一种等位基因特异性甲基化中杂合子进行检测的方法
【专利摘要】本发明公开了一种等位基因特异性甲基化中杂合子进行检测的方法。具体来说，用甲基化敏感限制性内切酶切割DNA后，再用含有酶切位点序列的特异性引物进行PCR扩增。检测甲基化敏感酶的PCR扩增产物，就可以检测出两个等位基因的甲基化状态；进行MSRE-PCR检测，鉴定双等位基因特定位点甲基化状态是否存在差异；根据甲基化敏感限制性内切酶只能够识别并切断未发生甲基化的酶切位点，而不能识别、切断发生了甲基化的DNA序列这一原理。本发明的有益效果是，可以有效阻碍转录因子与启动子结合，导致转录失活，合成成熟功能蛋白受阻而导致细胞增殖失控。
【专利说明】一种等位基因特异性甲基化中杂合子进行检测的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种生化的检测方法，具体来说，是指一种等位基因特异性甲基化中杂合子进行检测的方法。
【背景技术】
[0002]DNA甲基化(DNA methylation)是最重要的表观遗传学修饰方式之一，与肿瘤发生密切相关。抑癌基因启动区甲基化可以阻碍转录因子与启动子结合，导致基因转录失活，合成成熟功能蛋白受阻进而导致细胞增殖失控。有关抑癌基因甲基化失活的研究在临床肿瘤早期诊断，治疗以及预后判断方面具有重要指导意义，是目前的一个研究热点。
[0003]我们前期曾对辽南高发区胃癌的多位点甲基化情况进行了检测，结果发现此地区臂、癌患、考P16、hMLHl、TIMP3、DKK3、RASSF1A以及等特定基因启动子区DNA甲基化频率和程度都明显增高[I]，但同时我们发现基因启动子区异常高甲基化与基因表达沉默并非完全相关，国外也有越来越多的研究者发现并提出了这个问题。
【发明内容】
[0004]为克服上述技 术问题，我们提出了以下技术方案:
一种等位基因特异性甲基化中杂合子进行检测的方法，用甲基化敏感限制性内切酶切割DNA后，再用含有酶切位点序列的特异性引物进行PCR扩增。检测甲基化敏感酶的PCR扩增产物，就可以检测出两个等位基因的甲基化状态。。
[0005]本发明中，进行MSRE-PCR检测，鉴定双等位基因特定位点甲基化状态是否存在差
巳升。
[0006]本发明中，根据甲基化敏感限制性内切酶只能够识别并切断未发生甲基化的酶切位点，而不能识别、切断发生了甲基化的DNA序列这一原理。
[0007]本发明的有益效果是，可以有效阻碍转录因子与启动子结合，导致转录失活，合成成熟功能蛋白受阻而导致细胞增殖失控。
【具体实施方式】
[0008]一种等位基因特异性甲基化中杂合子进行检测的方法。具体来说，用甲基化敏感限制性内切酶切割DNA后，再用含有酶切位点序列的特异性引物进行PCR扩增。检测甲基化敏感酶的PCR扩增产物，就可以检测出两个等位基因的甲基化状态；进行MSRE-PCR检测，鉴定双等位基因特定位点甲基化状态是否存在差异；根据甲基化敏感限制性内切酶只能够识另IJ并切断未发生甲基化的酶切位点，而不能识别、切断发生了甲基化的DNA序列这一原理。
[0009]以上所述，仅为本发明较佳的【具体实施方式】，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本【技术领域】的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.一种等位基因特异性甲基化中杂合子进行检测的方法，其特征在于，用甲基化敏感限制性内切酶切割DNA后，再用含有酶切位点序列的特异性引物进行PCR扩增；检测甲基化敏感酶的PCR扩增产物，就可以检测出两个等位基因的甲基化状态。
2.如权利要求1所述的一种等位基因特异性甲基化中杂合子进行检测的方法，其特征在于，进行MSRE-PCR检测，鉴定双等位基因特定位点甲基化状态是否存在差异。
3.如权利要求1所述的一种等位基因特异性甲基化中杂合子进行检测的方法，其特征在于，根据甲基化敏感限制性内切酶只能够识别并切断未发生甲基化的酶切位点，而不能识别、切断发生了甲基化的DNA序列这一原理。
【文档编号】C12Q1/68GK103589792SQ201310518802
【公开日】2014年2月19日 申请日期:2013年10月29日 优先权日:2013年10月29日
【发明者】王景文 申请人:王景文