快速提取哈蟆油基因组DNA的方法、试剂盒及其应用与流程

文档序号:12743830阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种快速提取哈蟆油基因组DNA的方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:

1)取哈蟆油样品,加入Chelex-100和蛋白酶K,先水浴保温,后高温终止,进行细胞裂解,离心后获得第一上清液;其中,Chelex-100用于螯合所述哈蟆油样品中的非核酸有机物和使蛋白变性便于蛋白酶K进行酶解,蛋白酶K用于消化所述哈蟆油样品中的蛋白质;

2)在所述第一上清液中加入酚/氯仿/异戊醇,去除残留的脂类和蛋白质;

3)利用异丙醇或无水乙醇沉淀DNA。

2.如权利要求1所述的快速提取哈蟆油基因组DNA的方法,其特征在于,所述哈蟆油样品为干燥哈蟆油药材。

3.如权利要求2所述的快速提取哈蟆油基因组DNA的方法,其特征在于,步骤1)进一步包括,在加入Chelex-100和蛋白酶K之后,使用研磨杵对所述哈蟆油样品进行研磨粉碎。

4.如权利要求3所述的快速提取哈蟆油基因组DNA的方法,其特征在于,步骤1)中的所述水浴保温为54℃~58℃保温25~35分钟;所述高温终止为在煮沸的条件下保温5~10分钟,以使细胞膜破裂,并阻止所述哈蟆油样品的膨胀吸水。

5.如权利要求3所述的快速提取哈蟆油基因组DNA的方法,其特征在于,所述第一上清液加水补足体积至650~750μl,然后加入等体积的步骤2)中所述酚/氯仿/异戊醇,并剧烈振荡,离心后获得第二上清液;其中所述酚/氯仿/异戊醇的体积比为酚:氯仿:异戊醇=25:24:1。

6.如权利要求5所述的快速提取哈蟆油基因组DNA的方法,其特征在于,步骤2)进一步包括在所述第二上清液中,加入等体积氯仿/异戊醇,并剧烈振荡,离心后获得第三上清液;其中所述氯仿/异戊醇的体积比为氯仿:异戊醇=24:1。

7.一种快速提取哈蟆油基因组DNA的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒至少包括:含Chelex-100和蛋白酶K的裂解液;含酚、氯仿和异戊醇的杂质去除液。

8.如权利要求7所述的快速提取哈蟆油基因组DNA的试剂盒,其特征在于,所述裂解液中Chelex-100的质量体积比为5%~10%,蛋白酶K的浓度为10~20mg/mL。

9.如权利要求7所述的快速提取哈蟆油基因组DNA的试剂盒,其特征在于,所述提取试剂盒还包括3mol/L pH 5.2的乙酸钠,pH 8.0的TE缓冲液以及研磨杵。

10.如权利要求1所述的快速提取哈蟆油基因组DNA的方法或如权利要求7所述的快速提取哈蟆油基因组DNA的试剂盒在使用DNA条形码技术鉴定哈蟆油中的应用。

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