一种梅山猪或其肉制品的基因组分子鉴定试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本实用新型涉及生物领域，特别涉及一种梅山猪或其肉制品的基因组分子鉴定试 剂盒。
【背景技术】
[0002] 梅山猪原产于太湖流域的上海市嘉定、宝山、松江等区县和江苏的昆山、太仓等市 县，是太湖猪中的典型代表，有肉质好、耐粗饲、抗病力强等优良特性。嘉定区的梅山猪品种 其肌肉鲜嫩、肌纤维细而密，含水量较少，肌肉脂肪丰富，呈大理石状，俗称"五花肉"，风味 醇厚，细腻酥软。随着人们生活水平的提高，对畜禽产品的质量要求越来越高，许多以追求 高产为目的培育的外三元等品种在国内越来越不受欢迎，取而代之的是猪肉市场消费追求 多样化、精细化、肉质高品质化。梅山猪因肉质鲜美、香甜浓香而受到上海市民青睐，尽管价 格比较高却供不应求，导致市场上极易出现假冒梅山猪肉或其品牌或以次充好、以假乱真 的销售行为。但目前尚没有鉴定梅山猪肉或其肉制品的方法可以有效地保护正宗梅山猪肉 或其肉制品的质量品质和品牌形象。
[0003] 目前，制定了以活体猪为检测对象的鉴别梅山猪的地方性标准方法，但是对梅山 猪宰杀后分割肉或其他肉制品就不能使用地方标准方法进行鉴定了。而传统的鉴别方法则 通过测定猪胴体和肉质特征来评价生鲜肉或其肉制品品质，包括瘦肉率、嫩度、pH值、肉色 等区别肉品质好坏。但由于饲养条件和猪个体存在差异，且对测试猪生长日龄和取样部位 有具体要求，使得检测人员的工作十分不便并且使检测结果容易发生较大的误差，导致检 测结果缺乏重复性和准确性。此外，由于肉质指标大多没有统一的数值范围，个体差异也比 较明显，因此肉质指标也不能作为鉴定梅山猪的依据。目前，猪全基因组测序技术虽然可以 鉴别不同品种、甚至不同个体的猪，但需要检测的基因数目很多，成本大，不可能在实际日 常商业活动中推广。而若只检测不同品种猪个别基因，则不能区分转基因猪肉制品和纯种 猪肉制品。
[0004] DNA分子标记是基于基因组DNA序列丰富的多态性发展而来的一种遗传标记，可 直接反映DNA水平上的差异，具有其它遗传标记所不具有的优点，如变异稳定丰富、信息量 大、受环境因素影响小、不受取材部位、发育时期限制、可随时检测、操作方便等，故可以用 于动植物等品种鉴定、遗传育种等领域，近年来得到了迅速的发展。ISSR是Zietkiewicz 等于1994创建的一类在PCR反应基础上的DNA分子标记技术，它是根据基因组内广泛存在 的微卫星序列设计的单一引物对基因组进行扩增的标记系统，它对两个序列相同但方向相 反的简单重复序列（SSR)之间的区域进行扩增。ISSR技术和PCR技术联合使用具有很高 的特异性和灵敏度且准确快速，近年来在品种鉴定、种质资源和遗传多样性研宄中得到了 广泛应用：申请号为201310209120. 8的发明专利公开了利用ISSR分子标记技术鉴别四川 白鹅真伪的方法。其中共用到3个ISSR标记，形成了 11个鹅品种（系）DNA用三个遗传 标记分别PCR扩增后的标准电泳图谱，用于鉴别被鉴定的鹅群是否是真正的四川白鹅。中 国专利CN103484555A(公开日2014. 01. 01)公开了利用ISSR分子标记法对甘薯品种真实 性进行鉴别的方法，成功构建的甘薯品种单一引物的ISSR指纹图谱，使得甘薯品种真实性 的鉴定简便、快捷、重复性和稳定性好。中国专利CN102839219A(公开日2012. 12. 26)公 开了一种霍乱弧菌流行株分子鉴定方法或其ISSR-PCR引物及试剂盒，通过提供对霍乱弧 菌流行株具有特异性分子鉴定作用的1条ISSR-PCR引物来检测某一分离获得的霍乱弧菌 菌株基因组DNA，进而确定该霍乱弧菌菌株是否为流行株。中国专利CN101956016A(公开 日2011. 01. 26) -种适于水稻品种真实性鉴定的ISSR指纹图谱构建方法，提供一种快速、 准确的水稻品种的ISSR指纹图谱构建方法或其应用。中国专利CN103215365A(公开日 2013. 07. 24)公开了一种陆川猪或其肉制品的DNA分子鉴定方法，其中ISSR-PCR所用的引 物为丽14、丽12和丽29。最终绘制了 7张陆川猪或其肉制品的电泳图谱，建立了陆川猪 或其肉制品的DNA指纹图谱，可作为区分鉴定陆川猪或其肉制品的依据。
