基于宫颈癌特异性甲基化检测的引物对、试剂盒及方法与流程

文档序号:12413012阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种基于宫颈癌特异性甲基化检测的引物对,其特征在于,包括针对PAX1基因和ACTB基因的启动子区的特异性引物及探针,如下:

PAX1正向引物:5'-GTGGAGAGTGTTTTGGGAGGG-3',

PAX1反向引物:5'-CTACCRCCCRCTCCAAAACC-3',

PAX1检测探针:5'FAM-TAGTAGCGGCGGCGGT-3'MGB;

ACTB正向引物:5'-GGTTAGGAAGGAGGTTGTTTGTTTT-3',

ACTB反向引物:5'-ATCATCTTTCCCACCAAACTATAACC-3',

ACTB检测探针:5'VIC-CCCATTAACTAAACACAACCT-3'。

2.一种基于宫颈癌特异性甲基化检测的试剂盒,其特征在于,包括含有如权利要求1所述的特异性引物及探针的PCR反应液,所述PCR反应液包括:PAX1正向引物、PAX1反向引物、PAX1检测探针,ACTB正向引物、ACTB反向引物、ACTB检测探针,10×PCRbuffer,dNTP及无核酸酶水。

3.根据权利要求2所述的基于宫颈癌特异性甲基化检测的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括Ex Taq酶。

4.根据权利要求2所述的基于宫颈癌特异性甲基化检测的试剂盒,其特征在于,所述PCR反应液的成分终浓度为:1×PCR buffer,0.4μM PAX1正向引物、0.4μM PAX1反向引物、0.4μM PAX1检测探针,0.4μM ACTB正向引物、0.4μM ACTB反向引物、0.4μM ACTB检测探针,0.25mM dNTP。

5.根据权利要求2-4中任一所述的基于宫颈癌特异性甲基化检测的试剂盒,其特征在于,还包括阳性对照品及阴性对照品,所述阳性对照品为甲基化标准品DNA,所述阴性对照品为非甲基化标准品DNA。

6.一种基于宫颈癌特异性甲基化检测的方法,其特征在于,包括如下步骤:

步骤一:取待检测样本抽提的DNA,对其进行转化处理,转化后的DNA作为PCR的模板;

步骤二:提供如权利要求5所述的试剂盒,对所述模板进行PCR扩增;

步骤三:根据PAX1与ACTB基因PCR扩增结果的相对荧光CT值来确定待检测样本的甲基化率,即待检测样本中PAX1/ACTB的比值除以阳性对照品中PAX1/ACTB的比值。

7.根据权利要求6所述的基于宫颈癌特异性甲基化检测的方法,其特征在于,所述步骤一中转化处理所采用的试剂为亚硫酸氢盐或重亚硫酸盐。

8.根据权利要求7所述的基于宫颈癌特异性甲基化检测的方法,其特征在于,所述步骤二中PCR扩增反应程序为:95℃变性10min;50cycles,95℃15sec,60℃30sec。

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