1.一种基于宫颈癌特异性甲基化检测的引物对,其特征在于,包括针对PAX1基因和ACTB基因的启动子区的特异性引物及探针,如下:
PAX1正向引物:5'-GTGGAGAGTGTTTTGGGAGGG-3',
PAX1反向引物:5'-CTACCRCCCRCTCCAAAACC-3',
PAX1检测探针:5'FAM-TAGTAGCGGCGGCGGT-3'MGB;
ACTB正向引物:5'-GGTTAGGAAGGAGGTTGTTTGTTTT-3',
ACTB反向引物:5'-ATCATCTTTCCCACCAAACTATAACC-3',
ACTB检测探针:5'VIC-CCCATTAACTAAACACAACCT-3'。
2.一种基于宫颈癌特异性甲基化检测的试剂盒,其特征在于,包括含有如权利要求1所述的特异性引物及探针的PCR反应液,所述PCR反应液包括:PAX1正向引物、PAX1反向引物、PAX1检测探针,ACTB正向引物、ACTB反向引物、ACTB检测探针,10×PCRbuffer,dNTP及无核酸酶水。
3.根据权利要求2所述的基于宫颈癌特异性甲基化检测的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括Ex Taq酶。
4.根据权利要求2所述的基于宫颈癌特异性甲基化检测的试剂盒,其特征在于,所述PCR反应液的成分终浓度为:1×PCR buffer,0.4μM PAX1正向引物、0.4μM PAX1反向引物、0.4μM PAX1检测探针,0.4μM ACTB正向引物、0.4μM ACTB反向引物、0.4μM ACTB检测探针,0.25mM dNTP。
5.根据权利要求2-4中任一所述的基于宫颈癌特异性甲基化检测的试剂盒,其特征在于,还包括阳性对照品及阴性对照品,所述阳性对照品为甲基化标准品DNA,所述阴性对照品为非甲基化标准品DNA。
6.一种基于宫颈癌特异性甲基化检测的方法,其特征在于,包括如下步骤:
步骤一:取待检测样本抽提的DNA,对其进行转化处理,转化后的DNA作为PCR的模板;
步骤二:提供如权利要求5所述的试剂盒,对所述模板进行PCR扩增;
步骤三:根据PAX1与ACTB基因PCR扩增结果的相对荧光CT值来确定待检测样本的甲基化率,即待检测样本中PAX1/ACTB的比值除以阳性对照品中PAX1/ACTB的比值。
7.根据权利要求6所述的基于宫颈癌特异性甲基化检测的方法,其特征在于,所述步骤一中转化处理所采用的试剂为亚硫酸氢盐或重亚硫酸盐。
8.根据权利要求7所述的基于宫颈癌特异性甲基化检测的方法,其特征在于,所述步骤二中PCR扩增反应程序为:95℃变性10min;50cycles,95℃15sec,60℃30sec。