[0005] 但国内外还未见利用分子鉴定方法鉴定梅山猪或其肉制品的方法，建立可以区分 梅山猪制品或其他品种猪肉制品的方法，以此来解决涉及梅山猪或其肉制品的假冒销售纠 纷，从而有效保护梅山猪地方品种的市场地位和品牌形象。 【实用新型内容】
[0006] 本实用新型要解决的技术问题是为了克服现有技术中梅山猪或其肉制品难以鉴 定且鉴定检测方法过于繁琐、难以大量推广的缺陷，提供一种梅山猪或其肉制品的基因组 分子鉴定试剂盒以快速、简便、大规模地鉴定梅山猪或其肉制品。
[0007] 本实用新型是通过下述技术方案来解决上述技术问题：
[0008] 一种梅山猪或其肉制品的基因组分子鉴定试剂盒，包括盒盖、盒体、衬垫、装有 ISSR-PCR反应混合物的容器、装有特异性扩增梅山猪基因组的引物的容器、装有阳性对照 纯种梅山猪基因组DNA的容器和装有水的容器，所述衬垫设置于所述盒体内，所述衬垫上 设有容器孔，所述的装有ISSR-PCR反应混合物的容器、所述装有特异性扩增梅山猪基因组 的引物的容器、所述装有阳性对照纯种梅山猪基因组DNA的容器和所述装有水的容器放置 于所述容器孔内。
[0009] 较佳地，所述容器孔为4个，每个容器孔内分别放置所述装有ISSR-PCR反应混合 物的容器、所述装有特异性扩增梅山猪基因组的引物的容器、所述装有阳性对照的容器和 所述装有水的容器；更佳地，所述的容器孔在所述衬垫上分成两排平行排列。
[0010] 所述的容器为本领域常规的容器，较佳地为离心管，更佳地为1. 5mL离心管。
[0011] 所述的ISSR-PCR反应混合物为本领域常规的ISSR-PCR反应混合物；较佳地 包括可以实行ISSR-PCR反应的TaqDNA聚合酶和PCR缓冲液；更佳地，包括2XTaqPCR MasterMix，所述2XTaqPCRMasterMix包含TaqDNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、 PCR反应的增强剂和优化剂及稳定剂。
[0012] 所述的引物为本领域常规的特异性扩增梅山猪基因组所用的引物；较佳地为利用 ISSR-PCR法特异性扩增梅山猪基因组所用的引物；更佳地，为梅山1，所述梅山1的序列为 ATGATGATGATGATGATGA〇
[0013] 所述的水为本领域常规的水；较佳的为去离子水；更佳地为无菌去离子水。
[0014] 较佳地，所述的基因组分子鉴定试剂盒还包括一份使用说明书，所述的使用说明 书记载利用ISSR-PCR反应鉴定梅山猪或其肉制品的操作步骤。更佳地，所述的操作步骤包 括：
[0015]1)、提取生鲜肉和/或肉制品的基因组DNA;
[0016]2)、以步骤1)所述的基因组DNA为模板，利用核苷酸序列如SEQIDNO. 1所示的 引物，进行PCR反应。
[0017] 最佳地，还包括以下的步骤：
[0018]3)、构建步骤2)所述的PCR反应的扩增片段的电泳图谱；或
[0019] 4)、根据步骤3)所述的电泳图谱，鉴定梅山猪的生鲜肉和/或肉制品。
[0020] 本实用新型的积极进步效果在于：1、本实用新型所述的梅山猪或其肉制品的基因 组分子鉴定试剂盒利用ISSR-PCR方法操作简单快捷，能够鉴定梅山猪或其肉制品并且将 梅山猪与其他品种猪肉的肉制品鉴定区分；2、所述试剂盒中含有纯种梅山猪基因组DNA作 为阳性对照可将待测样品的ISSR-PCR扩增结果电泳图谱与阳性对照的电泳图谱相比较， 结果更为可靠。故本实用新型所述的梅山猪或其肉制品的基因组分子鉴定试剂盒能够快 速、简便、大规模地鉴定梅山猪或其肉制品。
【附图说明】
[0021] 图1为本实用新型实施例1~2所述的梅山猪或其肉制品的基因组分子鉴定试剂 盒的结构示意图，其中1为盒盖；2为盒体；3为装有ISSR-PCR反应混合物的容器、4为装有 特异性扩增梅山猪基因组的引物的容器、5为装有阳性对照纯种梅山猪基因组DNA的容器、 6为装有水的容器、7为衬垫。
【具体实施方式】
[0022] 下面举较佳实施例，并结合附图来更清楚完整地说明本实用新型。
[0023] 所述的常温为本领域常规的室温，较佳地为15~35°C。
[0024] 鉴定梅山猪或其肉制品的专用引物梅山1由英潍捷基（上海）贸易有限公司合 成，梅山 1 的序列为ATGATGATGATGATGATGA。
[0025] 梅山猪、梅杜二元杂猪样品来源于上海市嘉定区梅山猪育