1.一种耐热酯酶突变体,其特征在于,该突变体是对来源于Pyrobaculum calidifontis的野生型耐热酯酶进行突变获得的,野生型耐热酯酶的氨基酸序列为SEQ ID NO.2,所述突变发生的位点包括如下至少一个突变位点:所述突变发生的位点为第89位氨基酸由L突变为R,第20位氨基酸由F突变为A,第33位氨基酸由F突变为A,第40位的氨基酸由L突变为A,第213位氨基酸由L突变为A,第289位氨基酸由F突变为A,其中第89位为必要突变位点。
2.根据权利要求1所述突变体,其特征在于,所述突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6或SEQ ID NO.7。
3.权利要求1或2所述突变体的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)通过表达载体pET-23a和PestE酯酶野生型基因序列全合成质粒;
(2)再利用定点突变方法设计引物,用PCR方法引入目的氨基酸突变位点以获得相应突变体。
4.根据权利要求3所述突变体的制备方法,其特征在于,所述PCR引物序列如下:
L89R-F:5'-TGGAGGTGGATTCGTACGTGGTTCTGTGGAAACTC-3'
L89R-R:5'-GAGTTTCCACAGAACCACGTACGAATCCACCTCCA-3'
L40A-F:5'-GAAGTCAAGTCTTATCGCGGTGAAGATGGCAAACG-3'
L40A-R:5'-CGTTTGCCATCTTCACCGCGATAAGACTTGACTTC-3'
F20A-F:5'GCTGCACAATTGCAGGCTAGACCAGATATGG3'
F20A-R:5'CCATATCTGGTCTAGCCTGCAATTGTGCAGC3'
F33A-F:5'GGTGAGAGAGCAGGCCGAGAAGTCAAGTC3'
F33A-R:5'GACTTGACTTCTCGGCCTGCTCTCTCACC3'
L213A-F:5'GTTATTCTTACTGCCGATGCAATGGCCTGGTTTGGTAG3'
L213A-R:5'CTACCAAACCAGGCCATTGCATCGGCAGTAAGAATAAC3'
F289A-F:5'GTCATTCATGGCTTTGTCAATGCCTATCCAATATTAGAGGAAGG3'
F289A-R:
5'CCTTCCTCTAATATTGGATAGGCATTGACAAAGCCATGAATGAC3'。
5.一种利用权利要求1所述突变体制备的重组质粒。
6.将权利要求5所述制备的质粒转入宿主细胞制得的重组菌株。
7.根据权利要求6所述的重组菌株,其特征在于,所述的宿主细胞为大肠杆菌BL21。
8.权利要求1所述的耐热酯酶突变体在制备环氧化甘油酯中的应用。