使与精子注射用操作器10相连接的排出部件(未图示)工作，从而自微量移液器15排出精子。

并且，在精子注射步骤结束之后，使移动装置80工作而使带针尖的微量移液器15后退，从而自卵子100抽出微量移液器15。由此，完成了卵子细胞质内精子注射方法，在培养皿30内，被注射有精子的卵子被抽吸而保持于抽吸移液器12。

产业上的可利用性

本发明的带针尖的微量移液器保持装置具有以下技术方案。

(1)一种带针尖的微量移液器保持装置，其具有：筒状微量移液器移液杆，其能够在顶端部安装用于刺入生物体细胞的带针尖的微量移液器；以及移液杆保持件，其用于保持所述微量移液器移液杆，其中，所述移液杆保持件具有基座构件和能够转动地保持于所述基座构件且能够供所述微量移液器移液杆贯穿的筒状转动构件，而且，所述筒状转动构件具有移液杆位置调整机构，该移液杆位置调整机构包括：侧孔，其为多个并设于所述筒状转动构件的侧面且在所述筒状转动构件的周向上不同的位置；以及移液杆位置调整构件，其能够自所述侧孔进入所述筒状转动构件内且能够抵接于贯穿所述筒状转动构件的所述微量移液器移液杆的外表面。

在该带针尖的微量移液器保持装置中，由于将可安装用于刺入生物体细胞的带针尖的微量移液器的筒状的微量移液器移液杆保持为能够转动，因此，在进行向细胞内刺入带针尖的微量移液器的操作时，能够易于进行转动操作，从而能够易于将微量移液器的针尖刺入细胞内。而且，在该带针尖的微量移液器保持装置中，由于供微量移液器移液杆贯穿的筒状转动构件具有移液杆位置调整构件，因此能够对筒状构件的转动时的中心进行调整，换言之，能够对所安装的带针尖的微量移液器的针尖的旋转中心进行调整，由此能够使带针尖的微量移液器以良好的状态旋转。

另外，上述技术方案也可以如下。

(2)根据上述(1)所述的带针尖的微量移液器保持装置，其中，所述带针尖的微量移液器保持装置通过在将所述微量移液器安装于所述微量移液器移液杆的状态下对所述移液杆位置调整机构进行调整，能够将所述微量移液器的顶端部的中心轴线调整为所述筒状转动构件转动时的大致中心。

(3)根据上述(1)或(2)所述的带针尖的微量移液器保持装置，其中，所述移液杆位置调整机构包括：所述侧孔；外螺纹构件，其构成所述移液杆位置调整构件；以及内螺纹部，其形成于所述侧孔的附近或所述侧孔内，能够与所述外螺纹构件螺纹接合。

(4)根据上述(1)～(3)中任一项所述的带针尖的微量移液器保持装置，其中，所述筒状转动构件具有用于利用手动来使所述筒状转动构件转动的操作用突出部。

(5)根据上述(1)～(3)中任一项所述的带针尖的微量移液器保持装置，其中，所述微量移液器保持装置具有用于以非手动的方式使所述筒状转动构件转动的转动部件。

(6)根据上述(5)所述的带针尖的微量移液器保持装置，其中，所述转动部件具有：马达；以及旋转力传递机构，其将所述马达的转动轴和所述筒状转动构件连结起来，且通过所述转动轴的旋转使所述筒状转动构件旋转。

(7)根据上述(1)～(6)中任一项所述的带针尖的微量移液器保持装置，其中，所述基座构件具有底座部和自所述底座部立起的两个侧板部，

所述筒状转动构件具有设于其两端部的球轴承，所述筒状转动构件经由所述球轴承固定于所述两个侧板部，从而该筒状转动构件能够转动地保持于所述基座构件。

(8)根据上述(1)～(7)中任一项所述的带针尖的微量移液器保持装置，其中，所述筒状转动构件具有一个收纳于一端侧的内部的弹性筒状构件和一个收纳于另一端侧的内部的弹性筒状构件这两个弹性筒状构件，所述弹性筒状构件能够贴紧于所述微量移液器移液杆且能够供所述微量移液器移液杆贯穿。

(9)根据所述(1)～(8)中任一项所述的带针尖的微量移液器保持装置，其中，所述筒状转动构件包括第1移液杆位置调整机构和设于与所述第1移液杆位置调整机构分开预定长度的位置的第2移液杆位置调整机构。

(10)根据所述(1)～(9)中任一项所述的带针尖的微量移液器保持装置，其中，所述移液杆位置调整机构具有：所述侧孔，其为多个且相对地设置或以相对于所述筒状转动构件的中心轴线成为等角度的方式设置；以及移液杆位置调整构件，其能够自各所述侧孔进入所述筒状转动构件内且能够抵接于贯穿所述筒状转动构件的所述微量移液器移液杆的外表面。

(11)根据所述(1)～(10)中任一项所述的带针尖的微量移液器保持装置，其中，所述微量移液器保持装置具有设于所述基座构件的安装部，该安装部用于安装在操作装置上。

(12)根据所述(1)～(11)中任一项所述的带针尖的微量移液器保持装置，其中，所述微量移液器移液杆包括：筒状主体；顶端侧环状构件，其设于所述筒状主体的顶端部；基端侧环状构件，其设于所述筒状主体的基端侧；以及筒状弹性体，其收纳在所述顶端侧环状构件内且被所述筒状主体的顶端和所述顶端侧环状构件按压，所述筒状弹性体能够贯穿有所述微量移液器的基端部且能够在被按压时保持所述微量移液器的基端部。

(13)根据所述(1)～(12)中任一项所述的带针尖的微量移液器保持装置，其中，所述微量移液器保持装置用于保持显微受精用的微量移液器。

另外，本发明的卵子细胞质内精子注射方法具有以下技术方案。

(14)一种卵子细胞质内精子注射方法，其中，在该卵子细胞质内精子注射方法中进行如下步骤：利用抽吸移液器来保持卵子的步骤；使在顶端具有针尖且在内部保有精子的微量移液器的顶端部抵接于被保持于所述抽吸移液器的所述卵子的步骤；使所述微量移液器前进而使所述针尖刺穿所述卵子的透明带的步骤；使所述针尖抵接于所述卵子的卵膜并利用所述针尖来按压所述卵膜的步骤；微量移液器旋转步骤，在该微量移液器旋转步骤中，通过使所述微量移液器旋转，从而使所述针尖的切面旋转而使所述针尖刺穿所述卵膜，由此使所述针尖进入细胞质内；以及精子放出步骤，在该精子放出步骤中，将所述微量移液器内的精子在所述细胞质内放出。

在本发明中，通过使微量移液器的针尖的切面旋转，能够使针尖进入卵膜而容易且可靠地进入细胞质内，从而能够使微量移液器的针尖可靠地到达细胞质内。

另外，上述技术方案也可以如下。

(15)根据所述(14)所述的卵子细胞质内精子注射方法，其中，使所述微量移液器以所述微量移液器的顶端部的中心轴线为大致中心进行旋转。